細菌學檢驗 11 分枝桿菌屬 5課件

分枝桿菌屬（Mycobacterium

）分枝桿菌屬（Mycobacterium）內(nèi)容提要分枝桿菌屬分枝桿菌屬概述結(jié)核分枝桿菌麻風分枝桿菌微生物學檢查概述生物學性狀致病性與免疫性防治原則概述生物學性狀微生物學檢查致病性防治原則非結(jié)核分枝桿菌內(nèi)容提要分枝桿菌屬分枝桿菌屬概述結(jié)核分枝桿菌麻風分枝桿菌微生分枝桿菌屬概述是一類細長微彎的細菌，因有分枝生長趨勢而得名特點細胞壁含有大量的脂類（分枝菌酸）菌體不易著色，不易脫色，常采用抗酸染色，抗酸染色陽性（抗酸桿菌）營養(yǎng)要求高，生長緩慢無特殊結(jié)構(gòu)，不產(chǎn)毒素，其致病性與菌體成分有關(guān)引起疾病都呈慢性，并伴肉芽腫分枝桿菌屬概述是一類細長微彎的細菌，因有分枝生長趨勢而得名分枝桿菌屬概述分類分枝桿菌屬概述分類第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis)一、概述俗稱結(jié)核桿菌(Tuberclebacilli，TB)，引起人類結(jié)核病—有著三千年歷史的古老疾病目前，全球約有1/3人口受結(jié)核桿菌感染，70%在亞洲。每年新發(fā)病例800萬，300萬人死于結(jié)核病結(jié)核病成為亟待解決的全球性公共衛(wèi)生問題，是艾滋病高發(fā)區(qū)人群的首要死因第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis)一第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis)一、概述致病菌主要包括：人結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌。人型結(jié)核分枝桿菌感染的發(fā)病率最高我國是世界上結(jié)核病負擔最嚴重的22個國家之一，每年25萬死于結(jié)核，傳染病之首世界防治結(jié)核病日—3月24日第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis)一二、生物學性狀形態(tài)與染色細長略彎，分枝狀莢膜對菌體有一定的保護作用抗酸染色陽性，菌體呈紅色，背景呈藍色二、生物學性狀形態(tài)與染色金胺O染色：在熒光顯微鏡菌體呈橘黃色L型菌：Much顆粒，多見于細菌的變異金胺O染色：在熒光顯微鏡菌體呈橘黃色結(jié)核桿菌電鏡圖結(jié)核桿菌電鏡圖培養(yǎng)特性專性需氧，pH偏酸6.5-6.8營養(yǎng)要求高，常用羅琴氏培養(yǎng)基（選擇性固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所含的孔雀綠或青霉素可抑制雜菌生長）生長緩慢，18h/代，2-4W可見菌落生長菌落特征：乳白或米黃，表面粗糙呈顆粒結(jié)節(jié)，邊緣不整，呈“菜花樣”菌落液體培基：表面生長成菌膜二、生物學性狀培養(yǎng)特性二、生物學性狀細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件二、生物學性狀生化反應不發(fā)酵糖類觸酶試驗陽性熱觸酶試驗：將細菌懸液68℃30min，再加過氧化氫對區(qū)別結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌有重要意義結(jié)核分枝桿菌熱觸酶試驗陰性二、生物學性狀生化反應抵抗力四怕：對酒精敏感對濕熱敏感對紫外線敏感對抗結(jié)核藥物（鏈霉素、異煙肼、利福平等）敏感，但易產(chǎn)生耐藥性二、生物學性狀抵抗力四不怕：耐干燥耐酸堿耐染料對青霉素等抗生素耐藥抵抗力二、生物學性狀抵抗力變異性形態(tài)結(jié)構(gòu)變異在異煙肼、溶菌酶等作用下形成L型（多形性）菌落變異R-S型變異，性狀典型→不典型，毒力減弱毒力變異：卡介苗BCG：Calmette和Guérin將牛分枝桿菌經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒活疫苗株，用于預防結(jié)核病耐藥性變異易發(fā)生，抗結(jié)核藥物的結(jié)核菌株日益增多二、生物學性狀變異性二、生物學性狀三、致病性與免疫性致病物質(zhì)—菌體成分，機體免疫病理損傷脂質(zhì)——存在細胞壁，含量與毒力平行索狀因子（糖脂-分枝菌酸+海藻糖）：破壞細胞，引起肉芽腫磷脂：形成結(jié)核結(jié)節(jié)和干酪樣壞死蠟質(zhì)D（分枝菌酸+肽糖脂）：引起遲發(fā)性過敏反應硫酸腦苷脂：抑制吞噬體與溶酶體結(jié)合三、致病性與免疫性致病物質(zhì)—菌體成分，機體免疫病理損傷三、致病性與免疫性致病物質(zhì)—菌體成分，機體免疫病理損傷蛋白質(zhì)有抗原性、本身無毒，如結(jié)核菌素蛋白質(zhì)+蠟質(zhì)D——遲發(fā)型變態(tài)反應。組織壞死、全身中毒癥狀結(jié)核結(jié)節(jié)形成莢膜三、致病性與免疫性致病物質(zhì)—菌體成分，機體免疫病理損傷感染方式多途徑感染：呼吸道、消化道或皮膚損傷侵入機體所致疾病結(jié)核病，疾病種類多樣化，以肺結(jié)核常見三、致病性與免疫性感染方式三、致病性與免疫性所致疾病肺部感染：原發(fā)感染:多發(fā)生于兒童原發(fā)綜合征：原發(fā)灶（肺泡滲出性炎癥）、淋巴管炎和腫大的肺門淋巴結(jié)纖維化和鈣化而自愈復發(fā)：內(nèi)源性感染的來源三、致病性與免疫性所致疾病三、致病性與免疫性所致疾病肺部感染：繼發(fā)感染:多發(fā)生于成人，內(nèi)源性感染病灶多局限，不累及鄰近淋巴結(jié)干酪樣壞死和空洞，菌可隨痰排出，開放性肺結(jié)核三、致病性與免疫性空洞干酪樣壞死所致疾病三、致病性與免疫性空洞干酪樣壞死所致疾病肺外感染：免疫力低下患者常見于腦、腎、骨、關(guān)節(jié)、生殖系統(tǒng)。腦結(jié)核、腎結(jié)核、淋巴結(jié)核、皮膚結(jié)核等痰菌被咽入消化道或食入了消毒不嚴格的牛奶也可引起腸結(jié)核、結(jié)核性腹膜炎等少數(shù)形成全身粟粒性結(jié)核或播散性結(jié)核三、致病性與免疫性所致疾病三、致病性與免疫性免疫性－傳染、免疫、超敏反應共存人體對該菌有較強免疫力（感染率高，發(fā)病率低）主要是細胞免疫，有菌免疫細胞免疫與遲發(fā)型超敏反應同時存在三、致病性與免疫性免疫性－傳染、免疫、超敏反應共存三、致病性與免疫性免疫性結(jié)核菌素試驗（Tuberculintest)（OT試驗）原理：是應用結(jié)核菌素進行皮膚試驗來測定機體對結(jié)核分枝桿菌是否能引起遲發(fā)型超敏反應的一種試驗，以判斷機體對結(jié)核有無免疫力試劑：舊結(jié)核菌素（OT）--主要成分是結(jié)核桿菌蛋白純蛋白衍生物（PPD）方法：前臂皮內(nèi)注射OT或PPD5單位，48-72h后觀察三、致病性與免疫性免疫性三、致病性與免疫性免疫性結(jié)核菌素試驗（Tuberculintest)（OT試驗）結(jié)果：陽性：紅腫硬結(jié)直徑＞5mm，表明曾感染過結(jié)核桿菌/接種BCG強陽性：直徑≥15mm，表明可能有活動性結(jié)核陰性：直徑＜5mm，表明無結(jié)核感染，但應排除原發(fā)感染的早期、老年人、嚴重結(jié)核患者或同時患有其它傳染病、獲得性免疫功能低下等情況

