DB12-T361-2008單極蟲病診斷規(guī)程

1、ICS65.150B50 備案號：2008-02-19發(fā)布2008-03-30 實施DB12DB12/T 361-2008單極蟲病診斷規(guī)程Standard method fbr diagnosing Lohanellidae in fish未津市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB12/T 361-2008一、w -I.-刖 百-2000的編制要求為指南。出。水產(chǎn)研究所、鄧威、王玉佩、楊凱、馬文婷、干.菁。本標(biāo)準(zhǔn)的編弓以GB/T 1.1 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、B、C為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由大#市水產(chǎn)局提 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：犬津市 本標(biāo)準(zhǔn)主耍*草人：李軍 本標(biāo)準(zhǔn)I- 2008年X X月畐次發(fā)布。單極蟲病診斷規(guī)程1范圍本

2、規(guī)程規(guī)定9魚類單極蟲呷診斷規(guī)程的定義、病原種類、材料和試劑、采樣、診斷步驟、病原體計 數(shù)及結(jié)果判定的*求。本規(guī)程適用下對淡水食用W類及觀賞魚單極蟲病的診斷。2規(guī)范性引用文卜列文件中呻條款通過本屮準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的 修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)修訂版均不適用丁本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達成協(xié)議的各方研究 是否可使用這些*件的最浙版*992分析與寄生蟲病冊中國科亭GB/T 6682-1魚類寄生蟲 魚病調(diào)查手 一版OIE長。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用丁本標(biāo)準(zhǔn)。 驗室用水規(guī)格和試驗方法張劍英主編，科學(xué)出版社，1999:院水生先物研究所角.病學(xué)研究

3、室編為，上海科學(xué)技術(shù)出版社，1981,第水生動*疾病診斷手冊2000第ZZ版3術(shù)語和定義卜列術(shù)語和定*適用于本牛準(zhǔn)。單極蟲病lohanellidae由單極蟲屬(ielohcmellus Kudo, 1933)的一些種類寄生魚體導(dǎo)致寄主各種臨床表現(xiàn)的疾病叫單 極蟲病。4病原種類-單極蟲屬及單極蟲扃，見附錄A在魚類養(yǎng)殖中妹引起單極蟲阿的常見種類有鮫單極蟲(T.rohitae).光滑單極蟲IT. hovorkae)、吉 陶單極蟲(T. kitau*)等。參照魚類寄生蟲與寄生蟲病1999年第一篇第/、章第_節(jié)-十一-單極蟲科 (資料性附錄)。5材料和試劑5. 1皿、5. 2材料普通光學(xué)顯微鏡;放大鏡、

4、雙|筒解剖鏡、載玻片、蓋玻片、綴于、手術(shù)刀、手術(shù)剪、吸水紙、培養(yǎng) 滴管。試劑0.85%生理鹽水、70%酒精、鍬)5%或10%福爾馬林、甘油膠月東、肖氏液。 配置試劑用水符合GB/T 66821992要求。6采樣及目檢 6. 1樣品目檢單極蟲的多數(shù)種#,寄生于魚體表、觥、腸道及體腔，都表現(xiàn)出肉眼可見的癥狀，即白點狀或白 色的瘤狀地囊，抱囊話狀和大小不&則，顏色白、不透明。用鑲子取下一個抱囊放在載玻片上，加上一DB12/T 361-20082蓋玻片蓋上*壓，如勉囊破裂并流出乳白色液體，可初步診斷為單極蟲。觀察結(jié)束，做 行實驗室檢荷的采樣。滴生理鹽水，用 好詳細記錄并進6.2采樣量用了檢查診的樣品至

5、少5尾章、第一部分概符B.采樣方法忍行采樣，見附錄B (資料性附錄)。6. 3樣品運輸實驗室檢查用活魚進行 表示魚死術(shù)久，h以用來檢查實驗室進行*極蟲病檢査寸應(yīng)在采集的病料中加注原池水進行活體運輸。每個容器只裝運同一種病 料送至實驗室。嵐果運輸時間曲過2h,則應(yīng)耍有增氧設(shè)備并應(yīng)盡暈保證低溫低密度。折的魚應(yīng)有定數(shù)量，以保證檢查結(jié)果貝有代表性和可靠性，進行單極蟲病檢查時采集 0尾。也可按照OIE水生動物疾病診斷手冊2000第二版中第二部分魚類病害、第1.1檢查，如果是死魚，必須是新鮮剛死的揭開觥蓋觀察，如鯉瓣鮮紅,7診斷步驟及保7. 1顯微鏡鏡檢在100倍或40()倍顯微鏡卜，個孑包囊中有成千上萬

