動物實驗的基本知識和操作技術(shù)

動物實驗的基本知識和操作技術(shù)動物實驗的基本知識和操作技術(shù)動物實驗的基本知識和操作技術(shù)xxx公司動物實驗的基本知識和操作技術(shù)文件編號：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準審核制定方案設(shè)計，管理制度第二章動物實驗的基本知識和操作技術(shù)第一節(jié)實驗動物藥理學(xué)實驗常用的動物有蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、貓和犬等。常根據(jù)實驗?zāi)康暮鸵筮x用不同的實驗動物。由于不同的動物具有不同的特點，故所選用的動物應(yīng)能較好地反映試驗藥物的選擇性作用，并符合節(jié)約的原則。（一）、實驗動物的選擇原則

1、盡量選擇與人體結(jié)構(gòu)、機能、代謝及疾病特征相似的動物；

2、選用的實驗動物的解剖、生理特點應(yīng)符合實驗?zāi)康模?/p>

3、根據(jù)人與實驗動物對同一刺激的反應(yīng)差異，選用具有明顯反應(yīng)的動物；

4、根據(jù)生物醫(yī)學(xué)研究必須達到的精確度，選用結(jié)構(gòu)功能簡單又能反映研究指標的動物；

5、選用患有人類類似疾病的近交系或突變系動物；

6、選用與實驗設(shè)計、技術(shù)條件、實驗方法等相適應(yīng)的標準化動物；

7、在不影響實驗?zāi)康呐c結(jié)果的前提下，選擇最易獲得、最經(jīng)濟、便于操作管理的動物；

8、供實驗用的動物應(yīng)具備質(zhì)量合格證。

（二）、常用實驗動物的特點

1、蛙和蟾蜍離體心臟能較持久地有節(jié)律地搏動，常用于觀察藥物對心臟的作用；坐骨神經(jīng)和腓腸肌標本可用來觀察藥物對周圍神經(jīng)、神經(jīng)肌肉或橫紋肌的作用；蛙的腹直肌還可以用于鑒定膽堿能藥物的作用。

2、小白鼠是實驗室最常用的一種動物。易于大量繁殖，且價廉，適用需要大量動物的實驗，如藥物篩選、半數(shù)致死量測定、藥物效價比較、抗感染、抗腫瘤藥物及避孕藥物的研究等。

3、大白鼠與小白鼠相似。一些在小白鼠身上不便進行的實驗可選用大白鼠，如藥物抗炎作用的實驗常選用大白鼠踝關(guān)節(jié)制備關(guān)節(jié)炎的模型。此外，也可用大白鼠直接記錄血壓、作膽管插管，或用大白鼠觀察藥物的亞急性或慢性毒性。大白鼠的血壓和人相近，且穩(wěn)定，現(xiàn)常用于抗高血壓藥物實驗。

4、豚鼠是實驗室常用動物之一。對組織胺很敏感，容易致敏，常用于平喘藥和抗組胺藥的實驗。對結(jié)核菌亦敏感，故也用于抗結(jié)核藥的研究。此外還用于離體心臟及平滑肌實驗，其乳頭肌和心房常用于電生理特性及心肌細胞動作電位實驗，研究抗心律失常藥物的機理。

5、家兔溫順、易飼養(yǎng)，常用于觀察藥物對心臟、呼吸的影響及農(nóng)藥中毒和解救的實驗。亦用于研究藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用、體溫實驗、熱原檢查及避孕藥實驗。

6、貓與家兔比較，貓對外科手術(shù)的耐受性強，血壓較穩(wěn)定，故常用于血壓實驗，但價格較貴。此外，貓也常用于心血管藥物及中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的研究。

7、犬藥理實驗需大動物時常用犬。常用于觀察藥物對心臟泵功能和血流動力學(xué)的影響，心肌細胞電生理研究，降壓藥及抗休克藥的研究等。犬還可以通過訓(xùn)練，用于慢性實驗研究，如條件反射、高血壓的實驗治療、胃腸蠕動和分泌實驗、慢性毒性實驗。

