復習-單克隆抗體的過程課件VIP

單克隆抗體溫故知新：1.細胞工程的兩大類型？各自的技術手段及其原理是？2.核移植的兩大類型？其中提供細胞質的為去核的卵母細胞，為什么選去核的卵母細胞？3.動物細胞融合的實質，原理和方法？融合后的細胞叫？體積大，易操作；含有使細胞核的全能性容易表達的物質和營養(yǎng)條件植物細胞工程：植物組織培養(yǎng)（細胞的全能性）植物體細胞雜交

（細胞的全能性、細胞膜的流動性）動物細胞工程：動物細胞培養(yǎng)（細胞增殖）

核移植（動物細胞核的全能性）動物細胞融合（細胞膜的流動性）單克隆抗體

（細胞膜的流動性、細胞增殖）單克隆抗體1.概念：由單個B淋巴細胞經過無性繁殖（克隆），形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產生的化學性質單一、特異性強的抗體

稱為單克隆抗體。

2.特點：

特異性強、靈敏度高

一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞（癌細胞）能無限增殖雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術動物細胞融合單克隆抗體既能在體外大量繁殖，又能產生特異性抗體單克隆抗體漿細胞第一次篩選用特定的選擇培養(yǎng)基帥選出雜交瘤細胞融合①細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。②人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。你想到篩選雜交瘤細胞的方案了么？

小資料：陽性孔方法——抗原-抗體雜交法用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，稀釋度要保證每個孔內不多于一個細胞?？乖贵w雜交法檢測——呈陽性反應單克隆抗體第二次篩選雜交細胞雜交瘤細胞體外或體內培養(yǎng)第一次篩選骨髓瘤細胞誘導細胞融合特異性雜交瘤細胞雜交瘤細胞系提取經過免疫的B淋巴細胞動物細胞融合技術動物細胞培養(yǎng)技術單克隆抗體的制備過程：特點：既能大量繁殖又能產生專一抗體特點：特異性強靈敏度高可大量制備注射抗原免疫特定的選擇培養(yǎng)基多孔細胞培養(yǎng)板高考熱點：1.此過程中的B淋巴細胞是經過免疫的，實際上就是漿細胞。2.融合后形成的雜交細胞有多種，考慮兩兩融合，共有三種：B-B、B-瘤(雜交瘤細胞)、瘤-瘤3.單克隆抗體制備中用到的技術手段：動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)。4.原理：細胞膜的流動性、細胞增殖5.整個制備過程為何要經過兩次篩選?第一次篩選用特定的選擇培養(yǎng)基，

篩選出雜交瘤細胞（多種）

第二次用多孔培養(yǎng)板，篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞。單克隆確有單個細胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細胞，而是雜交瘤細胞?？评彰谞査固箻s獲1984年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎單克隆抗體的制備1、怎樣獲得能分泌專一抗體的B淋巴細胞？2、從何處獲得較多的B淋巴細胞？3、用什么方法可以使B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合？4、怎樣篩選出雜交瘤細胞？5、怎樣獲得只產生特異性抗體的雜交瘤細胞？6、怎樣獲得大量的單一抗體？反復注射特定的抗原，免疫小鼠。小鼠的脾臟PEG、滅活的病毒等利用HAT選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，篩選用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，稀釋度要保證每個孔內不多于一個細胞?？乖贵w雜交法檢測——呈陽性反應體內或體外大量培養(yǎng)特異的雜交瘤細胞，從中提取單一抗體。(1)若A細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則B細胞是取自小鼠體內的

細胞，從小鼠體內提取分離該細胞之前，應給小鼠注射_____________類物質。（2）d過程是一個_____________過程，該過程的進行常用_____________或_____________的誘導。(3)假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成

種類型的C細胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細胞用于培養(yǎng)，D細胞的名稱是

，其特點是_________________________________________。效應B

抗原

細胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇性3既能無限增殖又能產生特異性抗體

雜交瘤細胞15、（1）單克隆抗體是指

。（2）制備單克隆抗體的步驟：①將__________注入小鼠體內，從小鼠脾臟中獲得淋巴細胞，其中至少1個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。②將步驟①獲得的B淋巴細胞與步驟②培養(yǎng)的骨髓瘤細胞在_________________的誘導下融合。③將誘導后產生的多種細胞，放在_______培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。④這樣獲得的雜交瘤細胞既具有B淋巴細胞_____________的能力，又具有________________的本領。⑤檢測和分離帶有抗X抗體的陽性細胞，培養(yǎng)板中每孔放一個細胞進行培養(yǎng)。⑥將陽性細胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體?；瘜W性質單一，特異性強的抗體

抗原

聚乙二醇選擇性

無限增殖

產生專一抗體（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：①體外培養(yǎng)法，可獲得10μg/mL的抗體；②動物體內誘生法可獲得5~20mg/mL的抗體。你選擇的方法及原因是

。（4）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因為它是用小鼠的_______細胞制備的，其化學本質是___