三、致病性與免疫性免疫性三、致病性與免疫性免疫性結(jié)核菌素試驗（Tuberculintest)（OT試驗）應用：選擇卡介苗接種對象、測定卡介苗接種后的免疫效果了解人群自然感染率作為嬰幼兒結(jié)核病的輔助診斷測定腫瘤患者的細胞免疫功能三、致病性與免疫性免疫性三、致病性與免疫性細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件四、微生物學檢查四、微生物學檢查細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件四、微生物學檢查標本采集清晨第一口痰送檢無菌抽取腦脊液、胸水、腹水及關(guān)節(jié)液等盛無菌試管送檢腦脊液標本靜置后，表面有細薄凝塊，取凝塊作涂片或接種培養(yǎng)采集膿液應直接從潰瘍處取膿汁或分泌物四、微生物學檢查標本采集四、微生物學檢查檢驗方法直接涂片染色鏡檢：常用的簡易快速檢查方法齊-尼抗酸染色：痰涂片要厚，觀察至少100個視野。結(jié)核分枝桿菌抗酸染色后呈紅色，其他細菌和細胞為藍色金胺O染色：熒光顯微鏡下見金黃色熒光的結(jié)核分枝桿菌，結(jié)果快速準確結(jié)果應報告“找到或未找到抗酸性桿菌”，而不能報告“找到結(jié)核分枝桿菌”四、微生物學檢查檢驗方法齊-尼抗酸染色結(jié)果報告方式齊-尼抗酸染色結(jié)果報告方式四、微生物學檢查檢驗方法核酸檢測用PCR法快速診斷結(jié)核分枝桿菌感染特異性與敏感性均大于95％抗PPDIgG的檢測