（三）、實驗動物選擇的注意事項

由于動物對外界刺激的反應(yīng)存在個體差異，在選擇實驗動物時，還應(yīng)注意動物的年齡、體重、性別、生理狀態(tài)、健康狀況及其品系、等級等因素對實驗的影響。二、實驗動物的性別鑒別與編號

（一）、實驗動物的性別鑒別

藥理學(xué)實驗常用的動物中，較大的動物(如家兔、貓、犬等)可以從生殖器分辨其性別，而較小的動物(如小白鼠、大白鼠、豚鼠等)的性別鑒別，通常以肛門與生殖孔之間的距離來判斷，距離近者為雌性，距離遠者為雄性。

（二）、實驗動物的編號

藥理實驗中常用多只動物同時進行實驗，為避免混亂應(yīng)將動物進行編號。實驗動物編號的目的在于將觀察范圍內(nèi)的同種動物進行區(qū)別，以便于觀察。常用的方法有染色法、耳緣剪孔法、烙印法和號牌法等，可根據(jù)實驗?zāi)康?、動物種類和具備的條件選用，一般編號應(yīng)具有清晰易辨、簡便耐久的特點。貓、犬、兔等較大的動物可用特別的號碼牌固定于身上。小白鼠、大白鼠及白色家兔等用黃色苦味酸涂于動物不同部位進行染色標記而編號。例如在小白鼠，右前肢皮膚外側(cè)涂色標記為1號，腹部右外側(cè)皮膚涂色標記為2號，右后肢皮膚外側(cè)涂色標記為3號，頭部皮膚涂色標記為4號，背部正中皮膚標記為5號，尾巴根部標記為6號，7、8、9號在左側(cè)同1、2、3號，第10號不涂黃色。大白鼠的編號與小白鼠相同。

第二節(jié)實驗動物的捉拿、給藥和處死方法（一）、小白鼠、大白鼠1、捉拿法：小白鼠可采取雙手法和單手法兩種形式。

雙手法：右手提起鼠尾，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，向后方輕拉，小白鼠則將前肢固定于粗糙面上。此時迅速用左手拇指和食指捏住小白鼠頸背部皮膚(圖1)，并以小指與手掌尺側(cè)夾持其尾根部，固定于手中。

單手法：小白鼠置于籠蓋上，先用左手食指與拇指抓住鼠尾，手掌尺側(cè)及小指夾住尾根部，然后用左手拇指與食指捏住頸部皮膚。

圖1小白鼠的捉拿方法圖2大白鼠的捉拿方法大白鼠容易激怒咬人，捉持時左手應(yīng)戴防護手套或用厚布蓋住大鼠，先用右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握住頭部，其余手指與手掌握住背部和腹部(圖2)。不要用力過大，切勿捏其頸部，以免窒息致死。

2、給藥方法小白鼠

（1）、灌胃(po)：左手固定小鼠，右手持灌胃器，灌胃針頭自口角進入口腔，緊貼上腭插入食道(圖3)，如遇阻力，將灌胃針頭抽回重插，以防損傷。常用灌胃量為～ml/10g。（2）、皮下注射(ih)：可用腹部、背部、腹股溝的皮下，此處皮膚比較松弛，也可由助手協(xié)助。注藥量一般為～ml/10g。

（3）、肌肉注射(im)：一人抓住小鼠頭部皮膚和尾巴，另一人持連4號針頭的注射器，將針頭刺入后腿外側(cè)肌肉。注射量一般不超過～ml/只。

（4）、靜脈注射(iv)：將小鼠置入固定器，酒精涂擦尾部，以使血管擴張。自尾部末端刺入，刺入血管后抽針芯可見回血。常用注射量為～ml/10g。

圖3小白鼠的灌胃方法圖4小白鼠的腹腔注射方法（5）、腹腔注射(ip)：將小鼠固定后，從下腹部外側(cè)進針，深度較皮下注射深(圖4)。常用注射量為～ml/10g。

