微生物實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

微生物實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)微生物實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)微生物實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)微生物實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)過程中要及時(shí)詳細(xì)標(biāo)除去產(chǎn)物和日期，實(shí)驗(yàn)做完今后要對(duì)以前的過分產(chǎn)品做個(gè)清理，省得東西累積過多。實(shí)驗(yàn)后的DNA和RNA要及時(shí)放回冰箱，省得時(shí)間長(zhǎng)降解，特別是用水溶解的時(shí)候。3.要及時(shí)甘油保存你判斷出的細(xì)菌，每個(gè)細(xì)菌保存兩份，存放在-80度冰箱里。實(shí)驗(yàn)用的酶類固然在室溫下放一段時(shí)間也沒什么問題，但還是要及時(shí)放回冰箱，省得活性降低。要及時(shí)清理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，保持干凈，整齊，有序。無菌操作臺(tái)用后及時(shí)清理干凈，操作真菌和細(xì)菌等最好不要交織使用。培育基使用的時(shí)候要注意無菌操作，移液器不要插入培育基中，之允許無菌槍頭進(jìn)入瓶子腔體，如培育基較少，可以傾斜瓶子，移液器取液體最好不要用到最大批程，省得吸液過猛以致與移液器接觸。滅好的培育基標(biāo)簽必定要寫好，包含名稱，日期，能否加抗生素，能否加抗生素特別重要，特別是在共用培育基的實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)用過的試劑蓋子必定要蓋好，省得揮發(fā)。特別是有毒的物件，如氯仿，苯酚等，用完后的瓶子及時(shí)取出實(shí)驗(yàn)室。帶手套接觸有毒物件后，要及時(shí)辦理掉手套。無論能否接觸過有毒物件，，不要戴著手套亂接觸其余東西，如開窗等。11.做實(shí)驗(yàn)過程中不要接電話，說話，考慮其余事情。特別是PCR和配溶液的時(shí)候。做PCR和配溶液的時(shí)候要把所用的試劑找全，一字排開，加完一種東西就把這類東西放到一邊，可防范自己少加錯(cuò)東西。同時(shí)作幾個(gè)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候必定要有準(zhǔn)時(shí)器，防范自己忘掉，特別是在煮東西，加熱熔解溶液等危險(xiǎn)操作的時(shí)候，切忌。飯前，有活動(dòng)前不要做實(shí)驗(yàn)，這時(shí)候趕忙忙忙特別簡(jiǎn)單出錯(cuò)，特別是作有危險(xiǎn)的實(shí)驗(yàn)，更要注意。作好試驗(yàn)記錄，無論有沒有結(jié)果，必定要堅(jiān)持。還有點(diǎn)用圖片，測(cè)序結(jié)果等，假如不清楚記錄東西多了，就亂了，混了。這個(gè)必定要仔細(xì)做好。要隨時(shí)寫下自己的想法，由于有些想法片刻即逝。微生物實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)一、無菌操作要求接種細(xì)菌時(shí)一定穿工作服、戴工作帽。進(jìn)行接種食品樣品時(shí)，一定穿專用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。接種食品樣品時(shí)，應(yīng)在進(jìn)無菌室前用肥皂洗手，而后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛?。進(jìn)行接種所用的吸管，平皿及培育基等一定經(jīng)消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不可以擱置后再使用，金屬器具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃炙烤三次后使用。從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不可以涉及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)，吸管尖不得涉及試管或平皿邊。接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌一定在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要經(jīng)過分焰消毒。接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰炙烤所有金屬絲，必需時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在開水中煮沸5min，再經(jīng)火焰炙烤。吸管汲取菌液或樣品時(shí)，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭汲取，不得直接用口吸。二、無菌間使用要求1.無菌間通向外面的窗戶應(yīng)為雙層玻璃，并要密封，不得隨意打開，并設(shè)有與無菌間大小相應(yīng)的緩沖間及推拉門，另設(shè)有的小窗，以備進(jìn)入無菌間后傳達(dá)物件。無菌間內(nèi)應(yīng)保持潔凈，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦抹工作臺(tái)面，不得存放與實(shí)驗(yàn)沒關(guān)的物件。3.無菌間使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開紫外燈，如采納室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí)，30W需紫外燈，距離在1.0m處，照耀時(shí)間許多于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，省得引起傷害，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦抹，除去上邊灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。