中藥對(duì)幽門螺桿菌的體外聯(lián)合抗菌實(shí)驗(yàn)

中藥對(duì)幽門螺桿菌的體外聯(lián)合抗菌實(shí)驗(yàn)(作者：?jiǎn)挝唬亨]編：)【摘要】目的研究黃連、烏梅、蜂膠對(duì)幽門螺桿菌的體外聯(lián)合抗菌作用。方法應(yīng)用棋盤法，以瓊脂平板法測(cè)定兩兩組合的不同濃度中藥提取物對(duì)Hp的最低抑菌濃度，計(jì)算部分抑菌濃度(FIC)指數(shù)并判定聯(lián)合效應(yīng)。結(jié)果黃連與蜂膠聯(lián)合應(yīng)用后，其FIC指數(shù)為0.13(V0.5);黃連與烏梅聯(lián)合應(yīng)用后，其FIC指數(shù)為0.75(>0.5);烏梅與蜂膠聯(lián)合應(yīng)用后，其FIC指數(shù)為0.19(V0.5)。結(jié)論黃連與蜂膠聯(lián)合應(yīng)用及烏梅與蜂膠聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)Hp表現(xiàn)為協(xié)同作用，且烏梅與蜂膠聯(lián)合應(yīng)用協(xié)同作用較強(qiáng)；黃連與烏梅聯(lián)合應(yīng)用對(duì)Hp表現(xiàn)為相加作用；3種中藥之間均無(wú)拮抗作用。【關(guān)鍵詞】黃連烏梅蜂膠幽門螺桿菌聯(lián)合抗菌實(shí)驗(yàn)CombinedAntibacterialActivityofThreeChineseDrugsAgainstHelicobacterPyloriAbstractObjective:TostudythecombinedantibacterialactivityofCoptischinensis,DarkPlumFruitandBeePropolisproagainstHelicobacterpylori(Hp)MethodsTheprotocolwasdesignedbycheckboardmethod.TheMICsofCoptischinensis,DarkPlumFruitandBeePropolisproaloneorintwo-and-twocombinationagainstHpweredeterminedbyagarplatemethod,andtheFICindexeswascalculatedfortheevaluationofthecombinedeffects.ResultsWhenCoptischinensiscombinedwithBeePropolispro,theFICindexwas0.13(v0.5)butwas0.75(>0.5)whencombinedwithDarkPlumFruit;TheFICindexwas0.19(v0.5)whenDarkPlumFruitcombinedwithBeePropolispro.ConclusionBothCoptischinensisincombinationwithBeePropolisproorDarkPlumFruitincombinationwithBeePropolisprohadsynergisticactiononHp.withthelattershowingmorepotentsynergisticaction.CoptischinensiscombinedwithDarkPlumFruitCeorgihadadditivityagainstHp.NoantagonisticactionswerenotedinCoptischinensis,BeePropolisproandDarkPlumFruit.Keywords:Coptischinensis;DarkPlumFruit;BeePropolispro;Helicobacterpylori(Hp);combineddrugsusceptibilitytest幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,Hp)是由Warren和Marshall于1982年首次從慢性活動(dòng)性胃炎患者胃竇黏膜活檢組織中分離出來(lái)并培養(yǎng)成功的，目前認(rèn)為該菌與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關(guān)淋巴樣組織(MALT)惡性淋巴瘤以及腸型胃癌密切相關(guān)，WH(于1994年將其列為胃癌的I類生物致癌因子］1］。據(jù)調(diào)查，Hp感染在世界范圍內(nèi)廣泛存在，世界平均感染率為50%左右，我國(guó)各地自然人群中的Hp感染率(成人)均在50%以上。