大鼠灌胃、腹腔注射、皮下注射及尾靜脈注射與小鼠相似。靜脈注射也可在麻醉下行舌下靜脈注射。

3、處死方法（1）、頸椎脫位法：

術(shù)者左手持鑷子或用拇指、食指固定小鼠頭后部，右手捏住鼠尾，用力向后上方牽拉，聽到鼠頸部喀擦聲即頸椎脫位，脊髓斷裂，鼠瞬間死亡。（2）、打擊法：用手抓住鼠的尾并提起，朝地面用力撞擊鼠頭致死（也可用小木錘用力打擊鼠頭（3）、吸入麻醉法：吸過量的乙醚。（4）、大量放血法：可采用眼眶動、靜脈放血致死。（5）、空氣栓塞法：將空氣急速注入靜脈致死。小白鼠可注入空氣。（二）蛙和蟾蜍1、捉拿法：左手握持蛙或蟾蜍，食指和中指夾住左前肢，拇指壓住右前肢；右手將雙下肢拉直，左手無名指及小指將其壓住而固定。此法用于淋巴囊注射。毀腦和毀脊髓則用左手食指和中指夾持蛙或蟾蜍的頭部，拇指和無名指小指握持雙下肢，右手持刺針進行操作。2、給藥方法蛙皮下有數(shù)個淋巴囊(圖5)，注藥易吸收，常用腹淋巴囊。注藥時，將蛙四肢固定，使腹部向上，注射針頭從蛙大腿上部刺入，經(jīng)大腿肌層入腹壁肌層，再淺出至腹壁皮下，即是腹淋巴囊。此法可避免藥液外漏。注藥量一般為～ml/只。圖5青蛙的淋巴囊分布3、處死方法斷頭、毀腦法：常用于蛙類?？捎眉舻都羧ヮ^部或用金屬探針經(jīng)枕骨大孔破壞大腦和脊髓而致死。大鼠和小鼠也可用斷頭法處死，術(shù)者需戴手套，兩手分別抓住鼠頭與鼠身，拉緊并顯露頸部，由助手持剪刀，從頸部剪斷頭部。

（三）、豚鼠1、捉拿法：豚鼠性情溫順不咬人，可用左手直接從背側(cè)握持前部軀干，體重小者用一只手捉持，體重大者宜用雙手，右手托住臀部(圖6)2、給藥方法灌胃（見圖6）、皮下注射、肌肉注射及腹腔注射方法基本同小鼠，給藥量稍多。靜脈注射可選后腳掌外側(cè)靜脈或頸外靜脈。圖5豚鼠的捉拿方法圖6豚鼠的灌胃方法

3、處死方法豚鼠可采用注射麻醉法，即注射戊巴比妥鈉麻醉處死。豚鼠可注射麻醉劑量的3倍以上的量腹腔內(nèi)注射。還可采用吸入麻醉法。（四）家兔1、捉拿法：用左手抓住頸背部皮膚(抓的面積越大，其吃重點越分散)，將兔提起，以左手托住其臀部，使兔呈坐位(圖7)圖7家兔的捉拿方法2、給藥方法（1）灌胃：一人將兔身固定于腋下，一手固定兔頭，另一手將開口器放入兔口。另一人將導(dǎo)尿管從開口器孔插入口內(nèi)，再慢慢插入食道和胃(圖8)。為慎重起見，可將胃管外端放入水中，如無氣泡，則可證實導(dǎo)尿管在胃內(nèi)。灌胃量一般為10ml/kg。如用兔固定盒，可由一人操作。圖8家兔的灌胃方法

（2）、靜脈注射：一人固定兔身和兔頭，另一人在兔耳邊緣血管(耳緣靜脈)擴張后，從靜脈末端刺入血管，左手拇指和食指固定針頭和兔耳，右手注藥(圖9)。注藥量一般為2ml/kg，等滲液可達10ml/kg。