ELISA法檢測患者血清中抗PPDIgG可作為活動性結(jié)核分枝桿菌感染的快速診斷方法，陽性率為80％～90％四、微生物學檢查檢驗方法四、微生物學檢查檢驗方法分離培養(yǎng)無雜菌污染的標本：腦脊液、胸腹水等可直接或離心后取沉渣接種有雜菌污染的標本在接種到培養(yǎng)基之前須做4%NaOH處理15min，以消除雜菌的干擾標本接種于羅琴培養(yǎng)基。37℃，5％~10％CO2培養(yǎng)8周，如果出現(xiàn)干燥呈顆粒狀、灰白色菌落，涂片染色為抗酸陽性，多數(shù)是結(jié)核分枝桿菌。陰性繼續(xù)培養(yǎng)至12周方可報告四、微生物學檢查檢驗方法檢驗方法檢驗方法細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件四、微生物學檢查檢驗方法菌種鑒定：可為結(jié)核病和非典型分枝桿菌病的臨床鑒別和防治提供科學的依據(jù)PCR反向膜探針雜交EHSA法(PCR雜交梳)DNA探針16srRNA基因序列測定高效液相色譜(HPLC)檢測四、微生物學檢查檢驗方法四、微生物學檢查檢驗方法動物接種可用于結(jié)核分枝桿菌的分離和毒力測定此法敏感可靠，但手續(xù)較繁瑣，不能列為常規(guī)常用的豚鼠在接種后3-4周出現(xiàn)局部淋巴結(jié)腫大，身體消瘦，結(jié)核菌素試驗轉(zhuǎn)為陽性剖檢時可看到淋巴結(jié)、肝、脾、腎、肺等臟器的典型結(jié)核病變，由病變處可查到抗酸桿菌或經(jīng)培養(yǎng)有結(jié)核分枝桿菌生長

四、微生物學檢查檢驗方法四、微生物學檢查檢驗方法藥物敏感性試驗耐藥株的增多，應做藥物敏感性試驗，以指導臨床合理用藥。將純培養(yǎng)物菌懸液，接種含各種濃度藥物的固體培養(yǎng)基（改良羅氏培養(yǎng)基）上，同時做不含藥物的對照組常用方法：絕對濃度法（間接法）、比率法四、微生物學檢查檢驗方法藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）—我國30多年來一直沿用的常規(guī)藥敏試驗方法。1.菌懸液制備：

（1）臨床分離分枝桿菌的新鮮培養(yǎng)物（初生長2周），初生長2周后和貯存培養(yǎng)物須在改良羅氏培養(yǎng)基上二次傳代，取2~3周的亞培養(yǎng)物進行試驗。

（2）菌懸液制備：取上述培養(yǎng)物（需刮取斜面各個部分）放玻璃磨菌器底部，插入磨菌棒捻動使呈乳酪樣，以0.5%吐溫-80生理鹽水磨菌稀釋，與標準麥氏比濁管比濁配成1mg/ml的菌懸液。藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）—我國3藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）

2.含藥培養(yǎng)基制備：改良羅氏培養(yǎng)基每100ml加入1ml抗結(jié)核稀釋藥液，制成含不同藥物嘗試的培養(yǎng)基斜面?zhèn)溆谩?.

接種：將制備的菌懸液10倍稀釋至10-2mg/ml，以滅菌吸管準確吸取菌液0.1ml分別接種于含藥培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基斜面上，每管接種菌量為10-3mg/ml。置37℃培養(yǎng)四周觀察結(jié)果。藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）4.菌落生長情況：同分離培養(yǎng)（以-、+、2~4+）。5.藥敏結(jié)果判斷：低濃度含藥培養(yǎng)基分枝桿菌未生長者報告敏感（S），生長（1+）以上者報告耐藥（R）。6.質(zhì)量控制：每批試驗應以結(jié)核分枝桿菌參考菌株（H37Rv敏感株）10-3

mg/ml檢測含藥培養(yǎng)基質(zhì)量。要求對照培養(yǎng)基菌落數(shù)在200個以上且無融合，若菌落數(shù)低于50個時，要求重新作藥敏試驗。藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）4.菌落生長情況：同分藥物敏感性試驗比例法：是世界衛(wèi)生組織（WHO）全球結(jié)核病耐藥監(jiān)測項目統(tǒng)一推薦的方法。

1.培養(yǎng)基制備：同上述絕對濃度法。培養(yǎng)基藥物中藥物終濃度為：異煙肼0.2mg/ml，雙氫鏈霉素4mg/ml，利福平40mg/ml，乙胺丁醇2mg/ml。

2.菌液：新鮮菌落制成1.0mg/ml菌懸液，依次稀釋至10-2和10-4

mg/ml。

3.接種：分別接種10-2和10-4

mg/ml菌液0.01ml至對照及含藥培養(yǎng)基斜面。

4.培養(yǎng)：37℃培養(yǎng)4周

藥物敏感性試驗比例法：是世界衛(wèi)生組織（WHO）全球結(jié)核病耐藥藥物敏感性試驗比例法：

5.

