研究生分子生物學(xué)知識點

分子生物學(xué)學(xué)問點總結(jié)expressedbyagenome,〔相互作PPI〕〔染色〔胰肽酶〔指紋圖譜〕-數(shù)據(jù)庫搜尋鑒定蛋白性質(zhì)子量，先經(jīng)等電聚焦電泳(isoelectricfocusingIEF)，再經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳〔SDS-〕把簡單的蛋白質(zhì)成分分別。比較蛋白質(zhì)組學(xué)：通過比較同一個體腫瘤細胞〔組織〕與正常細胞〔組織〕之間蛋白質(zhì)在表達數(shù)量、表達位置和修飾狀態(tài)上的差異，覺察與腫瘤發(fā)病或者進展有關(guān)的分子標(biāo)記，用來作為腫瘤診斷的腫瘤相關(guān)蛋白。形成碎片離子。腫瘤血清蛋白質(zhì)分析方〔tumorserologicproteome s，是從腫瘤免疫學(xué)觀點動身建立的一種蛋白質(zhì)組學(xué)和腫瘤免疫學(xué)相結(jié)合的方法。SERPA其試驗過程如下：①雙向電泳分別腫瘤組織〔細胞〕總蛋白質(zhì)；②轉(zhuǎn)膜；③建立westernblotting〔與患者或正常人血清反響；④軟件分析確定差異反響的蛋白質(zhì)斑點；⑤質(zhì)譜鑒定和生物信息對腫瘤組織平行膠(replicagel)中相應(yīng)的差異蛋白質(zhì)點進展鑒定，篩選出腫瘤分子標(biāo)志物；析該蛋白功能，爭辯其在腫瘤進展中發(fā)揮的作用。蛋白質(zhì)芯片：是將大量蛋白質(zhì)分子按預(yù)先設(shè)置的排列固定于一種載體外表，形成微陣列，依據(jù)蛋白質(zhì)分子間特異性結(jié)合的原理，構(gòu)建微流體生物化學(xué)分析系統(tǒng)，以實現(xiàn)對生物分子的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測。DNA/RNA建立細胞內(nèi)外信號傳遞的簡單網(wǎng)絡(luò)。爭辯方法主要有：蛋白質(zhì)芯片技術(shù)目前常用蛋白質(zhì)芯片有：SELDI-TOF-MS抗體芯片靶蛋白質(zhì)芯片液相蛋白質(zhì)芯片噬菌體呈現(xiàn)技術(shù)酵母雙雜交系統(tǒng)免疫共沉淀〔Co-Immunoprecipitation胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。SDS-1.制備凝膠試劑：丙烯酰胺〔單體；亞甲雙丙烯酰胺〔膠聯(lián)劑〕29130%〔引發(fā)劑引發(fā)交聯(lián)N,N,N,’N’-〔TEMED〕〔SDS〔陰離子變性劑〕2.3.電泳緩沖液4.R2505.脫色液SDS-硝酸纖維素膜(nitrocellulosemembrane)上,在膜上進展固相免疫化學(xué)染色,原位顯示蛋白質(zhì)帶,從而在分子量的根底上對蛋白質(zhì)進展定性、定量分析。SDS-NCMDNA檢測轉(zhuǎn)移至膜上的蛋白質(zhì)。細胞死亡形式Celldeath細胞壞死ApoptosisPCD:PCD:

表現(xiàn)細胞生命現(xiàn)象不行逆的停頓細胞構(gòu)造和功能的不行逆喪失。細胞死亡并非與機體死亡同步。正常組織中也發(fā)生細胞死亡，它是維持組織機能和形態(tài)所必需的。細胞受到外來的急性的強力的致病因素作用下，細胞正常代謝活動被強行中斷而引起的“意外”的、被動性死亡過程；只見于病理狀況下。細胞腫脹，線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹。核染色質(zhì)隨機降解呈絮狀,蛋白合成削減。