免疫組化的應(yīng)用.x課件

平谷區(qū)醫(yī)院劉海明2015.11.18免疫組化在腫瘤診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本免疫組化技術(shù)是以免疫學(xué)的抗原抗體反應(yīng)為其理論基礎(chǔ)發(fā)展起來的一門方法學(xué)，在生物學(xué)領(lǐng)域尤其是在醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)和臨床研究中發(fā)揮重要的作用，對疾病尤其是腫瘤的診斷、鑒別診斷及發(fā)病機制的研究提供了強有力的手段。我國在臨床病理診斷上可用抗體293種。點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本目前常用的抗體分四大類淋巴細(xì)胞標(biāo)志物神經(jīng)及神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物間葉組織標(biāo)記物上皮性標(biāo)記物2.間葉組織標(biāo)記物：SMA，Desmin，Vimentin，Lysozyme，AACT,CD68MyoD1，CD117，這些抗體陽性，表明腫瘤組織起源于間葉組織，如果是惡性腫瘤，就是肉瘤。

3．神經(jīng)及神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)記物CgA，Synaptophysin，NSE，S-100：NF（神經(jīng)纖維絲蛋白），GFAP，CD99，CD56。4淋巴細(xì)胞標(biāo)志物：Tcell標(biāo)記物：CD3,CD45RO,CD43,CD5,CD8,CD4,ALK,GranmB,CD56。

Bcell標(biāo)記物：CD-20，CD79a，CD23，CD10，Kappa，LambdaCD21CD38，CyclinD1，Bcl-2。

其它：LCA，CD15，CD30，MPO，CD34，TdT，這些抗體用于淋巴瘤33個亞型的診斷和鑒別診斷。

免疫組化34BE12：角收白抗體，陽性提示良性病變。前列腺抗基底細(xì)胞特異抗體（34BE12）是一種高分子量細(xì)胞角蛋白抗體，它標(biāo)記前列腺基底細(xì)胞陽性率高，而惡性分泌上皮細(xì)胞陰性，前列腺基底細(xì)胞存在與否是判斷癌與非癌的一個重要標(biāo)志，34BE12明確陽性者都應(yīng)診斷良性，侵潤性前列腺癌34BE12陰性。

P63：抑癌基因，陽性提示良性病變。是一種新近認(rèn)識的基底細(xì)胞標(biāo)記物，與P53具有同源性，染基底細(xì)胞比34BE12更敏感，因P53在良性增生、萎縮、腺病和不典型增生中可有假陰性，而P63幾乎均呈陽性，在疑難的前列腺病變中應(yīng)用P63或P63加34BE12的混合試劑檢測對診斷更有幫助。

P504S：一前列腺癌的新標(biāo)記，即使在小的針刺活檢中癌的P504S陽性率仍為95％，而良性腺體（萎縮、腺病、硬化性腺病和基底細(xì)胞增生）均陰性，與34BE12及P63染色結(jié)果正相反，三者聯(lián)合應(yīng)用對比明顯，對前列腺良惡性病變的診斷很有幫助。P504：甲?；o酶A消旋酶檢測診斷前列腺癌的敏感性為97％，特異性為100％。

Nm23：是轉(zhuǎn)移抑制基因，其陽性表達(dá)和腫瘤轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。E－Ca，E鈣粘附蛋白，介導(dǎo)細(xì)胞間粘連作用的跨膜糖蛋白，其功能喪失引起細(xì)胞之間連接的破壞，主要用于腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面的研究。

PS2：（雌激素調(diào)節(jié)蛋白），其表達(dá)和ER表達(dá)有關(guān)，可作為內(nèi)分泌治療和預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。

