凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗操作規(guī)程

凝聚胺介質(zhì)交叉配血試驗操作規(guī)程(SOP文件)1目的作為介質(zhì)輔助用于完全抗體及不完全抗體的臨床篩選檢測及輔助用于臨床交叉配血實驗。2檢驗原理紅細胞表面帶有大量的負電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)性聚集，當(dāng)紅細胞懸浮在電解質(zhì)時，陽離子會被紅細胞的負電荷所吸引，此時紅細胞則被擴散的雙層離子云所圍繞，而形成2。｛3電位，Zeta電位決定紅細胞之間的排斥作用。凝聚胺技術(shù)首先利用低離子溶液(LIM)，降低介質(zhì)的離子強度，減少紅細胞周圍的陽離子云，以促進紅細胞和血清(血漿)中的抗體結(jié)合。其后，加入凝聚胺(Polybrene)溶液，它是一種高價陽離子多聚物、肝素中和劑，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細胞表面帶有的負電荷，使紅細胞Zeta電位降低，縮短紅細胞之間的距離，使紅細胞產(chǎn)生非特異性的凝聚。最后，加入懸浮液(Resuspending),Resuspending具有中和凝聚胺(Polybrene)陽離子的作用，使正常的紅細胞非特異性凝聚散開，試驗結(jié)果為陰性；但如果紅細胞被相應(yīng)的抗體致敏，則會被凝聚胺凝結(jié)，凝集就不會散開，試驗結(jié)果為陽性。3儲存條件及有效期未開封試劑應(yīng)貯存于2℃~25℃、相對濕度不大于80%,無腐蝕性氣體的室內(nèi)；已開封試劑應(yīng)貯存于相對濕度不大于80%，無腐蝕性氣體和通風(fēng)良好的室溫環(huán)境，試劑用后應(yīng)及時擰緊瓶蓋保存；未開封試劑的有效期為二年，在有效期內(nèi)的已開封試劑應(yīng)在開封后的6個月內(nèi)使用完。4樣本要求新鮮血清，含￡口丁人抗凝血漿、3%~5%的紅細胞懸液。不能使用溶血標本及含枸椽酸鈉、肝素抗凝血漿標本。5檢驗方法輔助交叉配血試驗取試管二支，標主次側(cè)，主側(cè)管加病人血清（血漿）2滴，加供血者3%~5%紅細胞懸液（洗滌或不洗滌均可）1滴,次側(cè)管反之。各加LIM0.65ml,混合均勻后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均勻。用離心機3400轉(zhuǎn)/min（相當(dāng)于1000g離心力）離心10秒,然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。輕輕搖動試管，目測紅細胞有無凝集，如無凝集，則必須要重做。最后加入Resuspending2滴，輕輕搖動試管混合并同時觀察結(jié)果。如果在60秒內(nèi)凝集散開，代表是由Polybrene引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合；如凝集不散開，則為紅細胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。如反應(yīng)可疑，可進一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。6注意事項可以用含EDTA之血漿代替血清使用。若病人血清（血漿）含肝素，如洗腎患者，須多加4?6滴Polybrene溶液以中和肝素。本試劑盒的操作方法也適用于抗體鑒定。若試劑使用前為低溫貯存，請回復(fù)室溫再行操作。加做輔助性抗人球蛋白試驗，目的是增加檢測抗-K的敏感性。在冬天室溫極低的情況下，操作交叉配血試驗，某些病人血清中可能含有冷凝集素等因素，而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果出現(xiàn)。若有此懷疑，建議在最后滴入Resuspending時，將試管立即置入37℃水浴中，輕輕搖動試管混合，并在60秒內(nèi)觀察結(jié)果。紅細胞抗原檢測步驟同抗體篩檢試驗，其檢測標準血清用已知標準血清。用戶可使用IgG抗D抗體（效價三64）與RhD陽性紅細胞反應(yīng)做陽性對照實驗，測試本試劑的有效性。ABO血型定型操作規(guī)程（SOP文件）1目的用于鑒定人ABO血型2檢驗原理本品系用產(chǎn)生抗A或抗B血型抗體的雜交瘤細胞培養(yǎng)上清液（或在上清液中加入少量同型腹水）配制而成，采用凝集試驗原理，專供鑒定人ABO血型用。3樣本要求本試劑適用于全血或10%、5%紅細胞懸液。