檢驗程序的選擇和確認

..>1目的為了證實〔驗證〕檢驗科所用檢驗方法可以滿足預期的用途，確保醫(yī)學檢驗工作能對患者和醫(yī)護人員發(fā)揮臨床有意義、有價值的作用，制定本程序。2范圍適用于本檢驗科對檢驗程序的選擇和確認，包括驗證、評估、評審等一系列活動。3職責⑴檢驗科管理層負責組織檢驗程序的評審；⑵技術主管負責檢驗程序確認的管理工作；⑶各專業(yè)組組長負責本組所用檢驗程序確認的組織實施；(4)文件資料管理員負責管理評審確認過程和結果的記錄。4程序、內(nèi)容和要求4.1檢驗方法的選擇選擇檢驗程序的優(yōu)先原則：⑴公認的或權威部門發(fā)布的程序；⑵經(jīng)同行評議認可的書刊、雜志中發(fā)表的程序；⑶國際、國家、區(qū)域的指南中發(fā)表的程序。按以上原則，中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司第3版"全國臨床檢驗操作規(guī)程"規(guī)定的檢驗程序和方法學是優(yōu)選的。設備制造商提供的程序，其檢驗原理應該是符合以上優(yōu)選程序中的原理的，只不過基于其設備進展了開發(fā)。該設備如果得到我國藥監(jiān)部門的批準，可直接選用。如果沒有上述優(yōu)選程序，檢驗科則使用自己制定程序——內(nèi)部程序。內(nèi)部程序必須經(jīng)過確認證明其符合預期的用途，而且形成正式文件。當以作業(yè)指導書的形式對公認的方法或標準規(guī)定的方法進展補充或細化時，這些作業(yè)指導書也被看作是一種內(nèi)部程序〔通常稱為"標準操作程序〞或"SOP文件〞〕。4.2檢驗程序確實認〔validation〕檢驗科所用的檢驗程序都經(jīng)過確認,證實適合其預期用途。確認的定義是"通過核查并提供客觀證據(jù)，以證實*一特定預期用途的特殊要求得到滿足〞。確認包括"證實〞、"評估〞、"評審〞三個步驟：a)證實〔confirm〕：證實檢驗程序的性能的真實性和可靠性。confirm也可翻譯成"驗證〞，檢驗科比較習慣用的詞是"驗證〞，所以在節(jié)以后稱為"驗證〞，與"證實〞是同義詞。證實的內(nèi)容：正〔準〕確度、精細度、可報告范圍、分析靈敏度〔檢出限〕、特異性、生物參考區(qū)間、攜帶污染率等。證實盡量充分，覆蓋認可的醫(yī)學檢驗專業(yè)領域和所需水平,滿足應用需求。假設檢驗科使用制造商配套的測量系統(tǒng)，則需證實前三項性能，對非配套〔自行組建〕的測量系統(tǒng)則還需證實其它性能。證實是基于本檢驗科所使用的測量系統(tǒng)進展的。證實的方法包括但不限于以下情況：⑴用參考程序進展方法學比較；⑵使用參考物質(zhì)證實檢驗程序的正確性；⑶參加正式的能力驗證活動，由組織者給出評價；⑷對影響結果的因素作系統(tǒng)評審。⑸根據(jù)對方法的理論原理和實踐經(jīng)歷的實驗學理解，對所得結果不確定度進展的評定。a)評估〔evaluation〕〔亦稱評價〕：評估檢驗程序的可承受性和適用性,即使用該程序可給出滿意結果。評估的指標：依據(jù)CLIA′88的允許誤差或制造商提供的技術性能指標。評估的方法：簡單評估或統(tǒng)計學評估。b)評審〔review〕：評審檢驗科使用該檢驗程序的質(zhì)量和能力。證實和評估根本上是一次性的，即同一個檢驗程序經(jīng)過一次證實和評估即可，以后只要測量的質(zhì)量和水平〔管理水平和技術水平〕不變，就不必重新證實和評估。評審是周期性的〔通常周期為一年〕，即檢驗科在第一次采用該檢驗程序之前就應進展評審，以后每隔一定時間進展再次評審。4.3檢驗方法性能的驗證〔即證實〕和評估建立檢驗程序驗證和評估方案。