通心絡(luò)對糖尿病大鼠腎臟抗氧化能力的影響

關(guān)鍵詞糖尿病【要】目研究通心絡(luò)對糖尿病大鼠腎臟的保護作用及作用機制。方法鏈佐菌素誘導的糖尿病大鼠給予通心絡(luò)治療6周，檢測通心絡(luò)對糖尿病大鼠腎臟氧自由基代謝狀態(tài)及抗氧化能力的改變。結(jié)果通心絡(luò)治療組血糖水平明顯高于正常對照組而與糖尿病大相比兩組血糖水平相當P0.05與常對照組大鼠比較尿病大鼠腎皮質(zhì)丙二量增加絡(luò)治療組MDA水高正常對照組，低于糖尿病組，但差異無顯著性＞0.05NC組相DM組胱甘肽GSH)水平均有下降，差異有顯著性P<0.05組相組GSH水平有升高趨勢，但仍顯著低于NC組水。與NC組比TXL組DM超氧化物歧化(SOD)水平均降低，差異有顯著性其TXL組SOD水高于組但兩組間差異無顯著（＞0.05大鼠腎臟T-AOC及CAT活性差異均顯著性。結(jié)論通絡(luò)可部分改善高糖引起的腎臟氧化應(yīng)激腎的抗氧化能力尿病引起的大鼠腎臟損害具有一定的保護作用?！炬I詞】糖病，實驗性；通心絡(luò)；氧化性應(yīng)激；腎EffectofTongxinluoonoxidativestressinkidneyrats【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofTongXinluoontheoxidativestressandantioxidativesysteminkidneyofdiabeticrats.MethodsAftertheSTZ-induceddiabeticratstreatedwithTongforsixweeksSOD，T-AOC，MDAinkidneycortexweremeasured.ResultsThelevelofbloodingroupTXLhigherthanthatofgroupCN.AndhadnosignificantdifferencewithgroupDM(P＞0.05).ThecontentofMDAgroupDMwashigherthangroupCN(P<0.05)andlowerthangroupTXL，butshowednosignificantdifferencewithingroupDMandgroupTXL(P＞0.05).ThecontentofGSHincreasedsignificantlyhigheringroupTXLgroupDM(P<0.05)butlowerthangroupCN(P＞0.05).TheactivityofSODincreasedsignificantlyingroupTXLthaningroupDM(P<0.05).OurtestnosignificantdifferenceT-AOCandCATwithinallgroups.ConclusionTongXinluocouldimprovetheantioxidativeability，decreaseoxidativestressprotectthekidneyindiabeticrats.【Keywords】diabetes；experimental；tongxinluo；oxidativestress；kidney[!--empirenews.]糖尿病并發(fā)癥發(fā)病的統(tǒng)一機制學說認為，在持續(xù)高糖狀態(tài)下體性氧基生成加可能是導致糖尿病各種并發(fā)癥發(fā)生中環(huán)2起尿病組織損害的四條路多元醇通路激活、蛋白質(zhì)非酶糖化增加蛋激酶C)激、己糖胺途徑激活等實質(zhì)都是高糖誘導的超氧化物過表達的結(jié)果。由此，氧自由基生成增多引起的氧化應(yīng)激成為糖尿病微血管病變發(fā)生重要影響因素究證通心絡(luò)可有效降低早期糖尿病腎病的內(nèi)皮ET水平和尿白蛋白排泄（有效地延緩糖尿病腎病腎功能衰竭的進展。