結(jié)果的判讀、解釋和報告：計算耐藥百分比，即含藥培養(yǎng)基上菌落數(shù)與無藥培養(yǎng)基上菌落數(shù)相比的百分比。耐藥百分比＝(含藥培養(yǎng)基上菌落數(shù))/(對照培養(yǎng)基上菌落數(shù))×100%)。＜1%者報告敏感（S），≥1%者報告耐藥（R）。

藥物敏感性試驗比例法：

5.

結(jié)果的判讀、解釋和報告：細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件五、防治原則預防：一般性預防：衛(wèi)生宣傳、提高機體抵抗力特異性預防：發(fā)現(xiàn)和治療痰菌陽性者新生兒和結(jié)核菌素試驗陰性的兒童接種卡介苗治療：一般治療：合理營養(yǎng)，注意休息抗結(jié)核藥物鏈霉素、異煙肼、利福平等治療原則：早期、聯(lián)合、適量、規(guī)律、分階段治療和堅持全程五、防治原則預防：第二節(jié)非典型分枝桿菌

是指結(jié)核和麻風分枝桿菌以外的分枝桿菌。因具有抗酸性，故又稱非典型抗酸性菌。廣泛分布于外環(huán)境和人及動物的機體中。已發(fā)現(xiàn)17種以上能引起人類疾病，引起的肺部感染,又難以與結(jié)核分枝桿菌感染區(qū)別，并對常用抗生素和抗結(jié)核藥物耐藥，所以區(qū)分鑒別非典型分枝桿菌具有重要的意義。第二節(jié)非典型分枝桿菌是指結(jié)核和麻風分枝桿菌以外的分枝桿一、光產(chǎn)色分枝桿菌特點是在暗處不產(chǎn)生色素，光照1h后能在48h內(nèi)，菌落轉(zhuǎn)為黃色或橘黃色。對人有致病性的是：堪薩斯分枝桿菌：廣泛分布于水和土壤中,能引起肺內(nèi)外結(jié)核樣的病變。海分枝桿菌：為水中的腐生菌。通過皮膚微小創(chuàng)口侵入，引起所謂的“游泳池肉芽腫”。猿分枝桿菌：先后從猿和人體分離出此菌。一、光產(chǎn)色分枝桿菌特點是在暗處不產(chǎn)生色素，光照1h后能在48二、暗產(chǎn)色分枝桿菌有光或無光均能產(chǎn)生色素，呈黃色或橘黃色。對人有致病性的為：瘰痢分枝桿菌：25℃-37℃均可生長，35℃最為適宜，45℃則不能生長。可引起人淋巴結(jié)炎或肺部感染。蘇爾加分枝桿菌：37℃時為暗產(chǎn)色，25℃時為光產(chǎn)色。本菌引起成人肺部的慢性感染。二、暗產(chǎn)色分枝桿菌有光或無光均能產(chǎn)生色素，呈黃色或橘黃色。三、不產(chǎn)色分枝桿菌不能產(chǎn)生色素。對人有致病性的是：鳥-胞內(nèi)復合分枝桿菌(MAC/MAIC)：AIDS患者易感染，對抗結(jié)核藥物不敏感或產(chǎn)生耐藥。潰瘍分枝桿菌：通過創(chuàng)傷感染，四肢伸側(cè)形成無痛性潰瘍，緩慢愈合或出現(xiàn)繼發(fā)感染。蟾分枝桿菌：為蟾蜍肉芽腫的病原菌。多引起老年男性的慢性肺部感染。三、不產(chǎn)色分枝桿菌不能產(chǎn)生色素。對人有致病性的是：四、迅速生長分枝桿菌在普通培養(yǎng)基上生長速度快，生長溫度為25℃-45℃，對人有致病性的是：偶發(fā)分枝桿菌：可引起人局部或肺部感染，對現(xiàn)有的抗結(jié)核藥物均有耐藥性。龜分枝桿菌：可引起人的軟組織病變及手術(shù)后繼發(fā)感染，亦可引起肺部感染。四、迅速生長分枝桿菌在普通培養(yǎng)基上生長速度快，生長溫度為25非結(jié)核分枝桿菌檢驗程序非結(jié)核分枝桿菌檢驗程序第三節(jié)麻風分枝桿菌（M.leprae）一、概述俗稱麻風桿菌，引起麻風病，是一種慢性傳染病流行廣泛，主要分布在亞、非和拉丁美洲第三節(jié)麻風分枝桿菌（M.leprae）一、概述二、生物學性狀形態(tài)與染色其大小、形態(tài)、染色均與結(jié)核桿菌類似，但菌體略粗抗酸染色陽性，呈束狀或團狀排列典型的胞內(nèi)寄生菌。多存在于細胞內(nèi)—麻風細胞（有大量麻風桿菌存在的感染細胞，呈泡沫狀）二、生物學性狀形態(tài)與染色培養(yǎng)特性目前體外人工培養(yǎng)尚未成功動物模型：犰狳，對該菌高度易感，接種后引起瘤型麻風。人對該菌抵抗力強，接觸者僅少數(shù)發(fā)病二、生物學性狀培養(yǎng)特性二、生物學性狀三、致病性所致疾病麻風病，是一種慢性傳染病，主要表現(xiàn)為皮膚、粘膜和神經(jīng)末梢的損害，晚期可侵犯深部組織和器官，形成肉芽腫人類為唯一宿主和唯一傳染源，致病因素不清三、致病性所致疾病三、致病性所致疾病傳染源：病人（瘤型麻風病人通過皮膚黏膜及外分泌液向外排菌）。傳播途徑：皮膚、黏膜、呼吸道及密切接觸潛伏期：2-5年，長者數(shù)十年特點：潛伏期長，發(fā)病慢，病程長的慢性傳染病類型：瘤型麻風（麻風結(jié)節(jié)，“獅面容”），結(jié)核樣型，界線類，未定類三、致病性所致疾病三、致病性所致疾病瘤型麻風（麻風結(jié)節(jié)，“獅面容”）肉芽腫，麻風結(jié)節(jié)三、致病性所致疾病細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件三、致病性所致疾病結(jié)核樣型麻風皮膚—邊緣清楚的紅色斑疹感覺功能障礙三、致病性所致疾病細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件麻風桿菌侵犯神經(jīng)系統(tǒng)麻風桿菌侵犯神經(jīng)系統(tǒng)四、微生物學檢查顯微鏡檢查可從患者鼻粘膜或皮損處取材，用抗酸性染色后檢查一般瘤型和界線類患者標本中可找到細菌在細胞內(nèi)存在，有診斷意義PCR四、微生物學檢查顯微鏡檢查五、防治原則無特異性預防方法，隔離早期發(fā)現(xiàn)、早治療目前多采用二三種藥聯(lián)合治療氨苯砜（dapsone，DDS）五、防治原則無特異性預防方法，隔離分枝桿菌屬（Mycobacterium

