藥代動(dòng)力學(xué)在新藥研究中的應(yīng)用課件

1、藥代動(dòng)力學(xué)在新藥研究中的應(yīng)用 ： 85327256 ： 1 生物利用度和生物等效性研究 人體生物利用度（bioavailability）是反映制劑中主藥吸收進(jìn)入人體體循環(huán)的相對(duì)量和速度的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。生物等效性（bioequivalancy）試驗(yàn)是指用生物利用度研究的方法，以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為指標(biāo)，比較同一種藥物的相同或者不同劑型的制劑，在相同的試驗(yàn)條件下，其活性成份吸收程度和速度有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的人體試驗(yàn)。 一、生物樣品測(cè)定方法的要求1特異性首選色譜法如HPLC、GC、GC-MS或LC-MS等方法放免與ELISA方法有一定的特異性，靈敏度高，但常有交叉反應(yīng)。2標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍必須用至少5個(gè)濃

2、度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，應(yīng)使用與待測(cè)樣品相同生物介質(zhì)，線性范圍要能覆蓋全部待測(cè)濃度，不得用線性范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線不包括零點(diǎn)。3精密度與準(zhǔn)確度精密度用質(zhì)控樣品的日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示，一般RSD應(yīng)小于15，在LOQ附近RSD應(yīng)小于20。準(zhǔn)確度是指用特定方法測(cè)得的生物樣品濃度與真實(shí)濃度的接近程度，可用相對(duì)回收率表示，一般應(yīng)85115范圍內(nèi)，在LOQ附近應(yīng)在80120范圍內(nèi)。 加樣濃度 (mgL)0.269.8419.680.269.8419.680.299.1020.490.299.7221.540.2210.2219.030.259.3819.56 檢出濃度0.241

3、0.2721.080.309.2118.26 (mgL)0.308.6617.510.299.3719.090.308.4716.960.309.6217.65 X0.279.3419.010.299.4619.22 SD0.040.851.800.020.211.50 RSD（%）14.89.19.56.92.27.8 表1-3 精密度試驗(yàn)日 內(nèi) 變 異 日 間 變 異6提取回收率應(yīng)考察高、中、低三個(gè)濃度的提取回收率，其限度一般應(yīng)高于50。7質(zhì)控樣品質(zhì)控樣品系將已知量的待測(cè)藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于質(zhì)量控制。一般配制高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。8質(zhì)量控制應(yīng)在生物樣品分析方法確證完

4、成之后開始測(cè)試未知樣品。每個(gè)未知樣品一般測(cè)定一次，必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)測(cè)。每批生物樣品測(cè)定時(shí)應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于20。一般情況下，受試者應(yīng)具備如下條件:男性1840周歲。同一批受試者年齡不宜相差10歲以上。體重：一般要求在標(biāo)準(zhǔn)體重10范圍內(nèi)；或體重指數(shù)BMI在2024范圍內(nèi)。身體狀況：無心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史；體格檢查示血壓、心率、心電圖、呼吸狀況、肝、腎功能和血象無異常。試驗(yàn)前兩周內(nèi)未服用任何其它藥物。簽署知情同意書。 受試者例數(shù)為1824例 絕對(duì)生物利用度試驗(yàn)選用經(jīng)批準(zhǔn)上市的相同藥物靜脈注射劑

5、作為參比制劑。相對(duì)生物利用度試驗(yàn)選用經(jīng)批準(zhǔn)上市的相同藥物相同劑型的主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑 對(duì)受試者的要求受試者于試驗(yàn)前1日和試驗(yàn)期內(nèi)均勿飲用酒類和咖啡類飲料；試驗(yàn)前禁食過夜10小時(shí)。于次日早晨空腹服用受試制劑或參比制劑，用150200ml溫開水送服；服藥2小時(shí)后方可再飲水，4小時(shí)后進(jìn)統(tǒng)一餐。受試者服藥后應(yīng)避免劇烈運(yùn)動(dòng)，亦不得長時(shí)間臥床三、設(shè)計(jì)方法一個(gè)受試制劑與一個(gè)參比制劑比較的情況下，采用兩制劑雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以減少不同試驗(yàn)周期和個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。受試者按隨機(jī)原則分成兩組。一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。通常應(yīng)間隔1周或2周。半衰

6、期長的藥物，需有更長的間隔時(shí)間。四、生物樣品采集時(shí)間點(diǎn)的確定通常應(yīng)有預(yù)試驗(yàn)，為合理設(shè)計(jì)采樣點(diǎn)提供依據(jù)。應(yīng)用血藥濃度測(cè)定法時(shí)，服藥前應(yīng)先取空白血樣。一般在藥時(shí)曲線峰前部分至少取4個(gè)點(diǎn)，峰后部分取6個(gè)或6個(gè)以上點(diǎn)?？偛蓸狱c(diǎn)不少于11個(gè)。采樣持續(xù)到受試藥原形或其活性物35個(gè)半衰期時(shí)，或持續(xù)采樣至血藥濃度為Cmax的110120以后。2 臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究 1研究目的：了解新藥在體內(nèi)動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，闡明ADME過程。為藥理毒理研究中的安全性與有效性提供依據(jù)。2、檢測(cè)方法：建立檢測(cè)方法要求同上！放射性核素標(biāo)記藥物，用前要進(jìn)行純度檢查，放化純度95%標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍：要指明藥物的化學(xué)純度要制備藥物在不同

