血液染色體課件

1、 血液細(xì)胞染色體檢驗(yàn)概述：1956年Tjio確定了人類細(xì)胞染色體數(shù)目為 46條。(23對(duì)，其中22對(duì)為男性和女性共有，稱為常染色體；另一對(duì)則與性別有關(guān)，稱性染色體，男性為XY，女性為XX.) 1960年Nowell和Hungerford發(fā)現(xiàn)了慢性粒細(xì)胞白細(xì)胞特異性染色體異常，即Ph染色體。檢測(cè)方法：1.染色體非顯帶技術(shù)2.染色體顯帶技術(shù)3.染色體高分辨技術(shù)4.姐妹染色單體互換技術(shù)5.染色體原位雜交技術(shù)（FISH) 一、染色體非顯帶技術(shù) 1）直接法 抗凝骨髓標(biāo)本不經(jīng)培養(yǎng)，以PBS稀釋后加入秋水仙素“阻留”中期細(xì)胞，經(jīng)低滲液處理后，再經(jīng)預(yù)固定、固定后即可制片、染色、鏡檢。秋水仙素能干擾有絲分裂紡錘

2、體形成，使細(xì)胞“阻留”在分裂中期，增加中期細(xì)胞數(shù)目。低滲處理則使染色體分散、鋪展開來(lái)，便于分析。2）短期培養(yǎng)法 抗凝骨髓標(biāo)本在含小牛血清的培養(yǎng)液中于37培養(yǎng)24h或48h左右，加入秋水仙素“阻留”中期細(xì)胞。其他同直接法。 3）非顯帶染色體的識(shí)別和命名 中期染色體的形態(tài)：每條染色體上有一收縮成極小的部分，稱為著絲粒，該處為染色體的縮窄處，又稱為主縊痕。著絲粒在染色體上的位置各不相同，可將染色體分為二部分，染色體的短臂(short arm)用p表示；染色體的長(zhǎng)臂(long arm)用q表示。在染色體上也可看到其他的收縮凹陷處,稱為次級(jí)縊痕。有些染色體的一端還可有球形小體，稱隨體，多見(jiàn)于近端著絲粒染

3、色體。每條染色體的短臂和長(zhǎng)臂末端稱為端粒。 二、顯帶染色體技術(shù) 1）G顯帶 標(biāo)本先經(jīng)某種處理，再以姬姆薩染色后使染色體顯帶的方法。G顯帶的機(jī)制較復(fù)雜，一種觀點(diǎn)認(rèn)為，DNA上富含A-T堿基對(duì)的DNA和組蛋白結(jié)合緊密，胰酶處理時(shí)不易高度抽提，和染料親和力較強(qiáng)，呈深帶；而富含G-C堿基對(duì)的區(qū)段結(jié)合的蛋白質(zhì)容易被胰酶抽提，和染料親和力降低，呈淺帶。2）R顯帶 R帶帶紋與G帶、Q帶正好相反，即前者的陽(yáng)性帶相當(dāng)于后者的陰性帶，而前者的陰性帶則相當(dāng)于后者的陽(yáng)性帶。R帶按制備方法不同可分為熒光R帶和姬姆薩R帶兩種類型。其顯帶機(jī)制尚未完全明了，可能由于DNA受熱變性，使富含A-T堿基對(duì)的區(qū)段單鏈化，故不易為姬姆

4、薩染色，呈淺帶；而富含G-C堿基對(duì)的區(qū)段仍保持正常的雙鏈結(jié)構(gòu)，易于染色，故顯深帶。2）非整倍體 如果生殖細(xì)胞在成熟分裂時(shí)僅僅有個(gè)別染色體發(fā)生不分離，結(jié)果造成受精卵中染色體的數(shù)目不是染色單體的倍數(shù)，則稱為非整倍體。因個(gè)別染色體增加而染色體總數(shù)超過(guò)二倍體者，稱為超二倍體；少于二倍體者，稱為低二倍體。如果染色體數(shù)目仍然是二倍體，但不是23對(duì)，而是個(gè)別染色體增加合并，個(gè)別染色體缺失，則稱為假二倍。3）嵌合體 如果染色體不分離現(xiàn)象發(fā)生在受精卵卵裂過(guò)程及胚胎發(fā)育早期的細(xì)胞分裂過(guò)程中，則此胚胎的部分細(xì)胞發(fā)生染色體數(shù)目異常，一個(gè)個(gè)體具有幾個(gè)不同核型的細(xì)胞系，稱為嵌合體。嵌合體的臨床表型一般比較輕。（2）染色體

