莨菪烷類抗膽堿藥物分析

關(guān)于莨菪烷類抗膽堿藥物分析第1頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六學(xué)習(xí)要求掌握莨菪烷類藥物的鑒別和特殊雜質(zhì)檢查方法原理與應(yīng)用熟悉含量測(cè)定的酸性染料比色法、非水滴定法和HPLC法掌握莨菪烷類抗膽堿藥物的結(jié)構(gòu)特征、理化性質(zhì)與分析方法之間的關(guān)系4123了解其他分析方法在莨菪烷類藥物分析中的應(yīng)用第2頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第一節(jié)莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)顛茄生物堿的來源：從茄科植物，如顛茄、莨菪和曼陀羅等中提取的生物堿，由莨菪醇與不同有機(jī)酸所成的酯。作用：具有對(duì)M受體阻斷作用第3頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)

硫酸阿托品

氫溴酸東莨菪堿

（atropinesulfate）(Scopolaminehydrobromide）第一節(jié)莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)第4頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第一節(jié)莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)氫溴酸山莨菪堿(Anisodaminehydrobromide）氫溴酸后馬托品(Hormatropinehydrobromide）第5頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第一節(jié)莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)樟柳堿(Anisodine）甲溴東莨菪堿(MethscopolaminBromide）第6頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第一節(jié)莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)（二）主要化學(xué)性質(zhì)1.

水解性

阿托品和東莨菪堿分子結(jié)構(gòu)中，具有酯的結(jié)構(gòu)，易水解。以阿托品為例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)，其反應(yīng)結(jié)構(gòu)式:

2.

堿性

阿托品和東莨菪堿結(jié)構(gòu)中，五原脂環(huán)含有叔胺氮原子，較強(qiáng)的堿性，易于酸成鹽，如阿托品pKb1為4.353.

旋光性

氫溴酸東莨菪堿含有不對(duì)稱碳原子，左旋體比旋度為-24°至-27°。阿托品雖然含有不對(duì)稱碳原子，但外消旋化，無旋光性第7頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第二節(jié)鑒別反應(yīng)鑒別反應(yīng)12345托烷生物堿的鑒別反應(yīng)（Vitaili反應(yīng)）與硫酸-重鉻酸鉀的反應(yīng)與生物堿顯色劑和沉淀劑的反應(yīng)

色譜法

光譜鑒別法第8頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六阿托品、莨菪堿等托烷類生物堿水解后生成莨菪酸，均可發(fā)生Vitaili反應(yīng)

生成具有共軛結(jié)構(gòu)的陰離子而顯深紫色

與發(fā)煙硝酸共熱，得到黃色三硝基衍生物，放冷，加醇制氫氧化鉀少許，即脫羧

一、托烷生物堿的鑒別反應(yīng)（Vitaili反應(yīng)）第二節(jié)鑒別反應(yīng)第9頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第二節(jié)鑒別反應(yīng)例1

氫溴酸山莨菪堿的鑒別取本品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色殘?jiān)爬?，加乙?~3滴濕潤，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。

第10頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第二節(jié)鑒別反應(yīng)二、與硫酸-重鉻酸鉀的反應(yīng)三、與生物堿顯色劑和沉淀劑的反應(yīng)

阿托品＋氯化汞醇試液→黃色沉淀東莨菪堿＋氯化汞醇→白色復(fù)鹽沉淀第11頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六氫溴酸東莨菪堿的鑒別即生成白色沉淀（與阿托品及后馬托品的區(qū)別）

取本品約10mg，加水1ml溶解后，置分液漏斗中分取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，殘?jiān)屑佣然囊掖既芤?.5ml

加氨試液使成堿性后，加三氯甲烷5ml，搖勻

第二節(jié)鑒別反應(yīng)（例2）第12頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第二節(jié)鑒別反應(yīng)生物堿沉淀試劑反應(yīng)條件及結(jié)果碘化鉍鉀試液（Dragendorff試劑）橙紅或棕紅色沉淀碘化鉀碘試液(Wagnen試劑)棕色或棕褐色沉淀碘化汞鉀試液(Mayen試劑)在酸性或堿性溶劑中生成白色或淡黃色沉淀三硝基苯酚試液（Hager試劑或苦味酸試液）結(jié)晶性沉淀并有特定熔點(diǎn)硅鎢酸試液（Bertrend試劑）白色、淡黃色或黃棕色沉淀磷鎢酸試液（Scheibler試劑）酸性或中性溶液中，淡黃色沉淀表13-2常用的生物堿沉淀試劑及反應(yīng)Tab.13-2Theprecipitationreagentsandreactionfortestingalkaloids

