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4/4PCR分子診斷POCT需要具備哪些基本要素?分子診斷POCT是近幾年的熱門話題。作為未來分子診斷發(fā)展的熱門方向,分子診斷POCT集合了小巧、靈活、方便、快速、精準等特點,在應(yīng)用場景和應(yīng)用領(lǐng)域上比傳統(tǒng)的分子診斷更多更廣。這也是目前國內(nèi)外診斷企業(yè)紛紛布局這一領(lǐng)域原因。那么實現(xiàn)PCR分子診斷POCT一般需要具備哪些基本要素?
01多重PCR技術(shù)
一般來講,分子POCT的擴增管比較少,所以掌握多重PCR技術(shù)能夠讓你在有限空間實現(xiàn)更多的位點檢測。
02
試劑常溫技術(shù)
分子診斷POCT能夠在應(yīng)用場景上拓展,試劑常溫技術(shù)尤為關(guān)鍵。試劑常溫運輸儲存即降低冷鏈運輸?shù)某杀居謳硎褂蒙系谋憬荨?/p>
試劑常溫技術(shù)一般分為兩種:液體試劑常溫技術(shù)和干式試劑常溫技術(shù)。
液體常溫技術(shù):
是通過對PCR體系中的酶做一些化學修飾,來實現(xiàn)酶在體系在短時間的常溫穩(wěn)定,以此實現(xiàn)常溫運輸,0-10℃或-20℃儲存。目前Taq酶的化學修飾已經(jīng)得到實現(xiàn),但對于體系中的其他酶(如逆轉(zhuǎn)錄酶)的修飾還需更多的研究投入。
干式試劑常溫技術(shù):
是通過對PCR體系(包含酶等活性成分)的冷凍干燥,實現(xiàn)常溫運輸常溫存儲或常溫運輸0-10℃儲存。國外廠家早在幾年前就掌握了干式試劑常溫技術(shù),國內(nèi)目前也有不少廠家實現(xiàn)了這一技術(shù)。只是國內(nèi)廠家目前絕大部分實現(xiàn)的是干式粉末技術(shù),對于干式球形技術(shù)掌握的極少。干式球形技術(shù)是實現(xiàn)批量化生產(chǎn),降低成本的關(guān)鍵。
03快速提取純化技術(shù)
經(jīng)典的分子診斷POCT即要快速也要精準,所以核酸的提取純化是精準的要素。
直擴的方法如果從體系和釋放劑的配方上深入研究,達到與提取純化后擴增的靈敏度也是有可能的,但從樣本的普適性上來講,直擴的方法范圍更窄,只能適用部分項目的某一類樣本的檢測。
核酸提取純化也不能像傳統(tǒng)的提取(提取時間一般20-30分鐘)一樣,要在提取效果和提取時間上找到平衡點,實現(xiàn)核酸快速提取純化。
04封閉式卡盒的設(shè)計
分子診斷POCT的關(guān)鍵之一,在于封閉式卡盒的設(shè)計。“核酸的提取、加樣及擴增全過程在封閉式的小卡盒在完成。”簡單的一句話,難倒了眾多開發(fā)設(shè)計者。
難點在于快速提取過程如何移液、純化后的核酸如何加入到體系中、卡盒需要預留什么樣的機構(gòu)與儀器設(shè)備配合。
突破這些難點以后,你還需要考慮如何低成本制造,試劑如何批量化生產(chǎn)。
因此設(shè)計一個可產(chǎn)業(yè)化的封閉式卡盒是實現(xiàn)分子診斷POCT的基本要素也是關(guān)鍵。
05配套的分子診斷POCT儀器
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