5、結(jié)構(gòu)異常1）缺失(deletion) 指染色體臂的部分丟失，用del表示。2）重復(fù)(duplicatlon) 指同源染色體中條斷裂后，其斷片連接到另一條同源染色體的相對(duì)應(yīng)部位或由同源染色體間的不等交換，使一條同源染色體上部分基因發(fā)生重復(fù)，而另一條同源染色體相應(yīng)缺失，一般用dup表示。3）倒位(inversion) 指染色體中的某一片段斷裂下來(lái)，顛倒后重新連接，造成原來(lái)基因順序的顛倒。倒位用inv表示。4）易位(translocatiol) 指染色體的節(jié)段位置發(fā)生改變，即一條染色體斷裂后，其片段接到同一條染色體的另一處或接到另?xiàng)l染色體上去。易位用t(A；B)的形式表示，A、B分別表示發(fā)生易位的兩

6、條不同染色體。 3染色體分析在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用（1）在白血病中的應(yīng)用 1）在白血病診斷和分型中的應(yīng)用 在多種白血病和其它血液系統(tǒng)疾病中可發(fā)現(xiàn)特異性的和非特異性的染色體異常。染色體異常的檢出對(duì)血液系統(tǒng)疾病的診斷、鑒別診斷等顯示越來(lái)越重要的作用。 如CML患者中費(fèi)城（Ph）染色體發(fā)生率可達(dá)90%以上，成為慢性粒細(xì)胞白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志。該染色體異常是9號(hào)染色體長(zhǎng)臂3區(qū)4帶（9q34）和22染色體長(zhǎng)臂1區(qū)1帶（22q11）相互易位所致，對(duì)CML 的診斷具有重要意義。50-80的急性髓細(xì)胞白血病(AML)中可發(fā)現(xiàn)克隆性染色體異常。由于特異性染色體異常對(duì)疾病診斷有標(biāo)志和分類的意義，故被MIC協(xié)作組列

7、為急性白血病MIC(形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué))分型的主要指標(biāo)之一。2）在白血病預(yù)后判斷、指導(dǎo)治療中的作用 AML中具有t(15；17)，inv(16)，t(8；21)異常的病人對(duì)治療反應(yīng)良好，緩解期較長(zhǎng)，而具有-5、-7、+8及t(9；22)的AML病人則預(yù)后較差。在ALL中，染色體數(shù)超過(guò)50的超二倍體者對(duì)治療的反應(yīng)良好，而t(9；22)、t(4；11)及：t(8；14)者則預(yù)后很差，生存期多小于1年。慢性粒細(xì)胞白血病(CML)患者出現(xiàn)雙倍Ph，+8，i17q等新的異常克隆時(shí)，往往預(yù)示著急變，核型異常對(duì)慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)的預(yù)后判斷具有重要意義。 （2）在骨髓增生異常綜合征中的應(yīng)用

8、染色體異?？梢?jiàn)于40-80的MDS，常表現(xiàn)為染色體的丟失、缺失，亦可見(jiàn)染色體增加和結(jié)構(gòu)異常如-7、-17、-Y、5q-、7q-以及+8、+ll和t(3；3)(q21；q26)、t(5；17)(q32；q12)等。在MDS與再障、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿(PNH)等疾病的鑒別中染色體分析技術(shù)有十分重要作用。染色體分析也有利于判斷MDS的轉(zhuǎn)歸及預(yù)后。 （3）在淋巴瘤中的應(yīng)用 核型異常同惡性淋巴瘤亞型相關(guān)。如大多數(shù)Burkitt淋巴瘤具有t(8；14)，少數(shù)為t(2；8)和t(8；22)。核型異常對(duì)淋巴瘤的預(yù)后判斷價(jià)值也是明確的，如約85的濾泡性(follicular)淋巴瘤具有t(14；18)，或單獨(dú)存在或與其他異常一起存在，前者預(yù)后良好而后者預(yù)后差。 （5）在骨髓移植中的應(yīng)用 染色體檢查是驗(yàn)證骨髓移植是否成功的常用方法。在供、受者性別不合時(shí)，如男性受者接受了女性骨髓，移植后造血細(xì)胞中Y染色體消失，或女性受者接受了男性骨髓，造血細(xì)胞中出現(xiàn)了Y染色體，均表示完全的植入