細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè) 6、試劑卡片技術(shù)

試劑卡片技術(shù)細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)的創(chuàng)新湛江安度斯生物有限公司2016年7月實(shí)驗(yàn)助手APP授權(quán)發(fā)布創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)力?

了解創(chuàng)新的必要過程分析技術(shù)(PAT)指出：–精確和可靠的預(yù)測(cè)反映出對(duì)過程的了解–過程的了解與風(fēng)險(xiǎn)成反比–對(duì)過程越了解風(fēng)險(xiǎn)就越低2質(zhì)量源于設(shè)計(jì)Quality

by

Design

(QbD)“Qualitycannotbetestedintopharmaceuticalproducts.Rather,

itresultsfrom

a

qualityorientedprocessdesign…withoutspecificon-stream

analyticalinstruments,finalproductqualityisneitherpredictablenorcontrollable”.藥品的質(zhì)量不是檢測(cè)出來的，而是源于質(zhì)量為導(dǎo)向的流程設(shè)計(jì)……沒有專門的在線分析儀器，終產(chǎn)品的質(zhì)量既不可測(cè)也不可控。阿賈斯S.侯賽因博士，藥品評(píng)價(jià)和研究中心（CDER）藥物科學(xué)處副主任，在第十七屆國(guó)際過程分析化學(xué)論壇上提出他的過程分析技術(shù)觀點(diǎn)。（國(guó)際過程分析技術(shù)論壇/2003）3過程分析技術(shù)與質(zhì)量源于設(shè)計(jì)理念如何支持內(nèi)毒素檢測(cè)？*?

內(nèi)毒素檢測(cè)的策略應(yīng)基于：–

對(duì)產(chǎn)品和過程的了解–

風(fēng)險(xiǎn)管理–

適當(dāng)?shù)倪^程檢測(cè)?

為了評(píng)估產(chǎn)品污染的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)，使用定量檢測(cè)方法比使用限量檢測(cè)方法更可取，有利于產(chǎn)品質(zhì)量趨勢(shì)追蹤及在超過指標(biāo)并導(dǎo)致產(chǎn)品不合格前識(shí)別和糾正偏差。*美國(guó)FDA行業(yè)指南，熱原和內(nèi)毒素檢測(cè)：?jiǎn)柵c答——2012年6月4將創(chuàng)新應(yīng)用到實(shí)踐中?

30多年來，CharlesRiver的微生物解決方案團(tuán)隊(duì)一直致力于將創(chuàng)新應(yīng)用到實(shí)踐中。?

隨著制藥工業(yè)對(duì)過程分析技術(shù)和質(zhì)量源于設(shè)計(jì)的日益重視，客戶需要不同的解決方案。?

我們的科學(xué)家明白簡(jiǎn)化內(nèi)毒素檢測(cè)過程的必要性。5將創(chuàng)新應(yīng)用到實(shí)踐中?

我們堅(jiān)信有一個(gè)更簡(jiǎn)單、更好的方法，所以開發(fā)了革命性的Endosafe?-PTS??

Endosafe?-PTS?2006年獲得FDA認(rèn)證。?

儀器需要符合細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)、必須操作簡(jiǎn)單、攜帶方便有助于滿足PAT的要求——可在供試品采集現(xiàn)場(chǎng)獲得結(jié)果，我們?cè)谠O(shè)計(jì)PTS時(shí)將這些銘記在心。6將創(chuàng)新應(yīng)用到實(shí)踐中?

Endosafe?-PTS?可以節(jié)省用戶寶貴的時(shí)間和金錢。?

它只需使用傳統(tǒng)鱟試驗(yàn)所需供試品用量的1/4。?

快速、完整和精確，我們革命性的卡片技術(shù)使全世界的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員進(jìn)行實(shí)時(shí)內(nèi)毒素檢測(cè)成為現(xiàn)實(shí)。7快速內(nèi)毒素檢測(cè)系統(tǒng)——?jiǎng)?chuàng)新實(shí)踐?

Endosafe?-PTS??

Endosafe?-MCS??

Endosafe?-Nexus?8卡片技術(shù)加樣槽

鱟試劑

顯色基質(zhì)

光學(xué)池試劑被分裝在一次性聚苯乙烯卡片上并干燥：供試品通道（1、3）放大圖加樣槽加樣槽光學(xué)池試劑位置試劑位置泵連接泵連接鱟試劑顯色基質(zhì)供試品陽(yáng)性通道（2、4）放大圖光學(xué)池試劑位置試劑位置鱟試劑+內(nèi)毒素顯色基質(zhì)試劑卡片是如何工作的?

卡片的標(biāo)定–以美國(guó)國(guó)家內(nèi)毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品（USPRSE）確定不同濃度標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素對(duì)應(yīng)的反應(yīng)時(shí)間–確定添加內(nèi)毒素的值(PPC)10試劑卡片如何工作的?

將標(biāo)定結(jié)果制作成校準(zhǔn)碼。–

校準(zhǔn)碼（CalibrationCode）中包含了標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)時(shí)間和添加內(nèi)毒素濃度等信息，該信息能在分析報(bào)告書（CoA）中找到。?

