干細胞移植治療急性心肌梗死-課件

1、干細胞移植治療急性心肌梗死The effects of MSCs transplantation for acute myocardial infarction 天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院 The Second Teaching Hospital of TUTCM徐 強干細胞移植治療急性心肌梗死The effects of BackgroundBackgroundMiranda D. Grounds, et al. The Journal of Histochemistry & Cytochemistry 2019,50(5): 589610 Miranda D. Grounds, et al

2、. The干細胞移植治療急性心肌梗死_課件干細胞移植治療急性心肌梗死_課件干細胞移植治療急性心肌梗死_課件ESC and ASCESCASC來自胚泡的內(nèi)細胞群來源于骨髓、外周血、角膜、視網(wǎng)膜、腦、骨骼肌、齒髓、肝、皮膚、胃腸道粘膜層和胰腺等發(fā)育全能性，可誘導(dǎo)分化為機體分化較局限，部分成體干細胞（造血干細胞、骨髓間充質(zhì)干細胞、神經(jīng)干細胞）有一定跨系、跨胚層的“可塑性”無限的自我更新能力病理條件下才顯出一定的自我更新潛能增殖能力強，便于應(yīng)用增殖能力較弱，故不能完全取代胚胎干細胞細胞可不斷增殖，“永生化”，移植后有形成腫瘤的可能性成瘤的可能性很小不能自體移植自體移植可避免免疫排斥有倫理問題分離和使用

3、不存在倫理問題ESC and ASCESCASC來自胚泡的內(nèi)細胞群來源于骨BMC(bone marrow cell)BMC(bone marrow cell)Nature/Vol428/3 April 2019/664-8 145例HSC移植入正?；蛘邠p傷的成年小鼠心臟的實驗研究，沒有發(fā)現(xiàn)由干細胞轉(zhuǎn)分化而來的心肌，并且干細胞移植組相對于假移植組心肌細胞數(shù)量沒有明顯的增加，為心肌修復(fù)的臨床研究提供一個警示。 心臟功能上的改善可能是由于移植對左心室重塑的影響或者是產(chǎn)生了新生血管，而不是心肌再生。過去兩年來，開展了一些使用骨髓祖細胞進行心臟修復(fù)臨床試驗。在目前研究中，HSC不能轉(zhuǎn)化形成新的心肌對這些

4、試驗的理論基礎(chǔ)提出了質(zhì)疑。 Problems of HSCNature/Vol428/3 April 2019/664HSC（CD34+）Transplatition for AMIJ Thorac Cardiovasc Surg 2019;130:1631-8 HSC（CD34+）Transplatition for A干細胞移植治療急性心肌梗死_課件是骨髓中除造血細胞以外的中胚層來源的細胞，其細胞特性穩(wěn)定，在連續(xù)傳代培養(yǎng)和凍存后仍具有多向分化潛能。在特定的誘導(dǎo)條件下，骨髓間充質(zhì)干細胞可以分化為間充質(zhì)組織中的各類細胞，包括：骨、軟骨、脂肪、肌腱、韌帶等細胞。骨髓間充質(zhì)干細胞（mesenchy

5、mal stem cell, MSC）是骨髓中除造血細胞以外的中胚層來源的細胞，其細胞特性穩(wěn)定，在 （K.D. Bunting, R.G. Hawley .Biology of the Cell 2019,95:563578）MSC(mesenchymal stem cell) DIFFERITION （K.D. Bunting, R.G. Hawley 梗死的心臟注入富含鼠的骨髓干細胞后，40%的心肌層得到恢復(fù)。 Olic. Nature. 2019,410:701-705用人的骨髓來源的干細胞使心肌梗死鼠30%40%的心功能得到改善。 Kocher. Nat Med. 2019,7:430

6、-436 梗死的心臟注入富含鼠的骨髓干細胞后，40%的心肌層得到恢復(fù)。Current problem-evidence骨髓干細胞究竟能否分化成心肌細胞卻始終有爭議，目前仍無法完全證實MSC可分化為心肌細胞。 ？Current problem-evidence骨髓干New Focus-microenvironment 急性心肌梗死后局部微環(huán)境發(fā)生的一系列炎癥反應(yīng)，對干細胞的存活、分化、遷移等都有很大影響。New Focus-microenvironment MSC原代傳代前細胞形態(tài)（100） 貼壁細胞增殖融合，鋪滿瓶底90% 左右，未貼壁細胞是造血干細胞及組織碎片MSC原代傳代前細胞形態(tài)（100

7、） 貼壁細胞增殖融合，鋪滿p1（100） p4（100） p3（100） p2（100） p1（100） p4（100） p3（100） p2（流式細胞鑒定CD106 、CD90表達陽性， CD31、CD45表達陰性流式細胞鑒定CD106 、CD90表達陽性， CD31、CDDiL標記結(jié)果（200） DiL標記結(jié)果（200） AMINormal復(fù)方丹參滴丸對骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療急性心肌梗死干預(yù)作用的實驗研究AMINormal復(fù)方丹參滴丸對骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療急性Normal AMINormal ANBTNBTNORMAL AMINORMAL AMI Group左室后壁增厚，運動幅度變小

