實驗動物與動物實驗方法教案

PAGEPAGE21 目錄TOC\o"1-3"\h\z第一篇實驗動物學(xué)基本知識 2第一章實驗動物學(xué)的基本概念 2第二章實驗動物的分類 2第二篇動物實驗的相關(guān)知識 4第一章實驗動物給藥量的確定及計算方法 4第一節(jié)實驗動物用藥量的計算方法 4第二節(jié)動物間劑量換算 4第三節(jié)動物給藥劑量的確定 5第二章實驗動物的麻醉方法 5第三章生理溶液的配制 5第四章動物實驗設(shè)計的基本原則 6第五章動物實驗數(shù)據(jù)的收集整理和描述 6第一節(jié)有效數(shù)字及其誤差的傳遞 6第二節(jié)實驗數(shù)據(jù)的分類 6第三節(jié)常用的數(shù)理統(tǒng)計方法 7第六章選擇實驗動物的基本原則 7第七章藥理學(xué)研究中實驗動物的選擇 7第八章動物實驗報告與論文的撰寫及注意事項 8第三篇動物實驗的常用實驗技術(shù) 9第一章動物實驗的基本操作 9第一節(jié)實驗動物的編號 9第二節(jié)動物的捉持和固定 9第三節(jié)常用動物的給藥方法 9第四節(jié)動物的性別鑒定 10第五節(jié)動物處死方法 10第二章動物血液的采集方法 10第一節(jié)大鼠、小鼠的血液采集方法 10第二節(jié)家兔、豚鼠的血液采集方法 11第三章動物實驗手術(shù)基本操作技術(shù) 11第四章動物尸檢的方法 12第五章動物各種體液的采集方法 12第四篇實驗講義 13實驗一大鼠、小鼠的實驗基本操作練習(xí) 13實驗二家兔血清轉(zhuǎn)氨酶的測定 13實驗三劑量的計算和大鼠、小鼠的采血練習(xí) 14實驗四家兔血壓的測定 14實驗五大白鼠腎上腺和小白鼠卵巢摘除術(shù) 14實驗六離體蛙心實驗 15實驗七藥物的抗驚厥作用 15實驗八藥物的鎮(zhèn)痛作用 17實驗九奎尼丁對實驗性心律失常的影響 18附表 19表一不同動物采血部位與采血量 19表二不同動物的最大安全采血量和最小致死采血量（ml） 19表三人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值表 19表四常用生理溶液的成分和配制 19表五常用非揮發(fā)性麻醉藥的劑量 20第一篇實驗動物學(xué)基本知識第一章實驗動物學(xué)的基本概念一、實驗動物的定義實驗動物是人工飼養(yǎng)，對其攜帶的微生物實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚的，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)、檢定及其科學(xué)實驗的動物。通常將用于實驗的各種動物稱為實驗動物，包括實驗動物、家畜（禽）和野生動物三大類。二、實驗動物學(xué)的基本內(nèi)容1、實驗動物育種學(xué)：實驗動物育種學(xué)主要研究實驗動物遺傳改良和遺傳控制，以及野生動物和家畜的實驗動物化。2、實驗動物醫(yī)學(xué)：實驗動物醫(yī)學(xué)專門研究實驗動物疾病的診斷、治療、預(yù)防以及它在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里如何應(yīng)用的科學(xué)。3、比較醫(yī)學(xué)：比較研究所有動物（包括人的）基本生命現(xiàn)象的異同。4、實驗動物生態(tài)學(xué)：研究實驗動物生存的環(huán)境與條件，如動物房舍、動物設(shè)施、通風(fēng)、溫度、濕度、光照、噪聲、籠具、飼料、飲水以及各種墊料等。5、動物實驗技術(shù)：研究動物實驗時的各種操作技術(shù)和實驗方法，也包括實驗動物本身的飼養(yǎng)管理技術(shù)和各種監(jiān)測技術(shù)等。第二章實驗動物的分類按微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)分類：㈠按國際標(biāo)準(zhǔn)分類：按微生物控制的程度，可將實驗動物分為四類：無菌動物、悉生動物、SPF動物和常規(guī)動物。1、無菌動物（germfreeanimals,GF）：機(jī)體內(nèi)外均無任何寄生物（微生物和寄生蟲）的動物，采用當(dāng)前的手段無法檢出一切其他生命體，它是在全封閉無菌條件下飼養(yǎng)的動物（如隔離器）。2、悉生動物（gnotobioticanimals,GN）：機(jī)體內(nèi)帶有已知微生物的動物，故又稱已知菌動物，它是將已知菌植入動物體內(nèi)，因植入的菌類數(shù)量不同可分為單菌動物、雙菌動物、多菌動物。這兩類動物必須飼養(yǎng)于隔離環(huán)境（全封閉無菌條件下）飼養(yǎng)內(nèi)，飼料、飲水、籠嚴(yán)格消毒，確保無菌。飼料中的營養(yǎng)成分必須齊全，滿足無菌動物的需要，特別是維生素類營養(yǎng)物質(zhì)。無菌動物和悉生動物適用于作一些特殊的研究試驗，如病原研究、微生物之間的關(guān)系研究、宿主與微生物之間關(guān)系研究、營養(yǎng)與代謝、抗腫瘤研究等。3、SPF動物SPF動物,即無特定病原體動物（specificpathogenfreeanimals,SPF），它是機(jī)體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲的動物，但非特定的微生物和寄生蟲是允許存在的，所以實際上就是指無傳染病的健康動物。SPF動物必須飼養(yǎng)于屏障環(huán)境中，飼料、飲水、墊料、籠具等必須滅菌，操作人員必須嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程。4、普通動物普通動物（conventionalanimals,CV），又稱常規(guī)動物，是指在一般自然環(huán)境中飼養(yǎng)的，允許帶有寄生蟲和細(xì)菌，但不允許帶有人畜共患病的動物。普通動物應(yīng)具有健康動物的外貌和正常的飲食，毛色光澤、貼身，皮膚有彈性，無瘢痕及缺損，頭、臉、四肢不腫脹，無弓背吊腹的表現(xiàn)，呼吸平穩(wěn)，不氣喘和咳嗽，無眼觀的病灶。普通動物飼養(yǎng)與普通環(huán)境中，飼喂全價飼料，飲水應(yīng)符合城市飲水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，飼料、墊料要消毒，飼養(yǎng)室溫度、濕度能人工控制，能防止蚊蟲的昆蟲進(jìn)入。飼養(yǎng)室內(nèi)外環(huán)境應(yīng)定期打掃、消毒。病死的動物要焚毀。普通動物對實驗的反應(yīng)性差，實驗結(jié)果不可靠，它只能供教學(xué)和為預(yù)備試驗時用，不宜搞科研。㈡國內(nèi)按微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)分類我國實驗動物按微生物標(biāo)準(zhǔn)分類：一級動物、二級動物、三級動物、四級動物。一級動物即普通動物。二級動物為清潔動物，這類動物除一級動物要求不能帶有人獸共患疾病的病原體及體外寄生蟲外，還需不帶有動物傳染病原體和對科學(xué)實驗干擾大的病原體。清潔動物外觀無病，不允許出現(xiàn)臨床癥狀和臟器的病變和自然死亡。