習(xí)題2：微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

1．微生物在生命活動(dòng)過(guò)程中，需要不斷地從外界吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。下列有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述，正確的是()A．不同種類的微生物，對(duì)碳源的需要情況差別不大B．無(wú)機(jī)氮源不能為微生物的生命活動(dòng)提供能源C．除水以外的無(wú)機(jī)物僅提供無(wú)機(jī)鹽D．某些無(wú)機(jī)氮源也能提供能量2．下列有關(guān)一種以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營(yíng)養(yǎng)的描述中，不正確的是()A．氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素B．碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)C．無(wú)機(jī)鹽是該微生物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)D．水是該微生物的營(yíng)養(yǎng)要素之一3．在微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)過(guò)程中，無(wú)菌技術(shù)是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。下列常用的無(wú)菌操作中錯(cuò)誤的是()A．無(wú)菌操作不要求殺死培養(yǎng)基內(nèi)的一切微生物B．用酒精擦拭雙手的方法對(duì)操作者進(jìn)行消毒C．實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行D．玻璃器皿可用酒精擦拭來(lái)進(jìn)行滅菌4．關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，敘述錯(cuò)誤的是()A．操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B．將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C．待培養(yǎng)基冷卻至50℃D．待平板冷卻凝固約5～10min后將平板倒過(guò)來(lái)放置5．下面為牛肉膏、蛋白胨培養(yǎng)基的成分列表，據(jù)此回答：成分牛肉膏蛋白胨NaClH2O含量0.5g1gg100mL(1)蛋白胨在培養(yǎng)基中的作用是____________________________________________。(2)要用此材料配制觀察細(xì)菌菌落狀況的培養(yǎng)基，還需添加的成分是____________。(3)表中各成分含量確定的原則是_________________________________________________________________________________________。(4)培養(yǎng)基配制好后，分裝前應(yīng)進(jìn)行的工作是_________________________________。(5)從配制培養(yǎng)基直到培養(yǎng)完成，所采用的預(yù)防雜菌污染的方法有________________________________________________________________________________________。(6)在培養(yǎng)基凝固前要擱置斜面，其目的是____________________________________________________________________。(時(shí)間：20分鐘；滿分50分)一、選擇題(每小題3分，共24分)1．下表是關(guān)于幾種微生物能利用的碳源物質(zhì)和氮源物質(zhì)的描述，描述準(zhǔn)確的微生物有幾種()硝化細(xì)菌圓褐固氮菌甲烷氧化菌乳酸菌碳源物質(zhì)CO2CO2葡萄糖葡萄糖氮源物質(zhì)NH3N2尿素N2A．1種 B．2種C．3種 D．4種2．有關(guān)細(xì)菌培養(yǎng)的敘述，正確的是()A．在瓊脂固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的單個(gè)菌落含有多種細(xì)菌B．在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進(jìn)細(xì)菌生長(zhǎng)C．向液體培養(yǎng)基中通入氧氣能促進(jìn)破傷風(fēng)桿菌的生長(zhǎng)D．在半固體培養(yǎng)基中接種細(xì)菌培養(yǎng)后可以觀察其運(yùn)動(dòng)3．平板冷凝后，要將平板倒置，其原因是()A．接種時(shí)再拿起來(lái)方便B．在皿底上標(biāo)記日期等方便C．正著放置容易破碎D．防止皿蓋上的冷凝水珠落入培養(yǎng)基造成污染4．下列敘述錯(cuò)誤的是()A．培養(yǎng)乳酸菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素B．培養(yǎng)霉菌時(shí)需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至堿性C．