詳見"檢驗程序驗證和評估方案表"、"檢測系統(tǒng)/方法的分析性能驗證評估報告"。精細度驗證和評估.1精細度的定義在規(guī)定條件下獲得的獨立測量結果之間的接近程度。精細度是一個定性詞匯，其反義是不精細度或分散性，可用標準偏差定量表示。.2精細度試驗方法⑴做精細度試驗的樣品要穩(wěn)定；它的基體組成盡可能與實際患者樣品一樣；⑵樣品中分析物的含量應在該工程的醫(yī)學決定水平處，有可能的話，做2個水平的精細度試驗。如果是對廠商的檢測系統(tǒng)的性能評價，則選取的樣品中分析物的含量盡量與公司評估系統(tǒng)性能時分析物的含量接近；⑶精細度試驗樣品與質(zhì)控樣品不可為同一個，也不能用質(zhì)控數(shù)據(jù)來評價試驗的精細度；因為質(zhì)控反映整個試驗過程是否受到控制，主要反映人員的操作一致性、儀器設備的穩(wěn)定性等,而精細度試驗僅反映方法〔檢測系統(tǒng)〕的精細程度。只有系統(tǒng)處于受控狀態(tài)，精細度試驗才是有效的；⑷采用凍干保存的樣品要注意選擇內(nèi)含分析物穩(wěn)定、瓶間差小，嚴格控制每次復溶凍干品時使用的復溶液的質(zhì)量，開瓶要小心慎重、加液準確，控制使凍干塊浸潤并復溶的時間，注意混勻的手法等；⑸通常對每個水平做批內(nèi)和天間重復試驗，一批連續(xù)做屢次，天間是每天做一次，累積多天的結果；在樣品數(shù)量較少，或樣品不易保存的情況下，可以采用雙份樣品檢測的方法。⑹同一個檢測系統(tǒng)不同檢驗工程的精細度可能不一樣的，所以必須對所有檢測工程做精細度試驗。.3精細度試驗數(shù)據(jù)處理計算均值、標準偏差、變異系數(shù)。.4精細度評估可根據(jù)相關國家標準判定，如無明確規(guī)定則可根據(jù)美國"臨床實驗室改進修正案"CLIA’88的規(guī)定判定。例如選擇1/4CLIA`88允許誤差為批內(nèi)不精細度判斷限，選擇1/3CLIA’88允許誤差為天間不精細度判斷限等，如果受檢驗科條件、檢測系統(tǒng)的限制，無法到達CLIA'88要求，則根據(jù)廠家提供的指標判定。見"精細度驗證試驗結果評價表"。如果簡單評估難以判斷，則應該用統(tǒng)計學方法評估，可參照NCCLS有關文件規(guī)定進展。正確度驗證和評估.1正確度的定義測量結果與被測量真值之間的一致程度。正確度也是定性概念，其反義是系統(tǒng)誤差或偏倚，可以定量表示。.2正確度試驗方法⑴正確度試驗實質(zhì)上是方法學比較，即用待評價的方法與參考方法對同一患者的同一新鮮樣品進展檢驗，比較二者的結果。通常需進展一系列水平的比較試驗，才能得出有意義的結論。如果只作個別水平的比較，則至少在醫(yī)學決定水平附近進展。也可以與參考物質(zhì)或與已定值的患者真實樣品進展比較；⑵在整個試驗過程中，保持良好的質(zhì)量控制，只有受控過程的數(shù)據(jù)才是有效的；⑶樣品數(shù)量足夠，否則數(shù)據(jù)的可靠性不高。原始樣品的質(zhì)量要好，防止溶血等對試驗結果的干擾；⑷兩種方法的試驗根本上同時進展。.3正確度試驗數(shù)據(jù)處理對單對數(shù)據(jù)，用待比較方法的測量值減去參考方法的測量值，即為二者的系統(tǒng)誤差或偏倚。如果是一系列測量數(shù)據(jù)則需用線性回歸方法得到回歸值，用回歸值減去參考值則為系統(tǒng)誤差或偏倚。參加衛(wèi)生部檢驗科或地方〔省、自治區(qū)〕檢驗科的室間質(zhì)評的結果可以作為本檢驗科正確度數(shù)值。但對系列的室間質(zhì)評結果應作統(tǒng)計分析。.4正確度評估在剔除了明顯的離群值后，經(jīng)過t檢驗或相關性檢驗確認試驗數(shù)據(jù)有效，然后進展判定。