160株新生兒肺炎克雷伯菌的耐藥性分析

1、160株新生兒肺炎克雷伯菌的耐藥性分析【摘要】目的分析我院新生兒科病區(qū)產(chǎn)ESBLs、Ap酶的肺炎克雷伯菌的耐藥情況，指導(dǎo)臨床合理用藥。方法按LSI推薦的超廣譜內(nèi)酰胺酶(ESBLs)確證試驗,對肺炎克雷伯菌進展ESBLs檢測,并用三維試驗法、三維試驗抑制試驗進展Ap酶檢測。結(jié)果160株肺炎克雷伯菌中,檢到產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌84株，陽性率高達52.50%。71株耐頭孢西丁菌株檢到23株產(chǎn)Ap酶，其中單產(chǎn)Ap酶5株，產(chǎn)Ap+ESBLs菌株18株。Ap酶陽性率為14.38%23/160。結(jié)論別離自我院新生兒科的肺炎克雷伯菌對-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥嚴重，主要以產(chǎn)ESBLs和或Ap酶為主。給臨床抗感

2、染治療帶來很大困難，是院內(nèi)感染的一大隱患?！娟P(guān)鍵詞】超廣譜-內(nèi)酰胺酶Ap酶肺炎克雷伯菌三維試驗三維抑制試驗Ap酶是繼ESBLs之后,臨床上出現(xiàn)的腸桿菌科細菌的又一重要耐藥機制,肺炎克雷伯菌作為條件致病菌是新生兒感染性肺炎的常見病原菌，也是重要的院內(nèi)感染病原菌,在醫(yī)院感染別離率一直趨于首位。近年來,由于廣譜抗菌藥物的廣泛大量應(yīng)用,導(dǎo)致這些細菌出現(xiàn)高產(chǎn)Ap酶菌株。近年來，編碼Ap酶的基因已轉(zhuǎn)移到質(zhì)粒上，并在大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌中出現(xiàn)1，易在不同菌種間橫向播散。所以監(jiān)測和檢測這類細菌產(chǎn)ESBLs和Ap酶的情況,對指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物以及預(yù)防和控制院內(nèi)感染的發(fā)生具有重要的意義。1材料與方法1.

3、1材料1.1.1菌株來源肺炎克雷伯菌160株均別離自2022年1月至2022年12月我院新生兒病區(qū)患兒呼吸道標(biāo)本。1.1.2一次性培養(yǎng)皿與藥敏紙片一次性培養(yǎng)皿為鄭州博賽產(chǎn)品；藥敏紙片為英國XID公司產(chǎn)品。1.1.3試劑克拉維酸中國藥品生物制品檢定所；鄰氯西林上海四藥。1.1.4質(zhì)控菌株E.liAT25922，K.pneuniaeAT700603，E.laae029，E.laae029。1.2方法1.2.1藥敏試驗按LSI推薦的K-B紙片法進展測定，并按其制定的標(biāo)準(zhǔn)進展判讀。1.2.2超廣譜-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)檢測按LSI推薦確實證試驗測定ESBLs。1.2.3產(chǎn)Ap酶菌株初篩采用K-B法，

4、按照LSI推薦的方法進展2，頭孢西丁(30g/片)抑菌環(huán)直徑17時，提示對FX中介或耐藥為疑產(chǎn)Ap酶菌株。1.2.4-內(nèi)酰胺酶粗提取物的制備取50l0.5麥?zhǔn)蠁挝痪簠⒓?2l胰蛋白胨肉湯中，35恒溫搖床孵育6h,4000r/in，4離心20in，棄上清，將沉淀物-70反復(fù)凍融5次，參加pH7.0的0.01l/L磷酸鹽緩沖液1.2l混勻，14000r/in，4離心20in，取上清液即為酶粗提物，無菌試驗后-20保存。1.2.5三維試驗對可疑菌株的酶提取物用頭孢西丁三維試驗方法進展Ap酶確證。1.2.6三維試驗抑制試驗3在涂有E.liAT25922菌液的-H平皿中央貼1片30g頭孢曲松紙片,垂直

