扇貝多肽對實驗性腦缺血大鼠缺血性半暗帶Bcl22 蛋白表達的影響

扇貝多肽對實驗性腦缺血大鼠缺血性半暗帶Bcl22蛋白表達的影響【關(guān)鍵詞】扇貝多肽;缺血半暗帶;蛋白質(zhì),Bl22蛋白;大鼠［摘要］目的討論扇貝多肽(PF)對大鼠腦缺血半影區(qū)內(nèi)Bl22蛋白表達的影響。方法應(yīng)用線栓法制作istar大鼠大腦中動脈缺血再灌注(A)模型，A模型大鼠隨機分為PF治療組、蒸餾水組和模型組。免疫組織化學(xué)法測定腦組織缺血半影區(qū)Bl22蛋白的表達。結(jié)果PF組腦缺血半影區(qū)Bl22蛋白那么呈過表達，與模型組及蒸餾水組相比差異有非常顯著性(q=38.08、41.69，P0.01)。結(jié)論PF能防止大鼠腦缺血后缺血半影區(qū)內(nèi)神經(jīng)元的凋亡。［關(guān)鍵詞］扇貝多肽;缺血半暗帶;蛋白質(zhì)，Bl22蛋白;大鼠EffetfplypeptidesfrhlaysfarrerintheexpressinfBl22prtEinsintheisheipenubrainratsaftererebralisheia［Abstrat］bjetiveTstudytheeffetfplypeptidesfrhlaysfarreri(PF)ntheexpressinfBl22prteinsintheisheipenubrainratsaftererebralisheia.ethdsTenty-furistarratseresubjetedtiddleerebralarterylusin(A)andreperfusin.Theratsererandlydividedintthreegrups：AdelgrupshihererandlydividedintPFgrup，distilled2atergrupandntrlgrup.TheexpressinfBl22prteinsintheisheipenubraereexainedbyiunheialtehnique.ResultsTheexpressinfBl22prteininthePFgrupasarkedlyhigherthanthatfthedistilled2atergrupandntrlgrup，thediffereneassignifiant(q=38.08，41.69，P0.01).nlusinPFanpreventtheneurnsfrapptsisinisheipenubrainrataftererebralisheia.［Keyrds］plypeptidesfrhlaysfarreri;isheipenubra;prtein，Bl22;rats抗氧化劑在腦缺血損傷修復(fù)過程中的重要作用已得到人們的共識，現(xiàn)已有多種藥物上市。但海洋活性物質(zhì)尤其是肽對預(yù)防腦缺血發(fā)生的研究較少。扇貝多肽(PF)是一種以海洋生物工程技術(shù)從扇貝廢棄物中提取純化的含有4種組分的肽類活性物質(zhì)，其相對分子質(zhì)量為800～1000［1］。本實驗采用免疫組織化學(xué)的方法檢測PF在體內(nèi)對腦缺血半暗帶Bl22蛋白表達的影響?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。1材料與方法1.1大腦中動脈缺血再灌注(A)模型的建立成年istar大鼠24只，體質(zhì)量200～280g，正常飼養(yǎng)。采用Zealnga等［2］的頸外動脈線栓法，建立大鼠A模型。24只A模型大鼠隨機分為PF治療組、蒸餾水組和模型組，每組8只。PF治療組術(shù)前2天腹腔注射體積分數(shù)0.1的扇貝多肽0.1l/kg，每日1次，再灌注前15in加注1次;蒸餾水組術(shù)前2天腹腔注射雙蒸餾水0.1l/kg，每日1次，再灌注前15in加注1次。