7、生物介質(zhì)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在所測(cè)濃度范圍內(nèi)，藥物自生物樣品的回收率不低于70。3.試驗(yàn)材料與方法1）實(shí)驗(yàn)藥品應(yīng)注明受試藥物的名稱、批號(hào)、來源、純度、保存條件及配制方法。使用的受試藥物應(yīng)與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究使用的一致。對(duì)照品應(yīng)是標(biāo)明含量的純品 2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般采用成年和健康的動(dòng)物。常用動(dòng)物有小鼠、大鼠、兔、豚鼠和狗等。首選動(dòng)物：應(yīng)與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究一致。盡量在清醒狀態(tài)下實(shí)驗(yàn)，動(dòng)力學(xué)研究最好從同一動(dòng)物多次采樣。 創(chuàng)新藥應(yīng)選用兩種或兩種以上的動(dòng)物，其中一種為嚙齒類動(dòng)物；另一種為非嚙齒類動(dòng)物。其他類型的藥物，可選用一種動(dòng)物（建議首選非嚙齒類動(dòng)物，如犬或兔等）?？诜盟幉灰诉x用兔子等食草類動(dòng)物。 3）給藥

8、途徑 所用的給藥途徑和方式，應(yīng)盡可能與臨床用藥一致。4）試驗(yàn)劑量藥代動(dòng)力學(xué)研究至少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組，其中一個(gè)劑量應(yīng)相當(dāng)于藥效學(xué)試驗(yàn)有效劑量，高劑量一般接近于最大耐受量(MTD)，以了解藥物在體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)過程是線性動(dòng)力學(xué)還是非線性動(dòng)力學(xué)。4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1）血藥濃度時(shí)間曲線：取樣點(diǎn)的設(shè)計(jì)應(yīng)兼顧到吸收相、分布相和消除相.根據(jù)研究樣品的特性，取樣點(diǎn)通?？砂才?13個(gè)點(diǎn)不等，即吸收相應(yīng)取23個(gè)點(diǎn)，達(dá)峰濃度處取23點(diǎn)，分布相取23點(diǎn)，消除相取34個(gè)點(diǎn)整個(gè)采樣時(shí)間應(yīng)持續(xù)到35個(gè)半衰期或到Cmax的1/101/20。在非連續(xù)取樣的動(dòng)物試驗(yàn)中，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)至少應(yīng)有5只動(dòng)物的數(shù)據(jù);如經(jīng)同一動(dòng)物多次采樣，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)至少應(yīng)

9、有3只動(dòng)物的數(shù)據(jù)?？诜o藥，一般在給藥前應(yīng)禁食12小時(shí)以上。特布他林濃度-時(shí)間曲線圖3）排泄試驗(yàn)一般選用小鼠或大鼠進(jìn)行排泄試驗(yàn)。選定一個(gè)有效劑量，給藥后按一定的時(shí)間間隔分段收集尿液、糞便和大鼠的膽汁，記錄每一時(shí)間間隔內(nèi)的尿液、糞便和膽汁的體積或重量，測(cè)定藥物在其中的排泄量。至少5只動(dòng)物的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，以確定藥物的排泄途徑、排泄速度和各途徑的排泄量。4）血漿藥物蛋白結(jié)合方法：平衡透析法、超過濾法、分配平衡法、凝膠過濾法、光譜法等。以平衡透析法最簡單、經(jīng)濟(jì)，但費(fèi)時(shí)，需24h達(dá)平衡。至少進(jìn)行3個(gè)濃度的血漿蛋白結(jié)合率試驗(yàn)，每個(gè)濃度至少重復(fù)試驗(yàn)3次，以了解是否有濃度依賴性。注意事項(xiàng)：考慮影響因素：pH、血漿

10、濃度、藥物濃度等證明藥物與半透膜本身有無結(jié)合，應(yīng)做對(duì)照從半透膜上溶解下來的成分會(huì)影響藥物測(cè)定，應(yīng)特別注意。要分析空白讀數(shù)高的原因?？杀谎獫{轉(zhuǎn)化的藥物，要加少量酶抑制劑。6）藥物對(duì)代謝酶活性的影響： 對(duì)于創(chuàng)新藥，應(yīng)觀察該藥物對(duì)細(xì)胞色素P450同工酶的誘導(dǎo)或抑制作用。5、數(shù)據(jù)分析6、結(jié)果與評(píng)價(jià)7、注意事項(xiàng)：應(yīng)提供有關(guān)測(cè)試方法學(xué)的確證資料應(yīng)提供每一只動(dòng)物每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)、均值和標(biāo)準(zhǔn)差；每只動(dòng)物的藥物濃度時(shí)間曲線及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)值。比較藥物濃度時(shí)間曲線擬合計(jì)算值與觀察值的符合程度。進(jìn)行生物樣品分析時(shí)，應(yīng)注意凍融的影響和質(zhì)控。在短時(shí)間內(nèi)，一組動(dòng)物不得重復(fù)不同劑量的試驗(yàn)。常用動(dòng)力學(xué)軟件介紹1.NONLIN