）分枝桿菌屬（Mycobacterium）內(nèi)容提要分枝桿菌屬分枝桿菌屬概述結(jié)核分枝桿菌麻風分枝桿菌微生物學檢查概述生物學性狀致病性與免疫性防治原則概述生物學性狀微生物學檢查致病性防治原則非結(jié)核分枝桿菌內(nèi)容提要分枝桿菌屬分枝桿菌屬概述結(jié)核分枝桿菌麻風分枝桿菌微生分枝桿菌屬概述是一類細長微彎的細菌，因有分枝生長趨勢而得名特點細胞壁含有大量的脂類（分枝菌酸）菌體不易著色，不易脫色，常采用抗酸染色，抗酸染色陽性（抗酸桿菌）營養(yǎng)要求高，生長緩慢無特殊結(jié)構(gòu)，不產(chǎn)毒素，其致病性與菌體成分有關(guān)引起疾病都呈慢性，并伴肉芽腫分枝桿菌屬概述是一類細長微彎的細菌，因有分枝生長趨勢而得名分枝桿菌屬概述分類分枝桿菌屬概述分類第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis)一、概述俗稱結(jié)核桿菌(Tuberclebacilli，TB)，引起人類結(jié)核病—有著三千年歷史的古老疾病目前，全球約有1/3人口受結(jié)核桿菌感染，70%在亞洲。每年新發(fā)病例800萬，300萬人死于結(jié)核病結(jié)核病成為亟待解決的全球性公共衛(wèi)生問題，是艾滋病高發(fā)區(qū)人群的首要死因第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis)一第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis)一、概述致病菌主要包括：人結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌。人型結(jié)核分枝桿菌感染的發(fā)病率最高我國是世界上結(jié)核病負擔最嚴重的22個國家之一，每年25萬死于結(jié)核，傳染病之首世界防治結(jié)核病日—3月24日第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis)一二、生物學性狀形態(tài)與染色細長略彎，分枝狀莢膜對菌體有一定的保護作用抗酸染色陽性，菌體呈紅色，背景呈藍色二、生物學性狀形態(tài)與染色金胺O染色：在熒光顯微鏡菌體呈橘黃色L型菌：Much顆粒，多見于細菌的變異金胺O染色：在熒光顯微鏡菌體呈橘黃色結(jié)核桿菌電鏡圖結(jié)核桿菌電鏡圖培養(yǎng)特性專性需氧，pH偏酸6.5-6.8營養(yǎng)要求高，常用羅琴氏培養(yǎng)基（選擇性固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所含的孔雀綠或青霉素可抑制雜菌生長）生長緩慢，18h/代，2-4W可見菌落生長菌落特征：乳白或米黃，表面粗糙呈顆粒結(jié)節(jié)，邊緣不整，呈“菜花樣”菌落液體培基：表面生長成菌膜二、生物學性狀培養(yǎng)特性二、生物學性狀細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件二、生物學性狀生化反應不發(fā)酵糖類觸酶試驗陽性熱觸酶試驗：將細菌懸液68℃30min，再加過氧化氫對區(qū)別結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌有重要意義結(jié)核分枝桿菌熱觸酶試驗陰性二、生物學性狀生化反應抵抗力四怕：對酒精敏感對濕熱敏感對紫外線敏感對抗結(jié)核藥物（鏈霉素、異煙肼、利福平等）敏感，但易產(chǎn)生耐藥性二、生物學性狀抵抗力四不怕：耐干燥耐酸堿耐染料對青霉素等抗生素耐藥抵抗力二、生物學性狀抵抗力變異性形態(tài)結(jié)構(gòu)變異在異煙肼、溶菌酶等作用下形成L型（多形性）菌落變異R-S型變異，性狀典型→不典型，毒力減弱毒力變異：卡介苗BCG：Calmette和Guérin將牛分枝桿菌經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒活疫苗株，用于預防結(jié)核病耐藥性變異易發(fā)生，抗結(jié)核藥物的結(jié)核菌株日益增多二、生物學性狀變異性二、生物學性狀三、致病性與免疫性致病物質(zhì)—菌體成分，機體免疫病理損傷脂質(zhì)——存在細胞壁，含量與毒力平行索狀因子（糖脂-分枝菌酸+海藻糖）：破壞細胞，引起肉芽腫磷脂：形成結(jié)核結(jié)節(jié)和干酪樣壞死蠟質(zhì)D（分枝菌酸+肽糖脂）：引起遲發(fā)性過敏反應硫酸腦苷脂：抑制吞噬體與溶酶體結(jié)合三、致病性與免疫性致病物質(zhì)—菌體成分，機體免疫病理損傷三、致病性與免疫性致病物質(zhì)—菌體成分，機體免疫病理損傷蛋白質(zhì)有抗原性、本身無毒，如結(jié)核菌素蛋白質(zhì)+蠟質(zhì)D——遲發(fā)型變態(tài)反應。組織壞死、全身中毒癥狀結(jié)核結(jié)節(jié)形成莢膜三、致病性與免疫性致病物質(zhì)—菌體成分，機體免疫病理損傷感染方式多途徑感染：呼吸道、消化道或皮膚損傷侵入機體所致疾病結(jié)核病，疾病種類多樣化，以肺結(jié)核常見三、致病性與免疫性感染方式三、致病性與免疫性所致疾病肺部感染：原發(fā)感染:多發(fā)生于兒童原發(fā)綜合征：原發(fā)灶（肺泡滲出性炎癥）、淋巴管炎和腫大的肺門淋巴結(jié)纖維化和鈣化而自愈復發(fā)：內(nèi)源性感染的來源三、致病性與免疫性所致疾病三、致病性與免疫性所致疾病肺部感染：繼發(fā)感染:多發(fā)生于成人，內(nèi)源性感染病灶多局限，不累及鄰近淋巴結(jié)干酪樣壞死和空洞，菌可隨痰排出，開放性肺結(jié)核三、致病性與免疫性空洞干酪樣壞死所致疾病三、致病性與免疫性空洞干酪樣壞死所致疾病肺外感染：免疫力低下患者常見于腦、腎、骨、關(guān)節(jié)、生殖系統(tǒng)。腦結(jié)核、腎結(jié)核、淋巴結(jié)核、皮膚結(jié)核等痰菌被咽入消化道或食入了消毒不嚴格的牛奶也可引起腸結(jié)核、結(jié)核性腹膜炎等少數(shù)形成全身粟粒性結(jié)核或播散性結(jié)核三、致病性與免疫性所致疾病三、致病性與免疫性免疫性－傳染、免疫、超敏反應共存人體對該菌有較強免疫力（感染率高，發(fā)病率低）主要是細胞免疫，有菌免疫細胞免疫與遲發(fā)型超敏反應同時存在三、致病性與免疫性免疫性－傳染、免疫、超敏反應共存三、致病性與免疫性免疫性結(jié)核菌素試驗（Tuberculintest)（OT試驗）原理：是應用結(jié)核菌素進行皮膚試驗來測定機體對結(jié)核分枝桿菌是否能引起遲發(fā)型超敏反應的一種試驗，以判斷機體對結(jié)核有無免疫力試劑：舊結(jié)核菌素（OT）--主要成分是結(jié)核桿菌蛋白純蛋白衍生物（PPD）方法：前臂皮內(nèi)注射OT或PPD5單位，48-72h后觀察三、致病性與免疫性免疫性三、致病性與免疫性免疫性結(jié)核菌素試驗（Tuberculintest)（OT試驗）結(jié)果：陽性：紅腫硬結(jié)直徑＞5mm，表明曾感染過結(jié)核桿菌/接種BCG強陽性：直徑≥15mm，表明可能有活動性結(jié)核陰性：直徑＜5mm，表明無結(jié)核感染，但應排除原發(fā)感染的早期、老年人、嚴重結(jié)核患者或同時患有其它傳染病、獲得性免疫功能低下等情況

