流式細(xì)胞儀配套用試劑注冊申報相關(guān)問題的建議

流式細(xì)胞儀配套用試劑注冊申報相關(guān)問題的建議發(fā)布時間：2009-01-04

流式細(xì)胞儀配套用試劑是指標(biāo)記有熒光染料（直接或間接法）的各種細(xì)胞分化抗原的單克隆抗體，這些抗體與血細(xì)胞或組織細(xì)胞的各種抗原分子特異性結(jié)合，與流式細(xì)胞儀配套使用，對人血液、骨髓液或其它體液標(biāo)本中的被標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行分類和計數(shù)。這類試劑的生產(chǎn)工藝和檢測原理非常相似，但種類繁多且臨床用途極為廣泛?；诹魇郊?xì)胞儀配套用試劑注冊申報工作的需要、該類試劑在臨床及檢驗醫(yī)學(xué)的應(yīng)用實踐、注冊檢測的實際情況以及部分生產(chǎn)企業(yè)的建議，結(jié)合《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》、《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》以及《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定，現(xiàn)對流式細(xì)胞儀配套用試劑注冊申報的相關(guān)問題提出以下建議。

一、產(chǎn)品分類

根據(jù)目前流式細(xì)胞儀配套用試劑在臨床中的實際應(yīng)用情況，綜合評價其風(fēng)險程度，建議將流式細(xì)胞儀配套用試劑統(tǒng)一歸為第三類體外診斷試劑管理。

二、注冊檢測

對于首次注冊產(chǎn)品，申請人擬定申報產(chǎn)品的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)后，應(yīng)當(dāng)在國家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行3個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢測。流式細(xì)胞儀配套用試劑的注冊檢測一般應(yīng)包括以下性能指標(biāo)：

（一）準(zhǔn)確性

驗證試劑盒檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，可用同一試劑盒多次檢測相應(yīng)的質(zhì)控品或校準(zhǔn)品，每次檢測結(jié)果均應(yīng)在其靶值范圍內(nèi)。

（二）線性范圍

線性是指檢測結(jié)果與檢測樣品中分析物濃度成比例的能力。對于本類試劑，驗證線性范圍即是要評估試劑的檢測結(jié)果具有可接受線性的細(xì)胞濃度范圍。

（三）批內(nèi)及批間不精密度

用于驗證相互獨立的檢測結(jié)果間的差異程度，常用變異系數(shù)（CV）表示。本類試劑的不精密度評價應(yīng)包括細(xì)胞計數(shù)比例差異和平均熒光強(qiáng)度差異兩方面。

平均熒光強(qiáng)度主要反應(yīng)抗原的表達(dá)密度，在疾病狀態(tài)下，許多抗原表達(dá)并不表現(xiàn)為陽性細(xì)胞的比例異常，而是其抗原密度表達(dá)異常，反映在流式細(xì)胞儀上即是平均熒光強(qiáng)度過強(qiáng)或過弱?？紤]到目前平均熒光強(qiáng)度已經(jīng)成為臨床實踐中較廣泛應(yīng)用的一個觀察指標(biāo)，故在此對該性能的不精密度做出要求。

另外，鑒于國內(nèi)目前尚無該類試劑相應(yīng)的國家參考品，企業(yè)在進(jìn)行注冊檢測時應(yīng)自行提供相應(yīng)的質(zhì)控品或校準(zhǔn)品。

三、

臨床試驗

（一）樣本例數(shù)

流式細(xì)胞儀配套用試劑臨床研究的總樣本數(shù)至少為500例。用于罕見病、特殊病種的診斷試劑，申請人可提出申請酌減樣本量。

（二）試驗方法

1、臨床研究單位的選擇

流式細(xì)胞儀配套用試劑的臨床研究應(yīng)在三家以上（含三家）省級醫(yī)療衛(wèi)生單位進(jìn)行，對于特殊使用目的產(chǎn)品（例如，用于HIV檢測），可以在相應(yīng)的市級以上?？漆t(yī)院或其它診療機(jī)構(gòu)開展臨床研究。建議在國內(nèi)不同城市選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本有一定地域代表性；臨床研究單位須具有流式細(xì)胞儀專業(yè)的技術(shù)人員及相應(yīng)的儀器設(shè)備，確保該項研究的實施。

2、研究方法

（1）對于中國境內(nèi)已有同類試劑批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的臨床研究

選擇中國境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱實驗試劑）與之進(jìn)行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。

（2）對于中國境內(nèi)無同類試劑批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品臨床研究

選擇國外已上市、普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用實驗試劑與之進(jìn)行對比試驗研究，證明本品與對照試劑等效或優(yōu)于對照試劑。同時，還應(yīng)結(jié)合每個患者的臨床病情對研究對象進(jìn)行跟蹤研究，以綜合判斷實驗的檢測結(jié)果，驗證其與臨床病情的一致性。

3、健康人群的選擇

臨床研究應(yīng)包括對部分來自健康人群樣本的檢測，確定正常參考值（范圍），比較正常組和疾病組結(jié)果，以便對申報產(chǎn)品的臨床性能做出合理的分析。正常組樣本數(shù)一般在50-100例左右，對于新試劑或臨床意義有待明確的試劑，可適當(dāng)增加正常樣本數(shù)。

4、臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

5、流式細(xì)胞儀檢測的專業(yè)性較強(qiáng)，實驗操作人員應(yīng)有一定的流式細(xì)胞儀檢測經(jīng)驗，并有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，實驗試劑和對照試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

6、對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸、ROC曲線分析、Logistic回歸或Cox回歸等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對實驗試劑和對照試劑的兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（r2）、回歸方程斜率及y軸截距等指標(biāo)。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價實驗試劑與對照試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

7、在數(shù)據(jù)收集過程中，如發(fā)現(xiàn)有樣本在實驗組和對照組間的檢測結(jié)果有差異，應(yīng)采用第三種同類試劑進(jìn)行驗證試驗，同時結(jié)合患者的臨床病情來判斷差異的原因并確認(rèn)正確的結(jié)果。

五、其它需要注意的問題

（一）樣本采集和儲存

1、說明書中應(yīng)注明樣本采集的方法、樣本的儲存及轉(zhuǎn)運、抗凝劑的選擇等事項，如果試劑盒可用于除血液、骨髓液外的其它類型標(biāo)本，如腹腔穿刺液、腦脊液、淋巴結(jié)處理后懸液等，還應(yīng)詳細(xì)注明其操作方法及注意事項。

2、說明書中應(yīng)注明樣本采集后至抗體標(biāo)記處理的時間間隔、樣本標(biāo)記后至上機(jī)檢測采集數(shù)據(jù)的時間間隔，必要時還應(yīng)提供相關(guān)的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)資料

（二）干擾/交叉反應(yīng)

生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)對可能產(chǎn)生干擾或交叉反應(yīng)的物質(zhì)進(jìn)行相關(guān)的驗證試驗，并在產(chǎn)品說明書的【注意事項】中注明相關(guān)情況，如未做這些驗證實驗，也應(yīng)在說明書中說明情況并提醒用戶在實際操作中注意。

1、含過量內(nèi)源性物質(zhì)（如溶血、高脂、高膽紅素）的樣本是否會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，對結(jié)果無影響