通心絡(luò)對糖尿病腎臟有一定的保護作用，但機制尚不明確。根據(jù)糖尿病并發(fā)癥的統(tǒng)一發(fā)病機制學說，糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展及改善與氧化損傷的相應(yīng)變化密切有關(guān)，因此本研究采用通心絡(luò)治療糖尿病大鼠，擬從氧化與抗氧化系統(tǒng)方面探討通心絡(luò)改善糖尿病腎臟病變的機制。1材料與方法1.1材鏈脲佐菌素（）購自美國Sigma公，通心絡(luò)超微顆粒（成分：人參、水蛭、全蝎、蜈蚣、土鱉蟲、赤芍等）由以嶺藥業(yè)提供。超氧化物歧化酶SOD氧氫酶（CAT胱甘肽（GSH質(zhì)氧化物的產(chǎn)物丙醛抗氧化力T-AOC）測定試劑盒購自南京建成公司。血糖測定采用美國羅氏公司血糖測定儀。雄性SD大鼠（體重160～180g自海中科院實驗動物中心。1.2方1.2.1DM大模型的制備與處理大適應(yīng)性飼養(yǎng)5天禁食后先按體重隨機分為2組，組15只大鼠單次腹腔注射STZ60mg/kg誘發(fā)糖尿，另一組5只大鼠同時腹腔注射等體積的上述緩沖液

作為對照。注射STZ的物注天，空腹血搪持續(xù)高于．7mmol/L，尿糖呈強陽性的動物確定為糖尿病動物。按空腹血糖水平再將糖尿病動物隨機分為2組，加上對照組共組：對照(5只，control，CN)糖尿病(5只diabetesmellitus，DM)，心絡(luò)處理的糖尿病組(5只，diabetesmellitusTong，TXL)并開始給藥處理。組天上午灌服通心絡(luò)水溶液1g/kg，余2組均灌服等體積稀釋液，為維持糖尿病大鼠的存活，根據(jù)血糖水平皮下注射諾和靈N24U/d，連續(xù)處理周。動物自由進食飲水，每周測量血糖、體重。實驗結(jié)束前大鼠過夜禁食后乙醚麻醉下摘除眼球取血并處死動物，留取血清。迅速切除雙側(cè)腎臟，左腎稱重，除留取供形態(tài)研究的樣品外，切取部分腎皮質(zhì)，液氮中保存?zhèn)溆谩?.2.2檢測指標與方法血糖水平用羅氏血糖儀測定備皮質(zhì)組織勻漿液可見光法檢測活；用TBA測定MDA，用DTNB法定量測定GSH含；比色法測SOD活性與總抗氧化能力。1.3統(tǒng)計學方法實驗數(shù)據(jù)用x±s表示，各組間數(shù)據(jù)差異顯著性均采用方差分析。2結(jié)果2.1一情況造模組注射STZ后24～48h出現(xiàn)多飲多第～多食明顯通絡(luò)處理組及模型對照組大鼠多飲多尿癥狀較重不增發(fā)光脫[!--empirenews.]2.2通心絡(luò)對糖尿病大鼠血糖及腎臟氧自由基的影響各模型組與對照組相比水明顯升高，但各模型組之間血糖水平差異無顯著性。各模型組腎體重比與正常對照組相比，差異具有顯著性（P<0.05模型組之間差異無顯著性。陽性對照組MDA顯著升高，與正常對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義P<0.05陽性對照組相比，通心絡(luò)處理組MDA水平有所降低但異無統(tǒng)計學意(P（見表各大鼠血糖腎重比及MDA情(x±注vs組*P<0.05MDA丙二醛GLU：血糖2.3通心絡(luò)對糖尿病大鼠腎臟抗氧化能力的影響與NC組相比模型組水均有下降中TXL處組GSH水平較DM組所改善差有顯著NC組比，DM組SOD水平降低，差異有顯性組SOD水平高于DM組但低于NC組差異均無顯著性。NC組鼠T-AOC及CAT活高于其他組，但各組間差異均無顯著性。見表2。表2各組大鼠GSH、SOD、T-AOC、CAT水(x±s)注：vsNC組*P<0.05；DM組#P<0.05；：胱甘肽SOD：超氧化物歧化酶T-AOC：總抗氧化力；CAT：過氧化氫酶3討糖病時機體普遍存在著氧化與抗氧化機制的紊亂中性氧簇ROS）生成過多、組織抗氧化酶發(fā)生糖化或氧化、還原性物質(zhì)消耗過多，是造成腎組織氧化損傷的重要機制。