免疫組化的應(yīng)用.x課件

平谷區(qū)醫(yī)院劉海明2015.11.18免疫組化在腫瘤診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本免疫組化技術(shù)是以免疫學(xué)的抗原抗體反應(yīng)為其理論基礎(chǔ)發(fā)展起來的一門方法學(xué)，在生物學(xué)領(lǐng)域尤其是在醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)和臨床研究中發(fā)揮重要的作用，對(duì)疾病尤其是腫瘤的診斷、鑒別診斷及發(fā)病機(jī)制的研究提供了強(qiáng)有力的手段。我國在臨床病理診斷上可用抗體293種。點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本點(diǎn)擊添加文本目前常用的抗體分四大類淋巴細(xì)胞標(biāo)志物神經(jīng)及神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物間葉組織標(biāo)記物上皮性標(biāo)記物2.間葉組織標(biāo)記物：SMA，Desmin，Vimentin，Lysozyme，AACT,CD68MyoD1，CD117，這些抗體陽性，表明腫瘤組織起源于間葉組織，如果是惡性腫瘤，就是肉瘤。

3．神經(jīng)及神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物CgA，Synaptophysin，NSE，S-100：NF（神經(jīng)纖維絲蛋白），GFAP，CD99，CD56。4淋巴細(xì)胞標(biāo)志物：Tcell標(biāo)記物：CD3,CD45RO,CD43,CD5,CD8,CD4,ALK,GranmB,CD56。

Bcell標(biāo)記物：CD-20，CD79a，CD23，CD10，Kappa，LambdaCD21CD38，CyclinD1，Bcl-2。

其它：LCA，CD15，CD30，MPO，CD34，TdT，這些抗體用于淋巴瘤33個(gè)亞型的診斷和鑒別診斷。

免疫組化34BE12：角收白抗體，陽性提示良性病變。前列腺抗基底細(xì)胞特異抗體（34BE12）是一種高分子量細(xì)胞角蛋白抗體，它標(biāo)記前列腺基底細(xì)胞陽性率高，而惡性分泌上皮細(xì)胞陰性，前列腺基底細(xì)胞存在與否是判斷癌與非癌的一個(gè)重要標(biāo)志，34BE12明確陽性者都應(yīng)診斷良性，侵潤性前列腺癌34BE12陰性。

P63：抑癌基因，陽性提示良性病變。是一種新近認(rèn)識(shí)的基底細(xì)胞標(biāo)記物，與P53具有同源性，染基底細(xì)胞比34BE12更敏感，因P53在良性增生、萎縮、腺病和不典型增生中可有假陰性，而P63幾乎均呈陽性，在疑難的前列腺病變中應(yīng)用P63或P63加34BE12的混合試劑檢測對(duì)診斷更有幫助。

P504S：一前列腺癌的新標(biāo)記，即使在小的針刺活檢中癌的P504S陽性率仍為95％，而良性腺體（萎縮、腺病、硬化性腺病和基底細(xì)胞增生）均陰性，與34BE12及P63染色結(jié)果正相反，三者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)比明顯，對(duì)前列腺良惡性病變的診斷很有幫助。P504：甲酰基輔酶A消旋酶檢測診斷前列腺癌的敏感性為97％，特異性為100％。

Nm23：是轉(zhuǎn)移抑制基因，其陽性表達(dá)和腫瘤轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。E－Ca，E鈣粘附蛋白，介導(dǎo)細(xì)胞間粘連作用的跨膜糖蛋白，其功能喪失引起細(xì)胞之間連接的破壞，主要用于腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面的研究。

PS2：（雌激素調(diào)節(jié)蛋白），其表達(dá)和ER表達(dá)有關(guān)，可作為內(nèi)分泌治療和預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。