皮下、肌肉、腹腔注射與鼠類相似。常用注藥量分別、、ml/kg。

3、處死方法采用注射麻醉法：急速注射ml/kg（50mg/ml）戊巴比妥鈉如兔的耳緣靜脈；大量放血法（暴露頸動脈放血）；空氣栓塞法（注入10-20ml空氣）。（五）貓1、捉拿法：貓較為溫順，可用一只手捉住貓的頸部皮膚，另一只手托起四肢部抱起(圖9)。對兇暴貓，將手慢慢伸入籠內(nèi)，輕撫貓的背、頭、頸部。一只手抓住貓的頸部，取出籠外，另一只手捉住從背到腰部的皮膚。當貓不許手接觸它的皮膚時，可用皮手套或用網(wǎng)捉拿。

圖9家兔的耳緣靜脈注射方法圖10貓的捉拿方法2、給藥方法與兔基本相同3、處死方法采用注射麻醉法：靜脈或腹腔內(nèi)急速注射戊巴比妥鈉麻醉劑量的2-3倍；大量放血法（暴露頸動脈放血）；空氣栓塞法（注入10-20ml空氣）。（六）、犬1、捉拿法：用一捕犬叉夾住犬頸，另一人用一粗棉帶綁住嘴巴，使其不能咬人。如系馴順犬，可突然捉住兩耳，將前足提高，然后綁嘴巴。綁嘴的方法是將扁帶繞上下頜一周，在上頜上打一結(jié)，然后轉(zhuǎn)向下頜，再作一結(jié)，最后將帶牽引至頭后頸背上打第三結(jié)，在此結(jié)上須再打一活結(jié)以固定之。

2、給藥方法腹腔注射：犬被夾住后，用力將犬的頸、頭壓在地上，提起側(cè)后肢，將藥注入腹腔。

靜脈注射：可從后肢外側(cè)小隱靜脈或前肢皮下頭靜脈注射。

3、處死方法采用注射麻醉法：靜脈急速注射戊巴比妥鈉100mg/kg；大量放血法（暴露股動、靜脈放血）；空氣栓塞法（注入70-150ml空氣）。第二節(jié)實驗動物的取血方法一、小鼠和大鼠

1、剪尾取血法：將清醒鼠裝入深顏色的布袋中，將鼠身裹緊，露出尾巴，用酒精涂擦或用溫水浸泡使血管擴張，剪斷尾尖后，尾靜脈血即可流出，用手輕輕地從尾根部向尾尖擠捏，可取到一定量的血液。取血后，用棉球壓迫止血。也可采用交替切割尾靜脈方法取血。用一鋒利刀片在尾尖部切破一段尾靜脈，靜脈血即可流出，每次可取～ml，供一般血常規(guī)實驗。三根尾靜脈可替換切割，由尾尖向根部切割。由于鼠血易凝，需要全血時，應(yīng)事先將抗凝劑置于采血管中，如用血細胞混懸液，則立即與生理鹽水混合。

2、眼球后靜脈叢取血法：左手持鼠，拇指與中指抓住頸部皮膚，食指按壓頭部向下，阻滯靜脈回流，使眼球后靜脈叢充血，眼球外突。右手持1％肝素溶液浸泡過的自制吸血器，從內(nèi)呲部刺入，沿內(nèi)下眼眶壁，向眼球后推進4～5mm，旋轉(zhuǎn)吸血針頭，切開靜脈叢，血液自動進入吸血針筒，輕輕抽吸血管(防止負壓壓迫靜脈叢使抽血更困難)，拔出吸血針，放松手壓力，出血可自然停止。也可用特制的玻璃取血管(管長7～10cm，前端拉成毛細管，內(nèi)徑～1.5mm，長為1cm，后端管徑為0.6cm)。必要時可在同一穿刺孔重復(fù)取血。此法也適用豚鼠和家兔。