三、致病性與免疫性免疫性三、致病性與免疫性免疫性結(jié)核菌素試驗（Tuberculintest)（OT試驗）應用：選擇卡介苗接種對象、測定卡介苗接種后的免疫效果了解人群自然感染率作為嬰幼兒結(jié)核病的輔助診斷測定腫瘤患者的細胞免疫功能三、致病性與免疫性免疫性三、致病性與免疫性細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件四、微生物學檢查四、微生物學檢查細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件四、微生物學檢查標本采集清晨第一口痰送檢無菌抽取腦脊液、胸水、腹水及關(guān)節(jié)液等盛無菌試管送檢腦脊液標本靜置后，表面有細薄凝塊，取凝塊作涂片或接種培養(yǎng)采集膿液應直接從潰瘍處取膿汁或分泌物四、微生物學檢查標本采集四、微生物學檢查檢驗方法直接涂片染色鏡檢：常用的簡易快速檢查方法齊-尼抗酸染色：痰涂片要厚，觀察至少100個視野。結(jié)核分枝桿菌抗酸染色后呈紅色，其他細菌和細胞為藍色金胺O染色：熒光顯微鏡下見金黃色熒光的結(jié)核分枝桿菌，結(jié)果快速準確結(jié)果應報告“找到或未找到抗酸性桿菌”，而不能報告“找到結(jié)核分枝桿菌”四、微生物學檢查檢驗方法齊-尼抗酸染色結(jié)果報告方式齊-尼抗酸染色結(jié)果報告方式四、微生物學檢查檢驗方法核酸檢測用PCR法快速診斷結(jié)核分枝桿菌感染特異性與敏感性均大于95％抗PPDIgG的檢測