清潔級動物是我國自行設(shè)立的一種等級動物，這類動物因在實驗中可免受動物疾病的干擾，其敏感性和重復(fù)性較好，適宜作大部分的科研實驗，目前我國已逐步廣泛應(yīng)用。清潔級動物必須飼養(yǎng)于半屏障環(huán)境中，飼料，飲水，墊料等均須消毒。工作人員需要更換滅菌工作服、鞋帽、口罩等后才可進(jìn)入飼養(yǎng)室操作。飼養(yǎng)室必須控制溫度、濕度、光照強(qiáng)度和光照時間。三級動物為SPF動物又稱無特定病原體動物。四級動物為無菌動物和悉生動物。二、按遺傳學(xué)分類按遺傳學(xué)控制方法，根據(jù)基因純合的程度，可將實驗動物分為近交系、遠(yuǎn)交系、突變系、系統(tǒng)雜交動物四類。近交系動物近交系動物一般稱之為純系動物，是按血緣關(guān)系采用兄妹交配或親子交配。如小鼠或大鼠等嚙齒類同胞兄妹連續(xù)交配20代以上而培育出來的遺傳上具有高度純合性和穩(wěn)定性的純品系動物，成為近交系。其近交系數(shù)可達(dá)99.8%。近交系的優(yōu)點是可以獲得精確度高的試驗結(jié)果，而且各項實驗結(jié)果極易重復(fù)，具有可比性，對各種應(yīng)激反應(yīng)均一，周期短，使用動物少，可作病理模型，遺傳背景明確。但是由于近交系動物是高度近交培育而成，必然造成近交衰退，如對生長環(huán)境條件要求較高，產(chǎn)仔少，飼料中營養(yǎng)要求也高等。遠(yuǎn)交系動物遠(yuǎn)交系動物也稱“封閉群”動物。1973年日本實驗動物研究會規(guī)定5年以上不從外部引種，指在一定群體中進(jìn)行繁殖，為經(jīng)常提供實驗動物而進(jìn)行生產(chǎn)的群體叫做“封閉群”。它是以群體遺傳學(xué)為基礎(chǔ)包括封閉年限、群體大小、群體結(jié)構(gòu)等。由于封閉群繁殖率高，具有雜合性，適用于大量繁殖，以滿足生物制品、制藥廠各種藥品的安全性和效價等多動物的大量需要。突變系動物動物受各種內(nèi)外因素影響引起染色體畸變和基因突變而育成某些特殊性狀表型的品系，稱之突變系動物。有的突變系動物與人的疾病相似，如肥胖小鼠具有與人類極相似的肥胖病和糖尿?。患∪馕s癥小鼠具有與人類相似的肌肉萎縮癥等。許多模型是由自然突變和自發(fā)突變而產(chǎn)生的。這就需要由實驗育種工作者去發(fā)現(xiàn)、研究并留種育成。4、系統(tǒng)雜交動物系統(tǒng)雜交動物是指兩個不同品系的近交系動物之間雜交產(chǎn)生的第一代雜交動物。此系統(tǒng)雜交動物又叫F1代動物，也可以叫“雜交一代”或“子一代”、“雜種一代”動物。F1代動物是由兩個不同品系的近交系雜交培育而來，具有雜交優(yōu)勢，對外界的適應(yīng)能力和抗病能力強(qiáng)，產(chǎn)仔率高，克服了因近交繁殖引起的各種近交率退現(xiàn)象；但也具有近交系的優(yōu)點，具有與純系動物基本相似的遺傳均質(zhì)性，雖基因不是純合子，但基因是整齊一致的，遺傳性是穩(wěn)定的，表現(xiàn)型也一致，基本上具有近交系動物的特點，具有遺傳上的均一性，實驗結(jié)果易重復(fù)，便于國際交流，并在生物醫(yī)學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。如干細(xì)胞的研究、移植免疫的研究、細(xì)胞動力學(xué)研究、單克隆抗體等。第二篇動物實驗的相關(guān)知識第一章實驗動物給藥量的確定及計算方法第一節(jié)實驗動物用藥量的計算方法一、一般藥物或試劑濃度的表示方法1、百分濃度：①重量／容量（W/V）法：每100ml溶液中含藥物的克數(shù)。②容量／容量（V/V）法：每100ml溶液中含藥物的毫升數(shù)。2、比例濃度：“1:X”,指1g固體或1ml液體溶質(zhì)，加溶劑配成xml溶液。3、摩爾濃度（mol/L）：1000ml溶液中含溶質(zhì)的摩爾數(shù)。4、百萬分濃度（PPM）：指一百萬份物質(zhì)（固體、液體、氣體）中所含藥物或毒物的份數(shù)。5、單位（u）和國際單位（IU或iu）：通過生物檢定，并與標(biāo)準(zhǔn)品比較，以確定檢品藥物一定量中含有多少效價單位。凡是按國際協(xié)議的標(biāo)準(zhǔn)品檢定得的效價單位稱為國際單位。二、中藥制劑濃度表示方法1、單味中藥粗制劑濃度表示法通常以mg·mL-1或g/ml表示液體制劑；如果是固體制劑，則通常以g·g-1或g/g表示。2、復(fù)方制劑濃度表示法：除表明藥物的制劑與濃度外，還應(yīng)附上藥物的組成及相當(dāng)?shù)纳幜俊?、濃度表示法：如果成分和含量清楚，一般以含量表示。三、動物實驗藥物劑量的表示方法：一般按mg/kg或g/kg體重計算。四、給藥溶液的配制與換算1、溶液配制時的換算①用純藥品或試劑配制溶液時，求所需的藥量：所需藥量＝所需溶液量×所需濃度②用濃溶液配制稀溶液，求所需濃溶液的量：所需濃溶液量＝稀釋溶液濃度×稀釋溶液量/濃溶液濃度2、動物給藥溶液的計算①已知給藥劑量和給藥濃度，計算給藥體積。②已知給藥劑量計算給藥濃度第二節(jié)動物間劑量換算1、同種動物間等效劑量的換算：①按動物體重給藥；②按體表面積用藥2.不同種屬動物間劑量的換算⑴標(biāo)準(zhǔn)動物的等效劑量折算系數(shù)法：舉例：小鼠1mg/只，由表可知人用量為387.9/人，人用量為387.9÷70Kg＝5.5mg/kg⑵等效劑量的直接折算法：對于任何體重的動物：用折算系數(shù)和體型系數(shù)進(jìn)行公式計算公式中dB是欲求算的B種動物（包括人）的公斤體重劑量，dA是已知動物（包括人）A的公斤體重劑量；WA、WB是已知動物A、B的體重，RA、RB是已知動物A、B的體型折算系數(shù)，KA、KB是折算系數(shù)。不同動物的劑量折算系數(shù)動物種屬小鼠大鼠豚鼠兔犬人R（體型系數(shù)）0.060.090.0990.0930.1040.11K（折算系數(shù)）10.710.620.300.320.11⑶人與動物用藥量的比例換算不同動物劑量換算可遵循以下系數(shù)換算：人一1，犬、猴—3，兔、貓一5，大鼠、豚鼠一7，小鼠一9的折算系數(shù)為依據(jù)，推算出等效劑量。第三節(jié)動物給藥劑量的確定一、動物給藥劑量的確定1、先用小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量，然后用小于中毒量的劑量，或取致死量1／l0～1／5。2、化學(xué)藥品可參考化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的已知藥物，特別是結(jié)構(gòu)和作用都相似的藥物劑量。3、已有臨床經(jīng)驗的藥物（中藥或西藥）可按臨床劑量推算。4、確定動物給藥劑量時，要考慮給藥動物的年齡大小和體質(zhì)強(qiáng)弱。5、確定動物給藥劑量時，要考慮因給藥途徑不同，所用劑量也不同，以口服量為l00時，灌腸量應(yīng)為100～200，皮下注射量30～50，肌肉注射量為25～30，靜脈注射量為25。6、確定劑量后，可根據(jù)與實驗結(jié)果調(diào)整劑量。二、給藥量的計算應(yīng)考慮的問題若已知給藥濃度和給藥劑量，則可計算給藥體積。若僅知給藥劑量，應(yīng)查出最佳給藥體積范圍，確定給藥體積，再計算給藥濃度。已知給藥劑量，查出最佳給藥體積范圍后，有時需摸索出適宜的給藥濃度，求給藥次數(shù)等（如中藥粗制劑）應(yīng)考慮助溶問題。