4檢驗方法平板法（玻片法）：本品與受檢者全血或10%紅細胞生理氯化鈉懸液按1:1攪勻，不必再稀釋，按照有無凝集判定結(jié)果5結(jié)果判斷血型抗A試劑抗B試劑A+B+OAB++注：“+”有凝集反應(yīng)，“-”無凝集反應(yīng)6檢驗結(jié)果的解釋將已知的抗人、抗8血型定型試劑與受檢者的紅細胞混合時，與抗A血型定型試劑發(fā)生凝集者即為A型血型，與抗8血型定型試劑發(fā)生凝集者即為B型血型，與抗人、抗8血型定型試劑均發(fā)生凝集者即為AB型血型，與抗人、抗8血型定型試劑均不發(fā)生凝集者即為O型血型。7注意事項對含有較多自身冷凝集的受檢者，在鑒定血型時往往被誤認為AB血型，遇到此種情況，需用37°生理氯化鈉溶液洗滌受檢者細胞2-3次，以去除吸附在紅細胞上的凝集素，然后再鑒定血型。在做配型試驗時，如發(fā)現(xiàn)有不配合現(xiàn)象，則取受檢者血清，用已知A血型或B血型細胞進行反定型試驗，以核實原鑒定的血型是否正確。用立即試管法不能測出亞型（如Ax），需延長作用時間。本品如出現(xiàn)渾濁或變色則不能使用，若開瓶使用時間較長后，最好用已知ABO血型紅細胞檢查結(jié)果是否與已知血型相符，以防制品污染，變質(zhì)失效，而造成鑒定錯誤。在有效期內(nèi)使用。ABO血型反定型操作規(guī)程（SOP文件）1目的用于ABO血型的反定型檢測，該產(chǎn)品不用于血源篩查。2檢驗原理本品系采用三人份同型混合的A1型、B型和O型合格人紅細胞經(jīng)洗滌后懸浮于紅細胞保存液中配制而成。采用凝集試驗原理，用已知的A1，B，O型紅細胞測定被檢者血清/血漿中有無相應(yīng)的抗A或抗B抗體（反定型試驗），結(jié)合正定型結(jié)果判定ABO血型。3檢驗方法試管法取被檢者血清/血漿各50ul分別加入3支標記好的試管中；分別各加50ulA1、B、O試劑紅細胞;搖動試管，混勻。于900g離心15s，或室溫靜止1h;首先檢查是否溶血，（溶血可能是陽性結(jié)果，或是細菌污染。）輕輕搖動懸浮紅細胞。觀察凝集情況，并立即記錄結(jié)果。必要時可借助顯微鏡觀測。4檢驗結(jié)果的解釋ABO血型正反定型反應(yīng)格局表正定型反定型血型抗人試劑抗8試劑A1細胞B細胞O細胞++A++B++O++AB注：“+”有凝集反應(yīng)，“-”無凝集反應(yīng)5注意事項如果在反定型試驗中，受檢者的血清/血漿與O血型紅細胞試劑產(chǎn)生陽性反應(yīng)，則需要添加自身對照試驗。如果自身對照為陽性，表明是冷凝集素導(dǎo)致。如果自身對照為陰性，則表明被檢者血清或血漿中可能存在ABO系統(tǒng)以外的其他血型系統(tǒng)的抗體干擾定型。請按照相關(guān)的試驗方法解決上述定型問題。本品如出現(xiàn)紅細胞顏色變成暗紫色或紅細胞自發(fā)凝集，出現(xiàn)菌落或溶血，則不能使用。若開瓶使用時間較長后，最好用注冊上市的抗人、抗8血型定型試劑檢查結(jié)果是否與已知血型相符，以防制品污染、變質(zhì)失效、而造成檢定錯誤。為了便于鑒別，A1血型紅細胞試劑標簽為藍色，B血型紅細胞試劑標簽為黃色，O血型紅細胞試劑標簽為紅色。乙型肝炎病毒表面抗原操作規(guī)程（SOP文件）.目的用于血液的篩查和臨床乙型肝炎病毒感染的輔助診斷。.檢驗原理本品系用乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）包被的微孔板和酶標記抗-HBs及其他試劑制成，應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法原理檢測人血清和血漿中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）3.適用儀器微量移液器；37℃恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機或洗瓶；計時器；酶標儀，檢測波長450nm，參考波長630nm。.樣本要求樣本采集不需要特殊準備，按照正常的采血技術(shù)收集血液，全血樣本最好先放置37℃處理2小時，再將血樣本充分離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不含有或極少含有血細胞。如果為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充分離心后，最好再放置室溫2小時以上。樣本中含有疊氮鈉會影響試驗的結(jié)果，高度溶血的樣本、沒完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會引起錯誤的結(jié)果。新鮮的樣本在2?8℃無菌條件下可保存一周，新鮮樣本可長期貯存在-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。.檢驗方法實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將洗滌液進行1:40倍稀釋。設(shè)陽性對照2孔，陰性對照3孔，空白對照1孔。