黃褐斑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的應(yīng)用研究概況

黃褐斑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的應(yīng)用研究概況本文綜述了國內(nèi)外有關(guān)黃褐斑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的幾種方法：雌激素全身攻擊法、紫外線照射法和微量定點(diǎn)注射輔以紫外線照射法。在總結(jié)每種模型方法特點(diǎn)的同時(shí)，指出了黃褐斑中醫(yī)病證模型的研究方向。標(biāo)簽：黃褐斑;動(dòng)物模型;綜述黃褐斑為臨床常見的慢性黑素增多性皮膚病之一。多表現(xiàn)為形狀不規(guī)則的淡褐色或淡黑色斑，對稱分布于額、眉、頰、鼻、上唇等顏面皮膚，因形似蝴蝶，故又名蝴蝶斑。中醫(yī)稱“面塵”、“黧黑斑”。其病程較長、發(fā)展緩慢、以中青年女性多見，嚴(yán)重影響美觀，現(xiàn)已成為醫(yī)學(xué)和美容界共同面臨的難題。迄今為止，不論中醫(yī)還是西醫(yī)都尚無療效確切的治療良藥。因此，尋找組方合理、高效安全的美白祛斑制劑，已成為目前藥學(xué)和化妝品領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)。其中建立切實(shí)可行的動(dòng)物模型是藥效學(xué)得以進(jìn)行的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。關(guān)于黃褐斑的動(dòng)物模型研究國內(nèi)外均有報(bào)道，但無公認(rèn)的造模方法，現(xiàn)將近幾年來的動(dòng)物造模研究歸納、分析、總結(jié)如下，以期對今后的探索有所啟迪。1雌激素全身攻擊法黃褐斑作為中西醫(yī)的一種疑難皮膚疾患，盡管其病因病機(jī)十分復(fù)雜，但普遍認(rèn)為：內(nèi)分泌失調(diào)、紫外線照射、遺傳是其發(fā)病的主要因素。過偉峰[1]等根據(jù)黃褐斑的發(fā)生與內(nèi)分泌紊亂有關(guān)及目前通行的“雌激素和黃體酮增多進(jìn)而刺激黑素細(xì)胞而致色素沉著”的發(fā)病學(xué)假說，用黃體酮攻擊雌性小鼠，使其內(nèi)分泌紊亂來復(fù)制黃褐斑動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。并以肝、皮膚組織中酪氨酸、MDA（丙二醛）、SOD（超氧化物歧化酶）含量變化及皮膚黑素細(xì)胞增長情況為考察造模是否成功的指標(biāo)。過氏實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：以2倍、8倍于人臨床等效量的黃體酮攻擊雌性小鼠1個(gè)月后，黃體酮高劑量組的皮膚、肝酪氨酸酶含量明顯高于正常及低劑量組（P＜0.01），從而證實(shí)該小鼠模型符合黃褐班發(fā)病的生化學(xué)改變特征。病理學(xué)檢測可見模型組黑素細(xì)胞明顯增多，成簇分布于毛囊基底細(xì)胞團(tuán)中，呈強(qiáng)陽性反應(yīng)（P＜0.01）。正常組小鼠鼠抗人單克隆抗體HMB45標(biāo)記皮膚僅在毛囊、皮脂腺基底細(xì)胞中見少量黑素細(xì)胞；病理圖像學(xué)多參數(shù)定量分析結(jié)果顯示，模型組皮膚黑色素著色面積、深度明顯大于正常組（P＜0.05）。這從病理學(xué)角度進(jìn)一步證實(shí)，用本方法制作的小鼠黃褐斑動(dòng)物模型是成功的。此后王氏[2]成功復(fù)制了該造模方法，用以探討省衛(wèi)生廳資助課題—蝴蝶霜治療黃褐斑的作用機(jī)理研究。2紫外線照射法根據(jù)紫外線照射是黃褐斑的主要加重和致病因素之一，國外學(xué)者Imokawa[3]等應(yīng)用紫外線照射對黑素增多性皮膚病動(dòng)物模型做了較為詳細(xì)的研究。Imokawa選用棕黃色豚鼠，分別采用UVB（中波紫外線）、PUVA（光化學(xué)療法）兩種方法致黑素形成。在UVB連續(xù)3天照射后，可見明顯的黑色沉著，一周后色素沉著達(dá)到最大量。病理切片顯示：未經(jīng)UVB照射的豚鼠表皮黑素含量為:200-400/mm2；經(jīng)UVB照射后豚鼠表皮黑素分布呈樹枝狀，含量達(dá)到800～1000/mm2；PUVA采用UVA（長波紫外線）照射，同時(shí)向豚鼠腹腔注射8-MOP（8-甲氧基補(bǔ)骨脂素），連續(xù)照射一周后也可產(chǎn)生較為明顯的色素沉著。并運(yùn)用UVB造模觀察了酪氨酸酶抑制劑對黑素細(xì)胞數(shù)和含量影響，證實(shí)了采用紫外線照射用于黑素增多性皮膚病動(dòng)物模型研究的可行性；日本學(xué)者豬木彩子[4]也采用UVB照射小鼠的模型方法研究了木槿提取物抑制黑素生成的作用。國內(nèi)學(xué)者潘揚(yáng)、曹亮等[5]參考相關(guān)文獻(xiàn)，對黃褐斑病因進(jìn)行分析，日光照射是發(fā)生黃褐斑的重要因素。過度日光照射后黃褐斑幾乎均加重。長期UVB照射可使黑素細(xì)胞增殖。根據(jù)這一假說進(jìn)行了UVB照射復(fù)制黃褐斑動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯?。