3、眼眶取血法：左手持鼠，拇指與食指捏緊頭頸部皮膚，使鼠眼球突出，右手持彎鑷或止血鉗，鉗夾一側(cè)眼球部，將眼球摘出，鼠倒置，頭部向下，此時眼眶很快流血，將血滴入預(yù)先加有抗凝劑的玻璃管內(nèi)，直至流血停止。此法由于取血過程中動物未死，心臟不斷跳動，一般可取鼠體重4％～5％的血液量，是一種較好的取血方法，但只適用一次性取血。

4、心臟取血：動物仰臥固定于鼠板上，用剪刀將心前區(qū)毛剪去，用碘酒、酒精消毒此處皮膚，在左側(cè)第3～4肋間用左手食指摸到心搏，右手持連有4～5號針頭的注射器，選擇心搏最強處穿刺，當針頭正確刺入心臟時，鼠血由于心臟跳動的力量，血自然進入注射器。

5、斷頭取血：實驗者帶上棉手套，用左手抓緊鼠頸部位，右手持剪刀，從鼠頸部剪掉鼠頭迅速將鼠頸端向下，對準備有抗凝劑的試管，收集從頸部流出的血液，小鼠可取血～ml，大鼠可取血5～10ml。

6、頸動靜脈、股動靜脈取血：麻醉動物背位固定，一側(cè)頸部或腹股溝部去毛，切開皮膚，分離出靜脈或動脈，注射針沿動靜脈走向刺入血管。20g小鼠可抽血ml，300g大鼠可抽血8ml。也可把頸靜脈或頸動脈用鑷子挑起剪斷，用試管取血或注射器抽血，股靜脈連續(xù)多次取血時，穿刺部位應(yīng)盡量靠近股靜脈遠心端。

二、豚鼠

1、心臟取血：需二人協(xié)作進行，助手以兩手將豚鼠固定，腹部面向上，術(shù)者用左手在胸骨左側(cè)觸摸到心臟搏動處，一般在第4～6肋間、選擇心跳最明顯部位進針穿刺。針頭進入心臟，則血液隨心跳而進入注射器內(nèi)，取血應(yīng)快速，以防在試管內(nèi)凝血。如認為針頭已刺入心臟，但還未出血時，可將針頭慢慢退出一點即可。失敗時應(yīng)拔出重新操作，切忌針頭在胸腔內(nèi)左右擺動，以防損傷心臟和肺臟而致動物死亡。此法取血量大，可反復(fù)采血。

2、背中足靜脈取血：助手固定動物，將其右或左后肢膝關(guān)節(jié)伸直提到術(shù)者面前，術(shù)者將動物腳背用酒精消毒，找出背中足靜脈，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿注射針刺入靜脈，拔針后立即出血，呈半球狀隆起，用紗布或棉花壓迫止血。可反復(fù)取血，兩后肢交替使用。

三、家兔

1、心臟取血：將動物仰臥在兔板上，剪去心前區(qū)毛，用碘酒、酒精消毒皮膚。用左手觸摸胸骨左緣第3～4肋間隙，選擇心臟跳動最明顯處作穿刺點，右手持注射器，將針頭插入胸腔，通過針頭感到心臟跳動時，再將針頭刺進心臟，然后抽出血液。

2、耳緣靜脈取血：選好耳緣靜脈，拔去被毛，用二甲苯或75％酒精涂擦局部，小血管夾子夾緊耳根部，使血管充血擴張．術(shù)者持粗針頭從耳尖部的血管逆回流方向入靜脈取血，或用刀片切開靜脈，血液自動流出，取血后用棉球壓迫止血，一般取血量為2～3ml，壓住側(cè)支靜脈，血液更容易流出，取血前耳緣部涂擦液體石蠟，可防止血液凝固。

3、耳中央動脈取血：免置入固定箱內(nèi)，用手揉擦耳部，使中央動脈擴張。左手固定兔耳，右手持注射器，中央動脈末端進針，與動脈平行，向心方向刺入動脈。一次取血量為15ml，取血后棉球壓迫止血。注意兔中央動脈易發(fā)生痙攣性收縮。抽血前要充分使血管擴張，在痙攣前盡快抽血，抽血時間不宜過長。中央動脈末端抽血比較容易，耳根部組織較厚，抽血難以成功。