軟件讀取校準(zhǔn)碼，生成標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過檢測(cè)各反應(yīng)通道的反應(yīng)時(shí)間，將其與預(yù)存標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，從而得到供試品檢測(cè)值和內(nèi)毒素回收率，如同傳統(tǒng)的動(dòng)態(tài)法鱟試驗(yàn)。11反應(yīng)時(shí)間添加內(nèi)毒素濃度121243使用PTS鍵盤輸入卡片及供試品信息PTS工作示意13MCS

&

PTS

參數(shù)?

15分鐘內(nèi)獲得動(dòng)態(tài)顯色法鱟試驗(yàn)結(jié)果?

兩個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)的檢測(cè)范圍，添加中點(diǎn)濃度內(nèi)毒素–

10-0.1、5.0-0.05、1.0-0.01、0.5-0.005EU/ml–

添加中點(diǎn)濃度內(nèi)毒素–

校準(zhǔn)碼使用RSE制備–

無需自行制備內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品?

符合現(xiàn)行美國(guó)藥典/歐洲藥典/中國(guó)藥典的規(guī)定?

利用現(xiàn)有的Endosafe內(nèi)毒素特異緩沖液，具有內(nèi)毒素特異性14卡片技術(shù)簡(jiǎn)化細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)?

無需–

用戶制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，這是檢測(cè)誤差的主要來源–

制備供試品陽(yáng)性對(duì)照–

使用多種配套用品–

幾個(gè)小時(shí)的專門培訓(xùn)?

快速，開始到結(jié)束只需15分鐘?

高度靈活的平臺(tái)——單次使用、便攜及實(shí)時(shí)供試品分析有助于消除風(fēng)險(xiǎn)放行?

計(jì)算機(jī)聯(lián)網(wǎng)多卡片和Nexus系統(tǒng)，可替代中心實(shí)驗(yàn)室酶標(biāo)儀和試管儀15PTS快速內(nèi)毒素檢測(cè)?PTS可在15分鐘內(nèi)快速獲得檢測(cè)結(jié)果，所需試劑（鱟試劑、內(nèi)毒素、顯色基質(zhì)）預(yù)置于一次性使用的卡片中，簡(jiǎn)化所需操作。?PTS是高度靈活、便攜式平臺(tái)，可用于生產(chǎn)現(xiàn)場(chǎng)、研發(fā)實(shí)驗(yàn)室、純化室等等。?PTS使用非常容易，無需特殊培訓(xùn)，無需制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。16MCS

多卡片式檢測(cè)系統(tǒng)?與PTS使用相同的試劑卡片，15分鐘內(nèi)可快速獲得5個(gè)供試品的結(jié)果。?MCS可用Endoscan-V軟件追蹤和趨勢(shì)分析結(jié)果。?MCS使用非常容易，無需特殊培訓(xùn)，無需制備標(biāo)準(zhǔn)曲線17Endosafe

Nexus18Endosafe

Nexus?

第一臺(tái)全自動(dòng)系統(tǒng)，專為鱟試驗(yàn)設(shè)計(jì)?

將鱟試劑卡片技術(shù)、大包裝卡片、自動(dòng)化液體處理以及簡(jiǎn)化數(shù)據(jù)管理合為一體?

每輪可檢測(cè)48-60個(gè)供試品?

占地面積小–

54″LX20″WX30″H(137X51X76cm)19細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)的未來20目前的BET模式所有供試品送到QC成品放行過程監(jiān)控水系統(tǒng)關(guān)鍵供試品必須立即檢測(cè)！怎么辦？原材料用具研發(fā)21供試品管理（11個(gè)步驟）取樣供試品送到數(shù)據(jù)分析中心填寫檢測(cè)表格錄入檢測(cè)表格供試品送到QC實(shí)驗(yàn)室供試品分批供試品送到QC暫存檢測(cè)信息檢查供試品檢測(cè)數(shù)據(jù)審核簽名通知生產(chǎn)人員結(jié)果典型供試品管理綜覽22與PAT看齊的BET模式15分鐘獲得關(guān)鍵供試品檢測(cè)結(jié)果！QC實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的供采樣現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，結(jié)試品果送到QC實(shí)驗(yàn)室成品放行水系統(tǒng)用具過程監(jiān)控水系統(tǒng)用具研發(fā)23供試品數(shù)據(jù)管理：使用PTS取樣供試品用PTS檢測(cè)文件送到數(shù)據(jù)分析中心填寫檢測(cè)表格X供試品送到QC暫檢測(cè)信息檢查錄入檢測(cè)表格供試品分批存XXX數(shù)據(jù)審核簽名供試品送到QC實(shí)驗(yàn)室供試品檢測(cè)通知生產(chǎn)人員結(jié)果典型供試品管理綜覽24期望的未來BET模式采樣現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，結(jié)果供試品在QC實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，結(jié)果送到送到QA/QC審核：過程監(jiān)控水系統(tǒng)QA/QC審核：成品放行水系統(tǒng)用具研發(fā)用具25供試品數(shù)據(jù)管理：帶電子數(shù)據(jù)的PTSXX用PTS檢測(cè)供試品獲得結(jié)果取樣文件送到數(shù)據(jù)分析中心填寫檢測(cè)表格XXXX供試品送到QC暫存檢測(cè)信息檢查供試品分批錄入檢測(cè)表格XXX在線審核數(shù)據(jù)簽名

通知生產(chǎn)人員結(jié)果供試品測(cè)試供試品送到QC實(shí)驗(yàn)室典型供試品管理綜覽26卡片技術(shù)符合細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定?

