蒲公英不同溶劑提取物對(duì)果蔬采后幾種病原真菌的體外抑制作用

蒲公英不同溶劑提取物對(duì)果蔬采后幾種病原真菌的

體外抑制作用摘要:以純化水和100%乙醇為提取溶劑,對(duì)采自永登武勝驛鎮(zhèn)的野生蒲公英全草進(jìn)行浸提，從浸膏得率、菌絲生長(zhǎng)抑制率及泡子萌發(fā)抑制率三個(gè)方面，探討了不同溶劑提取物對(duì)果蔬采后幾種病原真菌的體外抑制效果。結(jié)果表明:醇提取法浸膏得率高于水提取法，高出31.2%;隨著蒲公英醇提取物濃度的增加，擴(kuò)展青霉、鏈格泡、鐮刀菌、灰葡萄泡、葡枝根霉菌絲抑制率均在不斷的提升，隨著蒲公英水提取物濃度的增加，擴(kuò)展青霉、鏈格泡、鐮刀菌、灰葡萄泡菌絲抑制率均在不斷的提升，但葡枝根霉菌絲抑制率先隨著水提取物濃度的增加而增加，當(dāng)水提物濃度增加到20mg/mL以上時(shí)，菌絲抑制率變化不明顯;80mg/mL的蒲公英水提取物對(duì)鐮刀菌、灰葡萄泡的菌絲生長(zhǎng)及泡子萌發(fā)抑制率均在82%以上;80mg/mL的蒲公英醇提取物對(duì)擴(kuò)展青霉、鏈格泡、葡枝根霉的菌絲生長(zhǎng)及泡子萌發(fā)抑制率均在63%以上。關(guān)鍵詞:蒲公英;不同溶劑提取物;果蔬采后病原菌;體外抑菌0引言我國(guó)作為世界果蔬生產(chǎn)大國(guó)，因采后處理技術(shù)和管理措施未能及時(shí)跟進(jìn)，造成每年約有25%的產(chǎn)品因腐爛變質(zhì)而被白白浪費(fèi)，進(jìn)而造成了一定的環(huán)境壓力丁。統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)一步顯示，采后由病原真菌引起的果蔬損失率達(dá)到了30%'2'。造成果蔬采后腐爛的病原真菌主要有青霉屬(penieillumsp.)、鏈格清屬(Alternariasp.)、葡萄抱屬(Botlyrissp.)以及根霉屬(Rhizopussp.)3。目前，化學(xué)方法可有效控制果蔬病害,但也伴隨著產(chǎn)生了病原菌抗藥性、藥物殘留以及環(huán)境污染等問題'『。因此，綠色安全的天然果蔬防腐劑的開發(fā)利用必將成為一種新型的發(fā)展趨勢(shì)虧。蒲公英是一種常用于臨床的野生中藥材,隸屬于菊科。經(jīng)測(cè)定發(fā)現(xiàn)全草含有甾醇、皂苷、多酚、類黃酮、多糖等多種活性成分虧,具有抗菌消炎等功效。研究表明，蒲公英提取液對(duì)細(xì)菌丁以及真菌虧等均具有一定的抑制作用。蒲公英提取液對(duì)植物源病原真菌的抑制作用研究主要集中在板栗疫病菌、萵苣霜霉病、黃瓜霜霉病亨，蘑菇根霉、番茄灰霉菌、蘑菇青霉菌寸等病原物上。而對(duì)引起果蔬采后腐爛的幾種常見病原菌未見相關(guān)報(bào)道。因此，本研究探討了不同溶劑提取物對(duì)擴(kuò)展青霉(Penicilliumexpansum)、鏈格抱(Alternariaalterna-ta)、鐮刀菌(Fusariumsulphureum)、灰葡萄抱(Botrytiscinerea)、葡枝根霉(Rhizopusstolonifer)的體外抑制作用，以期為蒲公英的不斷開發(fā)利用提供理論依據(jù)，為果蔬米后病害的控制提供新的參考方法。