加樣：在陽性對照、陰性對照孔內(nèi)分別加入陽性對照、陰性對照50ul，其余每孔加待測血清或血漿50ul。蓋上封孔膠片，置37℃水浴孵育60分鐘。洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。加酶結(jié)合物：空白孔除外，每孔各加酶結(jié)合物50ul。蓋上封孔膠片，置37℃水浴孵育30分鐘。洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。加底物液：每孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul,混勻，蓋上封孔膠片，置37℃條件下避光顯色30分鐘后，加終止液50ul，混勻，終止反應(yīng)。.參考值（參考范圍）終止后盡快測定，波長450nm,先用空白孔校零，測OD值。如果選用雙波長測定，不必設(shè)置空白對照空。按下列公式計算：COV二陰性對照平均OD值X2.1倍陰性對照平均OD值低于或等于0.05,按0.05計算；高于0.05時，按照實際OD值計算。.檢驗結(jié)果的解釋樣品OD值S/COVN1時，待測樣本HBsAg為陽性；樣品OD值S/COVV1時，待測樣本HBsAg為陰性。.注意事項本品僅用于體外診斷，僅限檢測人體血清或血漿；檢測結(jié)果作為診斷指標之一。使用時，從冷藏環(huán)境取出試劑盒，置室溫平衡30分鐘后，方可進行測試。剩余試劑應(yīng)及時封存于冰箱內(nèi)保存，備用。結(jié)果判定需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。封孔膠片不得重復(fù)使用。在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試驗結(jié)果。試劑盒在有效期內(nèi)使用，不同批號不得混用。陽性對照應(yīng)呈陽性，否則全部試驗無效。確保樣本加樣量的準確，如果加樣不準確可能會導(dǎo)致錯誤的試驗結(jié)果。使用微量移液器加樣時，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本。在操作過程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。準確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間。洗板：1用洗板機洗板時，洗板機的加液量應(yīng)注意控制，既避免洗液過量而溢出，又能充滿反應(yīng)微孔，并經(jīng)常檢查加液頭是否堵塞；2洗板機最好每次使用前、后沖洗干凈，防止管路堵塞或腐蝕；3洗板時所用的吸水紙請勿反復(fù)使用。本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳染性物質(zhì)，請按相關(guān)實驗室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。.參考文獻《中國藥典》2010年版三部；《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》 （國食藥監(jiān)械【2007】240號）梅毒螺旋抗體操作規(guī)程（SOP文件）.目的本試劑盒定性檢測人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。適用于血液的篩查及臨床梅毒螺旋體感染的輔助診斷。.檢驗原理本試劑盒采用雙抗原夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗原理。在微孔條上預(yù)包被梅毒螺旋抗體的基因重組抗原，配以酶標記抗原及TMB顯色劑等其他試劑，檢測人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。.適用儀器加樣器、溫箱、洗板機、含波長450nm的酶標儀。.樣本要求本試劑使用樣品為人血清或血漿，含有EDTA、檸檬酸可編輯精品不能檢測含懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血的樣品。樣品中應(yīng)無微生物，可在2?8℃儲存1周，長期儲存應(yīng)低溫凍存，避免反復(fù)凍融。使用前請將樣品室溫平衡30分鐘以上，冷凍樣品實驗前需混勻。.檢驗方法配液：將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。編號：將樣品對應(yīng)微孔板按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照3孔，陽性對照2孔和空白對照1孔。（用雙波長檢測，可不設(shè)空白對照孔）。加樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測樣品或陰性、陽性對照100ul。溫育：用封板膜封板后，置37±1℃溫育60±2分鐘。洗板：小心揭掉封板膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干。加酶：酶孔加入酶標試劑100口1，空白孔除外。溫育：用封板膜封板后，置37±1℃溫育30±1分鐘。洗板：操作同步驟5.5顯色：沒孔加入顯色劑A.B液各50ul,輕輕震蕩混勻，37±1℃避光顯色30±1分鐘。.參考值臨界值（CUTOFF）計算臨界值二陰性對照孔A均值NC+0.18..檢驗結(jié)果的解釋陰性對照孔A值W0.10,陽性對照孔A值三0.80.否則實驗無效。若有1孔陰性對照A值大于0.1應(yīng)舍棄，若兩孔或兩孔以上陰性對照A值大于0.1,應(yīng)重復(fù)實驗。陰性判定:樣品A值（臨界值（CUTOFF）者為TP陰性。陽性判定：樣品A值三臨界值（CUTOFF）者為TP陽性（注意：初試陽性應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試）。.注意事項本品僅用于體外診斷，操作應(yīng)按說明書嚴格進行。封板膜不能重復(fù)使用，不同批號酶標板。酶標試劑和陰性、陽性對照不可混用，不能與其他廠家試劑混用。避免在有揮發(fā)性物質(zhì)及次氯酸類消毒劑（如84消毒劑）的環(huán)境下操作。使用前請將試劑平衡至室溫（平衡30分鐘以上），實驗前將試劑輕輕振蕩混勻，使用后立即放回2?8℃。未用完的微孔板條與干燥劑儀器用自封袋密封2?8℃保存。過期試劑請勿使用。加液時必須用加樣器，并經(jīng)常校對加樣器的準確性。加入不同樣品或不同試劑組分時，應(yīng)更換加樣器吸頭和加樣槽，以防出現(xiàn)交叉污染。洗滌時各孔均需加滿洗液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。使用洗板機應(yīng)設(shè)定30?60秒侵泡時間。在洗板結(jié)束后，必須立即進行下一步，不可使酶標板干燥。避免長時間的中斷實驗步驟，以確保每孔實驗條件的均一。結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。讀取結(jié)果時，應(yīng)擦干酶標板底部，且孔內(nèi)不能有氣泡。不要觸碰孔底部的外壁，指印或劃痕都可能影響板孔的讀值。所用樣品、廢液和廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為硫酸，使用時必須注意安全。顯色時必須加顯色劑A液后再加顯色劑B液，以免顯色過低。由于ELISA反應(yīng)原理的限制，本試劑檢測陰性并不排除TP感染的可能。檢測的陽性結(jié)果必須結(jié)合臨床信息進行分析。甲型肝炎病毒IgM抗體操作規(guī)程

（SOP文件）.目的用本試劑盒檢測人血清或血漿中的抗-HAVIgM,用于甲型肝炎的早期診斷。.檢驗原理本品系用抗人IgM（u鏈）包被的微孔板、甲型肝炎病毒（HAV）抗原和酶標記抗甲型肝炎病毒（抗-HAV）及其他試劑制成，應(yīng)用捕獲法原理檢測人血清或血漿中的抗-HAVIgM，用于甲型肝炎的早期診斷。.適用儀器微量移液器；37℃恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機或洗瓶；計時器；酶標儀，檢測波長450nm，參考波長630nm。.樣本要求樣本采集不需要特殊準備，按照正常的采血技術(shù)收集血液，全血樣本最好先放置37℃處理2小時，再將血樣本充分離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不含有或極少含有血細胞。如果為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充分離心后，最好再放置室溫2小時以上。樣本中含有疊氮鈉會影響試驗的結(jié)果，高度溶血的樣本、沒完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會引起錯誤的結(jié)果。新鮮的樣本在2?8℃無菌條件下可保存一周，新鮮樣本可長期貯存在-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。.檢驗方法二步法實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將洗滌液進行1:40倍稀釋。設(shè)陽性對照2孔，陰性對照3孔，空白對照1孔。加樣：在陽性對照、陰性對照孔內(nèi)分別加入陽性對照、陰性對照50ul，其余每孔加待測血清或血漿50ul（或?qū)⒋郎y血清或血漿用生理鹽水1:1000稀釋后，加入到反應(yīng)孔內(nèi)），蓋上封孔膠片，置37℃水浴孵育30分鐘。洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。加酶結(jié)合物：取出酶結(jié)合物，充分混勻，每孔加50ul（空白孔除外），蓋上封孔膠片，置37℃水浴孵育30分鐘。洗板：同5.4加底物液：每孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul,混勻，蓋上封孔膠片，置37℃條件下避光顯色15分鐘后，加終止液50ul，混勻，終止反應(yīng)。.參考值（參考范圍）終止后盡快測定，波長450nm,空白孔調(diào)零，測OD值。如