第二章實驗動物的麻醉方法一、麻醉方法的選擇根據(jù)動物種類與麻醉方法的選擇：鼠類動物一般都選擇腹腔麻醉，也較適宜吸入麻醉；兔、犬、猴等都比較適合靜脈麻醉。根據(jù)實驗長短選擇麻醉藥物和方法：時間短的可選擇吸入麻醉，或短效靜脈麻醉；時間較長的可選擇腹腔麻醉和肌肉麻醉；時間很長的宜選用靜脈輸液連續(xù)麻醉。根據(jù)實驗內(nèi)容選擇試驗方法：如失血性休克不宜麻醉過深，否則容易發(fā)生死亡；做心電圖的實驗多用烏拉坦等。二.常用的麻醉劑1、揮發(fā)性麻醉劑如：乙醚、氯仿等。2、非揮發(fā)性麻醉劑(1)戊巴比妥鈉：戊巴比妥鈉麻醉時間不很長，一般可持續(xù)3～5小時，十分符合一般實驗要求。所以是最常用的麻醉劑。(2)硫噴妥鈉：麻醉誘導(dǎo)和蘇醒時間短，一次用藥僅可維持?jǐn)?shù)分鐘。(3)水合氯醛：其麻醉量與中毒量很接近，故安全圍小。水合氯醛的常用濃度1％。(4)氨基甲酸乙酯(烏拉坦)：此藥是比溫和的麻醉藥，安全度大。烏拉坦常用濃度20～25％。第三章生理溶液的配制進(jìn)行離體器官或組織實驗時，必須給離體的器官或組織提供一個與其在機(jī)體內(nèi)所處環(huán)境相似的外界環(huán)境。各種不同的生理溶液，就是根據(jù)各種不同的器官或組織在機(jī)體內(nèi)所處環(huán)境中的化學(xué)成分、離子強(qiáng)度、酸堿性、能量和氧氣供應(yīng)、溫度等的不同而配制的，以提供給不同的器官或組織一個適宜的體外。一、配制人工生理溶液的主要條件1、滲透壓：配制人工生理溶液要等滲。不同的動物對同一物質(zhì)的等滲濃度要求不相同。2、各種離子：溶液中含有一定比例的不同電解質(zhì)的離子Na+、ca2+、K+、Mg2+、OH-是維持組織和器官功能所必需。組織器官不同，對生理溶液中離子成分和濃度要求亦不同。3、pH的影響：人工生理溶液的pH值一般要求在7～7．8之間。4、能量：葡萄糖能提供組織活動所需的能量，但需臨用時時加入溶液中，特別是氣溫較高時尤應(yīng)注意。各種細(xì)胞培養(yǎng)液還需加入多種氨基酸，血清等營養(yǎng)物質(zhì)。5、氧氣：有的離體器官需要氧氣，如離體的子宮、離體的兔心、乳頭肌等，一般用95％氧氣、5％C02；在腸管實驗時可以用空氣。二、常用生理溶液的成分和配制詳見附表表四。三、配制人工生理溶液的注意事項1、蒸餾水要新鮮，最好用重蒸餾水。2、配制時要用無水氯化鈣3、配制時如有碳酸氫鈉或有磷酸二氫鈉則必須充分稀釋后才可以加入已經(jīng)溶好的氯化鈣中，邊加邊攪拌，以免產(chǎn)生混濁和沉淀。4、含有碳酸氫鈉或葡萄糖的溶液，儲存的日期都不能過長。第四章動物實驗設(shè)計的基本原則一、對照性原則對照性原則是要求在實驗中設(shè)立可與實驗組比較，用以消除各種無關(guān)因素影響的對照組。實驗研究一般都把實驗對象隨機(jī)分設(shè)對照。可以采用同體對照，即同一動物在施加實驗因素前后所獲得的不同結(jié)果和數(shù)據(jù)各成一組，作為前后的對照，或同一動物在施加實驗因素的一側(cè)與不施加實驗因素的另一側(cè)作左右的對照；也可采用異體對照，即一組施加實驗因素，一組不施加實驗因素。不作任何實驗處理給生理鹽水進(jìn)行比較的對照組稱“空白對照’’或“陰性對照”；施行正常值、標(biāo)準(zhǔn)值處理進(jìn)行比較的對照組稱“標(biāo)準(zhǔn)對照”或“陽性對照”。對照各組均應(yīng)在同一條件下，否則失去對照意義。二、重復(fù)性原則重復(fù)性原則是指同一處理要設(shè)置多個樣本例數(shù)。一般估測的樣本數(shù)：小動物(小鼠、大鼠)每組10-30例：計量資料每組不少于10例，計數(shù)資料每組不少于20例。中等動物(豚鼠、家兔)每組8-20例；計量資料每組不少于8例，計數(shù)資料每組不少于20例。大動物(犬、貓)每組6-20例；計量資料每組不少于6例，計數(shù)資料每組不少于20例。三、隨機(jī)性原則隨機(jī)性原則就是按照機(jī)遇均等的原則進(jìn)行分組。其目的是使一切干擾因素造成的實驗誤差盡量減少，而不受實驗者主管因素或其他偏性誤差的影響。隨機(jī)化的手段可采用編號卡片抽簽法，隨機(jī)數(shù)字表或采用計算機(jī)的隨機(jī)數(shù)字鍵。第五章動物實驗數(shù)據(jù)的收集整理和描述第一節(jié)有效數(shù)字及其誤差的傳遞一、有效數(shù)字有效效字是指包括本位數(shù)在內(nèi)的各位數(shù)字，它不包括數(shù)字前的零，但包括數(shù)字后的零，它與小數(shù)點的位置無關(guān)。記錄讀數(shù)時應(yīng)由儀表最小刻度值向下估讀一位。二、有效數(shù)字的誤差傳遞1、尾數(shù)取舍計算值常含有多位小數(shù)，其有效位數(shù)末位數(shù)后的尾數(shù)取舍，應(yīng)按“四舍六入，逢五化偶”的規(guī)則(不是四舍五入)。當(dāng)尾數(shù)是五時，如前一位數(shù)是偶數(shù)則將五舍去；如為奇數(shù)則進(jìn)一，使末位數(shù)化為偶數(shù)。2、加減計算加減計算時，得數(shù)的最大絕對誤差是各實測值絕對誤差之和。亦可按實用簡法計算，即加減得數(shù)的小數(shù)位數(shù)等于或小于實測值中最小的小數(shù)位數(shù)。3、乘除計算乘除計算時，得數(shù)的最大相對誤差是各實測值相對誤差之和。亦可按實用簡法計算，即乘除得數(shù)的有效位數(shù)等于或小于實測值中最小的有效位數(shù)。第二節(jié)實驗數(shù)據(jù)的分類1、計數(shù)資料此類資料對于每一觀察個體而言；沒有量的差異，只存在質(zhì)的區(qū)別，故稱為質(zhì)反應(yīng)資料。它指某一特定反應(yīng)出現(xiàn)或不出現(xiàn)(例如，死亡或存活、有效或無效、嘔吐或不嘔吐、驚厥或不驚厥等)的個數(shù)。如扭體數(shù)、成活數(shù)、死亡數(shù)、產(chǎn)仔數(shù)等。這種指標(biāo)值的大小是以各組受試中陽性反應(yīng)(或陰性反應(yīng))的出現(xiàn)例數(shù)來表示，故又稱為計數(shù)資料。2、計量資料計量資料是藥效統(tǒng)計分析中最常用的資料類型。它通過直接計量而得來的以數(shù)量為特征的資料，是用度量衡等計量工具直接測定的。如血壓、體重、血糖、尿量、血細(xì)胞數(shù)等。常用于計量資料的統(tǒng)計方法(如t檢驗)都基于測量數(shù)據(jù)符合“常態(tài)分布”這一前提，故作統(tǒng)計學(xué)處理之前應(yīng)進(jìn)行資料是否符合常態(tài)（或正態(tài)）分布的檢驗。3、計時資料(時反應(yīng)資料)計時資料是以時間為指標(biāo)的特殊計量資料。因都以時間為指標(biāo)，故特稱為計時(或時反應(yīng))資料。觀察指標(biāo)是某種質(zhì)反應(yīng)出現(xiàn)所需的時間或持續(xù)時間，這類資料稱計時資料。計時資料的概率分布不如量反應(yīng)的概率分布對稱，其特點是常不符合常態(tài)分布，而呈右偏態(tài)，因而計時資料的數(shù)據(jù)處理不同于一般計量資料。