8、 CDDPMSC Group左室后壁厚度均勻，運動幅度正常AMI GroupCDDPMSC Group對AMI大鼠心臟射血分數(shù)的影響孫蘭軍等，中華醫(yī)學(xué)臨床雜志，2019，6（2）：4對AMI大鼠心臟射血分數(shù)的影響孫蘭軍等，中華醫(yī)學(xué)臨床雜志，2心肌梗死面積測定結(jié)果模型組MSCs復(fù)方丹參滴丸組心肌梗死面積測定結(jié)果模型組MSCs復(fù)方丹參滴丸組A，培養(yǎng)MSC用DiI（紅色）和Hoechst33258（藍色）染色的照片；B，心臟切片用Hoechst33258染色的照片，箭頭顯示部分移植的MSC；C，對照組心臟幾乎沒有MSC定位；A，培養(yǎng)MSC用DiI（紅色）和Hoechst33258（藍MSC移植后成活

9、和增殖 MSC移植后成活和增殖 極少量移植地細胞能表達-actinin，說明開始向心肌細胞分化，但這種分化是不完全的，因為沒有橫紋的出現(xiàn)。相對較多的細胞表達血管性血友病因子(vWF) ，說明移植的MSC能夠向內(nèi)皮細胞分化。極少量移植地細胞能表達-actinin，說明開始向心肌細胞CX-43染色在同一視野看到Dil標記的植入的紅色熒光的MSCs和二抗FITC標記的相應(yīng)綠色熒光的 CX-43陽性表達CDDP+MSC組（200）CX-43染色在同一視野看到Dil標記的植入的紅色熒光的MSCX-43染色MSC組（200）CX-43染色MSC組（200）Troponin 染色CDDP+MSC組（200）

10、 在同一視野看到Dil標記的植入的紅色熒光的MSCs和二抗FITC標記的相應(yīng)綠色熒光的 Troponin 陽性表達，Troponin 染色CDDP+MSC組（200） 在同Troponin 染色MSCs Group Troponin 表達（200） Troponin 染色MSCs Group Troponi對心臟膠原沉積的影響 HE Picrosirius red HE Picrosirius red normalMSCs+CDDPMSCs model對心臟膠原沉積的影響 HE 各心梗組大鼠的膠原含量無顯著差異。但是，MSC和CDDP+MSC移植使心肌梗死區(qū)I/III型膠原比值分別降低了77和

11、84。說明細胞移植能增加III型膠原含量，改善心肌順應(yīng)性，可能會對心功能有益。各心梗組大鼠的膠原含量無顯著差異。但是，MSC和CDDP+M*Balcalin induced migration of Mscs*Balcalin induced migration o Real-time quantitative RT-PCR analysis of VEGF, SCF, SDF-1 and MCP-1 mRNA change* p 0.05, * p 0.01, compared to model. (n=6), * Real-time quantitative R*Conclusions C

12、DDP可能通過多種途徑和機制干預(yù)誘導(dǎo)植入梗塞大鼠心肌干細胞的分化成活，并使植入細胞表達心肌特異性蛋白，說明植入細胞已分化為心肌樣細胞，同時可抑制膠原沉積，改善微環(huán)境。 有望成為中醫(yī)藥治療心血管疾病的一個新的發(fā)展方向，作為現(xiàn)代治療方法的補充手段，為臨床帶來廣闊的應(yīng)用前景。Conclusions CDDP可能通過多種途徑Is stem cell therapy for cardiac repair ready for patients? Is stem cell therapy for cardiRandomized Clinical Trials of Stem Cell Therapy for

13、 MIStudy n Cell Type /Treatment Mode of Delivery End Point P Janssens et al67BMMNCsIntracoronaryLV ejection fraction0.36BOOST60BMMNCsIntracoronaryLV ejection fraction0.0026ASTAMI100BMMNCsIntracoronaryLV ejection fraction0.05*REPAIR-AMI204BMMNCsIntracoronaryLV ejection fraction0.021Zohlnhoefer et al1

14、14G-CSFSubcutaneousInfarct size0.79STEMMI62G-CSFSubcutaneousLV systolic wall thickening1.00BMMNCs indicates bone marrow mononuclear cells; G-CSF, granulocyte colony-stimulating factor; and STEMMI, Stem Cells in Myocardial Infarction.*LV ejection fraction was higher in the control group.Circulation. 2019;114:353-358. Randomized Clinical Trials of Arrhythmias Restenosis, Accelerated Atherosclerosis, and Coronary Obstruction Abnormal Cellular DifferentiationIn addition，Safety Concerns Arrhythmias Restenosis, AcIs