果選用雙波長測定，不必設(shè)置空白對照空。按下列公式計算:COV二陰性對照平均OD值X2.1倍樣品OD值S/COVN1時為陽性樣品OD值S/COVV1時為陰性注：陰性對照平均OD值低于或等于0.05,按0.05計算；高于0.05時，按照實際OD值計算。.檢驗結(jié)果的解釋陰性結(jié)果表明樣本中不含有抗-HAVIgM或抗-HAVIgM含量低于試劑盒的檢測范圍。陽性結(jié)果表明樣本中含有抗-HAVIgM或產(chǎn)生非特異反應(yīng)。樣本的檢驗結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符或存在疑問時應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM行確認。對于待檢血清或血漿直接進行50ul加樣，結(jié)果判為陽性的標本，應(yīng)對其用生理鹽水1:1000稀釋后重復(fù)實驗并判定結(jié)果。.注意事項本品僅用于體外診斷，僅限檢測人體血清或血漿；檢測結(jié)果作為診斷指標之一。使用時，從冷藏環(huán)境取出試劑盒，置室溫平衡30分鐘后，方可進行測試。剩余試劑應(yīng)及時封存于冰箱內(nèi)保存，備用。結(jié)果判定需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。封孔膠片不得重復(fù)使用。在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試驗結(jié)果。試劑盒在有效期內(nèi)使用，不同批號不得混用。確保樣本加樣量的準確，如果加樣不準確可能會導(dǎo)致錯誤的試驗結(jié)果。使用微量移液器加樣時，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本；如果采用滴瓶滴加時，請將滴瓶中液體搖勻，并棄去2滴后垂直均速滴加，要避免組分中的液體觸到或濺到微孔邊緣上，特別是酶結(jié)合物。在操作過程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。準確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間。洗板：1用洗板機洗板時，洗板機的加液量應(yīng)注意控制，既避免洗液過量而溢出，又能充滿反應(yīng)微孔，并經(jīng)常檢查加液頭是否堵塞；2洗板機最好每次使用前、后沖洗干凈，防止管路堵塞或腐蝕；3洗板時所用的吸水紙請勿反復(fù)使用。本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳染性物質(zhì)，請按相關(guān)實驗室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。.參考文獻《中國生物制品規(guī)程》2000年版丙型肝炎病毒抗體操作規(guī)程（SOP文件）.目的用于血液的篩查和臨床丙型肝炎病毒感染的輔助診斷.檢驗原理本品系用丙型肝炎病毒（HCV）抗原包被的微孔板和酶標記抗人IgG及其他試劑制成，應(yīng)用簡接酶聯(lián)免疫法原理檢測人血清或血漿樣品中的HCV抗體。.適用儀器微量移液器；37℃恒溫水浴箱；振蕩器；洗板機或洗瓶；計時器；酶標儀，檢測波長450nm，參考波長630nm。.樣本要求樣本采集不需要特殊準備，按照正常的采血技術(shù)收集血液，全血樣本最好先放置37℃處理2小時，再將血樣本充分離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心6分鐘以上，使血清（血漿）不含有或極少含有血細胞。如果為抗凝血樣本，應(yīng)將血樣本充分離心后，最好再放置室溫2小時以上。樣本中含有疊氮鈉會影響試驗的結(jié)果，高度溶血的樣本、沒完全收縮的血清樣本或有微生物污染的樣本可能會引起錯誤的結(jié)果。新鮮的樣本在2?8℃無菌條件下可保存一周，新鮮樣本可長期貯存在-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。.