5、挖四個狹縫,分別參加40l的試驗菌株酶粗提取物、36l酶粗提取物+4l2l/L鄰氯西林、36l酶粗提取物+4l2l/L克拉維酸、36l酶粗提取物+4l2l/L克拉維酸+4l2l/L鄰氯西林,35培養(yǎng)24h,擴大生長區(qū)域消失為酶抑制實驗陽性。2結(jié)果2.1160株肺炎克雷伯菌耐藥現(xiàn)象較為嚴重，對16種抗菌藥物中的13種均出現(xiàn)不同程度的耐藥，其中對青霉素類、一代至四代頭孢菌素的耐藥率均超過60%，經(jīng)ESBLs確證試驗測定產(chǎn)ESBLs有84株，陽性率高達52.50%。對加酶抑制劑的內(nèi)酰胺類復(fù)合制劑舒普深、特治星的敏感率僅為55.06%、56.05%，頭霉素類的頭孢西丁敏感率僅為55.63%，應(yīng)引起臨床

6、重視。尚未出現(xiàn)對碳青酶烯類耐藥的肺炎克雷伯菌菌株。2.2經(jīng)產(chǎn)Ap酶菌株初篩試驗檢出可疑產(chǎn)Ap酶細菌71株，經(jīng)頭孢西丁三維試驗方法確證產(chǎn)Ap酶細菌5株。經(jīng)三維抑制試驗確證單產(chǎn)Ap酶菌株5株與三維試驗相符，單產(chǎn)ESBLs菌株84株與ESBLs紙片確證試驗相符。同時產(chǎn)Ap+ESBLs菌株18株，即產(chǎn)超超廣譜內(nèi)酰胺酶(SSBLs)，耐藥情況非常嚴重，對-內(nèi)酰胺類抗菌藥物包括含酶抑制劑的復(fù)合制劑全部耐藥，氨基糖苷類、喹諾酮類耐藥率也有所進步，僅碳青酶烯類未出現(xiàn)耐藥。3討論超廣譜內(nèi)酰胺酶ESBLs屬于Bush分類2be亞組，分子分類中屬于A類酶，ESBLs是目前腸桿菌科細菌尤其是肺炎克雷伯菌對廣譜頭孢菌素

7、產(chǎn)生耐藥的最主要原因，它由質(zhì)粒介導(dǎo)，可使細菌對青霉素和一、二、三、四代頭孢菌素以及單環(huán)菌素耐藥，但對頭霉素、碳青酶烯類及酶抑制劑克拉維酸敏感。Ap內(nèi)酰胺酶是由革蘭氏陰性桿菌產(chǎn)生的主要由染色體介導(dǎo)的絲氨酸頭孢菌素酶組成的一個酶家族，屬于Bush分類中的組類，能水解三代頭孢，不被內(nèi)酰胺酶抑制劑克拉維酸所抑制。研究說明:-內(nèi)酰胺類抗菌藥物頭孢西丁和碳青酶烯抗菌藥物亞胺培南是強有力的Ap酶誘導(dǎo)劑4。假如用頭孢西丁或頭孢西丁結(jié)合第三代頭孢菌素治療含有ap基因的腸桿菌科細菌如肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌，那么在治療過程中會因為Ap酶的大量產(chǎn)生而導(dǎo)致治療失敗。理論上講，四代頭孢對產(chǎn)Ap酶菌株敏感，但假如同時產(chǎn)E

8、SBLs那么四代頭孢也將無效。實驗結(jié)果顯示，我院新生兒病區(qū)別離出的160株肺炎克雷伯菌耐藥情況非常嚴重，僅對阿米卡星、亞胺培南、美羅培南尚未出現(xiàn)耐藥，其他16種抗菌藥物均出現(xiàn)不同程度的耐藥，其中對新生兒適用的-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥嚴重，一代至四代頭孢菌素耐藥率均超過60%，舒普深、特治星敏感率也僅有55.06%和56.05%。產(chǎn)超超廣譜內(nèi)酰胺酶(SSBLs)的肺炎克雷伯菌檢出率高達11.25%(18/160)，針對這類細菌臨床用藥唯有選用亞胺培南、美羅培南，抗菌藥物可選范圍之局限令人擔(dān)憂。由于臨床大量廣泛使用三代頭孢、亞胺培南、美羅培南，在抗菌藥物的選擇壓力下我院新生兒科已挑選出持續(xù)高產(chǎn)型Ap酶菌株，一旦處理不當(dāng)，將持續(xù)在醫(yī)院環(huán)境內(nèi)擴散。假如進一步出現(xiàn)質(zhì)粒介導(dǎo)的Ap酶菌株5，那