CK18：低分子量角蛋白，主要標(biāo)記各種單層上皮包括腺上皮，而復(fù)層鱗狀上皮常陰性，主要用于腺癌診斷。

CK19：分布于單層上皮和間皮，常用于腺癌診斷，肝細(xì)胞不表達(dá)，而膽管為陽性反應(yīng)。

Heppar1：肝細(xì)胞抗原，正常肝細(xì)胞和高分化肝細(xì)胞癌陽性，低分化肝細(xì)胞癌多弱陽性或陰性。乳腺癌也經(jīng)常成為女性患者未知原發(fā)部位轉(zhuǎn)移癌要鑒別排除的一種疾病。因?yàn)樵谵D(zhuǎn)移癌組織上觀察到明顯的villin免疫組化陽性染色，則這個(gè)腫瘤就極不可能為乳腺來源。其他villin免疫組化染色通常為陰性表達(dá)的腫瘤還有：如卵巢漿液性癌、尿道移行細(xì)胞癌和前列腺癌。間皮瘤也經(jīng)常為villin陰性表達(dá)，因此在一些情況下Villin還可以作為鑒別間皮瘤和腺癌使用抗體的一種。

但是也有一些非胃腸道來源的腫瘤可表達(dá)villin，如子宮內(nèi)膜樣腺癌、卵巢粘液性癌、腎細(xì)胞癌和小部分肺癌。也有一些專家報(bào)道Villin在部分宮頸內(nèi)膜腺癌病例中表達(dá)。

肝癌的診斷：Villin免疫組化染色可以顯示出毛細(xì)膽管結(jié)構(gòu)，因此它也可能在表達(dá)部分肝癌的管狀結(jié)構(gòu)上很有用。多克隆CEA是用于此目的的第一種試劑，而且CD10（CALLA）在表達(dá)肝癌的該結(jié)構(gòu)上也非常有用。多克隆CEA、villin和CD10（CALLA）在肝癌病例上的表達(dá)，相互之間并沒有任何的沖突，因此如果懷疑肝癌的可能性，建議將這三種抗體共同使用以協(xié)助疑難病例的診斷。

Syn：突觸素神經(jīng)組織標(biāo)志：S－100神經(jīng)組織標(biāo)志，存在于神經(jīng)組織，垂體、頸動(dòng)脈體，腎上腺髓質(zhì)、唾液腺、少數(shù)間葉組織，常用于神經(jīng)鞘瘤、惡黑、脂肪肉瘤、軟骨腫瘤診斷。

NSE：主要用于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷。

Chr：嗜鉻素，腎上腺髓質(zhì)含量很高，鑒別腎上腺髓質(zhì)和皮質(zhì)，用于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷。

CKH：高分子角蛋白，主要標(biāo)記鱗狀細(xì)胞腫瘤。

CKL：低分之角蛋白，主要標(biāo)記單層上皮、腺上皮。

EMA：上皮膜抗原，糖蛋白，廣泛分布各種上皮及其腫瘤。AMACR：優(yōu)點(diǎn)在于它是癌癥特異性，只存在于癌癥組織。Rubin稱，AMACR亦可用作其他癌癥的診斷標(biāo)志物。對(duì)各種癌癥細(xì)胞進(jìn)行檢查后發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤都過度表達(dá)AMACR，以結(jié)腸直腸癌和前列腺癌表達(dá)最高。

CD117：胃腸間質(zhì)瘤。

CD10：作為共同急性淋巴母細(xì)胞型白血病抗原，主要表達(dá)于未成熟淋巴細(xì)胞，在Burkitt淋巴癌，慢性髓性白血病等造血系統(tǒng)疾病的診斷中具有應(yīng)用價(jià)值。近幾年來發(fā)現(xiàn)該抗原在造血系統(tǒng)外的某些腫瘤中有表達(dá)，如子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤、惡性黑色素瘤等?？贵w在對(duì)腎細(xì)胞癌進(jìn)行診斷和鑒別時(shí)有一定的參考價(jià)值。SMA：平滑肌肌動(dòng)蛋白，標(biāo)記平滑肌。

CD56：為神經(jīng)細(xì)胞黏附分子，主要分布于大多數(shù)神經(jīng)外胚層來源細(xì)胞，常用于星型細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷，也是NK細(xì)胞瘤的重要標(biāo)志，也標(biāo)記小細(xì)胞肺癌。

Des（Desmin）：結(jié)蛋白，廣泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞，高分化高表達(dá)、低分化低表達(dá)。

MSA：肌特異性肌動(dòng)蛋白，廣泛分布于幾乎所有肌型細(xì)胞中。

CD68：存在于骨髓和各神經(jīng)組織的巨噬細(xì)胞用于粒細(xì)胞白血病、各種單核細(xì)胞來源腫瘤、包括惡性纖維組織細(xì)胞瘤診斷（首選）。