4、股靜脈取血：行股靜脈分離手術(shù)，注射器平行于血管，從股靜脈下端向向心端方向刺入，徐徐抽動針栓即可取血。抽血完畢后，要注意止血。股靜脈易止血，用干紗布輕壓取血部位即可。若連續(xù)多次取血，取血部位應(yīng)盡量選擇離心端。

5、頸靜脈取血：將兔固定于兔箱中，倒置使兔頭朝下，在頸部上l/3的靜脈部位剪去被毛，用碘酒、酒精消毒，剪開一個小口，暴露頸靜脈，注射器向向心端刺入血管，即可取血。此處血管較粗，很容易取血，取血量也較多，一次可取10ml以上，用干紗布或棉球壓迫取血部位止血。

四、貓從前肢皮下頭靜脈、后肢股靜脈、耳緣靜脈取血，需大量血液時可從頸靜脈取血。

五、犬

1、心臟取血：犬心臟取血方法與兔相似。將犬麻醉固定于手術(shù)臺上，暴露胸部，剪去左側(cè)3～5肋間被毛，碘酒、酒精消毒局部，術(shù)者觸摸心搏最明顯處，避開肋骨進針，一般在胸骨左緣外1cm第4肋間處可觸到，用6～7號針頭注射器取血，要垂直向背部方向進針。當針頭接觸到心臟時，即有搏動感覺。針頭進入心腔即有血液進入注射器。一次可采血20ml左右。

2、小隱靜脈和頭靜脈取血：（1）小隱靜脈：從后肢外踝后方走向外上側(cè)，頭靜脈位于前肢腳爪上方背側(cè)正前位。剪去局部被毛，助手握緊腿，使皮下靜脈充盈，術(shù)者按常規(guī)穿刺即可抽出血。

（2）頸靜脈取血：犬以側(cè)臥位固定于犬臺上，剪去頸部被毛，常規(guī)消毒。助手拉直頸部，頭盡量仰。術(shù)者左手拇指壓住頸靜脈入胸腔處，使頸靜脈曲張。右手持注射器，針頭與血管平行，從遠心端向向心端刺入血管，頸靜脈在皮下易滑動，穿刺時要拉緊皮膚，固定好血管，取血后棉球壓迫止血。

3、股動脈取血：麻醉犬或清醒犬背位固定于犬臺上，助手將犬后肢向外拉直，暴露腹股溝，剪去被毛，常規(guī)消毒，并用左手食指、中指觸摸動脈搏動部位，并固定好血管，右手持注射器，針頭與皮膚呈45°角，由動脈搏動最明顯處直接刺入血管，抽取所需血液量，取血后，需較長時間壓迫止血。第三節(jié)實驗動物麻醉麻醉藥的選擇（一）、理想的麻醉藥應(yīng)具備下列三個條件：麻醉完善，實驗過程中動物無掙扎或嗚叫現(xiàn)象，麻醉時間大致滿足實驗要求。對動物的毒性及所觀察的指標影響最小。使用方便。麻醉藥需根據(jù)動物的種類和不同實驗手術(shù)的要求選擇，麻醉必須適度，過淺或過深都會影響手術(shù)或?qū)嶒灥倪M程和結(jié)果。（二）、常用麻醉有下列兩種形式：1、局部麻醉