4、等級資料(半定量資料)當(dāng)觀察指標(biāo)有等級關(guān)系的稱為等級資料，如：用藥后疾病的變化可分為痊愈、顯效、改善、無效和惡化；組織的病變程度可分為＋＋＋、＋＋、＋、±、－；疼痛的緩解可分為高度、中度、輕度、無效等。等級資料介于計量資料和計數(shù)資料之間，可比計數(shù)資料獲得更多的信息，但不如計量資料及計時資料準(zhǔn)確，且常偏離正態(tài)，因而需要應(yīng)用非參數(shù)方法進(jìn)行統(tǒng)計分析。常用的數(shù)理統(tǒng)計方法配對資料——t檢驗兩組對比例數(shù)等：t值簡法基本正態(tài)方差齊無配對關(guān)系例數(shù)不等：t值法方差不齊：校正t值法計量資料多組對比：綜合對比用方差分析，兩藥對比用q檢驗數(shù)據(jù)偏態(tài)：秩檢驗或序值法計數(shù)資料兩率對比——χ2(2×2法)確切概率法等級資料——秩和法、Ridet法或等級序值法等第六章選擇實驗動物的基本原則1、相似性原則：相似性原則是指利用動物與人類某些機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)及疾病特點的相似性選擇實驗動物。2、特殊性原則：利用不同種系實驗動物機(jī)體存在的特殊構(gòu)造或某些特殊反應(yīng)選擇解剖、生理特點符合實驗?zāi)康暮鸵蟮膭游铩?、標(biāo)準(zhǔn)化原則：標(biāo)準(zhǔn)化原則是指動物實驗中選擇和使用與研究內(nèi)容相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化的實驗動物。只有選用經(jīng)遺傳學(xué)、微生物學(xué)、環(huán)境及營養(yǎng)控制的標(biāo)準(zhǔn)化實驗動物，才能排除微生物及潛在疾病對實驗結(jié)果的影響，排除因遺傳污染而造成的個體差異。4、規(guī)格化原則：規(guī)格化原則是指選擇與實驗要求一致的動物規(guī)格。由于不同動物對外界刺激的反應(yīng)存在著個體差異，選擇時，除了注意動物的種類及品系外，還應(yīng)考慮到動物的年齡、體重、性別、生理及健康狀況等，符合規(guī)格，這也是保證實驗結(jié)果可靠性和可重復(fù)性的一個重要環(huán)節(jié)。5、經(jīng)濟(jì)性原則：經(jīng)濟(jì)性原則是指盡量選用容易獲得、價格便宜和飼養(yǎng)經(jīng)濟(jì)的動物。在不影響整個實驗質(zhì)量的前提下，盡量做到方法簡便和降低成本，選用易于獲得、最經(jīng)濟(jì)和最易飼養(yǎng)管理的實驗動物。第七章藥理學(xué)研究中實驗動物的選擇一、作用于神經(jīng)系統(tǒng)的藥物研究中促智藥研究一般使用健康成年的小鼠和大鼠。除非特定需要，一般不選用幼鼠或老年鼠。鎮(zhèn)靜催眠藥研究一般選用健康成年小鼠，便于分組實驗。鎮(zhèn)痛藥研究均需在整體動物上進(jìn)行，常用成年小鼠、大鼠、兔，必要時也可用豚鼠、犬等。一般雌雄兼用，但在熱板法或是跖刺激法試驗中，不用雄性動物，因為雄性動物的陰囊部位對熱敏感。解熱藥研究首選家兔，因為家兔對熱原質(zhì)極為敏感。此外，也可用大鼠進(jìn)行試驗。二、作用于心血管系統(tǒng)的藥物研究抗心肌缺血藥物研究可選用犬、貓、家兔、大鼠和小鼠?？剐穆墒СＫ幬镅芯靠捎秒嗍?，因小鼠不便操作不宜選用。降壓藥物研究一般選用犬、貓或大鼠，大鼠是腎血管型高血壓良好的模型動物。降壓藥研究，不宜使用家兔，因家兔外周循環(huán)對外界環(huán)境刺激極敏感，血壓變化大。治療心功能不全藥物研究常用犬、貓、豚鼠、也可用家兔，一般不宜用大鼠。調(diào)血脂藥物研究一般選用大鼠、家兔，尤其是遺傳性高脂血癥WUHL兔是良好的模型動物?？箘用}粥樣硬化藥物研究，一般可選用家兔、鵪鶉。這兩種動物對高脂日糧誘發(fā)脂代謝紊亂極為敏感，動脈粥樣硬化極易形成。抗血小板聚集藥物研究一般選用家兔和大鼠，個別試驗選用小鼠。為避免動物發(fā)情周期影響，宜用雄性動物?？鼓幬镅芯砍Ｓ么笫蠛图彝茫部捎眯∈?、豚鼠或沙鼠等，也以雄性動物為宜。在研究藥物對心臟的作用時，可選擇青蛙和蟾蜍，因為它們的心臟在離體情況下仍有節(jié)律地搏動很久。三、作用于呼吸系統(tǒng)的藥物研究鎮(zhèn)咳藥篩選的首選動物是豚鼠，因為豚鼠對化學(xué)刺激或機(jī)械刺激都很敏感，刺激后能誘發(fā)咳嗽，刺激其喉上神經(jīng)亦能引起咳嗽。兔對化學(xué)刺激或電刺激不敏感，刺激后發(fā)生噴嚏的機(jī)會較咳嗽為多，故兔很少用于篩選鎮(zhèn)咳藥。小鼠和大鼠給以化學(xué)刺激雖能誘發(fā)咳嗽，但噴嚏和咳嗽動作很難區(qū)別，變異較大，實驗可靠性較差。盡管目前也有人用小鼠初篩鎮(zhèn)咳藥，但應(yīng)盡量少用。支氣管擴(kuò)張藥物研究最常用的動物是豚鼠，因其氣管平滑肌對致痙劑和藥物的反應(yīng)最敏感。祛痰藥研究一般選用雄性小鼠、兔或貓，用來觀察藥物對呼吸道分泌的影響。家兔因氣管切開時容易出血，會影響實驗結(jié)果，不宜采用四、作用于消化系統(tǒng)的藥物研究胃腸解痙藥物研究可用大鼠、豚鼠、家兔、犬等，雌雄均可。催吐或止吐藥一般選用犬、貓、鴿等，而不選用家兔、豚鼠、大鼠，因為這些動物無嘔吐反射。五、作用于泌尿系統(tǒng)的藥物研究利尿藥物或抗利尿藥物的研究一般以雄性大鼠或犬為佳，小鼠尿量較少，家兔為草食動物，實驗結(jié)果都不盡如意。六、作用于內(nèi)分泌系統(tǒng)的藥物研究腎上腺皮質(zhì)激素類藥物研究可選用大鼠、小鼠，雌雄均可。但做有關(guān)代謝試驗時，宜選用雄性動物，便于收集尿樣。Hl受體激動藥物或阻斷藥物研究首選動物是豚鼠，其次為大鼠，雌雄各半。第八章動物實驗報告與論文的撰寫及注意事項一、動物實驗報告的基本格式與要求動物實驗報告一般包括實驗名稱、實驗?zāi)康摹嶒灢牧?、實驗步驟、實驗結(jié)果和實驗結(jié)論等內(nèi)容。1．實驗名稱2．實驗?zāi)康?．實驗材料4．實驗步驟5．實驗結(jié)果實驗結(jié)果是在實驗過程產(chǎn)生的現(xiàn)象和數(shù)據(jù)的原始記錄的基礎(chǔ)上，經(jīng)過科學(xué)加工而成的資料。原始記錄是實驗結(jié)果的根據(jù)，在實驗過程中，必須隨時在有頁碼的記錄本上詳盡地進(jìn)行記錄，除記錄實驗過程及其產(chǎn)生的現(xiàn)象和數(shù)據(jù)外，還應(yīng)記錄實驗的日期、時間、環(huán)境條件(溫度、濕度，或其他特殊條件)、偶然情況，對原始記錄不得隨意涂改，更不能撕毀脫頁。在實驗完成之后，應(yīng)對原始記錄進(jìn)行認(rèn)真核對，系統(tǒng)分析，對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，形成實驗結(jié)果，正式寫進(jìn)實驗報告中。實驗結(jié)果的表示方法可以用表格、圖表、曲線等方式。如果必須敘述，文字一定要簡明扼要，避免圖、文重復(fù)。6．實驗結(jié)論實驗結(jié)論是根據(jù)實驗過程觀察到的現(xiàn)象和測得的數(shù)據(jù)等感性材料進(jìn)行理論上的分析、推理而產(chǎn)生的理性認(rèn)識的客觀表述。實驗結(jié)論不是實驗結(jié)果的簡單重復(fù)。(三)撰寫注意事項1．應(yīng)準(zhǔn)確描述實驗動物的品種或品系名稱，并規(guī)范化，避免使用通俗稱謂，如SD大鼠不能寫成SD大白鼠。