西醫(yī)采用以抗生素為主的三聯(lián)、四聯(lián)療法治療Hp感染，但隨著抗生素的使用，臨床上觀察到耐藥菌株也越來(lái)越多。中醫(yī)藥治療疾病有其獨(dú)到之處，在注重局部病變的同時(shí)，更注重整體的調(diào)節(jié)，加上中藥組方變化大，可供選擇的藥物多，其優(yōu)勢(shì)逐漸被人們認(rèn)同。本研究考察了3種傳統(tǒng)中藥對(duì)Hp的體外抗菌作用。選用棋盤法測(cè)定其單獨(dú)及聯(lián)合藥敏實(shí)驗(yàn)時(shí)各藥物的最低抑菌濃度(MinimalInhibitoryConcentration,MIC),以部分抑菌濃度(FractionalInhibitoryConcentration,FIC)指數(shù)評(píng)價(jià)藥物的體外聯(lián)合抗菌效應(yīng)，為研制抗Hp新的中藥組方提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料1.1Hp菌株本研究采用的Hp菌株為國(guó)際統(tǒng)一的SS1(SydneyStrain"菌株，經(jīng)鑒定cagA(+)和VacA(+).由河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院微生物室提供。1.2培養(yǎng)基[2]體培養(yǎng)基為改良Skirrow選擇性培養(yǎng)基，即在1000ml改良Skirrow瓊脂基礎(chǔ)中加入抗生素混合液，使終濃度為四環(huán)素(TMP)5mg/L,萬(wàn)古霉素10mg/L,多粘菌素B2500U/L,并加入50ml脫纖維凍融兔血。改良Skirrow瓊脂基礎(chǔ)和布氏肉湯均為北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品。2方法2.1實(shí)驗(yàn)藥液制備稱取黃連、烏梅、蜂膠3種中藥，按重量比加10倍的蒸餾水浸泡30min后，用文火煎熬30min，倒出煎液，藥渣再加等量蒸餾水煎熬30min，2次煎液合并，3500r/min離心15min，倒出上清液，蒸發(fā)濃縮成含生藥量1g/mL濃度的藥液。以最少量的二甲基亞砜溶劑溶解后，使其母液濃度分別為100mg/mL、50mg/mL、50mg/mL.2.2菌液的制備將培養(yǎng)3d的Hp菌株用無(wú)菌生理鹽水洗下后，配成布氏肉湯菌懸液，再用標(biāo)準(zhǔn)比濁管比濁，校正菌液濃度，使其菌液濃度相當(dāng)于1x108(ColonyFormingUnits,CFU)/mL.2.3MIC的測(cè)定[3,4]將上述3種藥物的母液以二甲基亞砜倍比稀釋，得到以下7種濃度藥液：黃連(100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.57mg/mL'烏梅(50、25'12.5'6.25'3.13、1.57、0.78mg/mL、蜂膠(50、25、12.5、6.25、3.13、1.57、0.78mg/mL。按黃連+蜂膠'黃連+烏梅'烏梅+蜂膠3組藥物兩兩配對(duì)，將每組配對(duì)藥物的不同濃度藥液按棋盤法設(shè)計(jì)，兩兩配比，每種中藥液均加50卩L;再向每管中加入900卩L改良Skirrow選擇性培養(yǎng)基，充分混合均勻，加入64孔平板培養(yǎng)皿中；再將配好的菌液分別在培養(yǎng)基上涂布5L,放人培養(yǎng)罐中(85%N210%C025%02),濕度保持在90%以上，充氣10min,37C培養(yǎng)72h后觀察結(jié)果。以肉眼及顯微鏡觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，記錄單獨(dú)應(yīng)用3種藥的MIC甲藥單用'MIC乙藥單用，并選擇最佳組合效應(yīng)時(shí)聯(lián)合2種藥各自的MIC甲藥聯(lián)合、MIC乙藥聯(lián)合，以計(jì)算FIC指數(shù)。2.4FIC指數(shù)的計(jì)算與判斷FIC指數(shù)二MIC甲藥聯(lián)合/MIC甲藥單用+MIC乙藥聯(lián)合/MIC乙藥單用。FIC指數(shù)=0.5時(shí)為協(xié)同作用；0.5vFIC指數(shù)w1時(shí)為相加作用；1VFIC指數(shù)w2時(shí)為無(wú)關(guān)作用；FIC指數(shù)〉2時(shí)為拮抗作用。3結(jié)果3.1黃連、烏梅、蜂膠單獨(dú)應(yīng)用和每?jī)煞N中藥聯(lián)合應(yīng)用對(duì)Hp的MIC(mg/ml)及FIC指數(shù)情況(見(jiàn)表1)表13種中藥單用及兩兩聯(lián)合應(yīng)用對(duì)Hp的MIC及FIC指數(shù)3.2黃連、烏梅、蜂膠每?jī)煞N聯(lián)合應(yīng)用的最佳配比(見(jiàn)表2)4討論本實(shí)驗(yàn)選取黃連和黃芩并加入具有良好抗菌作用的蜂膠作為研究對(duì)象，