1材料與方法1.1試驗(yàn)材料帶根野生蒲公英于8月18日采摘自永登武勝驛鎮(zhèn);試驗(yàn)所用菌株擴(kuò)展青霉(Penicilliumexpansum)、鏈格抱(Alternariaalternata)、鐮刀菌(Fusariumsulphure-um)、灰葡萄抱(Botrytiscinerea)、葡枝根霉(Rhizopusstolonifer)均由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院分離保存。1.2試驗(yàn)方法1.2.1蒲公英預(yù)處理參照馬井喜等m方法并作修改。將去除雜質(zhì)的蒲公英，在65龍恒溫干燥箱中干燥至恒重，粉碎后過60目篩，放于-20龍冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.2蒲公英水提取物參照王留等”的方法并作修改。取預(yù)處理好的蒲公英粉末150g,按照料水比1：25的比例加純化水浸泡12h,之后在80龍的水浴條件下浸提5h,提取4次，合并4次的浸提液，將浸提液用四層紗布進(jìn)行過濾，之后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將過濾液濃縮成浸膏，最后將浸膏置于4龍冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.3蒲公英醇提取物參照劉海燕等”并作修改。取預(yù)處理好的蒲公英粉末150g,按照料液比1：25的比例加100%的乙醇浸泡12h，之后在80龍的水浴條件下浸提5h，提取4次，合并4次的浸提液，將浸提液用四層紗布進(jìn)行過濾，之后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將過濾液濃縮成浸膏，最后將浸膏置于4龍冰箱保存?zhèn)溆谩?.2.4蒲公英提取物對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制的影響參照孟雅君"3「的方法并作修改。將擴(kuò)展青霉、鏈格抱、鐮刀菌、灰葡萄抱、葡枝根霉5種菌種在PDA培養(yǎng)基上連續(xù)培養(yǎng)幾代，實(shí)驗(yàn)前7d再活化一次。用0.6cm的打孔器將供試菌株打成菌餅備用。將蒲公英浸膏分別用100%乙醇配置成初始濃度為0.075g/mL、0.15g/mL、0.3g/mL、0.6g/mL、1.2g/mL的藥液，緊接著將藥液用細(xì)菌過濾器過濾，隨后各吸取1mL加入到14mL的PDA培養(yǎng)基中使其混勻倒成平板，此時(shí)，藥濃度即為5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、40mg/mL、80mg/mL。同時(shí)設(shè)置溶劑對(duì)照。將長(zhǎng)有菌落的菌餅朝下放置在平板中央，每個(gè)培養(yǎng)皿接種一個(gè)菌餅，重復(fù)9次。在25X.培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7d后用十字交叉法測(cè)定菌落直徑。菌絲生長(zhǎng)抑制率用下列公式計(jì)算。菌絲生長(zhǎng)抵制率一對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑困絲生長(zhǎng)抵制率 — 對(duì)照困落直徑-0.6X100%1.2.5蒲公英提取物對(duì)孑包子萌發(fā)的抑制作用參照戴岳等"的方法。將配置好的抱子懸浮液10以分別均勻涂布到蒲公英提取物濃度為80mg/mL的PDA平板上(9cm)，在25X的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，隨后在顯微鏡下觀察抱子萌發(fā)數(shù),每個(gè)處理重復(fù)3次。計(jì)算抱子萌發(fā)率和抱子抑制率。抱子萌發(fā)率=已萌發(fā)抱子數(shù)

鏡檢抱子總數(shù)X100%孢子萌發(fā)抵制率=對(duì)照萌發(fā)率-處理萌發(fā)率

對(duì)照萌發(fā)率X100%2結(jié)果與分析抱子萌發(fā)率=已萌發(fā)抱子數(shù)