細胞膜、溶酶體裂開,細胞內(nèi)容物流出,引起四周炎癥指在肯定的生理和病理條件下，多細胞有機體為調(diào)控機體發(fā)育、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因把握并遵循肯定程序的細胞主動性死亡過程.又(programmedcelldeath,PCD).凋亡小體：胞膜皺縮內(nèi)陷、反折，包圍凝集斷裂的染色質(zhì)、胞質(zhì)、細胞器等形成芽狀、泡狀突起并分別脫落，形成一些有膜包被，內(nèi)涵物不外溢的小塊，稱凋亡小體〔apoptoticbody〕。多細胞生物體在生長發(fā)育過程中，細胞在基因調(diào)控下，依據(jù)肯定時空挨次發(fā)生的受到嚴(yán)格程序把握的PCD Apoptosis功能性概念發(fā)育學(xué)概念 形態(tài)學(xué)概念僅存在于發(fā)育細胞 可存在于發(fā)育和成體細胞大局部凋亡是PCD。PCD的最終結(jié)果是凋亡某些凋亡是非程序性。如細胞毒物誘導(dǎo)的凋亡1、確保正常生長發(fā)育、2、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、3、防范功能;2亡小體內(nèi)有構(gòu)造完整的細胞器。DNA(DNAfragmentation)形成一些DNAnDNALadder，是推斷DNADNA(DNAfragmentation)形成一些DNAnDNALadder，是推斷DNA要標(biāo)準(zhǔn)〕有特異水解作用的，活性中心富含半胱氨酸的蛋白水解酶。Caspase1.細胞骨架蛋白和核纖層蛋白，導(dǎo)致細胞解體成凋亡小體DNACaspase-activatedDNaseCADCAD:CaspaseCaspaseICAD,CADDNA。滅活凋亡抑制物: 如Bcl-2、ICAD水解與DNA損傷修復(fù)相關(guān)的酶和蛋白質(zhì)ADP〔poly-ADP-ribosepolymerase,PARP〕TNFR1FasCAR1NGFRDR3DR4、DR5〕Caspase8—Caspase3---細胞凋亡是細胞呼吸鏈和氧化磷酸化的中心，而且是細胞凋亡的調(diào)控中心。C〔Cyt.c〕和限制性核酸內(nèi)切酶ROS細胞周期：從有絲分裂DNA復(fù)制前的一段時期，又稱合成前期，此期主物質(zhì)代謝著增大。這一期的主要意義在于為下階段SDNA即DNA。DNAG2〔secondgap〕期為DNAM細胞周期蛋白或周期素〔Cyclins)：一類構(gòu)造類似、能結(jié)合并調(diào)整CDK10，14〔cyclinA、B1-2、C、D1-3、E、F、G1-2、H、I、K。cyclins-CDKs-CKIsHIF-1a：幾乎參與了對糖酵解每一步的調(diào)控；PI3K/Akt；Myc；P53CDK〔周期素依靠的蛋白激酶〕的調(diào)整亞基，分別在細胞周期的不同時期積存，激活CDK，使其具有催化關(guān)鍵底物的磷酸化修飾并調(diào)整其活性。參與細胞周期中不同時相的調(diào)整。G/SstartR(restrictionpoint)，1GDNADNA1細胞外環(huán)境是否適宜？細胞體積是否足夠大？100，稱為周期蛋白盒(cyclinboxCDKRNA(RNAinterference，RNAi)是將雙鏈RNAmRNA試述CDK1活性的調(diào)控機制？認(rèn)為CDK與周期素的結(jié)合以及保守的蘇氨酸殘基的磷酸化是較為重要的兩種磷酸化修飾的激活作用：CDKCDK1〔p34cdc2〕Thr161CDK1CDK2CA〔CDKactivitingkinase，P34cdc2磷Thr14Tyr15Thr14Myt1，使Tyr15Wee1/Mik1Thr14Tyr15CDC25。DNADNADNADNA插入、缺失、重排。突變形式〔一DNAAT-TA；(地中海貧血)〔三〕重排：指DNADNA段可在位點顛倒方向反置〔倒位，也可在染色體之間發(fā)生交換重組。