大白鼠、小白鼠的描述均與學(xué)術(shù)論文不相符的，也是不準(zhǔn)確的俗稱。2．應(yīng)準(zhǔn)確描述試驗中所用動物的雌雄性別比例、數(shù)量、體重、年齡等。撰寫實驗報告應(yīng)突出真實性、可重復(fù)性和可操作性。3．統(tǒng)計名詞及符號的書寫要求：樣本的算術(shù)平均數(shù)用英文小斜體x，不用大斜體X或M；標(biāo)準(zhǔn)差用英文小斜體s不用SD；標(biāo)準(zhǔn)誤用英文大斜體S加下角小斜體x，即Sx，不用SE或SEM；t檢驗用英文小斜體t；卡方檢驗用希臘文小斜體χ2；概率用英文大斜體P；樣本用英文小斜體n。第三篇動物實驗的常用實驗技術(shù)第一章動物實驗的基本操作第一節(jié)實驗動物的編號大鼠和小鼠的編號一般都用不同顏料涂染皮毛的方法來標(biāo)記，常用的涂染化學(xué)品如下①涂染黃色用3～5%苦味酸溶液;②涂紅色用0.5%品紅溶液等。前者最常用。在動物固定的不同部位涂上苦味酸斑點表示不同號碼。一般習(xí)慣在左前腿上為1，腰部為2，在左后腿上為3，在頭部為4，在正中為5，在尾基部位6，在右前腿為7，在右側(cè)要不為8，在右后退上為9，不涂染鼠為10。如果試驗時動物編號超過10，可在動物同一部位上再涂染另一種涂染劑。標(biāo)記方法如圖。第二節(jié)動物的捉持和固定一、小白鼠的捉持：捉拿時可先用右手抓住并提起鼠尾，置于實驗臺或鼠籠上，并稍向后拉；用左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳后頸背部的皮膚，將鼠置于左手心中，拉直后肢，以無名指及小指按住鼠尾或小鼠的左后肢即可。二、大白鼠的持：大白鼠的捉拿時，可戴上手套。實驗者可用右手捉住鼠尾，放在實驗臺或鼠籠上，并稍向后拉；左手掌面向鼠背，食指和中指壓住鼠的頭頂，拇指和無名指分別從鼠的兩腋下插入，將鼠的兩前肢卡住；或拽緊鼠后頸及后背皮膚即可。三、家兔的捉持：用一手抓住家兔頸背部皮膚，將兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿勢。第三節(jié)常用動物的給藥方法一、小鼠、大鼠常用的給藥方法1、灌胃（ig）：左手將動物固定后，右手持裝有灌胃針頭的注射器，自口角進(jìn)針，沿上腭向鼠口腔的后下方插入食管。一般的給藥量小鼠為0.1～0.3ml／10g，大鼠為1～2.0ml／100g。2、皮下注射（sc）:常在背部皮下注射。一手固定動物，另一只手注射給藥。一般給藥量小鼠為0.1～0.20ml／10g，大鼠為1ml／100g。3、腹腔注射（ip）:左手固定動物，右手持注射器，從下腹部外側(cè)，呈45度角刺入腹腔，進(jìn)針約3～5mm，一般給藥量小鼠為0.1～0.3ml／10g，大鼠1～2.0ml／100g。4、肌內(nèi)注射（im）：多注射后肢股部肌肉。如一人單獨操作，以左手拇指和食指抓住小鼠頭部皮膚，小指、無名指和掌部夾住鼠尾及一側(cè)后肢，右手持注射器刺入后肢肌肉給藥。一般小鼠每側(cè)不超過0.1ml。5、尾靜脈注射（iv）：將動物固定，鼠尾巴露在外面，用70%～75%的酒精棉球擦尾部，或?qū)⑹笪步?5～50℃溫水中。待尾部左右靜脈擴(kuò)張后，左手拉著尾，右手進(jìn)針。小鼠一般的給藥量為0.1～0.2ml／10g。二、家兔常用的給藥方法灌胃：（略）皮下、肌內(nèi)及腹腔注射：給藥方法基本上同小白鼠，為針頭稍大，給藥量可稍多（皮下與肌內(nèi)0.5～1.0ml／kg，腹腔1.0～5.0ml／kg）。靜脈注射：將家兔置固定箱內(nèi)，拔去耳克外緣的毛，選擇一條比較明顯的耳緣靜脈，用酒精棉球涂擦皮膚，使血管暴露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖，以食指墊在兔耳擬進(jìn)針部位的下面，右手持注射器，從近耳尖處將針頭刺入血管。推注時如有阻力，局部出現(xiàn)腫脹，表明針頭部在血管內(nèi)，應(yīng)立即拔針重新穿刺。一般藥液為0.2～2.0ml／kg，等滲藥液可達(dá)10ml／kg。第四節(jié)動物的性別鑒定一般情況下，哺乳類動物性別依據(jù)動物的肛門與外生殖器(陰莖或陰道)之間的距離加以區(qū)分。雄性要比雌性的距離更長。大、小鼠雌雄動物肛門與外生殖器間距離第五節(jié)動物處死方法1、頸椎脫臼法：本法常用于小鼠的處死。左手拇指、食指用力向下按住鼠頭，同時右手抓住鼠尾用力向后上方拉，將脊髓與腦髓拉斷，鼠即死亡。2、斷頭法：用剪刀將鼠頭剪斷，由于腦髓與脊髓斷離且大量出血，動物很快死亡。麻醉后的家兔也可采用此法。3、擊打法：提起鼠尾，用力棒擊頭部，或用小木棰打擊頭部，鼠痙攣立即死亡。家兔也可采用此法。家兔等大動物常采用空氣拴塞法、放血法、窒息法處死。也可用過量麻醉藥注入法等方法處死動物。第二章動物血液的采集方法第一節(jié)大鼠、小鼠的血液采集方法一、眶靜脈叢（竇）采血小鼠為眶靜脈竇，大鼠為眶靜脈叢?？上葘游飩?cè)眼向上固定體位，左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側(cè)，使眶靜脈叢（竇）充血。右手持注射器或硬質(zhì)毛細(xì)玻璃管，用采血管由眼內(nèi)角在眼瞼和眼球之間向喉頭方向刺入。若為針頭，其斜面先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn)180°角使斜面對著眼眶后界。刺入深度：小鼠約2mm～3mm，大鼠約4mm～5mm。然后將采血管保持水平位，稍加旋轉(zhuǎn)并后退吸引。二、眶動脈和眶靜脈取血常用摘眼球法從眶動脈和眶靜脈取血，多用于小鼠。操作時，用左手抓住動物頸部皮膚，將動物輕壓在實驗臺上，取稍側(cè)臥位，左手拇食指盡量將動物眼周圍皮膚往眼后壓，使其眼球突出充血后，用彎頭眼科鑷迅速夾去眼球，并將鼠倒置，頭向下，眼眶內(nèi)很快流出血液。一般取血量約為小鼠體重4％～5％。三、尾靜脈采血首先將動物尾巴置于45℃～50℃熱水中，泡數(shù)分鐘，也可用酒精或二甲苯反復(fù)擦拭，使尾部血管擴(kuò)張，擦干，剪去尾尖（小鼠約1～2mm，大鼠5～l0mm），血自尾尖流出，讓血液滴入盛器或直接用吸管吸取。也可用試管等接住，自尾根部向尾尖按摩，血液會自尾尖流入試管。四、大血管采血大、小鼠可從頸動（靜）脈、股動（靜）脈等大血管采血。在這些部位取血均需麻醉后固定動物，然后作動（靜）脈分離手術(shù)，使其暴露清楚后，用注射器沿大血管平行方向刺入，抽取所需血量。小鼠、大鼠還可以從腹主動脈采血。首先進(jìn)行深麻醉，仰臥位固定，打開腹腔，將腸管推向一側(cè)，然后用手指輕輕分開脊柱前的脂肪，暴露出腹主動脈。針頭在向心端方向平行刺入，立即采血。大鼠和小鼠還可采用斷頭取血、心臟取血。第二節(jié)家兔、豚鼠的血液采集方法一、耳中央動脈采血兔耳中央有一條較粗、顏色較鮮紅的中央動脈。采血時，用左手固定兔耳，右手持注射器，在中央動脈末端，沿著動脈平行的方向刺入動脈，刺入方向應(yīng)朝向近心端。不要在近耳根部進(jìn)針，因其耳根部組織較厚，血管游離，位置較深，不清晰，易刺透血管造成皮下出血。一般用6號針頭采血。取血完畢后注意止血。此法一次可抽取10ml～15ml。二、耳緣靜脈采血耳緣靜脈采血多用于家兔等動物的中量采血，可反復(fù)采取。采血姿勢與耳緣靜脈注射給藥相同。操作時，將兔固定于兔盒內(nèi)或由助手固定，選靜脈較粗、清晰的耳朵，拔去采血部位的被毛，消毒。