DB43-T 2327-2022羊肚菌菌種質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程

ICS67.080CCSB31 43湖 南 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB43/T2327—2022羊肚菌菌種質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程Regulationsforqualityinspectionofmorchellastrains20222022050620220806湖南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布目 次前言Ⅲ112規(guī)范性引用文件13語定義14樣15官驗(yàn)16菌害檢驗(yàn)17種定28種力驗(yàn)·········29培驗(yàn)310定則311案理4A（）DNA·5B（）PCR6C（）7前 言GB/T1.1—20201請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由湖南農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。羊肚菌菌種質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程本文件規(guī)定了羊肚菌菌種質(zhì)量檢驗(yàn)的術(shù)語和定義、抽樣、感觀檢驗(yàn)、雜菌及害蟲檢驗(yàn)、菌種鑒定、菌種活力檢驗(yàn)、栽培檢驗(yàn)、判定規(guī)則、檔案管理等技術(shù)要求。（）（GB/T12728食用菌術(shù)語GB/T30989高通量基因測(cè)序技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1284食用菌菌種中雜菌及害蟲的檢驗(yàn)NY/T1846食用菌菌種檢驗(yàn)規(guī)程DB43/T1908羊肚菌簡(jiǎn)易拱棚栽培技術(shù)規(guī)程DB43/T1908羊肚菌簡(jiǎn)易拱棚栽培技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義GB/T12728界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1羊肚菌morchellaspp.AsocoaDsoceePezzaeMocheaceeoce4抽樣菌種的抽樣應(yīng)符合NY/T1846的規(guī)定。5感官檢驗(yàn)樣品的感官檢驗(yàn)應(yīng)符合NY/T1846的規(guī)定。6雜菌及害蟲檢驗(yàn)NY/T1284將活化的羊肚菌菌塊接種于液體土豆培養(yǎng)基，20℃靜置培養(yǎng)7d～10d，然后收集菌絲體，用無菌水反復(fù)清洗干凈，再用滅菌濾紙吸干水分，直接使用或-20℃保存。DNA基因組DNA的提取方法參見附錄A，得到的DNA濃度不宜低于50ng/μl，1.7<A260/A280<2.0。PCR選擇ITS通用引物ITS1/ITS4：TCCGTAGGTGAACCTGCGG/TCCTCCGCTTATTGATATGC。PCR擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序參見附錄B。PCR（條帶應(yīng)為800bpGB/T30989NCIBlstnhttps//bastncb.nlnih.gv/Clasifr（htp:/rdpcmesu.ed/clssiierclaifierjspITSCLUSTALMEGAmaximumparsimony,MPneighbourjoining,NJPDA202d～3d1cm0.5cmPDA菌塊應(yīng)在繼代培養(yǎng)6h～10h后萌發(fā)。采用十字交叉法分別在繼代培養(yǎng)1d、2d、3d時(shí)測(cè)量羊肚菌菌落直徑，計(jì)算菌絲生長速率，羊肚菌菌絲平均生長速率應(yīng)大于10mm/d。繼代培養(yǎng)2d～3d后，使用體視顯微鏡觀察主菌絲和二級(jí)菌絲分枝的夾角，夾角應(yīng)小于30°。5d～10d14d繼代培養(yǎng)10d～15d后，菌落應(yīng)無色素或色素較淺；色素產(chǎn)生多的菌種不宜用于生產(chǎn)。宜選擇溫濕度、光照、通風(fēng)等可控的菇房或人工氣候培養(yǎng)箱。3m23DB43/T1908。播種1d～3d菌種應(yīng)萌發(fā)。5d～10d（。施加外源營養(yǎng)袋20d～30d，營養(yǎng)袋應(yīng)充滿羊肚菌菌絲。土壤表面應(yīng)產(chǎn)生大量原基，原基應(yīng)有分化為幼菇的趨勢(shì)。10判定規(guī)則11檔案管理3附錄A（資料性）羊肚菌基因組DNA提取方法羊肚菌基因組DNA提取按照以下步驟進(jìn)行：0.1g2ml700μl（CTAB2％，pH=8.0）651.5～2.0h10minr/min10min加入等體積的C∶∶11000r/mn10minC（=2112000r/min10min，2201h以上；12000r/min10minDNA1mL75DNA1％RNaseATE（Tris-HCl10mmol/L,EDTA1mmol/L）或滅菌雙蒸水溶DNA附錄B（資料性）PCR擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序PCRPCR5010×PCRBuffer5ITS1/ITS41μl，Taq0.5μlDNA2μl35.5μl。PCR首先94℃預(yù)變性5min；然后94℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸60sec，30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸7min。附錄C（資料性）羊肚菌菌種質(zhì)量檢驗(yàn)檔案表1羊肚菌菌種質(zhì)量檢驗(yàn)檔案表菌種名稱菌種來源菌種級(jí)別接種日期保藏條件聯(lián)系人菌種質(zhì)量檢驗(yàn)步驟感官檢驗(yàn)氣味瓶塞（蓋）松緊度菌種顏色干燥度記錄人雜菌及害蟲檢驗(yàn)斑點(diǎn)液體培養(yǎng)檢