培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或微堿性D．培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供無(wú)氧的條件5．有關(guān)稀釋涂布平板法的敘述錯(cuò)誤的是()A．首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B．然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C．其核心是防止雜菌污染，保證培養(yǎng)液的純度D．結(jié)果都是在培養(yǎng)基表面由單個(gè)細(xì)胞形成單個(gè)的菌落6．下圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序?yàn)閘→2→3→4→5。下列操作方法正確的是()A．操作前要將接種環(huán)放在火焰旁滅菌B．劃線操作要在火焰上進(jìn)行C．在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌7．為了保證菌種的純凈需要對(duì)菌種進(jìn)行保藏，下列有關(guān)敘述不正確的是()A．對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法B．臨時(shí)保藏的菌種一般是接種到試管的斜面培養(yǎng)基上C．臨時(shí)保藏菌種容易被污染或發(fā)生變異D．對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用低溫－4℃8．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入瓊脂這一理想的凝固劑，下列關(guān)于瓊脂的說(shuō)法不正確的是()A．不被所培養(yǎng)的微生物分解利用，對(duì)所培養(yǎng)的微生物無(wú)毒害作用B．在微生物生長(zhǎng)溫度范圍內(nèi)保持固體狀態(tài)C．瓊脂凝固點(diǎn)低，利于微生物的生長(zhǎng)D．瓊脂在滅菌過(guò)程中不會(huì)被破壞，透明度好，凝固力強(qiáng)二、非選擇題(共26分)9．(10分)研究發(fā)現(xiàn)乳酸菌素(小分子蛋白質(zhì))有抑菌作用，其提取及應(yīng)用如下圖所示。eq\x(乳酸菌A)→eq\x(培養(yǎng)液)→eq\x(乳酸菌素)→抑菌實(shí)驗(yàn)(1)篩選乳酸菌A時(shí)可選用平板劃線法或________________接種。對(duì)新配制的培養(yǎng)基滅菌時(shí)所用的設(shè)備是________________。實(shí)驗(yàn)前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行________處理。(2)培養(yǎng)基中的尿素可為乳酸菌A生長(zhǎng)提供_____________________________________。(3)抑菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，在長(zhǎng)滿致病菌的平板上，會(huì)出現(xiàn)以抑菌物質(zhì)為中心的透明圈?？赏ㄟ^(guò)測(cè)定透明圈的________來(lái)檢測(cè)乳酸菌素的抑菌效果。10．(16分)炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對(duì)炭疽病疑似患者，可根據(jù)噬菌體的宿主專一性，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確診。(1)細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落。(2)細(xì)菌鑒定：實(shí)驗(yàn)流程如下圖所示。①對(duì)配制的液體培養(yǎng)基等需采取________方法滅菌；實(shí)驗(yàn)所用液體培養(yǎng)基的碳源為_(kāi)_______(填“無(wú)機(jī)碳”或“有機(jī)碳”)。②挑選可疑菌落制片后，用____________觀察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。③接種可疑菌后，35℃培養(yǎng)24小時(shí)，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是________________。對(duì)照組試管中應(yīng)加入________，與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)培養(yǎng)6小時(shí)后，若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對(duì)照組________(填“高”或“低”④對(duì)排除的疑似患者及易感人群，可接種炭疽桿菌疫苗，刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體。與產(chǎn)生抗體相關(guān)的細(xì)胞除T細(xì)胞、B細(xì)胞外，還有________________________。參考答案1．