為使血管擴(kuò)張，可用手指輕彈或用二甲苯涂擦血管局部。用6號針頭沿耳緣靜脈遠(yuǎn)心端刺入血管。也可以用刀片在血管上切一小口，讓血液自然流出即可。取血后，用棉球壓迫止血。此法一次可采血5ml～10ml。三、心臟采血將兔仰臥固定，用左手觸摸左側(cè)第3～4肋間，選擇心跳最明顯處穿刺。一般由胸骨左緣外3mm處將注射針頭插入第3～4肋間隙。當(dāng)針頭正確刺入心臟時，由于心搏的力量，血會自然進(jìn)入注射器。采血中回血不好或動物躁動時應(yīng)拔出注射器，重新確認(rèn)后再次穿刺采血。經(jīng)6天～7天后，可以重復(fù)進(jìn)行心臟采血。豚鼠的心臟采血亦較常用。第三章動物實驗手術(shù)基本操作技術(shù)切開根據(jù)實驗要求確定手術(shù)切口的部位及大小。切開時先繃緊皮膚，將刀刃與皮膚垂直，用力要得當(dāng)，一般將切開皮膚全層，切口整齊不偏斜。切開皮及皮下組織時，一定要求按解剖層次逐層切開，注意止血，避免損傷深層的重要組織器官。組織分離1、銳性分離：用刀、剪等銳性器械作直接切割的方法，該法用于皮膚、粘膜、各種組織的精細(xì)解剖和緊密粘連的分離。使用刀柄、止血鉗、剝離器或手指等分離肌肉、筋膜間隙的疏松；結(jié)締組織的方法。四、止血止血是手術(shù)操作中的重要環(huán)節(jié)。手術(shù)過程中止血完美與否，不僅直接影響手術(shù)部位的顯露和手術(shù)操作，而且關(guān)系到手術(shù)后動物的安全、切口愈合的好壞以及是否造成并發(fā)癥等。術(shù)中止血必須準(zhǔn)確、迅速、可靠。術(shù)中止血方法有：1、壓迫止血：手術(shù)中出血一般可先用無菌紗布或擰干的溫?zé)猁}水紗布按壓片刻，切勿用紗布擦拭，以減少組織損傷。2、鉗夾止血：用止血鉗與血流方向垂直夾住血管斷端，停留一段時間后取下止血鉗。3、結(jié)扎止血：出血點用紗布壓迫蘸吸后，用止血鉗夾住血管斷端，再用絲線結(jié)扎止血。結(jié)扎時，先豎起止血鉗，將結(jié)扎線繞過鉗夾點之下。第四章動物尸檢的方法動物尸檢是動物實驗中的一個重要方法，通過對實驗動物進(jìn)行病理解剖觀察，可對實驗結(jié)果進(jìn)行判定，也可分析死亡原因等。具體尸檢方法時，應(yīng)首先復(fù)查動物編號、性別和實驗分組，記錄死亡或活殺時間、解剖時間。然后檢查動物外形：年齡、胖瘦、毛色、皮膚出血情況，生殖器官病變情況等。在完成尸體外部檢查之后，為了全面而系統(tǒng)地檢查尸體內(nèi)外所呈現(xiàn)的病理變化，需要采出臟器檢查，而必須要按照一定的順序進(jìn)行。雖然各種動物大小不一，解剖結(jié)構(gòu)不同，某些疾病的特殊要求，以及剖檢者的習(xí)慣不同，剖檢順序有一定的靈活性，但常規(guī)臟器采出與檢查一般遵循下列順序：剝皮和皮下檢查一腹腔的剖開和腹腔臟器的視查→胸腔的剖開和胸腔臟器的視查→腹腔臟器的采出→胸腔臟器的采出→口腔和頸部器官的采出→骨盆腔臟器的采出和檢查→顱腔剖開和腦的采出與檢查→鼻腔的剖開和檢查→脊椎管的剖開和脊髓的采出與檢查→肌肉和關(guān)節(jié)的檢查→骨和骨髓的檢查。第五章動物各種體液的采集方法一、尿液的采集方法1．代謝籠采集尿液將動物放在特制的籠內(nèi)飼養(yǎng)，動物排便時，可通過籠子底部的大小便分離漏斗，將尿液與糞便分開，達(dá)到采集尿液的目的。2．輸尿管插管采集尿液在動物輸尿管內(nèi)插一根塑料套管收集尿液。適用于兔、貓、犬等。3．膀胱手術(shù)插管采集尿液一般用于犬等較大動物。4．穿刺膀胱采集尿液二、膽汁、胰液、腸液的收集方法(—)膽汁的收集方法一般采取手術(shù)收集。以大鼠為例，手術(shù)前禁食16小時～18小時，飲2.5％葡萄糖鹽水。將動物腹腔麻醉后，仰臥于實驗臺上，從背至腹中線去毛、消毒。自劍突下及腹中線做3cm～5cm的切口。肌肉鈍性分離，切開腹膜，暴露腹腔，將肝臟向上翻起。在門靜脈一側(cè)，找出肝、膽總管。分離出膽總管，在膽總管靠近十二指腸的膨大后端剪開小切口，用剪成斜口的聚乙烯管尖端由此插入，一直向上插入至肝總管后，結(jié)扎固定，可收取膽汁。注意：若插管前端插在膽總管處，收集到的將是膽汁和胰液混合液。為準(zhǔn)確起見，可在肝總管處剪切口插入。(二)胰液的收集方法大鼠的胰液收集麻醉大鼠，在固定板上仰臥固定。上腹部劍狀突部位下作3cm左右腹正中切口，找出十二指腸和胃的交界處，用線在交界處穿線備用。然后找到膽總管。大鼠胰管很多，包括前大胰腺管、后大胰腺管，以及許多小胰腺管。大鼠的所有胰腺管均不直接開口于十二指腸而都開口于膽總管。因而膽總管是由肝總管和許多胰管一起匯合而成，并開口于十二指腸。肝總管由來自各肝葉的肝管匯集而成。在膽總管和十二指腸交界處，分離出膽總管，分離完畢，從膽總管下穿兩根線，靠腸管的一根結(jié)扎，作為牽引線。用眼科剪在膽總管壁剪一小斜口，將制作好的胰液收集管插入小口內(nèi)。插進(jìn)后，可見黃色膽汁和胰液混合液流出，結(jié)扎并固定，此管供收集胰液用。然后順著膽總管向上可找到肝總管，結(jié)扎。此時，在胰液收集管內(nèi)可見有白色胰液流，(三)腸液的收集方法一般采用腸造瘺術(shù)收集腸液。第四篇實驗講義實驗一大鼠、小鼠的實驗基本操作練習(xí)1、練習(xí)動物的編號、雌雄的鑒別和處死方法。2、灌胃給予大、小鼠、豚鼠10%碳末混懸液，并熟練掌握之。3、靜脈給予大、小鼠1%伊文氏藍(lán)生理鹽水溶液。實驗二家兔血清轉(zhuǎn)氨酶的測定【實驗?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)和掌握家兔的取血方法、血清的制備方法，熟悉轉(zhuǎn)氨酶的測定方法?！緦嶒灢牧稀?22分光光度計、試管、吸量管、恒溫水浴鍋、家兔、注射器、1.0mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.4）底物液、丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液、2，4－二硝基苯肼、0.4mol/LNaOH等。【原理】］血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用于丙氨酸及α－酮戊二酸，結(jié)果生成谷氨酸與丙酮液。丙酮酸與2，4－二硝基苯肼作用，生成二硝基苯腙，此物在堿性溶液中顯紅棕色，與經(jīng)同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸比色，求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性?！緦嶒灢襟E】取家兔一只，耳緣靜脈或心臟取血2～5ml，沿試管壁緩慢加入試管中，靜止30分鐘，3000轉(zhuǎn)離心5分鐘。用吸管吸取上層液血清，加入試管中，另取3支試管連同這支試管共4支試管，編號，按下表加試劑（ml）。標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)空白管測定管測定空白管丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液0.1———新鮮血清——0.10.1底物液（已在37℃保溫過）0.50.50.5—1.0mol/L磷酸鹽緩沖液—0.1——混勻各管，置于37℃保溫30分鐘，再按下表加入試劑：2，4－二硝基苯肼0.50.50.50.5底物液———0.5充分混勻，繼續(xù)在原水浴中保溫20分鐘，取出，每管加入0.4mol/LNaOH5ml，混勻，靜置10分鐘后，用721型分光光度計比色，波長520nm，以蒸餾水校正零點，測定各管光密度。