系統(tǒng)誤差或偏倚不應大于允許值。該允許值可能由相關標準給出，如果無相關標準則可以根據(jù)美國"臨床實驗室改進修正案"CLIA`88的規(guī)定判定，例如將1/2CLIA`88的允許誤差作為正確度判斷限。見"正確度驗證試驗結果評價表"。如果簡單評估難以判斷，則應該用統(tǒng)計學方法評估，可參照NCCLS有關文件規(guī)定進展。患者結果的可報告范圍.1患者結果可報告范圍的概念檢驗結果與被測分析物濃度之間呈線性關系的范圍?；颊呓Y果的可報告范圍是針對原始樣品濃度而言的，稀釋的結果不能作為可報告范圍。.2試驗方法對一系列濃度的樣品〔其基體盡可能與真實患者樣品一樣，濃度范圍盡可能覆蓋通常所需的檢驗結果〕進展屢次重復檢驗，取平均值為實測值。樣品的濃度可通過稀釋比準確計算出〔預期值〕。.3試驗數(shù)據(jù)處理將檢驗結果〔實測值〕和對應的樣品濃度值〔預期值〕點畫在坐標圖上，理想的情況下可通過回歸得到一條斜率約為±1，截距約為0的直線。如果回歸直線的斜率明顯偏離±1，或截距明顯偏離0，或相關系數(shù)明顯偏離±1，則需重新做試驗，方法是縮短測量的濃度范圍，或者舍去頭或尾的局部數(shù)據(jù)重新統(tǒng)計，當能到達上述要求時的統(tǒng)計上下限即為患者結果的可報告范圍。見"臨床可報告范圍試驗評價表"。.4患者結果的可報告范圍評估患者結果的可報告范圍至少應覆蓋醫(yī)學決定水平。如果簡單評估難以判斷，則應該用統(tǒng)計學方法評估，可參照NCCLS有關文件規(guī)定進展。分析靈敏度〔檢測下限〕.1分析靈敏度的定義靈敏度這個詞在國際通用計量名詞術語〔VIM〕中的含義是"測量儀器響應的變化除以對應的鼓勵變化〞，即曲線的斜率。醫(yī)學檢驗中常用的分析靈敏度是指可檢測的分析物的最低濃度〔或〕含量，又稱檢出限或檢測限。檢測限又有檢測低限、生物檢測限、功能靈敏度之分。.2試驗方法在"空白〞樣品中分別參加不同濃度或含量的分析物，構成一系列的檢測限樣品。對空白樣品和這一系列的檢測限樣品進展屢次重復測量得到一系列檢驗值。.3試驗數(shù)據(jù)處理計算空白樣品測量的均值和標準偏差，計算每一個檢測限樣品的測量平均值和標準偏差，將檢驗均值減去空白均值得到一系列檢驗結果。通常以95%的置信概率判斷檢測限，因此；⑴空白均值加兩倍空白標準偏差為檢測低限；⑵一系列濃度檢驗結果中，如果有一個檢驗結果的均值減去兩倍標準偏差〔該檢測限樣品的〕恰好等于檢測低限，則該檢驗結果的均值為生物檢測限；⑶一系列濃度檢驗結果中，如果有一個濃度檢驗結果的〔天間〕相對標準偏差〔變異系數(shù)〕接近20%，則該檢驗結果的均值為功能靈敏度。見"分析靈敏度試驗結果評價表"。.4分析靈敏度評估實測分析靈敏度的值可與制造商給出的相關值進展比較，實測分析靈敏度的值應優(yōu)于或等于制造商給出的相關值。如果簡單評估難以判斷，則應該用統(tǒng)計學方法評估，可參照有關統(tǒng)計學資料進展。分析干擾.1分析干擾定義由一種影響量而引起的測量的系統(tǒng)誤差，該影響量自身在測量系統(tǒng)中不產(chǎn)生信號，但它會引起示值的增加或減少。.2試驗方法及結果判定⑴配對差異檢驗將陽性干擾物參加樣品中，制成干擾測定樣品，與不加干擾物的樣品〔干擾對照樣品〕用待評價的方法進展比較測量。兩個檢驗結果有顯著差異則干擾存在。⑵與參考方法比較從患者樣品組中尋找有*種疾病的，或使用過*種藥物的，或有其它不正常組分的患者樣品，將這些樣品用待評價的方法檢驗的"不正確結果〞與用參考方法〔不存在干擾的影響〕的檢驗結果比較，發(fā)現(xiàn)有顯著差異則可判定干擾物為何。以上兩種方法各有局限性，最好相互補充。生物參考區(qū)間的評審檢驗科對所使用的生物參考區(qū)間須注明出處和適用范圍。