用UVB照射雌性白色豚鼠一個(gè)月，并以豚鼠皮膚黑素細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)及皮膚和肝臟組織酪氨酸、SOD、MDA含量變化作為考察指標(biāo)，進(jìn)一步證實(shí)紫外線照射復(fù)制該模型的科學(xué)性。李洪武等[6]應(yīng)用紫外線照射棕黃色豚鼠的造模方法進(jìn)行了祛斑中藥-白術(shù)對豚鼠皮膚色素沉著抑制作用這一國家3微量定點(diǎn)注射輔以紫外線照射由于經(jīng)日光曝曬或紫外線的過多照射可促發(fā)黃褐斑并使其加劇。有學(xué)者[10]據(jù)此以及色斑的外形采用微量定點(diǎn)注射法將黑斑形成液注入幼年豬皮下不同深度，輔用紫外線照射以形成類似褐斑的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。具體實(shí)驗(yàn)方法為：采用特制黑斑定位板固定在動(dòng)物已備皮處，消毒后，將已配制好的黑斑形成液充分混勻后依次進(jìn)行皮下注射。以后每天1次用黑斑形成液輕輕點(diǎn)擦外部相應(yīng)處并每天用紫外線燈照射，對照組用生理鹽水代替黑斑形成液，連續(xù)60天后，取豬背部的對照皮膚和黑斑形成處皮膚進(jìn)行切片、染色，并用光鏡和電鏡進(jìn)行觀察。結(jié)果：受試動(dòng)物皮下形成肉眼可見的類似褐斑形狀和大小的黑斑斑點(diǎn)。通過皮膚組織切片染色并用光鏡和透射電鏡觀察，黑斑形成處黑素細(xì)胞產(chǎn)生的黑素顆粒比與正常對照組有明顯增多（P＜0.05）。綜上所述，目前黃褐斑的動(dòng)物造模主要有：雌激素全身攻擊法、紫外線照射法及微量定點(diǎn)注射輔以紫外線照射等幾種方法。其中，過氏采用的雌激素全身攻擊小鼠，使其內(nèi)分泌紊亂及國內(nèi)外的紫外線照射法與黃褐斑的發(fā)病原因相似；微量定點(diǎn)注射輔以紫外線照射形成的動(dòng)物黑斑則完全依賴黑斑形成液和紫外光等外源性因素誘導(dǎo)產(chǎn)生，故應(yīng)注意到動(dòng)物模型本身并不完善，只是單一的從病因的一個(gè)方面反映了疾病的表現(xiàn)，尚不能完全理解黃褐斑病因病機(jī)的復(fù)雜性，且動(dòng)物的病因?qū)W與人的相似性仍存在不確定性，基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)與臨床應(yīng)用還有差距。紫外線照射法從黃褐斑病因和癥狀兩個(gè)方面來模擬，相比其他造模方法要成熟，但仍要對建立模型的各項(xiàng)指標(biāo)如照射劑量、觀察時(shí)間及測量指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化比較；并且對采用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種類、性別等也應(yīng)進(jìn)行分析研究，進(jìn)一步完善黃褐斑動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。另外，黃褐斑的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型還應(yīng)注重在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，采用模擬癥狀和模擬中醫(yī)病因相結(jié)合的造模方法，塑造出符合中醫(yī)辨證論治要求的病證結(jié)合模型。參考文獻(xiàn)[1]過偉峰，徐立，項(xiàng)曉人，等.建立小鼠黃褐斑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的初步研究[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2001,7(2):49-51[2]王志國.蝴蝶霜治療黃褐斑的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國藥師，2006,9(7):588-590[3]ImokawaG,KawaiM,MishimaY,etal.DifferentialanalysisofexperimentalhypermelanosisinducedbyUVB,PUVA,andallergiccontactdermatitisusingabrownishguineapigmodel[J].ArchDermatolRes.1986,278(5):352-362[4]豬木彩子.木槿提取物抑制黑素生成的作用(2)[J].國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊，2005，27（4）：246[5]潘揚(yáng)，曹亮，許惠琴，等.建立黃褐斑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的初步研究[J]．成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2003,26(4):27-29[6]李洪武，朱文元，夏明玉，等.白術(shù)等對UVB誘導(dǎo)豚鼠皮膚色素沉著的抑制作用[J].中華皮膚科雜志，2000,33(6):386-388[7]方晶，朱文元，張美華.橙皮苷對中波紫外線誘導(dǎo)豚鼠色素沉著抑制作用的研究[J].臨床皮膚科雜志，2007，36（3）：141-144[8]潘建英，張玉彬，帕它木·莫合買提，等.煙酰胺干預(yù)UVB誘導(dǎo)豚鼠皮膚色素沉著的作用