本法所規(guī)定的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性單位的定義是：1ml血清于37℃與底物作用30分鐘，產(chǎn)生2.5ml丙酮酸為1個谷丙轉(zhuǎn)氨酶單位。先計算出0.1ml血清所產(chǎn)生的丙酮酸的μg數(shù)：再根據(jù)單位定義，換算為每ml血清內(nèi)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力單位。正常值：2—40單位／ml血清實驗三劑量的計算和大鼠和小鼠的采血練習(xí)1、劑量的計算：已知戊巴比妥鈉人用的口服催眠劑量為50～100mg/次，試計算大鼠、小鼠灌胃和肌肉注射的用量，然后以大、小鼠的適宜給藥體積推算出應(yīng)配置的給藥濃度，并具體操作之。2、大鼠和小鼠的采血練習(xí)，眶靜脈叢（竇）采血、眶動脈和眶靜脈取血（摘眼球采血）、腹主動脈采血、斷頭采血等。實驗四家兔血壓的測定[實驗?zāi)康腯學(xué)習(xí)手術(shù)操作技術(shù)、實驗動物的麻醉、血壓的測定方法，觀察傳出神經(jīng)藥物對動物血壓的影響。[實驗材料]家兔、手術(shù)刀、手術(shù)剪、民用剪、眼科剪、止血鉗、氣管插管、動脈插管、動脈夾、靜脈插管、壓力換能器、電腦及記錄裝置、注射器、頭皮靜脈針、藥棉、紗布、1%肝素溶液、生理鹽水、20%烏拉坦溶液、0.002%鹽酸腎上腺素溶液、0.001%鹽酸異丙腎上腺素、0.5甲磺酸酚妥拉明、0.1%鹽酸心得安、0.1%氯化乙酰膽堿、0.5%硫酸阿托品等。[實驗方法]1.家兔一只，稱重，找到耳緣靜脈，插入與注射器相連的頭皮靜脈針頭，用膠布固定。頭皮靜脈針頭的另一端與大號的注射器連接，緩慢而連續(xù)的推注生理鹽水或藥物，以免堵塞針頭。耳緣靜脈注射20％烏拉坦溶液1.0～1.2g/kg，麻醉后，將其背位固定于手術(shù)臺上。2、剪去頸部的毛，正中切開頸部皮膚，分離氣管。在氣管上作一個“T”形切口，插入氣管插管，結(jié)扎固定。分離頸總動脈，在頸總動脈下穿兩根線，用動脈夾夾住頸總動脈近心端，結(jié)扎頸總動脈遠(yuǎn)心端。耳靜脈注射1％肝素溶液10mg/kg，體內(nèi)抗凝。然后用注射器將1％的肝素溶液注入壓力傳感器頭部的三通處，并將其內(nèi)充滿。插入與壓力換能器相連的動脈插管，結(jié)扎固定，松開動脈夾。記錄血壓變化。3、打開電腦，點擊桌面中BL—410圖標(biāo)，進(jìn)入主菜單，再點擊生理、藥理實驗項，選擇血壓的實驗項目進(jìn)行實驗。先描記一段正常血壓曲線，然后依次向與靜脈插管相連的橡皮管內(nèi)注射藥物。每次給藥后立即由滴定管放出生理鹽水2ml,將藥物沖入靜脈，觀察所引起的血壓變化。待血壓恢復(fù)原水平或平穩(wěn)后，再給下一藥物。觀察擬腎上腺素藥物和抗腎上腺素藥物對血壓的影響：鹽酸腎上腺素3μg/kg(0.002%溶液0.15ml/kg)。鹽酸異丙腎上腺素3μg/kg(0.002%溶液0.15ml/kg)。鹽酸腎上腺素3μg/kg(0.002%溶液0.15ml/kg),酚妥拉明1mg/kg(1%溶液0.1ml/kg)。[注意事項]1、實驗用家兔進(jìn)行，因家兔的耐受性較差，且有些反應(yīng)不很典型。2、實驗中的劑量是按一般情況進(jìn)行計算的，必要時可根據(jù)具體情況適當(dāng)增減。實驗五大白鼠腎上腺和小白鼠卵巢摘除術(shù)（一）大白鼠腎上腺摘除術(shù)[實驗?zāi)康腯學(xué)習(xí)腎上腺摘除的方法。[實驗材料]大白鼠固定臺、常用手術(shù)器械、乙醚、70％酒精、大白鼠[方法]1.用乙醚麻醉大白鼠，俯臥固定于手術(shù)臺。2.用手術(shù)剪刀作背部正中皮膚切口，長約1.5cm。剪去腰背部及肋骨上下方的毛。3.牽動皮膚切口，暴露左側(cè)肋骨下緣靠肋脊角處，將后腹壁剪開約0.5cm的切口，略將內(nèi)臟上推，找到腎臟，在腎臟上方可見一粉黃色的腎上腺。4.用眼科鑷將腎上腺摘出，注意不要弄破被膜，以保持腺體完整。如有出血以小棉球輕壓止血。5.縫合肋下腹壁切口。6.將皮膚切口牽向右側(cè)，按上述步驟摘除右側(cè)腎上腺。7.縫合皮膚切口，為防止感染可在縫合前局部撒少量抗菌藥粉。8.術(shù)后動物注意保溫，并供給葡萄糖鹽水飲用。（二）小白鼠卵巢摘除術(shù)［實驗?zāi)康模輰W(xué)習(xí)大、小白鼠卵巢摘除方法。［實驗材料］小白鼠固定臺、常用手術(shù)器械、]乙醚、70％酒精、小白鼠［方法］1、用乙醚麻醉小白鼠，俯臥位固定于手術(shù)臺。2、剪除腰背部毛，沿腰脊柱作一長1～1.5em的皮膚切口，然后向一側(cè)牽開皮膚切口，通過薄膜的一層腰部肌層隱約可見有腹膜后脂肪組織，用剪刀在肌肉層開一小口，通過這一切口，將脂肪組織拉出，通常卵巢、輸卵管和子宮角的上部同時被帶出。3、在子宮上端與卵巢之間用線結(jié)扎，切除卵巢(小白鼠可不結(jié)扎)，把子宮送回原處，縫合皮膚。實驗六離體蛙心實驗[實驗?zāi)康腯學(xué)習(xí)斯氏離體蛙心灌注法，觀察強(qiáng)心苷對離體蛙心收縮強(qiáng)度、頻率和節(jié)律的影響。[實驗材料]蛙或蟾蜍兩只、蛙板、手術(shù)器械、探針、斯氏蛙心插管、蛙心夾、張力換能器、電腦及記錄裝置、雙凹夾、張力換能器、長柄木夾、任氏液、低鈣任氏液、毒毛花甙K溶液(0.25mg/ml)等。[實驗方法]1、取蛙或蟾蜍1只，用探針破腦及脊髓，背位置于蛙板上。剪開胸部皮膚、肌肉及胸骨，打開胸腔，剪破心包膜，暴露心臟。2、在主動脈干下穿一根線，打好松結(jié)，備結(jié)扎插管用。在左動脈上剪一V型切口，插入盛有任氏液的蛙心插管，通過主動脈球轉(zhuǎn)向左后方，同時用鑷子輕提動脈球，向插管移動的方向拉，即可使插管尖端順利進(jìn)入心室。見到插管內(nèi)的液面隨著心搏而上下搏動后，將松結(jié)扎緊、固定，然后剪斷兩根動脈。持插管提起心臟，用線自靜脈竇以把其余血管一起結(jié)扎，在結(jié)扎處下剪斷血管使心臟離體。用滴管吸取插管內(nèi)血液，并用任氏液連續(xù)換洗，直無血色，使插管內(nèi)保留1.5ml左右的任氏液。3、用帶有長線的蛙心夾住心尖，將長線與張力換能器相連。4、打開電腦，點擊桌面中BL—410圖標(biāo)，進(jìn)入主菜單，再點擊生理、藥理實驗項，選擇平滑肌的實驗項目進(jìn)行實驗，在電腦上紀(jì)錄心臟搏動情況。5、記錄一段正常心博曲線后，依次換加以下藥液。每加一種藥液后，密切注意心臟收縮強(qiáng)度、心率等方面的變化。⑴換入低鈣任氏液。⑵當(dāng)心臟收縮顯著減弱時，向插管內(nèi)加入向插管內(nèi)加入2.5%毒毛花甙K溶液0.05～0.1ml。然后換入任氏液，使心臟收縮恢復(fù)正常。[注意事項]在實驗中以低鈣任氏液灌注蛙心，使心臟的收縮減弱，可以提高心肌對藥物的敏感性。實驗七藥物的抗驚厥作用㈠苯巴比妥對藥物致驚法的抗驚厥作用[實驗?zāi)康腯觀察苯巴比妥鈉對藥物性驚厥的對抗作用。[實驗材料]鼠籠、電子天平、注射器、1%戊四氮溶液、0.5%苯巴比妥鈉溶液，生理鹽水、小白鼠等。