CK18：低分子量角蛋白，主要標(biāo)記各種單層上皮包括腺上皮，而復(fù)層鱗狀上皮常陰性，主要用于腺癌診斷。

CK19：分布于單層上皮和間皮，常用于腺癌診斷，肝細(xì)胞不表達(dá)，而膽管為陽性反應(yīng)。

Heppar1：肝細(xì)胞抗原，正常肝細(xì)胞和高分化肝細(xì)胞癌陽性，低分化肝細(xì)胞癌多弱陽性或陰性。乳腺癌也經(jīng)常成為女性患者未知原發(fā)部位轉(zhuǎn)移癌要鑒別排除的一種疾病。因為在轉(zhuǎn)移癌組織上觀察到明顯的villin免疫組化陽性染色，則這個腫瘤就極不可能為乳腺來源。其他villin免疫組化染色通常為陰性表達(dá)的腫瘤還有：如卵巢漿液性癌、尿道移行細(xì)胞癌和前列腺癌。間皮瘤也經(jīng)常為villin陰性表達(dá)，因此在一些情況下Villin還可以作為鑒別間皮瘤和腺癌使用抗體的一種。

但是也有一些非胃腸道來源的腫瘤可表達(dá)villin，如子宮內(nèi)膜樣腺癌、卵巢粘液性癌、腎細(xì)胞癌和小部分肺癌。也有一些專家報道Villin在部分宮頸內(nèi)膜腺癌病例中表達(dá)。

肝癌的診斷：Villin免疫組化染色可以顯示出毛細(xì)膽管結(jié)構(gòu)，因此它也可能在表達(dá)部分肝癌的管狀結(jié)構(gòu)上很有用。多克隆CEA是用于此目的的第一種試劑，而且CD10（CALLA）在表達(dá)肝癌的該結(jié)構(gòu)上也非常有用。多克隆CEA、villin和CD10（CALLA）在肝癌病例上的表達(dá)，相互之間并沒有任何的沖突，因此如果懷疑肝癌的可能性，建議將這三種抗體共同使用以協(xié)助疑難病例的診斷。

Syn：突觸素神經(jīng)組織標(biāo)志：S－100神經(jīng)組織標(biāo)志，存在于神經(jīng)組織，垂體、頸動脈體，腎上腺髓質(zhì)、唾液腺、少數(shù)間葉組織，常用于神經(jīng)鞘瘤、惡黑、脂肪肉瘤、軟骨腫瘤診斷。

NSE：主要用于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷。

Chr：嗜鉻素，腎上腺髓質(zhì)含量很高，鑒別腎上腺髓質(zhì)和皮質(zhì)，用于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷。

CKH：高分子角蛋白，主要標(biāo)記鱗狀細(xì)胞腫瘤。

CKL：低分之角蛋白，主要標(biāo)記單層上皮、腺上皮。

EMA：上皮膜抗原，糖蛋白，廣泛分布各種上皮及其腫瘤。AMACR：優(yōu)點在于它是癌癥特異性，只存在于癌癥組織。Rubin稱，AMACR亦可用作其他癌癥的診斷標(biāo)志物。對各種癌癥細(xì)胞進行檢查后發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤都過度表達(dá)AMACR，以結(jié)腸直腸癌和前列腺癌表達(dá)最高。

CD117：胃腸間質(zhì)瘤。

CD10：作為共同急性淋巴母細(xì)胞型白血病抗原，主要表達(dá)于未成熟淋巴細(xì)胞，在Burkitt淋巴癌，慢性髓性白血病等造血系統(tǒng)疾病的診斷中具有應(yīng)用價值。近幾年來發(fā)現(xiàn)該抗原在造血系統(tǒng)外的某些腫瘤中有表達(dá)，如子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤、惡性黑色素瘤等?？贵w在對腎細(xì)胞癌進行診斷和鑒別時有一定的參考價值。SMA：平滑肌肌動蛋白，標(biāo)記平滑肌。

CD56：為神經(jīng)細(xì)胞黏附分子，主要分布于大多數(shù)神經(jīng)外胚層來源細(xì)胞，常用于星型細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷，也是NK細(xì)胞瘤的重要標(biāo)志，也標(biāo)記小細(xì)胞肺癌。

Des（Desmin）：結(jié)蛋白，廣泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞，高分化高表達(dá)、低分化低表達(dá)。

MSA：肌特異性肌動蛋白，廣泛分布于幾乎所有肌型細(xì)胞中。

CD68：存在于骨髓和各神經(jīng)組織的巨噬細(xì)胞用于粒細(xì)胞白血病、各種單核細(xì)胞來源腫瘤、包括惡性纖維組織細(xì)胞瘤診斷（首選）。