4.辦理和接種食品標(biāo)本時(shí)，進(jìn)入無菌間操作，不得隨意出入，如需要傳達(dá)物件，可經(jīng)過小窗傳達(dá)。5.在無菌間內(nèi)如需要安裝空調(diào)時(shí)，則應(yīng)有過濾裝置。三、消毒滅菌要求微生物檢測(cè)用的玻璃器皿、金屬器具及培育基、被污染和接種的培育物等，一定經(jīng)滅菌后方能使用。（一）干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法1．滅菌前準(zhǔn)備（1）所有需要滅菌的物件第一應(yīng)沖洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴(yán)實(shí)，如用金屬筒應(yīng)將上邊通氣孔打開。（2）裝培育基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。2．裝放1）干熱滅菌器：裝放物件不行過擠，且不可以接觸箱的四壁。2）大型高壓蒸氣鍋：擱置滅菌物件分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物件之間不可以過擠。3．設(shè)備檢查1）檢查門的開關(guān)能否靈巧，橡皮圈有無損壞，能否平坦。2）檢查壓力表蒸氣排盡時(shí)能否逗留在零位，關(guān)好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察能否漏氣，壓力表與溫度計(jì)所標(biāo)示的狀況能否吻合，管道有無擁堵。3）對(duì)有自動(dòng)電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應(yīng)檢查規(guī)定的程序，能否吻合于進(jìn)行滅菌辦理的要求。4．滅菌辦理干熱滅菌法：此法適應(yīng)于在干熱狀況下，不損壞、不變質(zhì)、不蒸發(fā)的物件、較常用于玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等的滅菌。器材器皿應(yīng)沖洗后再干烤，以防附著在表面的污物炭化。②滅菌時(shí)安置物件不可以過擠，不要直接接觸底和箱壁，物件之間留有空隙。③菌時(shí)將箱門關(guān)緊，接上電源，先將排氣孔打開約氣，溫度升至160℃調(diào)理指示燈，保持1.5–2h。④滅菌達(dá)成后或溫度升溫過程中，須在60℃以下才能打開箱門。30min，除去滅菌器中的冷空氣。手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：①手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復(fù)使用時(shí)應(yīng)將水量補(bǔ)足，水變污濁需更換）.②手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中（無軟管或軟管銹蝕破碎的滅菌器不得使用）。③蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣（水沸騰后排氣10-15min）。④關(guān)閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求，并保持規(guī)準(zhǔn)時(shí)間（按滅菌物件性質(zhì)與相關(guān)狀況而定）。⑤達(dá)到規(guī)準(zhǔn)時(shí)間后，對(duì)需干燥的物件，馬上打開排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復(fù)到零時(shí)，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物件，不要打開排氣閥，而應(yīng)馬上將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到體激烈沸騰或容器爆破。60℃以下再開蓋取物，以防忽然減壓。(3)臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按以下步驟進(jìn)行：①關(guān)緊鍋門，打開進(jìn)氣閥，將蒸氣引入夾層進(jìn)行預(yù)熱，夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動(dòng)排出。②夾層達(dá)到預(yù)約溫度后，打開鍋室進(jìn)氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動(dòng)排出。③待鍋室達(dá)到規(guī)定的壓力與溫度時(shí)，調(diào)理進(jìn)氣閥，使保持恒定至④自然或人工降溫至60℃再開門取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防忽然降壓，液體激烈沸騰或容器爆破。⑤使用自動(dòng)程序控制式壓力蒸氣滅菌器，在放好物件關(guān)緊門后，應(yīng)依據(jù)物件種類按動(dòng)相應(yīng)開關(guān)，以便按要求程序自動(dòng)進(jìn)行滅菌，滅菌時(shí)一定利用附設(shè)儀表記錄溫度與時(shí)間以備查，操作要求應(yīng)嚴(yán)格依照廠家說明書進(jìn)行。5．滅菌溫度與時(shí)間：干熱滅菌器滅菌溫度160℃，1.5-2h。(2)（二）間歇滅菌方法壓力蒸氣滅菌滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸氣滅菌簡(jiǎn)單損壞，可用此法滅菌。（1）將欲滅菌物件置于鍋內(nèi)，蓋上頂蓋，打開排水口，使器內(nèi)余水排盡。（2）關(guān)閉排水口，打開進(jìn)氣門，依據(jù)需要消毒10～20min。（3）滅菌達(dá)成關(guān)閉進(jìn)氣門，取出物件待冷至室溫溫度，放入37℃溫箱過夜，次日仍按上述方法消毒，這樣三次，即可達(dá)到滅菌目的。2．血清凝固器使用方法，培育基中含有血清或雞蛋特別成份時(shí)，因高熱會(huì)損壞其營養(yǎng)成份，故用低溫，可使血清凝固，又可達(dá)到滅菌目的。(1)使用。在使用該法滅菌的血清均分裝時(shí)，需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，試管、平皿也經(jīng)滅菌后(2)將培育基按要求使成斜面或高層，加足水后，接上電源，升溫

