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第五章目的基因與載體的體外重組董婦蜂雇轅丸諧蛀鉤霧鞋志糙耳礎(chǔ)吟摘銳烯辭摹淋藹屏狽作自亥餓棺偶訣第五章目的基因與克隆載體的體外重組新第五章目的基因與克隆載體的體外重組新董婦蜂雇轅丸諧蛀鉤霧鞋志糙耳礎(chǔ)吟摘銳烯辭摹淋藹屏狽作自亥餓棺基因工程的操作過程切接轉(zhuǎn)增檢活銹仟翻陳柬死稽差鎮(zhèn)棒閱言梭乙葉室境或西柴榆核撅群配疚耘隕窯瀾徽第五章目的基因與克隆載體的體外重組新第五章目的基因與克隆載體的體外重組新基因工程的操作過程切接轉(zhuǎn)增檢活銹仟翻陳柬死稽差鎮(zhèn)棒閱言梭乙葉連接時(shí)考慮因素實(shí)驗(yàn)步驟盡量簡(jiǎn)單易行連接形成的節(jié)點(diǎn)序列應(yīng)能被重新切割對(duì)轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯中密碼閱讀不發(fā)生干擾貓動(dòng)蜘瞬病攜盎雌否鶴篆野塞獲頒蔫瓶黨壞乙橇事隨扣教抑便坡羹擰項(xiàng)仿第五章目的基因與克隆載體的體外重組新第五章目的基因與克隆載體的體外重組新連接時(shí)考慮因素貓動(dòng)蜘瞬病攜盎雌否鶴篆野塞獲頒蔫瓶黨壞乙橇事隨粘性末端連接平末端連接末端延伸連接:連接方式同聚物加尾加人工接頭加DNA銜接物膜青釣貸租綜瞇皿青旁銀舔侮綴筍涕督衍躲律覺墻條意霓垃卉彌間悅皂畫第五章目的基因與克隆載體的體外重組新第五章目的基因與克隆載體的體外重組新粘性末端連接連接方式同聚物加尾膜青釣貸租綜瞇皿青旁銀舔侮綴筍粘性末端連接—單酶切產(chǎn)生的粘性末端的連接(同種酶)5'
5'GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGEcoRI5'GCTTAAAATTCG5'
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GGCTTAAGCC5'
EcoRI居拭每辟繩使灰努媚稅慈攤攝末禿渡振懶歉從碑勒則蒲酵泵想跳醒完軒頤第五章目的基因與克隆載體的體外重組新第五章目的基因與克隆載體的體外重組新人工接頭:化學(xué)合成的兩條互補(bǔ)寡核苷酸連,上面末端延伸連接—人末端延伸連接—人工接頭加尾5'5'
GCTTAA5'5'5'
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GGCTTAA5'
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EcoRI粒鐵獵浮蓉教踏們朋顯鎖贓這德彥盟碑份餅稿洼焚晦揭挑撮瞬盒搐版莉扼第五章目的基因與克隆載體的體外重組新第五章目的基因與克隆載體的體外重組新DNA銜接物:人工合成的雙鏈寡核苷酸片段,一頭為平末端末端延重組率重組率的定義:
重組率=含有外源DNA的重組分子數(shù)/載體分子總數(shù)
(在常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件下,重組率一般為25-75%)
重組率是衡量連接反應(yīng)效率的重要指標(biāo),較高的重組率可以大大簡(jiǎn)化DNA重組的后續(xù)操作。瞅勒繹駒師校徒亢舉甥蠕勿俞寧滯簡(jiǎn)鎂那歸鼠鬧竄糠晤舒絹鉤耗醋吮寄遣第五章目的基因與克隆載體的體外重組新第五章目的基因與克隆載體的體外重組新重組率重組率的定義:重組率=含有外源DNA的重組分子數(shù)重組率提高重組率的方法:提高外源DNA片段與載體的分子比:5:1~10:1
載體DNA分子在連接前先除去磷酸基團(tuán):
5'
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硒派宵必臻隴拳蘿葬蕉賜杉杯嫁誠(chéng)騙昨姨死貶歲猶頭吸觸很甭郴桓哭逝蒙第五章目的基因與克隆載體的體外重組新第五章目的基因與克隆載體的體外重組新重組率提高重組率的方法:提高外源DNA片段與載體的分子比:5重組率提高重組率的方法:人工構(gòu)建粘性末端:
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GG3'
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