高級(jí)食品化學(xué)

山茱萸果酒中功效性成分及其檢測(cè)方法的探討摘要：本論文對(duì)山茱萸果酒中馬錢苷，熊果酸等功能性成分進(jìn)行分析及其檢測(cè)方法進(jìn)行探討。關(guān)鍵詞：山茱萸；功能性成分；檢測(cè)方法Dogwoodfruitwineeffectinthecomposition anddetectionmethod Abstract：Inthispaper,thedogwoodfruitwineoffunctionalcomponentswasanalyzedanditsdetectionmethodsarediscussed.Keywords:cornus、Functionalingredients、Detectionmethod山茱萸，又名蜀棗、鼠矢、雞足、山萸肉、實(shí)棗兒、棗皮等。系山茱萸科山茱萸屬小喬木或灌木，屬名貴滋補(bǔ)藥材。臨床上習(xí)慣以其成熟果實(shí)去核后入藥，具有補(bǔ)益肝腎、澀精固脫之功效?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中記述：“山茱萸味酸平，主心下邪氣，寒熱溫中，逐寒濕痹，去三蟲，久服身輕”。山茱萸作為名貴滋補(bǔ)藥材，含有24種礦物元素，16種氨基酸，人體所需要的8種必需氨基酸全部具備，含有VA、VC、VE和VB2等對(duì)人有益的成分。還含有環(huán)烯醚萜苷(如馬錢苷、莫諾苷)、有機(jī)酸（如熊果酸、齊墩果酸等三萜酸，沒(méi)食子酸）、黃酮、花色素、鞣質(zhì)等功效成分和大量粗蛋白和粗脂肪等營(yíng)養(yǎng)成分。這些成分具有補(bǔ)血健胃，提高免疫功能，消除疲勞，延緩衰老，降血壓等功效ADDINCNKISM.Ref.{E7976F67747B4970870C7A6FBFB5BE92}[1]。將山茱萸加工成保健酒，為我國(guó)山茱萸產(chǎn)業(yè)的發(fā)展及果品的深加工綜合利用提供一定的依據(jù)，對(duì)開發(fā)利用山茱萸資源具有重要意義。山茱萸保健果酒不像普通藥酒那樣只是針對(duì)特殊人群，它是具有山茱萸獨(dú)特香味的低酒度果酒；同時(shí)還含有馬錢素、熊果酸等功能性成分，起到調(diào)節(jié)機(jī)體、延緩衰老等功用，老少皆宜。1山茱萸果酒中的主要功效性成分1.1馬錢素馬錢素是山茱萸的主要水溶性成分，無(wú)論體內(nèi)、體外，適當(dāng)濃度的馬錢素有促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用，高濃度則有抑制作用，對(duì)免疫反應(yīng)有雙向調(diào)節(jié)作用，能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能，延緩衰老；有良好的防癌、防輻射功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，山茱萸降血糖作用的主要活性部位是環(huán)烯醚萜類（主要是馬錢素和莫羅苷）和三萜酸類（主要為熊果酸和齊墩果酸）。1.2莫諾甙莫諾苷具有保護(hù)細(xì)胞免于H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性和細(xì)胞凋亡的作用，因此可作為一種神經(jīng)保護(hù)類藥物。在山茱萸果中，作為活性成分之一的莫諾苷的含量要遠(yuǎn)大于馬錢素含量。1.3熊果酸熊果酸在體外能快速有效地殺死培養(yǎng)細(xì)胞，但腹腔注射熊果酸的小鼠免疫指標(biāo)均明顯提高。熊果酸還具有明顯的安定與降溫作用，同時(shí)，熊果酸還是山萸肉抑菌的有效成分，能有效地控制細(xì)菌、真菌及一些霉菌的生長(zhǎng)，其最低抑制酵母菌的濃度為100mg/L～700mg/L。1.4沒(méi)食子酸英文名稱：Gallicacid中文別名：棓酸；五倍子酸；3,4,5-三羥基苯甲酸；沒(méi)食子酸（無(wú)水）分子式：C7H6O5物化性質(zhì)：針狀結(jié)晶（由無(wú)水甲醇和氯仿中結(jié)晶），210℃升華時(shí)，得到一個(gè)穩(wěn)定型結(jié)晶，258～265℃（分解）和一個(gè)不穩(wěn)定型結(jié)晶，熔點(diǎn)225～230℃。密度1.694g/cm3(60℃)。100～120℃失去結(jié)晶水。1g溶于87ml水、3ml沸水、6ml乙醇、100ml乙醚、10ml甘油、5ml丙酮。不溶于苯、氯仿、石油醚。沒(méi)食子酸在體內(nèi)具有抗菌作用，可治療菌痢。具有收斂、止血、止瀉作用。1.5總黃酮黃酮的功效是多方面的，它是一種很強(qiáng)的抗氧劑，可有效清除體內(nèi)的氧自由基，如花青素、花色素可以抑制油脂性過(guò)氧化物的全階段溢出，這種阻止氧化的能力是維生素E的十倍以上，這種抗氧化作用可以阻止細(xì)胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發(fā)生。