鏡檢抱子總數(shù)X100%孢子萌發(fā)抵制率=對(duì)照萌發(fā)率-處理萌發(fā)率

對(duì)照萌發(fā)率X100%2.1蒲公英不同提取物得率比較從浸膏得率可以看出,100%乙醇的提取得率高于水提取得率，兩種提取物的得率分別為12.45%和9.49%,醇提取法得率比水提取法高出31.2%。試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)醇提法過濾速度較水提法快,整體用時(shí)較短，同時(shí)提取率也高于水提法，因此，可選擇100%乙醇對(duì)蒲公英進(jìn)行提取。王超群等”研究發(fā)現(xiàn)醇提法用時(shí)較短，但提取物的得率低于水提取法,造成差別的原因可能與所用的提取工藝不同有關(guān),見表1所列。表1蒲公英不同提取物得率比較提取溶劑樣品原始質(zhì)量/g浸膏質(zhì)量/g得率/%水150.02014.249.49100%乙醇150.10018.6912.452.2不同濃度的蒲公英提取物對(duì)供試菌種菌絲生長(zhǎng)活性的影響由表2可以看出，不論是醇提取物還是水提取物,均對(duì)供試菌絲的生長(zhǎng)產(chǎn)生一定的抑制作用。同時(shí)，隨著蒲公英醇提取物濃度的增加,擴(kuò)展青霉、鏈格抱、鐮刀菌、灰葡萄抱、葡枝根霉菌絲抑制率均在不斷的提升,隨著蒲公英水提取物濃度的增加,擴(kuò)展青霉、鏈格抱、鐮刀菌、灰葡萄抱菌絲抑制率均在不斷的提升，但葡枝根霉菌絲抑制率先隨著水提取物濃度的增加而增加，當(dāng)水提物濃度增加到20mg/mL以上時(shí),菌絲抑制率變化不明顯。