CD34：表達(dá)于早期淋巴造血干細(xì)胞、祖細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、胚胎纖維母細(xì)胞和某些神經(jīng)組織細(xì)胞，多用于標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，血管源性腫瘤的診斷，GIST80－90％。CD31也標(biāo)記血管內(nèi)皮。

NESTIN：神經(jīng)干細(xì)胞中極為豐富。

Ost：成骨素，為骨化細(xì)胞分泌。

AAT：抗胰蛋白酶纖維組織細(xì)胞來源腫瘤ACT抗糜蛋白酶p16：陽性提示惡性?；蚨ㄎ挥谌祟惾旧w9p21，通過與細(xì)胞周期蛋白D競爭性結(jié)合CDK4／6，阻止細(xì)胞從G1期至S期，從而對(duì)有絲分裂進(jìn)行負(fù)反饋調(diào)節(jié)。p16蛋白在正常、炎癥性宮頸組織上皮中均為陰性表達(dá)，而在CIN和宮頸SCC病變中具有極高的陽性表達(dá)；在CIN病變中伴隨病變級(jí)別升高，其表達(dá)強(qiáng)度亦相應(yīng)升高。借助p16的陽性表達(dá)結(jié)果，有助于診斷CIN病變以及對(duì)CIN病變進(jìn)行客觀分級(jí)。GFAP：膠質(zhì)纖維酸性蛋白神經(jīng)組織標(biāo)志，多用于星形膠質(zhì)瘤診斷。

Tg：甲狀腺球蛋白，甲狀腺癌TG陽性。

CT：降鈣素甲狀腺髓樣癌陽性。

PH：甲狀旁腺素甲狀旁腺腫瘤陽性。TTF－1：在甲狀腺及其腫瘤中的表達(dá)：TTF－1主要表達(dá)在甲狀腺濾泡細(xì)胞中和甲狀旁腺的主細(xì)胞中，TTF－1為甲狀腺分化和甲狀腺球蛋白分泌調(diào)節(jié)的基礎(chǔ)物質(zhì)，可促進(jìn)甲狀腺過氧化物酶、碘／鈉的轉(zhuǎn)運(yùn)，TTF－1與血清TSH的活性有關(guān)，活性的TSH－R可增強(qiáng)TTF－1的表達(dá)。TTF－1在良惡性甲狀腺組織中表達(dá)不同，正常甲狀腺和良性腺瘤表達(dá)多，甲狀腺乳頭狀癌與濾泡癌中表達(dá)少，未分化癌中不表達(dá)，TTF－1在惡性甲狀腺病變中的表達(dá)強(qiáng)度隨年齡增加而增強(qiáng)，而且病變存瘤期長，復(fù)發(fā)機(jī)率高。

TTF－1：在肺癌中的表達(dá)：75％的肺非小細(xì)胞癌（NSCLCs）陽性表達(dá)，腺癌（ACs）明顯高于鱗癌（SCC），90％以上的原發(fā)性小細(xì)胞肺癌（SCLC）表達(dá)陽性，TTF－1在非小細(xì)胞肺癌（NSCLCs）陽性表達(dá)強(qiáng)度與病人的預(yù)后成呈負(fù)相關(guān)，可作為一項(xiàng)獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)，肺的典型性類癌（TCS）均為陰性，表明小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌可能有一個(gè)不同于TCS的共同起源的理論。免疫組化在治療中的應(yīng)用P－Gp：多藥耐藥基因蛋白（P－Gp）－－藥泵作用－－胞膜／胞漿－－陽性率越高，對(duì)下列藥物耐藥性越強(qiáng)：阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素、米托蒽醌、長春花堿、長春新堿、紫彬醇、泰素帝。

谷光甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GSTπ）：解毒作用－－胞漿－－陽性率越高，對(duì)下列藥物耐藥性越強(qiáng)：阿霉素、順鉑、氮芥、環(huán)磷酰胺、瘤可寧。

拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（TOPOⅡ）：靶點(diǎn)作用－－胞核－－陽性率越高，對(duì)下列藥物越有效：蒽環(huán)類抗生素和鬼臼毒素類，如VP16、替尼泊苷、玫瑰樹堿、新霉素、柔紅霉素、表阿霉素、阿霉素、VM