如果疑心原有的生物參考區(qū)間已不適用，則要對原有的生物參考區(qū)間進展驗證，當驗證結果說明原有的生物參考區(qū)間確實不適用時，須對檢驗科效勞對象的參考值重新調(diào)查、統(tǒng)計，建立新的生物參考區(qū)間。詳見"生物參考區(qū)間評審程序"。4.4檢驗程序的評審檢驗程序的評審是一項周期性的活動，主要是對檢驗科應用該程序的質(zhì)量和能力〔包括初始能力和持續(xù)能力〕和結果滿意程度進展評審，而不是確認檢驗方法的性能。評審包括對人員、儀器設備、環(huán)境條件、量值溯源、質(zhì)量控制等方面的評價，在開場采用*個檢驗程序以及以后每年都要評審一次，檢驗程序修改之后也需重新評審。詳見"檢驗程序的評審程序"和"檢驗程序評審表"等。5相關文件⑴〔文件〕"檢驗程序的評審程序"⑵〔文件〕"生物參考區(qū)間評審程序"⑶〔文件〕"檢驗程序評審表"6相關記錄⑴〔文件〕"精細度驗證試驗結果評價表"⑵〔文件〕"精細度驗證試驗數(shù)據(jù)記錄表"⑶〔文件〕"正確度驗證試驗結果評價表"⑷〔文件〕"正確度驗證試驗數(shù)據(jù)記錄表"⑸〔文件〕"臨床可報告范圍試驗評價表"⑹〔文件〕"臨床可報告范圍試驗數(shù)據(jù)記錄表"⑺〔文件〕"分析靈敏度試驗結果評價表"⑻〔文件〕"檢測系統(tǒng)/方法的分析性能驗證評估報告"⑼〔文件〕"檢驗程序驗證和評估方案表"..>精細度驗證試驗結果評價表年：□□□□流水號：□□□□□□試驗日期工程試驗樣品檢測系統(tǒng)名稱及質(zhì)控品批號試劑名稱及有效期檢測方法批內(nèi)試驗結果試驗次數(shù)均值標準差變異系數(shù)1/3CLIA'88允許誤差評價天間試驗結果試驗天數(shù)均值標準差變異系數(shù)1/2CLIA'88允許誤差評價評價人及日期..>精細度驗證試驗數(shù)據(jù)記錄表年：□□□□流水號：□□□□□□試驗樣品及批號檢測系統(tǒng)名稱檢測系統(tǒng)試劑名稱及有效期操作者檢測工程檢測方法批內(nèi)檢測日期重復1重復8重復15重復2重復9重復16重復3重復10重復17重復4重復11重復18重復5重復12重復19重復6重復13重復20重復7重復14批間檢測日期重復1重復2重復3重復4..>正確度驗證試驗結果評價表年：□□□□流水號：□□□□□□試驗日期工程檢測系統(tǒng)試驗樣品試劑名稱試劑有效期校準品批號校準品靶值驗證值絕對偏倚相對偏倚〔%〕允許誤差t檢驗結果評價評價人及日期..>正確度驗證試驗數(shù)據(jù)記錄表年：□□□□流水號：□□□□□□試驗樣品檢測系統(tǒng)名稱檢測系統(tǒng)檢測日期試劑名稱及有效期操作者檢測方法工程校準品批號驗證值1驗證值2驗證值3均值試驗樣品檢測系統(tǒng)名稱檢測系統(tǒng)檢測日期試劑名稱及有效期操作者檢測方法工程校準品批號驗證值1驗證值2驗證值3均值..>臨床可報告范圍試驗評價表年：□□□□流水號：□□□□□□試驗日期工程檢測系統(tǒng)名稱及試驗樣品質(zhì)控品批號試劑名稱及有效期檢測方法5H4H+1L3H+2L2H+3L1H+4L5L預期值實測值回歸方程評價標準斜率b在0.97～1.03范圍內(nèi)，截距a接近0評價結果評價人及日期..>臨床可報告范圍試驗數(shù)據(jù)記錄表年：□□□□流水號：□□□□□□試驗樣品檢測系統(tǒng)名稱檢測系統(tǒng)檢測日期試劑名稱及有效期操作者檢測方法工程5H4H+1L3H+2L2H+3L1H+4L5L重復1重復2重復3試驗樣品檢測系統(tǒng)名稱檢測系統(tǒng)檢測日期試劑名稱及有效期操作者檢測方法工程5H4H+1L3H+2L2H+3L1H+4L5L重復1重復2重復3..