6、個拖子蟲。7. 1. 1體表檢查體表，用輕壓片，壓片后，7. 1.2 鰭日檢止常的魚剖鏡檢査有否抱囊日檢魚體務(wù)鰭有潰爛或向， 蓋玻片蓋上輕壓，冃點或抱囊直7. 1.3 醜 先用剪刀將左#兩邊的鯉完， 組織(應(yīng)從每一邊車的第一片鯉 上蓋玻片，并輕壓#片，顯微鏡如鯉上肉眼可血白點或抱囊.，則用鑲子刮取冃點或抱囊，或取整片鯉絲壓片，鏡卜檢査。7. 1.4體腔打開魚體腹腔，寄生。取載玻片一弓卜滴一滴生用鹽水，用鐐子刮取冃點部位或砲囊置丁載玻片上，蓋上蓋玻片，并輕 壓玻片，見抱囊破*后，顯微鏡，僉查。7. 1.5腸道將腸道外壁上才有脂肪去除草凈，把腸前后伸直擺在解剖盤上。將腸分為前、中、后三段，各取一

7、段，用剪刀從與腸苒 滴生理鹽水，蓋上.玻片，進行鐐檢，每部分同時檢査兩片標(biāo)本。剪開腸道后，如察。7.2單極蟲的保存 按照魚病調(diào)漬方法進行，見附錄C壓破的飽囊液體早.橄欖形的胞子狀，清晰可見，可診斷為單極蟲病。一解剖刀刮取遺片卜的瘤狀物，置丁載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片用拇指輕 顯微鏡觀察。,取務(wù)個鰭進行檢查.取載玻片一張，滴一滴生理鹽水，剪卜各鰭，置丁玻片上，解存在。8計數(shù)及結(jié)果判定點，用鐐子刮取潰爛或白點部位，置于載玻片上，加一滴生理鹽水，用 裂，顯微鏡檢査。整地取出，分開放在培養(yǎng)皿里，并附上左右標(biāo)記。用剪刀剪取一小塊醜 片接近兩端的位置剪取)，放在載玻片上，滴入1滴2滴生理鹽水，蓋

8、 査有否跑囊存在，每邊鯉至少要剪兩片。仔細觀察顯露出的部位有無可疑病變。如發(fā)現(xiàn)白點，或較大抱囊，有可能是單極蟲行的方向剪井一個小小切口，用鐐子從切口上取一小滴內(nèi)容物放在載玻片上，滴一見白點或砲附著，直接用解剖刀刮取白點或抱囊丁在玻片上，壓片后，顯微鏡觀f手冊1981，第二版第四章第五節(jié)-1-標(biāo)本的收集-(4)粘抱子蟲及(6)單弛子蟲 (資料性附錄)。DB12/T 361-2008 8.1病原體記數(shù) 8.1.1計數(shù)符用“ + ”表?。?+ ”表示有；+”表示多；+”表示很多。8. 1.2高倍顯微鏡400倍下，有1個20個蟲體時記 + ”，21個50個蟲體時記+”，50個以 上的蟲體時記“十+”

9、；弛囊用數(shù)字說明，蟲體數(shù)為同一片中3個視野的平均數(shù)。8.2結(jié)果判定日檢及高倍顯微鏡卜TOO倍觀察蟲體結(jié)構(gòu)來判斷被檢樣品是否感染單極蟲，如若感染則判為單極蟲 病。A. 1天津地區(qū)常見嚴(yán)重致病種(T. hovorkae)、古陶單極蟲(附錄A(資料性附錄)單極蟲病原種類特征類有鮫單極蟲(T rohitae) (Southwell & Prashad, 1918)、光滑單極蟲 T. kitauei) 等。(T. rohitae) 片E白色當(dāng)mm。孑包于 于長的1/31A. 1.1簸單極蟲著生丁魚體鱗 可達32 mm,短的布5 節(jié)長圓形，約占飽 A. 1.2 光滑單極蟲(T. hovorkaQ通常寄生丁

10、鯉(Southwell&Prashad, 1918)蠟黃色，抱囊大小形狀不一，有圓形、橢圓形、氏方形或多角形，其R 長29.8卩m35卩m, 7卩m12.3 pm,極囊氏19卩m25卩m,寬為7卩m, 卩2。嗜碘泡1個。弛于外面常被有一層無色透明的薄膜，見圖A.1。卿魚體表及灘部。抱囊呈不規(guī)則塊狀，人小不一，為2 mm3mm,見圖A.2。A. 1.3 吉陶單極莊,(T. kitauei)寄生在鯉魚腸道粘膜上，通 泡1個，1個棍棒狀極囊，見圖A.常會形成大拖囊，使腸膨大變薄。拖于一般較大，梨形或囊形。嗜碘30圖A. 1光滑單極蟲(血血赫訊隊daw而ie)圖 A. 2 吉陶單極蟲(Fielbfia

11、no血Kitanei Engsa. 1981)10 u in3,示縫面觀4.示殼面觀1918) Kudo,1933附錄B（資料性附錄）采樣數(shù)量表B. 1圖 A. 簸單極蟲 T rohitae (Southwell & Prashad,魚群大小2%感籍率時取樣5%感染率時取樣10%感染率時取樣50I 503520100|754523250)1105025500)130552610004055271500(40552720001)45602740001456027100001#6027100000或以上o6030注：檢疫釆樣應(yīng)釆集全部實驗室樣品e 單位：足DB12/T 361-2008附錄C（資料性附錄）標(biāo)本收集及保存C. 1C. 2C. 3C.4銀于取一小塊甘油 全溶解后，即蓋上把