考察單藥及兩兩聯(lián)合后的抗菌作用。表23種中藥兩兩聯(lián)合應(yīng)用的最佳配比黃連(Coptischinensis)具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效，是我國(guó)中醫(yī)臨床治療胃腸道疾病的常用藥之一。黃連抑菌的有效成分一般認(rèn)為是小檗堿，其殺菌機(jī)制可能是小檗堿抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)與呼吸，抑制細(xì)菌的葡萄糖及糖代謝中間產(chǎn)物的氧化過(guò)程，特別是脫氧反應(yīng)，從而殺滅細(xì)菌。烏梅為雙子葉植物藥薔薇科植物梅的干燥未成熟果實(shí)，主要具有斂肺止咳，澀腸止瀉，崩止血，生津止渴，安蛔作果實(shí)，主要具有斂肺止咳，澀腸止瀉，崩止血，生津止渴，安蛔作用，主治久咳，虛熱煩渴，久瘧，久瀉，痢疾，便血，尿血，血崩，蛔厥腹痛、嘔吐，鉤蟲?。?］。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可以得出以下結(jié)論：3種中藥抗Hp的效果為黃連〉蜂膠＞烏梅；黃連與蜂膠'烏梅與蜂膠聯(lián)用對(duì)Hp均呈現(xiàn)協(xié)同作用，且蜂膠與烏梅的聯(lián)用顯著增強(qiáng)了抗菌效果；而黃連與烏梅聯(lián)用對(duì)Hp僅呈現(xiàn)相加作用。3種中藥提取物之間均無(wú)拮抗作用。綜上所述，蜂膠對(duì)Hp有很好的抗菌活性，與其它藥物聯(lián)合抗Hp通常表現(xiàn)為協(xié)同作用。因此，在中藥復(fù)方制劑治療Hp陽(yáng)性消化性潰瘍時(shí)，加入蜂膠可能會(huì)起到更好的療效。參考文獻(xiàn)】［1］中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì).對(duì)幽門螺桿菌若干問(wèn)題的共識(shí)意見(jiàn)(2003?中國(guó)):J］?中華醫(yī)學(xué)雜志，2004,84(6):522.:2］謝獻(xiàn)勝，王鋒’陸桂平，等?幽門螺旋桿菌的培養(yǎng)與保存［J］.DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減泰州職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006,6(1):51-52.:3]裴斐,王睿.磷霉素與替考拉寧對(duì)90株革蘭陽(yáng)性球菌的聯(lián)合藥敏研究]J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2004,14(11):1282-1284.[4]EliopoulosGM.MoelleringRCJr.AntibooticsinLaboratoryMedicine[M].4thed.NewYork:WilliamsWilkiins,1996:330.[5]吳靜，王克霞.中藥制劑體外抑殺幽門螺桿菌的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006,17(4):631-633.DOCDOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減膠與烏梅的聯(lián)用顯著增強(qiáng)了抗菌效果；而黃連與烏梅聯(lián)用對(duì)Hp僅呈現(xiàn)相加作用。3種中藥提取物之間均無(wú)拮抗作用。綜上所述，蜂膠對(duì)Hp有很好的抗菌活性，與其它藥物聯(lián)合抗Hp通常表現(xiàn)為協(xié)同作用。因此，在中藥復(fù)方制劑治療Hp陽(yáng)性消化性潰瘍時(shí)，加入蜂膠可能會(huì)起到更好的療效?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[1/r