第13頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第二節(jié)鑒別反應(yīng)四、光譜鑒別法通過比較λmax、λmin或吸收光譜的一致性進(jìn)行鑒別，也可比較其吸光度或吸收系數(shù)的比值來鑒別絕大多數(shù)生物堿原料藥都采用IR法鑒別

UV

IR第14頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六四、光譜鑒別法氫溴酸東莨菪紅外光譜TheinfraredspectrumofScopolamine

Hydrobromide

第二節(jié)鑒別反應(yīng)第15頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第二節(jié)鑒別反應(yīng)c色譜法一般用于已知生物堿的鑒別TLCHPLCGCPC五、色譜法第16頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六例4

Ch.P氫溴酸山莨菪堿注射液TLC鑒別取本品1ml，置水浴上蒸干。取殘?jiān)c消旋山莨菪堿對(duì)照品，分別加甲醇制成10mg/ml的溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一氧化鋁（中性，活度Ⅱ-Ⅲ級(jí)）薄層板上，以三氯甲烷-無水乙醇（95∶5）為展開劑，展開，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液-碘化鉀碘試液（1∶1）。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)位置和顏色，應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。第二節(jié)鑒別反應(yīng)第17頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第三節(jié)特殊雜質(zhì)與檢查氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)檢查氫溴酸東莨菪堿來源：

茄科植物顛茄、白曼陀羅、莨菪中等提?。ㄎ覈茁恿_的干燥品：洋金花中提取東莨菪堿，制成氫溴酸鹽）

制備方法：

洋金花粗粉乙醇/滲漉滲漉液減壓蒸餾浸膏H2SO4/提取酸性提取液Na2CO3,CHCl3/提取總生物堿Na2CO3,CHCl3/分離東莨菪堿HBr/成鹽氫溴酸東莨菪堿（粗品）75%C2H5OH/精制成品第18頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第三節(jié)特殊雜質(zhì)與檢查特殊雜質(zhì)與檢查取本品0.50g，加水10ml溶解后，依法測(cè)定（附錄ⅥH），pH值應(yīng)為4.0～5.5。－強(qiáng)酸弱堿取本品0.15g,加水5ml溶解后，在15～20℃加高錳酸鉀滴定液(0.02mol/L)0.05ml，10分鐘內(nèi)紅色不得完全消失。－阿撲東莨菪堿、其他含有不飽和雙鍵的有機(jī)物質(zhì)取本品0.10g，加水2ml溶解后，分成兩等份：一份中加氨試液2～3滴，不得發(fā)生渾濁；另一份中加氫氧化鉀試液數(shù)滴，只許發(fā)生瞬即消失的類白色渾濁。－阿撲阿托品、顛茄堿

酸度易氧化物其他生物堿第19頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六一、酸性染料比色法的基本原理UV

第四節(jié)含量測(cè)定第20頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六應(yīng)用示例硫酸阿托品片的含量測(cè)定精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液4ml，振搖提取后，靜置使分層；分取三氯甲烷液，照紫外-可見分光光度法，在420nm波長處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。第四節(jié)含量測(cè)定第21頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第四節(jié)含量測(cè)定BECDA有機(jī)試劑的選擇水分的影響水相最佳pH值的選擇酸性染料的選擇及其濃度酸性染料中雜質(zhì)的影響酸性染料比色法的影響因素第22頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六