1.2標(biāo)本采集將各組大鼠灌流固定后置頭顱于立體定位儀上，于前囟前2到后囟取腦組織，常規(guī)石蠟包埋。7μ厚連續(xù)冠狀切片用于免疫組化的測定。1.3Bl22蛋白的檢測采用免疫組化的方法進展檢測。Bl22免疫組化試劑盒均購自北京中山公司。應(yīng)用VI2DAS221顯微圖像處理系統(tǒng)測定各組缺血半影區(qū)一樣位置的免疫反響產(chǎn)物吸光度(A)值。2結(jié)果PF治療組缺血半暗帶Bl22蛋白呈過表達，與模型組及蒸餾水組相比，差異有非常顯著性(q=38.08、41.69，P0.01)。見表1。表1大鼠腦頂葉缺血半暗帶Bl22蛋白的表達〔略〕注：PF組與模型組和蒸餾水組比擬，q=23.80、41.69，P0.013討論腦缺血時體內(nèi)產(chǎn)生大量的氧自由基，而抗氧化劑可通過去除自由基、進步抗氧化酶等有效地阻斷或防止氧自由基對神經(jīng)元的損傷［3］。PF是一種肽類活性物質(zhì)，其在體外的抗氧化和凋亡作用已經(jīng)得到證實［4］，本文是在體內(nèi)實驗中驗證PF的抗凋亡作用。目前關(guān)于腦缺血半暗帶的發(fā)活力制有許多學(xué)說，但近幾年大多數(shù)學(xué)者的研究主要集中在神經(jīng)元凋亡上。1982年Kirin［5］首次報道了腦缺血后海馬A1區(qū)神經(jīng)元的選擇性易損性和遲發(fā)性神經(jīng)元死亡(DND)現(xiàn)象。而如今許多學(xué)者經(jīng)過研究認為，腦缺血中神經(jīng)元凋亡在遲發(fā)性神經(jīng)元死亡中扮演著重要的角色［6］。Krajeski等［7］在大鼠腦缺血再灌注模型中觀察到，海馬區(qū)不同部位Bax蛋白表達存在明顯的差異，A1區(qū)Bax蛋白表達明顯，而A3區(qū)Bl22蛋白表達明顯。TUNEL染色證實A1區(qū)大量神經(jīng)元喪失而A3區(qū)根本無變化。一方面提示大鼠海馬各區(qū)缺血耐受性不同，另一方面也證實Bax蛋白表達參與了缺血時神經(jīng)細胞凋亡。所以，本文的研究主要集中于缺血半影區(qū)的細胞凋亡上。Bl22基因(B淋巴細胞瘤/白血病22基因)是一種能抑制細胞凋亡的基因。Bl22基因的過度表達能增強細胞對大多數(shù)細胞毒性因素的抵抗性，并可增強細胞對大多數(shù)DNA損傷因子的抵抗性，抑制大多數(shù)化療藥物所引起的靶細胞凋亡，還能阻止自由基和脂質(zhì)過氧化導(dǎo)致的細胞凋亡［8］。腦缺血再灌注后，半暗帶內(nèi)發(fā)生細胞凋亡，凋亡啟動的同時，抗凋亡Bl22蛋白相繼表達，與模型組和蒸餾水組比擬，PF能上調(diào)腦缺血時腦組織中Bl22蛋白的表達，說明其通過進步Bl22蛋白的表達從而阻止腦缺血再灌注引發(fā)的脂質(zhì)過氧化介導(dǎo)的細胞損傷。由此可以推斷，PF可能通過抑制凋亡的啟動而起到保護細胞的作用。［參考文獻］1杜衛(wèi)，劉曉萍，梁惠，等.PF對淋巴細胞的保護作用和反相液相色譜分析.中國海洋藥物，2000，19(5)：27.2ZealngaE，EinsteinPR，arlsnS，etal.Reversibleiddleerebralarterylusinithutranietyinrats.Strke，1989，20：84.3王平，顧振綸，周文軒，等.心腦通膠囊對實驗性腦缺血的保護作用.中成藥，2000，22(9)：636.4王春波，賀孟泉，秦守哲，等.扇貝多肽的體外抗氧化作用.中國海洋藥物，1998，17(3)：15.5KirinT.Delayedneurnaldeathinthegerbilhippapusfl2lingisheia.BrainResearh，1982，239(5)：57.6HeissD.Isheipenubra――thetherapeutiind.JerebBldFletab，1994，14：892.7