常用5～10g/l普魯卡因，動物實驗中多采用局部皮下浸潤麻醉。劑量按所需麻醉面積的大小而定，一般不超過50mg/kg。

2、全身麻醉

（1）吸入麻醉乙醚(ether)為吸入性麻醉藥，可用于各種動物，尤其是時間短的手術(shù)或?qū)嶒灐⒁颐训卧诿耷蛏戏湃氩Ａд謨?nèi)，利用其揮發(fā)的性質(zhì)，經(jīng)呼吸道進入肺泡，對動物進行麻醉。吸入后約15～20min開始發(fā)揮作用。其優(yōu)點：麻醉深度易于掌握，比較安全，術(shù)后動物蘇醒較快。缺點：需要專人管理，在麻醉初期常出現(xiàn)強烈興奮現(xiàn)象，對呼吸道有較強的刺激作用，使粘液分泌增加，易阻塞呼吸道而發(fā)生窒息。對于經(jīng)驗不足的操作者，用乙醚麻醉動物時，容易因麻醉過深而致動物死亡。另外乙醚易燃、易爆，對人亦有作用，使用時應(yīng)避火、通風(fēng)，并注意安全。（已少用）

（2）注射麻醉

巴比妥類各種巴比妥類藥物的吸收和代謝速度不同，其作用時間亦長短不一。戊巴比妥鈉(sodiumpentobarbital)在實驗中最為常用。該品為白色粉末，常配成1％～3％水溶液由靜脈或腹腔給藥。一次給藥麻醉的有效作用時間持續(xù)為3～5h，屬中效巴比妥類。靜脈注射時，前1/3劑量可快速注射，以快速度過興奮期；后2/3劑量則應(yīng)緩慢注射，并密切觀察動物的肌肉緊張狀態(tài)、呼吸頻率和深度及角膜反射。動物麻醉后，常因麻醉藥作用、肌肉松弛和皮膚血管擴張，致使體溫緩慢下降，所以應(yīng)設(shè)法保溫。硫噴妥鈉(sodillmthiopental)為淺黃色粉末，其水溶液不穩(wěn)定，故需在使用之前臨時配制成％～5％溶液經(jīng)靜脈注射?！谓o藥可維持～1h。實驗時間較長時可重復(fù)給藥，維持量為原劑量的1/l0～1/5。適用于較短時程的實驗，屬短效或超短效類。巴比妥類對呼吸中樞有較強的抑制作用，麻醉過深時，呼吸活動可完全停止。故應(yīng)注意防止給藥過多、過快。對心血管系統(tǒng)也有復(fù)雜的影響，故這類藥物不用于研究心血管功能的實驗動物麻醉。

烏拉坦(urethane)又名氨基甲酸乙酯，作用性質(zhì)溫和，易溶于水，對動物麻醉作用強大而迅速，安全范圍大，多數(shù)動物實驗都可使用，更適用于小動物麻醉。可導(dǎo)致較持久的淺麻醉，對呼吸無明顯影響。優(yōu)點是價廉，使用簡便，—次給藥可維持4～5h，且麻醉過程較平穩(wěn)，動物無明顯掙扎現(xiàn)象；缺點是蘇醒慢，麻醉深度和使用劑量較難掌握。烏拉坦對兔的麻醉作用較強，是家兔急性實驗常用的麻醉藥，對貓和犬則奏效較慢，在大鼠和兔能誘發(fā)腫瘤，不宜用于長期存活的慢性實驗動的麻醉，本藥易溶于水，使用時配成10％～25％溶液。若注射劑量過大，則可致動物血壓下降，且對呼吸影響也很大。用此藥麻醉時動物保溫尤為重要。

氯醛糖本藥溶解度較小，常配成1％水溶液。使用前需先在水浴鍋中加熱，使其溶解，但加熱溫度不宜過高，以免降低藥效。本藥安全范圍大，能導(dǎo)致持久的淺麻醉，對自主神經(jīng)中樞無明顯抑制作用，對痛覺的影響也小，故特別適用于研究要求保留生理反射(如心血管反射)或神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)的實驗。

實驗中常將氯醛糖與烏拉坦混合使用。以加溫法將氯醛糖溶于25％的烏拉坦溶液內(nèi)，使氯醛糖濃度為5％。犬和貓靜脈注射劑量為～2m1/kg混合液，其中氯醛糖劑量為75～100mg/kg。兔也可用此劑量做靜脈注射。非揮發(fā)性麻醉藥的優(yōu)點：使用簡便，一次給藥(硫噴妥鈉除外)可維持較長時間的麻醉狀態(tài)，手術(shù)和實驗過程中不需要專人管理麻醉，而且麻醉過程比較平穩(wěn)，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。缺點：蘇醒較慢。

