實驗六 土壤中微生物的分離和課件

1、實驗六 土壤中微生物的分離和純化, 微生物的培養(yǎng)特征觀察,環(huán)境中的微生物一 實驗目的1 學習掌握倒平板的方法和幾種分離純化微生物的基本操作技術 2 了解不同微生物在液體,半固體,固體培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征3 學習并掌握各種無菌操作接種技術二 實驗原理1 微生物的分離純化原理自然條件下的微生物往往是不同種類微生物的混合體。為了研究某種微生物的特性或者要大量培養(yǎng)和使用某種微生物，必須從這些混雜的微生物群落中獲得純培養(yǎng)，這種獲得純培養(yǎng)的方法稱為微生物的分離與純化。在自然界中，上壤是微生物生活的良好環(huán)境，其中生活的微生物數(shù)量和種類都是極其豐富的。土壤中的微生物數(shù)量與種類非常多,在通氣良好的花園土中，好氣性

2、微生物占有絕對優(yōu)勢。本實驗以花園土為材料分離土壤中的好氣性細菌.分離微生物常用的方法有稀釋平板分離法和劃線分離法，根據(jù)不同的材料，可以采用不同方法，其最終目的是要在培養(yǎng)基上出現(xiàn)欲分離微生物的單個菌落，必要時再對單菌落進一步分離純化。在用稀釋平板法分離微生物時，還可以同時測定待分離的微生物的數(shù)量。倒平板的方法倒平板（a）皿架法；（b）手持法稀釋平板計數(shù)法中樣品的稀釋和稀釋后的取樣培養(yǎng)平板涂布法2) 微生物的培養(yǎng)特征是指微生物培養(yǎng)在培養(yǎng)基上所表現(xiàn)出來的群體形態(tài)和生長情況. 一般可用斜面,液體,和半固體培養(yǎng)基來檢驗不同微生物的培養(yǎng)特征.它們培養(yǎng)在斜面培養(yǎng)基上,可以呈絲線狀, 刺毛狀, 串珠狀,舒展狀

3、,樹枝狀或假根狀. 生長在液體培養(yǎng)基內(nèi),可以呈渾濁,絮狀,黏液狀, 形成菌膜, 上層清晰而底部顯沉淀狀. 穿刺接種在半固體培養(yǎng)基中,可以沿穿刺線向四周蔓延, 或僅沿穿刺線生長, 也可上層生長得好,甚至連成一片,底部很少生長; 或底部長的好,上層甚至不生長.液體培養(yǎng)特征半固體穿刺培養(yǎng)特征3 微生物的無菌操作接種原理1) 斜面接種菌種管和待接試管在手中的拿法試管拔塞后的滅菌試管拔塞后的取菌2) 穿刺接種穿刺接種（a）水平穿刺接種；（b）垂直穿刺接種四 實驗方法1 倒平板:在微波爐中將三角瓶內(nèi)的培養(yǎng)基熔化, 取滅菌的培養(yǎng)皿, 每組倒12個平板.2 土壤稀釋液的制備 稱取1g花園土，無菌操作倒入99m

4、L無菌生理鹽水中,在震蕩器中振蕩20分鐘, 使微生物細胞分散，靜置2030s，即成10-2稀釋液；再用 lmL移液器，吸取10-2稀釋液lmL，移入裝有9mL無菌水的試管中，振蕩，讓菌液混合均勻，即成10-3稀釋液；再換一支無菌吸頭吸取10-3稀釋液lmL，移入裝有9mL無菌水的試管中，振蕩，即成10-4稀釋液；以此類推，連續(xù)稀釋，制成 10-2、10-3、10-4、10-5等一系列稀釋菌液。3 平板涂布將培養(yǎng)基平板編號，然后用移液槍吸取10-3、10-4、10-5等一系列稀釋菌液各0lmL對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上（每個編號設兩個重復）。再用無菌涂布棒將菌液在平板上涂布均勻，每個稀

5、釋度用一個滅菌涂布棒；更換稀釋度時需將涂布棒灼燒滅菌。4 培養(yǎng)將涂布好的平板平放于桌上1020min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉。恒溫37培養(yǎng), 兩天后觀察.5 連續(xù)劃線分離: 用滅菌接種環(huán)蘸取10-2稀釋液一環(huán)于已凝固的平板上進行劃線。劃線可按以下兩種方式進行：一種為交叉劃線法，是在平板的一邊做第一次“Z”字形劃線。轉動培養(yǎng)皿約70角，將接種環(huán)在火上燒過并冷卻后，通過第二次劃線部分，做第二次“Z”字形劃線。同法進行第三次、第四次劃線。另一種為連續(xù)劃線法，是從平板邊緣的一點開始連續(xù)作緊密的波浪式劃線，直至平板中央。轉動培養(yǎng)皿 180，再從平板另一邊（不燒接種環(huán)）同樣劃線至平板中央。 6 培養(yǎng) 將平板倒轉, 恒溫37培養(yǎng)兩天后觀察.五 實驗報告