[實驗步驟]取小白鼠2只，稱重，編號，甲鼠腹腔注射0.5%苯巴比妥鈉溶液0.1ml/10g（0.5mg/10g）,乙鼠腹腔等容量的生理鹽水作對照,10分鐘后兩鼠均皮下注射1%戊四氮溶液0.1ml/10g（1mg/10g）,觀察兩鼠出現(xiàn)驚厥(以后肢伸直為驚厥指標(biāo))的時間及程度有何不同。[結(jié)果]鼠號藥物劑量（mg/kg）出現(xiàn)驚厥的時間（分）甲乙匯總?cè)嗟膶嶒灲Y(jié)果，并進(jìn)行t檢驗。表2苯巴比妥對藥物致驚法的抗驚厥作用（）組別藥物劑量（mg/kg）動物數(shù)（n）出現(xiàn)驚厥的時間（min）P值生理鹽水苯巴比妥鈉[思考題]根據(jù)實驗結(jié)果討論苯巴比妥鈉的抗驚厥作用。㈡苯巴比妥電刺激法的抗驚厥作用[實驗?zāi)康腯觀察苯妥英鈉和苯巴比妥對電驚厥的保護(hù)作用。[實驗原理]以一強(qiáng)電流刺激小鼠頭顱可引起全身強(qiáng)直性驚厥，藥物預(yù)防強(qiáng)直性驚厥發(fā)生可初步推測該藥有抗癲癇大發(fā)作的作用。[實驗材料]小鼠、注射器、藥理生理多用儀、0.5%苯妥英鈉溶液、0.5%苯巴比妥溶液、生理鹽水等。[實驗方法]1、將藥理生理多用儀的刺激方式旋鈕置于“單次”位置，“A”頻率置于“2Hz”，后面板上的開關(guān)撥向“工作”一邊，電壓調(diào)至140～160為宜(最大電壓為170伏)。將輸出線前端的兩鱷魚夾用生理鹽水浸濕，分別夾在小鼠兩耳上。接通電源，按下“啟動”按鈕，即可使小鼠產(chǎn)生前肢屈曲，后肢伸直的強(qiáng)直性驚厥。（如未產(chǎn)生強(qiáng)直驚厥，可將“頻率”旋鈕撥到“4Hz”試之，否則另換小鼠）。每實驗小組選擇3只典型強(qiáng)直驚厥小鼠，稱重，標(biāo)記。分別腹腔注射苯妥英鈉0.75mg/10g(0.5%溶液0.15ml/10g)，苯巴比妥0.75mg/10g(0.5%溶液0.15ml/10g)及生理鹽水0.15ml/10g。給藥后40分鐘，再以原電流強(qiáng)度給予刺激，觀察并記錄各鼠是否出現(xiàn)掙扎反應(yīng)或強(qiáng)直驚厥。[報告要點]鼠號體重藥物及劑量致休克電流通電后反應(yīng)（g）g/kg給藥前給藥后實驗完畢后，匯總?cè)嗟膶嶒灲Y(jié)果，并進(jìn)行χ2檢驗。組別藥物劑量（mg/kg）動物數(shù)（n）出現(xiàn)驚厥的動物數(shù)（n）P值生理鹽水苯巴比妥鈉[注意事項]1、夾住兩鼠耳的鱷魚夾嚴(yán)防短路，以免損壞儀器。2、引起驚厥的刺激電流參數(shù)因動物的個體而異，本實驗中設(shè)定4Hz和8Hz兩檔，不宜過大，；以免引起死亡。3動物驚厥可分為潛伏期、僵直屈曲期、后肢伸直期、陣攣期以及恢復(fù)期五個期。[思考題]比較兩種抗驚厥的實驗方法。通過實驗比較苯巴比妥和苯妥英鈉的異同。實驗八藥物的鎮(zhèn)痛作用㈠化學(xué)刺激法觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用[實驗?zāi)康腯觀察杜冷丁、顱通定的鎮(zhèn)痛效果，掌握扭體法鎮(zhèn)痛實驗方法；學(xué)習(xí)質(zhì)反應(yīng)的χ2檢驗方法。[實驗材料]1ml注射器、鼠籠、天平、秒表。[藥品]0.2%杜冷丁生理鹽水溶液、0.2%顱通定生理鹽水溶液、0.05%酒石酸銻鉀溶液（或0.4%醋酸溶液）。[動物]昆明種小白鼠（體重18～22克，雌雄兼用）。[實驗方法及步驟]取小鼠3只，隨機(jī)分為三組，每組10只。分別按0.1ml/10g腹腔注射給藥，甲鼠注射0.2%杜冷丁生理鹽水溶液；乙鼠腹腔注射顱通定生理鹽水溶液；丙鼠注射等容量的生理鹽水作對照。給藥30分鐘后，每鼠均腹腔注射0.05%酒石酸銻鉀0.3ml/只，觀察注射致痛劑10分鐘內(nèi)產(chǎn)生扭體反應(yīng)的動物數(shù)。（扭體反應(yīng)的標(biāo)志：伸展后肢，腹部收縮內(nèi)凹，同時肢體扭曲，抬臀豎尾）。[結(jié)果]匯總?cè)嗟膶嶒灲Y(jié)果，并進(jìn)行χ2檢驗；同時將所測的痛閾值代入下列公式計算：藥物鎮(zhèn)痛百分率＝給藥組無扭體動物數(shù)—對照組無扭體動物數(shù)×100%對照組扭體反應(yīng)動物數(shù)藥物對小鼠的鎮(zhèn)痛作用（表1）劑量給藥后反應(yīng)鼠號藥物（）甲生理鹽水乙杜冷丁丙顱通定藥物對小鼠的鎮(zhèn)痛作用（表2）組別劑量動物數(shù)扭體動物數(shù)P值生理鹽水組杜冷丁組顱通定組㈡用熱板法觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用[實驗?zāi)康腯用熱板法觀察鎮(zhèn)痛藥物的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，學(xué)習(xí)量反應(yīng)的t檢驗方法。[實驗材料]1ml注射器、鼠籠、天平、水浴鍋、燒杯、秒表、0.2%杜冷丁生理鹽水溶液、0.2%顱通定生理鹽水溶液、雌性小白鼠。[實驗步驟]1、準(zhǔn)備工作于電熱恒溫水浴鍋內(nèi)適量水，接通電源使之加熱。水浴上部放置一大燒杯，使之恒定于55±0.5℃。燒杯底部預(yù)熱10分鐘即作為熱痛刺激物。2、小鼠的選擇及正常痛閾值的測定取18～22g雌性小鼠數(shù)只，依次放入燒杯內(nèi)，立即用秒表記錄時間。自放入燒杯至出現(xiàn)舔后足所需的時間（秒）作為該鼠的痛閾值。凡在30秒內(nèi)不舔足或逃避者棄置不用。將篩選合格的小鼠6只，隨機(jī)分為三組，各鼠編號重復(fù)測其正常痛閾值一次，將所測兩次正常痛閾平均值作為該鼠給藥前痛閾值。3、給藥及給藥后痛閾值測定分別按0.1ml/10g腹腔注射給藥，甲組注射0.2%杜冷丁生理鹽水溶液；乙組腹腔注射顱通定生理鹽水溶液；丙組注射等容量的生理鹽水作對照。給藥10、30分鐘后各測小鼠痛閾值兩次。若放入燒杯內(nèi)60秒鐘仍無反應(yīng)，應(yīng)將小鼠取出，痛閾值以60秒計。4、實驗完畢后，匯總?cè)嗟膶嶒灲Y(jié)果，并進(jìn)行t檢驗；同時將所測的痛閾值代入下列公式計算：鎮(zhèn)痛提高百分率(%)=×100%[結(jié)果]藥物對小鼠的鎮(zhèn)痛作用劑量動物數(shù)給藥前平均痛閾值給藥后平均痛閾值（秒）痛閾提高（%）組別（）（）（秒）10分鐘30分鐘10分鐘30分鐘生理鹽水組杜冷丁組顱通定組[思考題]比較兩種鎮(zhèn)痛的實驗方法。根據(jù)實驗結(jié)果討論鎮(zhèn)痛藥的鎮(zhèn)痛作用。實驗九奎尼丁對實驗性心律失常的影響[實驗?zāi)康腯學(xué)習(xí)并掌握烏頭堿誘發(fā)實驗性心律失常的方法，觀察奎尼丁的抗心律失常作用。[實驗材料]大鼠、0.4%戊巴比妥鈉、0.004%烏頭堿、20%烏拉坦溶液、0.5%奎尼丁、生理鹽水、電子天平、電腦及軟件、手術(shù)器械等。[實驗步驟]1、取大白鼠一只，稱重，腹腔注射烏拉坦溶液1g/kg麻醉。然后背位固定在手術(shù)臺上。2、打開電腦，點擊桌面上的BL—410圖標(biāo)，選擇做心電圖的實驗內(nèi)容，將于電腦主機(jī)相連的針狀電極插入大鼠四肢皮下，做好描記心電圖的準(zhǔn)備。3、找到股靜脈，插入與注射器相連的頭皮靜脈注射針頭，緩慢推注生理鹽水，以備給藥。4、描記一段正常心電圖后，股靜脈注射烏頭堿30～50μg/kg，3～5秒內(nèi)注射