解析：異養(yǎng)型的微生物需要有機(jī)物作碳源，自養(yǎng)型微生物需無(wú)機(jī)物作碳源；無(wú)機(jī)物NH3不僅能為硝化細(xì)菌提供能量，還能作為其氮源，能為其生命活動(dòng)提供無(wú)機(jī)鹽和調(diào)節(jié)pH等。答案：D2．解析：根據(jù)題意，CO2是該生物的唯一碳源，由此推斷該微生物是自養(yǎng)型生物，CO2不能為該生物提供能量。答案：B3．解析：無(wú)菌技術(shù)是用來(lái)防止培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染，而不是殺死培養(yǎng)基中的一切微生物；對(duì)操作者應(yīng)用較溫和的方法進(jìn)行消毒；實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基；對(duì)無(wú)菌操作用到的玻璃器皿要用干熱滅菌法徹底消滅其中的微生物，用酒精擦拭只能消毒不能滅菌。答案：D4．解析：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的正確操作順序是：計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。答案：A5．解析：蛋白胨中含有大量的蛋白質(zhì)降解而成的多肽類物質(zhì)等，因而在培養(yǎng)基中提供碳源、氮源和生長(zhǎng)因子。細(xì)菌菌落的形成是在固體培養(yǎng)基上。營(yíng)養(yǎng)成分含量確定要依據(jù)所培養(yǎng)的微生物的需要。培養(yǎng)基配制好后，首先要調(diào)整pH，然后再分裝，整個(gè)操作過(guò)程都要保證無(wú)雜菌污染。答案：(1)提供碳源、氮源、生長(zhǎng)因子(2)瓊脂(凝固劑)(3)所培養(yǎng)微生物對(duì)各營(yíng)養(yǎng)成分的需要量(4)調(diào)整pH(5)高壓蒸汽滅菌、灼燒接種環(huán)、酒精棉擦手、在火焰旁接種、棉塞塞試管口(6)擴(kuò)大接種面積(時(shí)間：20分鐘；滿分50分)一、選擇題(每小題3分，共24分)1．解析：硝化細(xì)菌為化能自養(yǎng)型，以CO2為碳源，以NH3為氮源。圓褐固氮菌為異養(yǎng)固氮菌，碳源為含碳有機(jī)物，氮源為分子態(tài)氮。甲烷氧化菌對(duì)碳源要求嚴(yán)格，只能是甲烷或甲醇。乳酸菌不能固氮，其氮源不可能是N2。答案：A2．解析：?jiǎn)蝹€(gè)菌落中只含有一種細(xì)菌；青霉素抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，而對(duì)真菌沒(méi)有影響；破傷風(fēng)桿菌是厭氧型細(xì)菌，通入氧氣會(huì)抑制其生長(zhǎng)。答案：D3．解析：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面濕度也比較高。將平板倒置，可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答案：D4．解析：霉菌適宜的pH為～；細(xì)菌適宜的pH為～；放線菌適宜的pH為～。答案：B5．解析：只有在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，才能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。答案：D6．解析：操作前要將接種環(huán)放在酒精燈的外焰灼燒進(jìn)行滅菌；整個(gè)操作過(guò)程要在酒精燈旁進(jìn)行；1、2、3、4、5這五個(gè)區(qū)域都可能有所需菌落；在每次畫線前對(duì)接種環(huán)灼燒是為了殺死上次畫線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，畫線結(jié)束后對(duì)接種環(huán)滅菌是為了殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。答案：D7．解析：對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可采用甘油管藏法，即在3mL甘油瓶中加入1mL的甘油后滅菌，將1mL的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，放在－20℃答案：D8．解析：瓊脂作為一種理想的凝固劑，是由其本身的性質(zhì)決定的，瓊脂不會(huì)被微生物利用且對(duì)其無(wú)毒害作用，在滅菌過(guò)程中不會(huì)被破壞，透明度好。答案：C二、非選擇題(共26分)9．解析：(1)微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法；新配制的培養(yǎng)基需要用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌；實(shí)驗(yàn)前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行消毒處理。(2)尿素可為乳酸菌A提供氮源。(3)透明圈越大，表明抑菌效果越好。答案：(1)稀釋涂布平板法(或稀釋混合平板法)高壓蒸汽滅菌鍋消毒(2)氮源(3)直徑(或大小)10．解析：①培養(yǎng)基應(yīng)用高壓蒸汽方法進(jìn)行滅菌。炭疽桿菌同化類型為異養(yǎng)型，應(yīng)選有機(jī)碳作為其碳源。②微生物個(gè)體小，肉眼觀察不到，必須借