75～90℃1h

滅菌，放

37℃溫箱過夜，再這樣滅菌三次。3．煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮5～15min，也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5min，加入0.02﹪甲醛,80℃煮60min均可達(dá)到滅菌目的,煮沸消毒的增消劑時(shí),應(yīng)注意對(duì)物件的腐化性.但采納4．滅菌辦理:滅菌后物件,按正常狀況已屬無菌,從滅菌器中取出應(yīng)仔細(xì)檢查擱置,省得再度污染。物件取出,隨即檢查包裝的完好性,如有損壞或棉塞脫掉,不行作為無菌物件使用。取出的物件,如為包裝有明顯的水浸者,不行作為無菌物件使用。培育基或試劑等,應(yīng)檢查能否吻合達(dá)到滅菌后的色彩或狀態(tài),未達(dá)到者應(yīng)荒棄。啟閉式容器,在取出時(shí)應(yīng)將篩孔關(guān)閉。取出的物件掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為遇到污染,不行作為無菌物件使用。取出的合格滅菌物件,應(yīng)存放于儲(chǔ)藏室或防塵柜內(nèi),禁止與未滅菌物件混放。凡屬合格物件,應(yīng)標(biāo)有滅菌日期及有效限期。每批滅菌辦理達(dá)成后,記錄滅菌品名、數(shù)目、溫度、時(shí)間、操作者。四、有毒有菌污物辦理要求微生物實(shí)驗(yàn)所用實(shí)驗(yàn)器材、培育物等未經(jīng)消毒辦理，一律不得帶出實(shí)驗(yàn)室。1.經(jīng)培育的污染資料及荒棄物應(yīng)放在嚴(yán)實(shí)的容器或鐵絲筐內(nèi)，并集中存放在指定地點(diǎn)，待一致進(jìn)行高壓滅菌。經(jīng)微生物污染的培育物，一定經(jīng)121℃30min高壓滅菌。3.染菌后的吸管，使用后放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡24h（消毒min高壓滅菌。液體不得低于浸泡的高度）再經(jīng)121℃304.涂片染色沖洗片的液體，一般可直接沖入下水道，烈性菌的沖洗液一定沖在燒杯中，經(jīng)高壓滅菌后方可倒入下水道，染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24沸清洗。做凝集試驗(yàn)用的玻片或平皿，一定高壓滅菌后清洗。5.打碎的培育物，

馬上用

5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被污染部位，

浸泡半小時(shí)后再擦抹干凈。

污染的工作服或進(jìn)行烈性試驗(yàn)所穿的工作服、帽、口罩等，應(yīng)放入專用消毒袋內(nèi)，經(jīng)