黃酮可以改善血液循環(huán)，可以降低膽固醇，向天果中的黃酮還含有一種PAF抗凝因子，這些作用大大降低了心腦血管疾病的發(fā)病率，也可改善心腦血管疾病的癥狀。被稱為花色苷酸的黃酮化合物在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中被證明可以降低26%的血糖和39%的三元脂肪酸丙酯，這種降低血糖的功效是很神奇的，但更重要的是它對(duì)穩(wěn)定膠原質(zhì)的作用，因此它對(duì)糖尿病引起的視網(wǎng)膜病及毛細(xì)血管脆化有很好的作用。黃酮可以抑制炎性生物酶的滲出，可以增進(jìn)傷口愈合和止痛，櫟素由于具有強(qiáng)抗組織胺性，可以用于各類敏感癥。1.6單寧單寧是山茱萸果酒中所含有的二種酚化合物其中的一種物質(zhì)，有益于心臟血管疾病的預(yù)防。山茱萸果酒中的單寧一般是由山茱萸籽、皮及梗浸泡發(fā)酵而來(lái)，或者是因?yàn)榇嬗谙鹉就皟?nèi)而萃取橡木內(nèi)的單寧而來(lái)。單寧的多少可以決定酒的風(fēng)味、結(jié)構(gòu)與質(zhì)地。缺乏單寧的果酒質(zhì)地輕薄，沒(méi)有厚實(shí)的感覺(jué)。單寧豐富的紅酒可以存放經(jīng)年，并且逐漸醞釀出香醇細(xì)致的陳年風(fēng)味。當(dāng)果酒入口后口腔感覺(jué)干澀，口腔黏膜會(huì)有褶皺感，那便是單寧在起作用。2山茱萸果酒中的主要功效性成分的快速測(cè)定2.1山茱萸果酒中馬錢素ADDINCNKISM.Ref.{E7976F67747B4970870C7A6FBFB5BE92}[2]的定量測(cè)定采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)山茱萸中馬錢素的定量測(cè)定。2.1.1色譜條件：色譜柱：AgilentC18柱(250mm×4mm)柱溫：25℃；流動(dòng)相：乙腈-水(15﹕85)；流速1mL/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：236nm；進(jìn)樣量：10μL。2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取馬錢素標(biāo)準(zhǔn)品1.52mg，甲醇定容于25mL容量瓶中，搖勻；以樣品峰面積為據(jù)，精密吸取此溶液，制成不等濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作HPLC分析。以峰面積(y)為縱坐標(biāo)，樣品濃度(x)為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.1.3樣品溶液的配置及測(cè)定：酒液中馬錢素的提取：吸取酒液1mL，蒸干，加甲醇超聲，過(guò)濾，定容到25mL容量瓶中，進(jìn)樣時(shí)用0.45μm濾頭過(guò)濾（原料中提取馬錢素與酒液中提取馬錢素方法相同）。2.2山茱萸果酒中莫諾甙的定量測(cè)定采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)山茱萸中莫諾甙ADDINCNKISM.Ref.{E7976F67747B4970870C7A6FBFB5BE92}[5]的定量測(cè)定。2.2.1色譜條件：色譜柱：AgilentC18柱(250mm×4mm)柱溫：25℃；流動(dòng)相：乙腈-水(15﹕85)；流速1mL/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：236nm；進(jìn)樣量：10μL。2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取莫諾甙標(biāo)準(zhǔn)品2.15mg，甲醇定容于25mL容量瓶中，搖勻；以樣品峰面積為據(jù)，精密吸取此溶液，制成不等濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作HPLC分析。以峰面積(y)為縱坐標(biāo)，樣品濃度(x)為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.2.3樣品溶液的配置及測(cè)定：酒液中莫諾甙的提?。何【埔?mL，蒸干，加甲醇超聲，過(guò)濾，定容到25mL容量瓶中，進(jìn)樣時(shí)用0.45μm濾頭過(guò)濾（原料中提取莫諾甙與酒液中提取莫諾甙方法相同）。2.3山茱萸果酒中熊果酸的定量測(cè)定采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)山茱萸果酒中總?cè)浦行芄酇DDINCNKISM.Ref.{E7976F67747B4970870C7A6FBFB5BE92}[3]的定量測(cè)定。