水性最佳pH值：使得BH+和In-最多

酸性染料及其濃度：定量結(jié)合；對(duì)離子對(duì)的溶解性好；有較高的吸收度；足夠量即可

有機(jī)溶劑的選擇：提取效率高，氯仿最理想

水分的影響：影響結(jié)果，脫水劑或?yàn)V紙除去水分

酸性染料中的有色雜質(zhì)：有機(jī)溶劑萃取除去第四節(jié)含量測(cè)定第23頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第四節(jié)含量測(cè)定測(cè)定法精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠2.0ml，振搖提取兩分鐘后，靜止分層，分取澄清的三氯甲烷液，在420nm波長處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算，并將結(jié)果與1.027相乘，即得本品（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O相當(dāng)標(biāo)示量的百分含量。百分標(biāo)示量式中Ax、AS分別為供試品和對(duì)照品溶液的吸光度；CS為對(duì)照品溶液的濃度mg/ml；m為樣品質(zhì)量；為平均片重。1.027為（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O與（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O的質(zhì)量換算系數(shù)。第24頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六Fig.13-2TheUV-spectrumofatropinesulfatewithBTBions1.離子對(duì)2.染料空白（對(duì)照品平行測(cè)定，空白吸收可被扣除）3.阿托品（水溶液在420nm附近無吸收）第四節(jié)含量測(cè)定第25頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六一、非水溶液滴定法當(dāng)HA酸性較強(qiáng)時(shí)，反應(yīng)不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應(yīng)順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸第四節(jié)含量測(cè)定第26頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml結(jié)果HClO4滴定空白試驗(yàn)校正指示劑堿性溶液pKb>10，冰醋酸中滴定突躍不明顯，需加入醋酐，使堿性增強(qiáng)，突躍更明顯第四節(jié)含量測(cè)定第27頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六適用范圍廣

分離模式多樣

檢測(cè)手段多樣靈敏

選擇和專屬性強(qiáng)

分離速度快重復(fù)性好

HPLC優(yōu)點(diǎn)各國藥典中采用HPLC法對(duì)莨菪類生物堿的含量和有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行直接分析測(cè)定的比例不斷增加。

第四節(jié)含量測(cè)定第28頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六色譜保留常常較弱，從而影響到它們的含量或有關(guān)物質(zhì)HPLC測(cè)定的專屬性和準(zhǔn)確度。采用離子對(duì)高效液相色譜法，可以改善它們的色譜保留行為，并實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確測(cè)定。

在反相液相色譜條件下呈離子狀態(tài)的藥物，如有機(jī)堿類、有機(jī)酸類等調(diào)整流動(dòng)相的pH，抑制它們的解離，以改變色譜保留行為。但并不都能獲得滿意的結(jié)果。

第四節(jié)含量測(cè)定第29頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六了解藥物在體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變化

獲得藥代參數(shù)和藥物轉(zhuǎn)化、代謝的方式、途徑等信息有助于對(duì)所研究的藥物作出綜合評(píng)價(jià)

概念：研究生物機(jī)體中藥物及其代謝物和內(nèi)源性物質(zhì)的質(zhì)與量變化規(guī)律的分析方法學(xué)

體內(nèi)藥物分析通過分析手段第五節(jié)體內(nèi)藥物分析

第30頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六去除蛋白質(zhì)

綴合物的水解

液-液提取

固相提取

化學(xué)衍生化

12345生物樣品組成復(fù)雜，干擾雜質(zhì)多，一般需經(jīng)分離、純化，排除干擾后才能進(jìn)行測(cè)定第五節(jié)體內(nèi)藥物分析

第31頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六有些藥物的生物樣品即使經(jīng)預(yù)處理和富集，采用HPLC-UV測(cè)定時(shí)仍有干擾；而且對(duì)于小劑量或生物利用度低的藥物，采用UV檢測(cè)、甚至熒光檢測(cè)時(shí)，靈敏度也不能滿足要求現(xiàn)代色譜和光譜的聯(lián)用技術(shù)集色譜的高分離效能和光譜的高專屬性與高靈敏度于一體，尤其是液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)，對(duì)于絕大多數(shù)有機(jī)堿性藥物的檢測(cè)限能達(dá)10pg/ml。存在問題解決辦法第五節(jié)體內(nèi)藥物分析

第32頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六復(fù)雜生物樣品中微量藥物定量測(cè)定專屬有效的方法色譜與光譜聯(lián)用技術(shù)集色譜的高分離效能和光譜的高專屬性與高靈敏度于一體

特點(diǎn)作用藥物代謝物定性鑒定和含量測(cè)定常用的方法

第五節(jié)體內(nèi)藥物分析第33頁，共39頁，2022年，5月20日，4點(diǎn)19分，星期六第五節(jié)體內(nèi)