高壓滅菌后方能清洗。

五、培育基制備要求

培育基制備的質(zhì)量將直接影響微生物生長(zhǎng)。由于各種微生物對(duì)其營養(yǎng)要求不完好同樣，培育目的的不一樣，各種培育基制備要求以下：1．依據(jù)培育基配方的成分按量稱取，而后溶于蒸餾水中，在使用前對(duì)應(yīng)用的試劑藥品應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)。2．PH其測(cè)定及調(diào)理：PH測(cè)定要在培育基冷至室溫時(shí)進(jìn)行，因在熱或冷的狀況下，PH有必定差異，當(dāng)測(cè)定好時(shí)，按計(jì)算量加入堿或酸混勻后，應(yīng)再測(cè)試一次。培育基PH值必定要正確，不然會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)或影響結(jié)果的觀察。但需注意因高壓滅菌可影響一些培育基的PH降低或高升，故不宜滅菌壓力過高或次數(shù)太多，省得影響培育基的質(zhì)量，指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調(diào)完P(guān)H后再加入。3．培育基需保持澄清，便于觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況，培育基加熱煮沸后，可用脫脂棉花或絨布過濾，以除去積淀物，必需時(shí)可用雞蛋白澄清辦理，所用瓊脂條要早先洗凈晾干后使用，防范因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度。4．盛裝培育基不宜用鐵、銅等容器，使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好。5．培育基的滅菌既要達(dá)到完好滅菌目的，又要注意不因加熱而降低其營養(yǎng)價(jià)值，一般121℃15min即可，如為含有不耐高熱物質(zhì)的培育基如糖類、血清、明膠等，則應(yīng)采用低溫滅菌或間歇法滅菌，一些不可以加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌素等，待基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入。6．每批培育基制備好后，應(yīng)做無菌生長(zhǎng)試驗(yàn)及所檢菌株生長(zhǎng)試驗(yàn)。假如是生化培育基，使用標(biāo)準(zhǔn)菌株接種培育，觀察生化反應(yīng)結(jié)果，應(yīng)呈正常反應(yīng)，培育基不該儲(chǔ)存過久，必需時(shí)可置4℃冰箱存放。7．目前各種干燥培育基許多，每批需用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行生長(zhǎng)試驗(yàn)或生化反應(yīng)觀察，各種培育基用相應(yīng)菌株生長(zhǎng)試驗(yàn)優(yōu)異后方可應(yīng)用，新購進(jìn)的或存放過久的干燥培育基，在配制時(shí)也應(yīng)測(cè)PH，使用時(shí)需依據(jù)產(chǎn)品說明書用量和方法進(jìn)行。8．每批制備的培育基所用化學(xué)試劑、滅菌狀況及菌株生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)果、制作人員等應(yīng)做好記錄，以備盤問。六、樣品收集及辦理要求1．所收集的檢驗(yàn)樣品必定要擁有代表性，采樣時(shí)應(yīng)第一對(duì)該批食品原料、加工、運(yùn)輸、儲(chǔ)藏方法條件、四周環(huán)境衛(wèi)生狀況等進(jìn)行詳細(xì)檢查，檢查能否有污染源存在。2．依據(jù)食品的種類及數(shù)目，采樣數(shù)目及方法應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法的要求進(jìn)行。3．采樣應(yīng)注意無菌操作，容器一定滅菌，防范環(huán)境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，用新潔爾滅、酒精等消毒藥物滅菌，更不可以含有此類消毒藥物或抗生素類藥物，以防范殺死樣品中的微生物，所用剪、刀、匙器具也需滅菌方可應(yīng)用。4．樣品收集后應(yīng)馬上送往檢驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)，送檢過程中一般不超出3h，如行程較遠(yuǎn)，可保存在1～5℃環(huán)境中，如需冷凍者，則在凍存狀態(tài)下送檢。5．檢驗(yàn)室收到樣品后，進(jìn)行登記（樣品名稱、送檢單位、數(shù)目、日期、編號(hào)等）觀察樣品的外觀，假如發(fā)現(xiàn)有以下狀況之一者，可拒絕檢驗(yàn)。樣品經(jīng)過特別高壓、煮沸或其余方法殺菌者，失掉代表原食品檢驗(yàn)意義者。(2)瓶、袋裝食品已啟開者，熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完好者，即失掉原食品形狀者（食品中毒樣品除外）。按規(guī)定采樣數(shù)目不足者。對(duì)送檢吻合要求的樣品，檢驗(yàn)室收到后，應(yīng)馬上進(jìn)行檢驗(yàn)，假如條件不具備，應(yīng)置4℃冰箱存放，及時(shí)準(zhǔn)備創(chuàng)立條件，而后進(jìn)行檢驗(yàn)。6．樣品檢驗(yàn)時(shí)，依據(jù)其不一樣性狀，進(jìn)行合適辦理。