ELISA法檢測患者血清中抗PPDIgG可作為活動性結(jié)核分枝桿菌感染的快速診斷方法，陽性率為80％～90％四、微生物學檢查檢驗方法四、微生物學檢查檢驗方法分離培養(yǎng)無雜菌污染的標本：腦脊液、胸腹水等可直接或離心后取沉渣接種有雜菌污染的標本在接種到培養(yǎng)基之前須做4%NaOH處理15min，以消除雜菌的干擾標本接種于羅琴培養(yǎng)基。37℃，5％~10％CO2培養(yǎng)8周，如果出現(xiàn)干燥呈顆粒狀、灰白色菌落，涂片染色為抗酸陽性，多數(shù)是結(jié)核分枝桿菌。陰性繼續(xù)培養(yǎng)至12周方可報告四、微生物學檢查檢驗方法檢驗方法檢驗方法細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件四、微生物學檢查檢驗方法菌種鑒定：可為結(jié)核病和非典型分枝桿菌病的臨床鑒別和防治提供科學的依據(jù)PCR反向膜探針雜交EHSA法(PCR雜交梳)DNA探針16srRNA基因序列測定高效液相色譜(HPLC)檢測四、微生物學檢查檢驗方法四、微生物學檢查檢驗方法動物接種可用于結(jié)核分枝桿菌的分離和毒力測定此法敏感可靠，但手續(xù)較繁瑣，不能列為常規(guī)常用的豚鼠在接種后3-4周出現(xiàn)局部淋巴結(jié)腫大，身體消瘦，結(jié)核菌素試驗轉(zhuǎn)為陽性剖檢時可看到淋巴結(jié)、肝、脾、腎、肺等臟器的典型結(jié)核病變，由病變處可查到抗酸桿菌或經(jīng)培養(yǎng)有結(jié)核分枝桿菌生長

四、微生物學檢查檢驗方法四、微生物學檢查檢驗方法藥物敏感性試驗耐藥株的增多，應做藥物敏感性試驗，以指導臨床合理用藥。將純培養(yǎng)物菌懸液，接種含各種濃度藥物的固體培養(yǎng)基（改良羅氏培養(yǎng)基）上，同時做不含藥物的對照組常用方法：絕對濃度法（間接法）、比率法四、微生物學檢查檢驗方法藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）—我國30多年來一直沿用的常規(guī)藥敏試驗方法。1.菌懸液制備：