的的材料，是進化的分子根底DNADNA1.光修復(fù)、2.鏈斷裂的直接重接、3.堿基的直接插入、4.轉(zhuǎn)甲基作用切除修復(fù)(excissionrepair)：DNADNADNADNA板，合成一段正確配對的堿基序列來修補缺口。DNA〔1〕ATP，〔2〕修復(fù)〔3〕DNA。重組修復(fù)：DNA重組修復(fù)：DNADNA到子鏈缺口，進展重組修復(fù)。發(fā)生在復(fù)制后，故又稱“復(fù)制后修復(fù)”DNA〔1〕傷部位，子鏈對應(yīng)位點留下空缺；無損母鏈復(fù)制成完整雙鏈。空缺與無損母鏈相應(yīng)片段重組交換(RecBCD空缺轉(zhuǎn)移到無損母鏈，有缺子鏈完整，損傷母鏈仍舊保存。DNA酶的催化下，重修復(fù)缺口;DNA.DNA式。SOS物種類繁多。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路★★★〔配體〕并能激發(fā)靶細胞產(chǎn)生特異生物效應(yīng)的特別蛋白質(zhì)分子。內(nèi)側(cè)，由三個亞基組成，一般稱為經(jīng)典G蛋白或大GG〔存在于不同的細胞部位的小分子量GGRas被覺察的小G〕SH2構(gòu)造域：由約100個氨基酸殘基組成，中心為反向平行的β片層構(gòu)造，兩側(cè)為α螺旋。SH2介導(dǎo)信號分子與含磷酸酪氨酸蛋白分子的結(jié)合，并與磷酸化酪氨酸的磷酸基團結(jié)合。這種結(jié)〔motifSH2性。30.1.簡述細胞膜受體的類型及其特征：SH355-75βSH330.1.簡述細胞膜受體的類型及其特征：22.舉例說明cAMP-PKA信號傳遞途徑。cAMP腎上腺素ATPcAMP↑，cAMPPKA〔cAMP〕行使功能，PKA*腎上腺素3RTK－Ras－MAPKEGF、PDGF、IGF、FGF、VGEF〔與配體結(jié)合及受體二聚化/寡聚化使酶激活〕GDP，GDP，結(jié)合GTP，本身即被激活，RasGTPaseGTPGDPRasRasGTPG100sα有絲分裂原活化蛋白激酶或微管相關(guān)蛋白激酶屬Ser/Thr激酶是承受轉(zhuǎn)換與傳遞的信號并將其帶入細胞核內(nèi)的一類重要分子在多種受體信號傳遞途徑中具有 關(guān)鍵性作用。抑癌基因〔tumorsuppressorgene：又稱為抗癌基因負(fù)調(diào)控作用，而在兩個等位基因都缺失p53、Rb、VHL、APCp53〔1〕cyclinA〔〕DNADNA起始復(fù)合物的結(jié)合〔3〕激活抑制細胞分裂的基因〔4〕抑制癌基因?qū)毎霓D(zhuǎn)化。分子生物學(xué)相關(guān)試驗:承受分子生物學(xué)的技術(shù)方法來分析受檢者的某一特定基因的構(gòu)造病因的診斷。分子生物學(xué)相關(guān)試驗PCR-RFLP：多聚酶鏈?zhǔn)椒错?限制性片段長度多態(tài)性分析PCR擴增、DNA〔長度多態(tài)性。主要用于核酸變異性分析與比較。PCR-SSCP〔診斷有無突變〕：聚合酶鏈反響-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(singlestrandconformationpolymorphismDNA經(jīng)過變性處理，形成單鏈，由于序列不同，單鏈構(gòu)象就有差異在中性聚丙烯酰胺凝膠中電泳的遷移率不同有無突變不能鑒別全部的突變。PCR-southernblotDotblotPCR原體特異基因等方面的爭辯及檢測。依據(jù)堿基互補配對原則，將不同來源的序列互補單鏈的原位雜交：用核苷酸探針對特別的核苷酸挨次在其原位進展(insituhybridizationDNA、RNADNA(Southernblotting)：SouthernDNADNAPCR又叫體外基因擴增技術(shù)。