檢驗方法實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時將洗滌液進行1:40倍稀釋。設(shè)陽性對照2孔，陰性對照3孔，不加樣品稀釋液，直接加入陽性對照。陰性對照100ul，另設(shè)空白對照1孔（只加底物液及終止液）。加樣：在其余每孔加先加樣品稀釋液100ul,再加待檢血清或血漿10ul（空白孔除外），充分混勻，蓋上封孔膠片，置37℃水浴孵育60分鐘。洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。加酶結(jié)合物：空白孔除外，每孔各加酶結(jié)合物100ul。蓋上封孔膠片，置37℃水浴孵育30分鐘。洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用稀釋后的洗滌液連續(xù)洗滌5次后，拍干孔內(nèi)液體。加底物液：每孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul,混勻，蓋上封孔膠片，置37℃條件下避光顯色30分鐘后，加終止液50ul，混勻，終止反應(yīng)。.參考值終止后盡快測定，波長450nm,空白孔調(diào)零，測OD值。如

果選用雙波長測定，不必設(shè)置空白對照空。按下列公式計算:COV二陰性對照平均OD值X2.1倍陰性對照平均OD值低于或等于0.1,按0.1計算；高于0.1,按照實際OD值計算。7結(jié)果判斷樣品OD值S/COVN1時，待測樣本為陽性；樣品OD值S/COVV1時，待測樣本為陰性。.注意事項本品僅用于體外診斷，僅限檢測人體血清或血漿；檢測結(jié)果作為診斷指標之一。使用時，從冷藏環(huán)境取出試劑盒，置室溫平衡30分鐘后，方可進行測試。剩余試劑應(yīng)及時封存于冰箱內(nèi)保存，備用。結(jié)果判定需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完成。封孔膠片不得重復(fù)使用。在有效期內(nèi)，微孔板密封袋如有漏氣現(xiàn)象，不影響試驗結(jié)果。試劑盒在有效期內(nèi)使用，不同批號不得混用。確保樣本加樣量的準確，如果加樣不準確可能會導(dǎo)致錯誤的試驗結(jié)果。使用微量移液器加樣時，每次應(yīng)更換吸頭吸取樣本。在操作過程中應(yīng)盡量避免反應(yīng)微孔中產(chǎn)生氣泡。準確控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間。洗板：1用洗板機洗板時，洗板機的加液量應(yīng)注意控制，既避免洗液過量而溢出，又能充滿反應(yīng)微孔，并經(jīng)常檢查加液頭是否堵塞；2洗板機最好每次使用前、后沖洗干凈，防止管路堵塞或腐蝕；3洗板時所用的吸水紙請勿反復(fù)使用。本試劑盒及臨床樣本均應(yīng)視為傳染性物質(zhì)或潛在傳染性物質(zhì)，請按相關(guān)實驗室工作規(guī)范執(zhí)行和處理。.參考文獻《中國藥典》2010年版三部《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械【2007】240號）HIV抗體初篩實驗室操作規(guī)程（SOP文件）.檢驗?zāi)康臋z驗人體血清中是否感染HIV病毒.檢驗原理本產(chǎn)品系用純化基因工程人類免疫缺陷病毒“1”型和“2”（HIV-1和山丫-2）抗原包被的微孔板和酶聯(lián)記的HIV-1和HIV-2抗原及其它試劑組成試劑盒，應(yīng)用雙原夾心法原理檢測人血清或血漿中的人類免疫缺陷病毒抗體，用于獻血員及高危人群中人類免疫缺陷病毒的篩查。.檢驗條件操作人員對本實驗應(yīng)心中有數(shù)，嚴格執(zhí)行操作規(guī)程。洗板機，酶標儀，加樣器必須定期校正。試劑按規(guī)定保存。.標本采集門診病人由檢驗科人員無菌抽取靜脈血2ml分離血清備用。住院病人由護士采血送檢驗科。要避免溶血。.設(shè)備和試劑設(shè)備全自動ZDMX型酶標洗板機，MR-96A酶標儀。試劑珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的抗HIV診斷試劑盒。.操作方法實驗準備從冷環(huán)境中取出試劑盒，室溫平衡半小時，同時將濃縮洗液用蒸餾水作1:20稀釋備用。編號每板應(yīng)設(shè)空白對照1孔，陽性對照2孔，陰性對照2孔，質(zhì)控1孔。加樣每孔加入50位樣品稀釋液，并分別在相應(yīng)孔中加入待測樣品或陰、陽對照、質(zhì)控品50位?？瞻卓變?nèi)只加稀釋液。溫育用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。加酶除空白對照孔外，每孔加50ul酶標記物，輕輕震動混勻，用封板膜將板孔封好，置37℃溫育30分