（1）臨床分離分枝桿菌的新鮮培養(yǎng)物（初生長2周），初生長2周后和貯存培養(yǎng)物須在改良羅氏培養(yǎng)基上二次傳代，取2~3周的亞培養(yǎng)物進行試驗。

（2）菌懸液制備：取上述培養(yǎng)物（需刮取斜面各個部分）放玻璃磨菌器底部，插入磨菌棒捻動使呈乳酪樣，以0.5%吐溫-80生理鹽水磨菌稀釋，與標準麥氏比濁管比濁配成1mg/ml的菌懸液。藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）—我國3藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）

2.含藥培養(yǎng)基制備：改良羅氏培養(yǎng)基每100ml加入1ml抗結(jié)核稀釋藥液，制成含不同藥物嘗試的培養(yǎng)基斜面?zhèn)溆谩?.

接種：將制備的菌懸液10倍稀釋至10-2mg/ml，以滅菌吸管準確吸取菌液0.1ml分別接種于含藥培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基斜面上，每管接種菌量為10-3mg/ml。置37℃培養(yǎng)四周觀察結(jié)果。藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）4.菌落生長情況：同分離培養(yǎng)（以-、+、2~4+）。5.藥敏結(jié)果判斷：低濃度含藥培養(yǎng)基分枝桿菌未生長者報告敏感（S），生長（1+）以上者報告耐藥（R）。6.質(zhì)量控制：每批試驗應以結(jié)核分枝桿菌參考菌株（H37Rv敏感株）10-3

mg/ml檢測含藥培養(yǎng)基質(zhì)量。要求對照培養(yǎng)基菌落數(shù)在200個以上且無融合，若菌落數(shù)低于50個時，要求重新作藥敏試驗。藥物敏感性試驗－－絕對濃度法（間接法）4.菌落生長情況：同分藥物敏感性試驗比例法：是世界衛(wèi)生組織（WHO）全球結(jié)核病耐藥監(jiān)測項目統(tǒng)一推薦的方法。

1.培養(yǎng)基制備：同上述絕對濃度法。培養(yǎng)基藥物中藥物終濃度為：異煙肼0.2mg/ml，雙氫鏈霉素4mg/ml，利福平40mg/ml，乙胺丁醇2mg/ml。

2.菌液：新鮮菌落制成1.0mg/ml菌懸液，依次稀釋至10-2和10-4

mg/ml。

3.接種：分別接種10-2和10-4

mg/ml菌液0.01ml至對照及含藥培養(yǎng)基斜面。

4.培養(yǎng)：37℃培養(yǎng)4周

藥物敏感性試驗比例法：是世界衛(wèi)生組織（WHO）全球結(jié)核病耐藥藥物敏感性試驗比例法：

5.

結(jié)果的判讀、解釋和報告：計算耐藥百分比，即含藥培養(yǎng)基上菌落數(shù)與無藥培養(yǎng)基上菌落數(shù)相比的百分比。耐藥百分比＝(含藥培養(yǎng)基上菌落數(shù))/(對照培養(yǎng)基上菌落數(shù))×100%)。＜1%者報告敏感（S），≥1%者報告耐藥（R）。

藥物敏感性試驗比例法：

5.

結(jié)果的判讀、解釋和報告：細菌學檢驗11分枝桿菌屬5課件五、防治原則預防：一般性預防：衛(wèi)生宣傳、提高機體抵抗力特異性預防：發(fā)現(xiàn)和治療痰菌陽性者新生兒和結(jié)核菌素試驗陰性的兒童接種卡介苗治療：一般治療：合理營養(yǎng)，注意休息抗結(jié)核藥物鏈霉素、異煙肼、利福平等治療原則：早期、聯(lián)合、適量、規(guī)律、分階段治療和堅持全程五、防治原則預防：第二節(jié)非典型分枝桿菌

是指結(jié)核和麻風分枝桿菌以外的分枝桿菌。因具有抗酸性，故又稱非典型抗酸性菌。廣泛分布于外環(huán)境和人及動物的機體中。已發(fā)現(xiàn)17種以上能引起人類疾病，引起的肺部感染,又難以與結(jié)核分枝桿菌感染區(qū)別，并對常用抗生素和抗結(jié)核藥物耐藥，所以區(qū)分鑒別非典型分枝桿菌具有重要的意義。第二節(jié)非典型分枝桿菌是指結(jié)核和麻風分枝桿菌以外的分枝桿一、光產(chǎn)色分枝桿菌特點是在暗處不產(chǎn)生色素，光照1h后能在48h內(nèi)，菌落轉(zhuǎn)為黃色或橘黃色。對人有致病性的是：堪薩斯分枝桿菌：廣泛分布于水和土壤中,能引起肺內(nèi)外結(jié)核樣的病變。海分枝桿菌：為水中的腐生菌。通過皮膚微小創(chuàng)口侵入，引起所謂的“游泳池肉芽腫”。猿分枝桿菌：先后從猿