氧化損傷進一步導致糖尿病微血管病變?nèi)缒I小球、視網(wǎng)膜、周圍神經(jīng)，并最終導致1型2型糖尿病患者失明、腎功能衰竭及發(fā)生周圍神經(jīng)病變［，等5］已證明在腎小球系膜細胞和小管上皮細胞，高糖是以時間依賴方式誘導對二氯熒光素敏感的ROS的產(chǎn)。ROS攻不飽和脂肪酸后，腎皮質(zhì)中所產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量、抗氧化酶SODCAT活性T-AOCGSH改變可反映腎皮質(zhì)的抗氧化能力和氧化應(yīng)激程度?？捎行孓D(zhuǎn)高血糖引起的上述因素改變的藥物將有利于糖尿病腎病的預防與治療。3.1通心絡(luò)對血糖的影響現(xiàn)已公認性氧對腎組織的損傷作用是腎組織病變的主要發(fā)病機制之一，甚至是許多細胞因子損傷腎組織的最終介質(zhì)，高血糖是誘導超氧化物過表達的主要因素。本研究結(jié)果顯示，與陽性對照組及褪黑素治療組相比，通心絡(luò)在糖尿病誘導成功后給藥，未發(fā)現(xiàn)有明顯的降血糖、升高體重的作用。故分析通心絡(luò)對糖尿病腎臟的保護作用并不依賴于其調(diào)節(jié)血糖水平的效應(yīng)。[!--empirenews.]3.2通絡(luò)對抗氧化能力影響糖尿病并發(fā)癥發(fā)病的統(tǒng)一發(fā)病機制學說認為高糖狀態(tài)下線體活性氧基生成增加可能是糖尿病各種并發(fā)癥發(fā)生的中心環(huán)12起糖尿病組織損害的四條通路多元醇通路激活、蛋白質(zhì)非酶糖化增加PKC激活己糖胺途徑激活實質(zhì)上都是高糖誘導的超氧化物過表達的結(jié)果。研究證實高血糖可誘導腎系膜細胞及腎小管上皮細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生的增6ROS的損傷作用超過機體的抗氧化作用時，便可

通過激活PKC及因子［］而進一步影響血脂、蛋白及DNA的傷，最終導致慢性并發(fā)癥的發(fā)生。已有一些動物實驗和臨床研究證實了通心絡(luò)具有保護超氧化物歧化酶(SOD)活性、清除氧自由基的作。秦鑒等8］建立小鼠的缺血再灌注模型，觀察高、中、低劑量的通心絡(luò)對心肌組織SOD活二(MDA)水平現(xiàn)通心絡(luò)能夠提高缺血再灌注心肌的SOD活，降低水，有明顯的抗氧自由基損傷作用。張子新等的動物實驗同樣觀察到通心絡(luò)治療的家兔SOD水明顯升高［10察通心絡(luò)膠囊對25例心病患者的療效時發(fā)現(xiàn)，通心絡(luò)治療組血漿MDA含量低比對照組明顯，而紅細胞SOD活則明顯高于對照組。本研究旨在觀察通心絡(luò)對糖尿病大鼠腎臟氧化應(yīng)激及抗氧化能力的影響。結(jié)果顯示，與糖尿病大鼠相比，通心絡(luò)可以顯著增加還原性物質(zhì)GSH的量，降低腎皮質(zhì)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的量，增強抗化酶SOD的活性，提高腎臟的T-AOC，從而提高腎臟的抗氧化能力，并減輕高糖引起的氧化損傷。以上結(jié)果顯示，通心絡(luò)可以增加機體的抗氧化能力，并在一定程度上清除過氧化物，降低高糖引起的氧化損傷。但其差異不明顯，可能與樣本量小實周期短有關(guān)且體分子機制尚待進一步研究明確。3.3通絡(luò)在糖尿病并發(fā)癥治療中的藥用價值通絡(luò)由人參、水蛭、全蝎、蜈蚣、土鱉蟲、赤芍等藥物組成?，F(xiàn)代藥理研究表明參具有降血脂、血糖的功能，能延緩糖尿病的發(fā)生時間，降低尿糖，增高胰島神經(jīng)叢特別是內(nèi)神經(jīng)叢的膽堿酯酶活性；水蛭有利尿、消除尿蛋白的作用，并能改善微循環(huán)；土鱉蟲、全蝎具有抗凝、抗血栓形成的作用；赤芍具有降低全血濃度、抑制