11、軟件國外應(yīng)用最廣泛的軟件Win Nonlin是其Windows版本，為美國Pharsight公司的產(chǎn)品可用于幾乎所有的藥代、藥效及非房室模型的分析藥代動(dòng)力學(xué)和生物藥劑學(xué)程序包PKBP-N1由南京軍區(qū)總醫(yī)院于1985年編制主要功能包括：非線性曲線擬合隔室模型并作參數(shù)估算非線性米曼型消除動(dòng)力學(xué)參數(shù)估算非房室模型分析給藥方案設(shè)計(jì)和預(yù)測(cè)體內(nèi)血濃變化3P87/3P97（practical pharmacokinetic program)國家藥品評(píng)審中心組織中國藥理學(xué)會(huì)數(shù)學(xué)專業(yè)委員會(huì)編制國內(nèi)應(yīng)用最廣可處理各種途徑的線性和非線性藥動(dòng)學(xué)模型主要功能：可處理不同房室數(shù)的各種線性和非線性藥動(dòng)學(xué)模型的時(shí)間血濃數(shù)據(jù)，

12、并打印藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及各種圖表計(jì)算機(jī)自動(dòng)給出可能的房室數(shù)及權(quán)重系數(shù)的計(jì)算結(jié)果對(duì)多劑量組數(shù)據(jù)進(jìn)行批處理及統(tǒng)計(jì)分析用戶可自定義房室模型、權(quán)重系數(shù)、計(jì)算方法、收斂精度、初始值等進(jìn)行研究分析提供12種模型，其中9種屬于一級(jí)速率消除的線性房室模型，3種屬于M ichaelis-Menten消除的一房室非線性模型 MAIN MENU 1. 3p87 (New Edition) 2. Bioequivalence evaluation 3. Estimation of Absorption Rate 4. Estimation of Pk parameters from urinary data 5. Exit

13、 MAIN MENU 1. Input or Modify Data 2. Computation for Mean C-T Data or Selection of Models 3. Computation for Batch or Groups of C-T Data 4. Algorithms and Conditions Specified by User 5. Output of Computed Results 6. Definition of Pharmacokinetic Models 7. Simplified Parameters Estimation System 8.

14、 ExitMODEL: Two-compartment Model with i.v. InjectionRecord No. 2 Mean of Group 1Algorithm = Marquardt Weight = 1Compartment number = 2 Regression coefficient = .9987655R square = .9975322 WSS = 4.953764E-02Goodness of fit = 7.419017E-02 Maximum C(obs)-C(cal) = .1531363Max (C-C(cal)/C) % = 11.99278

15、Convergent precision = 7.894796E-30AIC = -31.06529 Run test: 4Parameter Unit Values Standard ErrorA ug/ml 6.668624 2.88E-01alpha 1/h 3.888228 3.02E-01B ug/ml 1.162247 1.62E-01beta 1/h 0.392228 6.58E-02V (c) (mg)/(ug/ml) 1.276997T 1/2 alpha h 0.178268t 1/2 beta h 1.767202K21 1/h 0.911100K10 1/h 1.673

16、882K12 1/h 1.695475AUC (ug/ml)*h 4.678270CL(s) mg/h/(ug/ml) 2.137542 BIOEQUIVALENCE EVALUATION PROGRAM 1. Input PK parameters (AUC,Cmax,Tmax,. ) 2. Bioequivalence Analysis of PK parameters file input in 1. 3. Input Concentration-Time data and create a data file 4. Estimation of Concentration-Time da

17、ta file 5. Example From : Textbooks & Monographs: S-C Chow & J-P Liu 6. ExitANALYSIS OF BIOEQUIVALENCE 1. Input Concentration-Time data file and Estimation of Parameters 2. Display F Test and Two two One-sided tests Procedure 3. Display Individual subject Concentration-Time data and curve 4. Printou

18、t C-T data and Estimated Parameters on Printer 5. Return to Main menu PARAMETER:AUC(0-Tn) ANALYSIS OF VARIANCE Data without transformation-Source Sum of Squares DF Mean Squares F value P value-Inter-subjects Carry-over 554.0536 1 554.0536 7.1019 0.01578 Residuals 1404.2750 18 78.0153 5.5943 0.00032I

19、ntra-subjects Formulation 0.0051 1 0.0051 0.0004 0.98493 Periods 5.7711 1 5.7711 0.4138 0.52814 Residuals 251.0191 18 13.9455Total 2215.1239 39-Two one-side test and (1-2*alpha) confidential interval-Mean of Reference: 33.7026 Mean of Tested: 33.7266t1: 5.728 = t(1-alpha): 1.7340 t2: 5.688 = t(1-alpha): 1.73490% confidential interval: 94.0%-106.1%- CONCLUSION: Test and Reference formulation bioequivalencePARAMETER:AUC(0-Tn) ANALYSIS OF VARIANCE After Logrithmic transformation-source Sum of Squares DF Mean Squares