二、各種動物的麻醉方法

1、小白鼠根據(jù)需要選用吸入麻醉或注射麻醉。注射麻醉時多采用腹腔注射法。

2、大白鼠多采用腹腔麻醉，也可用吸入麻醉。

3、豚鼠可進行腹腔麻醉，也可將藥液注入背部皮下。

4、貓多用腹腔麻醉，也可用前肢或后肢皮下靜脈注射法。

5、家兔多采用耳緣靜脈麻醉。注射麻醉藥時應(yīng)先快后慢，并密切注意家兔的呼吸及角膜反射等變化。

6、犬多用前肢或后肢皮下靜脈注射。

表1常用注射麻醉藥物的劑量與給藥途徑

三、麻醉動物注意事項

1、不同動物個體對麻醉藥的耐受性不同。因此在麻醉過程中，除參照上述一般藥物用量標準外，還必須密切注意動物的狀態(tài)，以決定麻醉藥的用量。2、注意麻醉的深淺，根據(jù)呼吸的深度和快慢、角膜反射的靈敏度、有無四肢和腹壁肌肉的緊張性以及皮膚夾捏反應(yīng)等進行判斷。當呼吸突然變深變慢、角膜反射的靈敏度明顯下降或消失、四肢和腹壁肌肉松弛、皮膚夾捏無明顯疼痛反應(yīng)時，應(yīng)立即停止給藥。3、靜脈注藥時應(yīng)堅持先快后慢的原則，避免動物因麻醉過深而死亡。麻醉過深時，最易觀察到的是呼吸減慢甚至停止，但仍有心跳。此時應(yīng)立即進行人工呼吸?？捎檬钟泄?jié)奏地壓迫和放松胸廓，或推壓腹腔臟器使膈上、下移動，以證肺通氣，與此同時迅速做氣管切開，并插入氣管套管，連接人工呼吸機以代替徒手人工呼吸，直至主動呼吸恢復(fù)。還可給予蘇醒劑以促進恢復(fù)，常用的蘇醒劑有咖啡因(1mg/kg)、尼可剎米(2～5mg/kg)和洛貝林～1mg/kg)等。心跳停止時應(yīng)進行心臟按摩，注射溫?zé)嵘睇}水和腎上腺素。4、實驗過程中如麻醉過淺，可臨時補充麻醉藥，但一次補充劑量不宜超過總量的1/5。第四節(jié)實驗動物劑量一、給藥劑量的確定

在觀察一個藥物的作用時，應(yīng)該給動物多大的劑量是實驗開始時應(yīng)確定的一個重要問題。劑量太小，作用不明顯；劑量太大，又可能引起動物中毒死亡。給藥劑量可以按下列方法來確定：

1、根據(jù)有關(guān)文獻、實驗教材、實驗參考書提供的藥物劑量。由于藥物批號不同、動物、環(huán)境條件的差異，必要時通過預(yù)備實驗調(diào)整用藥劑量。

2、根據(jù)臨床常用有效劑量換算成實驗動物劑量。

(1)對于新藥劑量的確定，先用小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量，然后用小于中毒量的劑量，或取致死量的若干分之一為應(yīng)用劑量，一般為1/10～1/5。通過預(yù)試來確定。

(2)植物藥粗制劑的劑量多按生藥折算。

(3)化學(xué)藥品可參考化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的已知藥物，特別是其結(jié)構(gòu)和作用都相似的藥物劑量。

(4)確定劑量后，如第一次實驗的作用不明顯，動物也沒有中毒的表現(xiàn)(如體重下降、精神不振、活動減少或其它癥狀)，可以加大劑量再次實驗。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應(yīng)降低劑量再次實驗。一般情況下，在適宜的劑量范圍內(nèi)，藥