CD34：表達(dá)于早期淋巴造血干細(xì)胞、祖細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、胚胎纖維母細(xì)胞和某些神經(jīng)組織細(xì)胞，多用于標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，血管源性腫瘤的診斷，GIST80－90％。CD31也標(biāo)記血管內(nèi)皮。

NESTIN：神經(jīng)干細(xì)胞中極為豐富。

Ost：成骨素，為骨化細(xì)胞分泌。

AAT：抗胰蛋白酶纖維組織細(xì)胞來源腫瘤ACT抗糜蛋白酶p16：陽性提示惡性。基因定位于人類染色體9p21，通過與細(xì)胞周期蛋白D競爭性結(jié)合CDK4／6，阻止細(xì)胞從G1期至S期，從而對有絲分裂進行負(fù)反饋調(diào)節(jié)。p16蛋白在正常、炎癥性宮頸組織上皮中均為陰性表達(dá)，而在CIN和宮頸SCC病變中具有極高的陽性表達(dá)；在CIN病變中伴隨病變級別升高，其表達(dá)強度亦相應(yīng)升高。借助p16的陽性表達(dá)結(jié)果，有助于診斷CIN病變以及對CIN病變進行客觀分級。GFAP：膠質(zhì)纖維酸性蛋白神經(jīng)組織標(biāo)志，多用于星形膠質(zhì)瘤診斷。

Tg：甲狀腺球蛋白，甲狀腺癌TG陽性。

CT：降鈣素甲狀腺髓樣癌陽性。

PH：甲狀旁腺素甲狀旁腺腫瘤陽性。TTF－1：在甲狀腺及其腫瘤中的表達(dá)：TTF－1主要表達(dá)在甲狀腺濾泡細(xì)胞中和甲狀旁腺的主細(xì)胞中，TTF－1為甲狀腺分化和甲狀腺球蛋白分泌調(diào)節(jié)的基礎(chǔ)物質(zhì)，可促進甲狀腺過氧化物酶、碘／鈉的轉(zhuǎn)運，TTF－1與血清TSH的活性有關(guān)，活性的TSH－R可增強TTF－1的表達(dá)。TTF－1在良惡性甲狀腺組織中表達(dá)不同，正常甲狀腺和良性腺瘤表達(dá)多，甲狀腺乳頭狀癌與濾泡癌中表達(dá)少，未分化癌中不表達(dá)，TTF－1在惡性甲狀腺病變中的表達(dá)強度隨年齡增加而增強，而且病變存瘤期長，復(fù)發(fā)機率高。

TTF－1：在肺癌中的表達(dá)：75％的肺非小細(xì)胞癌（NSCLCs）陽性表達(dá)，腺癌（ACs）明顯高于鱗癌（SCC），90％以上的原發(fā)性小細(xì)胞肺癌（SCLC）表達(dá)陽性，TTF－1在非小細(xì)胞肺癌（NSCLCs）陽性表達(dá)強度與病人的預(yù)后成呈負(fù)相關(guān)，可作為一項獨立的預(yù)后指標(biāo)，肺的典型性類癌（TCS）均為陰性，表明小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌可能有一個不同于TCS的共同起源的理論。免疫組化在治療中的應(yīng)用P－Gp：多藥耐藥基因蛋白（P－Gp）－－藥泵作用－－胞膜／胞漿－－陽性率越高，對下列藥物耐藥性越強：阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素、米托蒽醌、長春花堿、長春新堿、紫彬醇、泰素帝。

谷光甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GSTπ）：解毒作用－－胞漿－－陽性率越高，對下列藥物耐藥性越強：阿霉素、順鉑、氮芥、環(huán)磷酰胺、瘤可寧。

拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（TOPOⅡ）：靶點作用－－胞核－－陽性率越高，對下列藥物越有效：蒽環(huán)類抗生素和鬼臼毒素類，如VP16、替尼泊苷、玫瑰樹堿、新霉素、柔紅霉素、表阿霉素、阿霉素、VM