2.3.1色譜條件：色譜柱：AgilentC18柱（250mm×4mm）柱溫：25℃；流動(dòng)相：甲醇-水(95﹕5)；流速：1mL/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm；進(jìn)樣量：10μL。2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品4.7mg，甲醇定容于5mL容量瓶中，搖勻；以樣品峰面積為據(jù)，精密吸取此溶液，制成不等濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作HPLC分析。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，樣品濃度(X)為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.3.3樣品溶液的配置及測(cè)定：原料中熊果酸的提取（2005年版《藥典》一部）：取山茱萸粉末1g，加10mL乙酸乙酯，超聲15min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液，進(jìn)樣時(shí)用0.45μm濾頭過(guò)濾（酒液中提取熊果酸與原料中提取熊果酸相同）。2.4山茱萸果酒中沒(méi)食子酸的定量測(cè)定采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）對(duì)山茱萸果酒中沒(méi)食子酸ADDINCNKISM.Ref.{E7976F67747B4970870C7A6FBFB5BE92}[4]的定量測(cè)定。2.4.1色譜條件：色譜柱：Ymc-packODS-A(（250mm×4.6mm）柱溫：25℃；流動(dòng)相：0.1%磷酸-甲醇（75：5）；流速1.0mL/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：210.2nm；進(jìn)樣量：20μL。2.4.2對(duì)照品溶液的制備：準(zhǔn)確稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品20mg，用30%甲醇溶解至100mL的容量瓶中，配制成200mg/L儲(chǔ)備液，其他不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液由儲(chǔ)備液稀釋得到。2.4.3供試品溶液的制備：取10mL酒液置錐形瓶中，加入30mL30%甲醇，超聲提取30min，移入50mL容量瓶中定容，靜置之后，吸取上清液經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣。2.5山茱萸果酒中總黃酮ADDINCNKISM.Ref.{E7976F67747B4970870C7A6FBFB5BE92}[3]的定量測(cè)定2.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品為5.0mg，加85%乙醇溶解，定容至25mL容量瓶中，搖勻，制成0.2mg/mL的對(duì)照品溶液;分別取該溶液0.0,0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0mL于10mL容量瓶中,加5%亞硝酸鈉0.4mL，放置6min，加10%硝酸鋁0.4mL，放置6min，再加4%氫氧化鈉4mL，加水至刻度，搖勻，放置15min，在510nm處測(cè)定其吸光度值;以吸光度值為橫坐標(biāo)，樣品濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得標(biāo)準(zhǔn)回歸方程C=1.286A-0.048，r=0.9961，在40～800μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.5.2樣品含量測(cè)定：精密吸取黃酮供試品液4.0mL，置10mL比色管中，測(cè)定A值，計(jì)算出樣品總黃酮含量。2.6山茱萸果酒中單寧的定量測(cè)定2.6.1采用分光光度法，先用苯抽提除去有機(jī)溶劑抽出物后，用乙醇處理將單寧溶解，采用分光光度計(jì)測(cè)定溶出液在波長(zhǎng)500nm處的光密度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得到單寧含量。2.6.2精確量取不同量標(biāo)準(zhǔn)單寧酸溶液與50mL容量瓶中（瓶中預(yù)先放好25ml水），假如2mL乙醇、5mL1mol/LNa2CO3溶液及2.5mL鎢酸鈉-磷鉬酸試劑，再加水沖稀至刻度，搖勻后在25℃水浴中放置30min。將此有色溶液倒入比色皿中，用分光光度計(jì)，以波長(zhǎng)500nm（或