符合美國(guó)FDA以及USP/EP/ChP細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法要求?

使用經(jīng)美國(guó)FDA認(rèn)證的LAL–

經(jīng)認(rèn)證的顯色法試劑，鱟資源使用是傳統(tǒng)方法的1/20?

用USPRSE制作校準(zhǔn)碼?

3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用中點(diǎn)濃度制備供試品陽(yáng)性對(duì)照?

供試品和供試品陽(yáng)性對(duì)照各平行兩管?

穩(wěn)定性–

始終符合適用要求–

兼容制藥/生物制藥配方?

可使其具有內(nèi)毒素特異性–

使用能阻斷葡聚糖干擾的稀釋劑27這是替代方法嗎？?

不是，這是鱟試劑，與藥典中細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中描述的一樣?

只要求進(jìn)行產(chǎn)品驗(yàn)證（干擾驗(yàn)證），正如所有其它鱟實(shí)驗(yàn)方法一樣?

替代方法是指那些不符合細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，要求進(jìn)行替代方法驗(yàn)證以及產(chǎn)品驗(yàn)證的方法，比如：重組C因子和以配合基為基礎(chǔ)的技術(shù)。28鱟試驗(yàn)方法美國(guó)FDA/USP/EP認(rèn)為PTS卡片與傳統(tǒng)鱟實(shí)驗(yàn)方法一樣是屬于同一類別：–

凝膠法–

終點(diǎn)顯色法–

KTA-動(dòng)態(tài)濁度法–

KCA-動(dòng)態(tài)顯色法和卡片技術(shù)29PTS/MCS

應(yīng)用?

醫(yī)藥?

終產(chǎn)品?

生物制藥?

醫(yī)療設(shè)備?

透析診所?

核醫(yī)學(xué)?

中間產(chǎn)品?

潔凈室供試品?

緩沖區(qū)?

清洗驗(yàn)證?

研發(fā)供試品?

化學(xué)合成藥??

干細(xì)胞研究?

注射用水及原料30Endosafe?

PTS/MCS供試品干擾驗(yàn)證31產(chǎn)品驗(yàn)證?

驗(yàn)證產(chǎn)品可分為以下2步：–干擾初篩試驗(yàn)–干擾驗(yàn)證321：PTS/MCS干擾初篩?

制備并檢測(cè)若干個(gè)濃度的供試品稀釋液–

介于供試品原液（未經(jīng)稀釋）和MVC或MVD之間?

每片抑制/增強(qiáng)卡片(PTS220)可檢測(cè)四個(gè)供試品稀釋濃度?

用靈敏度足夠的卡片確認(rèn)無干擾濃度或稀釋倍數(shù)?

可能的話請(qǐng)留一個(gè)安全系數(shù)（避免在MVD或接近MVD檢測(cè)）332：PTS/MCS干擾驗(yàn)證?

檢測(cè)三批獨(dú)立的產(chǎn)品?

使用所需靈敏度的卡片?

確保符合所有適用標(biāo)準(zhǔn)?

驗(yàn)證文件，包括日后放行實(shí)驗(yàn)中使用與驗(yàn)證中相同的供試品制備方法的說明34PTS/MCS驗(yàn)證有效性有效的試驗(yàn)為?

回收率50-200%?

供試品變異系數(shù)<25%?

供試品陽(yáng)性對(duì)照變異系數(shù)<25%35實(shí)驗(yàn)人員/試劑/實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證試劑信息檢測(cè)范圍：1-0.01EU/mL添加內(nèi)毒素：0.17EU/mL36儀器驗(yàn)證儀器信息制造商/儀器序列號(hào)校準(zhǔn)有效期便攜式檢測(cè)

Endosafe

05.Mar.201系統(tǒng)(PTS)

PTS1740537干擾初篩試驗(yàn)1.供試品信息?內(nèi)毒素限值:3EU/ml?產(chǎn)品濃度:1ml/ml?MVD=(3EU/mlx1ml/ml)/0.01EU/ml=300?檢測(cè)濃度:1/1,1/10,1/50,1/100,1/200,1/30038干擾初篩試驗(yàn)3.結(jié)果用于驗(yàn)證所選擇的稀釋倍數(shù)/濃度:1/20039b.干擾試驗(yàn)（驗(yàn)證）批次1結(jié)果40b.干擾試驗(yàn)（驗(yàn)證）批次2結(jié)果41b.干擾試驗(yàn)（驗(yàn)證）批次3結(jié)果42驗(yàn)證結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍:1-0.01EU/ml相關(guān)系