對(duì)擴(kuò)展青霉而言，醇提取物的菌絲抑制率高于水提取物，當(dāng)提取物濃度達(dá)到80mg/mL時(shí),水提取物的菌絲抑制率為45.51%，而醇提取物的菌絲抑制率達(dá)到了為82.10%；對(duì)鏈格抱而言，醇提取物的菌絲抑制率高于水提取物，當(dāng)提取物濃度達(dá)到80mg/mL時(shí)，水提取物的菌絲抑制率為54.49%，而醇提取物的菌絲抑制率為63.11%；對(duì)鐮刀菌而言，水提取物的菌絲抑制率高于醇提取物，當(dāng)提取物濃度達(dá)到80mg/mL時(shí),水提取物的菌絲抑制率為88.36%，而醇提取物的菌絲抑制率僅為46.87%；對(duì)灰葡萄抱而言,水提取物的菌絲抑制率高于醇提取物，當(dāng)提取物濃度達(dá)到80mg/mL時(shí)，水提取物的菌絲抑制率為89.92%，而醇提取物的菌絲抑制率僅為66.02%；對(duì)葡枝根霉而言，醇提取物的菌絲抑制率高于水提取物，當(dāng)提取物濃度達(dá)到80mg/mL時(shí)，水提取物的菌絲抑制率為30.37%，而醇提取物的菌絲抑制率達(dá)到了87.24%。綜上所述，較醇提物相比，蒲公英水提取物對(duì)鐮刀菌、灰葡萄抱的菌絲生長(zhǎng)可發(fā)揮較好的抑制作用，且在濃度達(dá)到80mg/mL時(shí)，水提取物對(duì)灰葡萄抱的抑制作用（89.92%）＞鐮刀菌的抑制作用（88.36%）。與水提物相比，蒲公英醇提取物對(duì)擴(kuò)展青霉、鏈格抱、葡枝根霉可發(fā)揮較好的抑制作用，且在濃度達(dá)到80mg/mL時(shí)，醇提取物對(duì)葡枝根霉的抑制作用（87.24%）＞擴(kuò)展青霉的抑制作用（82.10%）＞鏈格抱的抑制作用（63.11%）。這也表明蒲公英不同溶劑提取物可對(duì)不同的菌種表現(xiàn)出不同的抑制作用。王超群等"在研究蒲公英醇提法、水提法及超聲波法3種方法對(duì)黃瓜灰霉病菌的抑制作用時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)乙醇提取所得的蒲公英活性成分更有利于對(duì)擴(kuò)展青霉發(fā)揮抑制作用;也有研究發(fā)現(xiàn)蒲公英水提物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用,而蒲公英醇提物對(duì)炭疽桿菌等菌種有很好的抑制作用*「。因此，在以后的研究中,還需要針對(duì)不同菌種選用適合的提取方法,以期使活性成分能最大限度地發(fā)揮作用。2.3蒲公英提取物對(duì)供試菌種抱子萌發(fā)的抑制作用由表3可以看出，80mg/mL的蒲公英水提取物和表2蒲公英不同提取物對(duì)供試菌種菌絲生長(zhǎng)活性的影響供試菌種菌絲生長(zhǎng)抑制率/%提取物 濃度/mg-mL-1 擴(kuò)展青霉 鏈格泡 鐮刀菌 灰葡萄泡 葡枝根霉水提取物醇提取物5水提取物醇提取物510.32±1.06a1.97±0.02a7.46±1.24a9.09±1.38a2.11±0.03a1015.49±0.17b8.39±0.10b17.06±2.78b21.33±2.11b5.15±1.31b2025.17±1.11c28.94±1.83c32.48±4.06c23.59±1.86b30.93±2.08c4037.18±1.11d47.19±2.38d59.39±4.28d55.30±1.79c30.63±1.56c8045.51±1.11e54.49±2.68e88.36±3.69e89.92±0.00d30.37±1.83c515.65±0.23a10.83±01.44a5.65±1.44a15.64±4.41a24.34±3.67a1046.16±0.87b20.92±1.76b14.94±1.85b38.34±3.79b25.50±3.18a2056.53±4.53c51.46±9.39c17.88±1.81b54.94±7.44c36.11±2.41b4075.03±1.69d56.53±4.53d46.78±4.90c65.86±3.16d65.81±6.15c8082.10±5.58e63.11±6.05e46.87±4.90c66.02±3.36d87.24±0.00d表3蒲公英提取物對(duì)供試菌種孢子萌發(fā)的抑制作用供試菌株泡子萌發(fā)抑制率/%提取物擴(kuò)展青霉 鏈格泡 鐮刀菌 灰葡萄泡 葡枝根霉水提取物56.74±1.37 58.96±1.03 82.32±2.41 88.67±3.28 42.09±1.98醇提取物75.65±2.01 72.61±0.98 45.92±1.87 72.09±1.67 89.24±2.7410(C)1994-2022ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved,醇提取物均可對(duì)供試菌種的抱子萌發(fā)產(chǎn)生一定的抑 （72.61%）。制作用。較醇提物而言,80mg/mL的蒲公英水提取物對(duì)鐮刀菌和灰葡萄抱的抱子萌發(fā)可產(chǎn)生較好的抑制作用，抑制率分別為82.32%和88.67%；和水提物相比，80mg/mL的蒲公英醇提取物對(duì)擴(kuò)展青霉、鏈格抱、葡枝根霉的抱子萌發(fā)抑制較好，其對(duì)葡枝根霉的抱子萌發(fā)抑制率（89.24%）＞擴(kuò)展青霉（75.65%）＞鏈格抱（72.61%）。3結(jié)論（1） 從浸膏得率可以看出，醇提取法浸膏得率高于水提取法，浸膏得率達(dá)到了12.45%，比水提取法高出31.2%。（2） 隨著蒲公英醇提取物濃度的增加，擴(kuò)展青霉、鏈格抱、鐮刀菌、灰葡萄抱、葡枝根霉菌絲抑制率均在不斷的提升，隨著蒲公英水提取物濃度的增加，擴(kuò)展青霉、鏈格抱、鐮刀菌、灰葡萄抱菌絲抑制率均在不斷的提升，但葡枝根霉菌絲抑制率先隨著水提取物濃度的增加而增加,當(dāng)水提物濃度增加到20mg/mL以上時(shí)，菌絲抑制率變化不明顯。（3） 蒲公英不同溶劑提取物可對(duì)不同菌種的菌絲生長(zhǎng)表現(xiàn)出不同的抑制作用。蒲公英水提取物對(duì)鐮刀菌、灰葡萄抱的菌絲生長(zhǎng)可發(fā)揮較好的抑制作用，且在濃度達(dá)到80mg/mL時(shí)，水提取物對(duì)灰葡萄抱的抑制作用（89.92%）＞鐮刀菌的抑制作用（88.36%）。與水提物相比，蒲公英醇提取物對(duì)擴(kuò)展青霉、鏈格