利用人工合成的一對引物，在被擴組成體系：templateDNA.atleastacoupleofprimer〔長度：20bp堿基分布:均勻隨機，G+C:40-60%;引物自身不存在發(fā)卡構(gòu)造;兩個引物間不能互補；引物與非特異靶區(qū)段同源性不能超過70%；5‘端可修飾〔酶切位點--便利基因?。籘aqdNTPsbuffer〔Mg2+。過程：①變性：將雙鏈DNA〔95℃〕使之變性，DNA變成單鏈56℃DNADNADNATaq酶的特性：耐熱(3’-5’外切酶活性)，相對簡潔錯誤摻入c)合成速度:1200bp/min3’-A5’-3’realtimePCRDNAcDNA嚴(yán)密排列固定于單位面積的支持物上。1.〔生物學(xué)2.3.顯微注射法。RNAi〔RNAinterference：是指在生物體細胞內(nèi)，RNA〔dsRNA〕mRNA，因而抑制相應(yīng)基因表達的過程。一種轉(zhuǎn)錄后水平的同源靶基因沉默，RNAiSiRNA基因工程一般步驟：1.分別目的基因〔化學(xué)合成、制備DNA組文庫、PCR；2.DNA〔vector；3.連接；4.轉(zhuǎn)化：b〕E.Coli:CaCl2真核細胞轉(zhuǎn)化:micro-injection磷酸鈣共沉淀法(貼壁細胞)electroporation(電穿孔,電激,電擊)(懸浮細胞)基因槍(貼壁細胞/組織塊)liposome(脂質(zhì)體)5.篩選重組體：藍白篩選(α-互補法)；養(yǎng)分缺陷互補法；抗生素抗性互補。genemanipulation表達的載體。Plasmid：質(zhì)粒，指一種小環(huán)狀DNA分子，存在與細胞染色體外，能夠自主復(fù)制產(chǎn)生特定的功能。LncRNA：長鏈非編碼RNA，由基因組編碼產(chǎn)生，長度大于200個核苷酸，沒有編碼蛋白的力量。Palindrome5`-3`方向與其另一條鏈一樣。CRISPRDNADNACas9蛋白有兩個核酸酶構(gòu)造域，可以分別切割DNA的兩條單鏈。Cas9先與crRNA及tracrRNA結(jié)合成復(fù)合物，然后通過PAN序列結(jié)合并侵入DNA，形成RNA-DNA復(fù)DNADNA基因工程常用的酶：限制性內(nèi)切酶、反轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNApolymeraseQRT-PCR〔可以結(jié)合文獻，舉例說明。qRT-PCR〔熒光定量PC〕在PCR時監(jiān)測整個PCR進展定量分析的方法。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反響，提取組織或細胞中的總RNAmRNAOligo〔dT〕或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA.GreenI〔舉例說明。RecombinantDNATechnology--Processofcloning:Isolationoftargetgene〔分別目的基因〕Selectionandconstructionofvectors〔載體的選擇和構(gòu)建〕LigationoftargetDNAandvector〔載體與目的基因結(jié)合〕提取質(zhì)粒，限制酶切割質(zhì)粒，用限制酶從其他組織切割目的基因暴露粘性末端。載體與目的基因結(jié)合得到重組質(zhì)粒，重組質(zhì)粒導(dǎo)入E.coliTransformationoftargetgeneintoreceptorcell〔目的基因?qū)胧荏w細胞〕Introduction:transformation(E.coli)transfection(Tumorcells)infection(Virus)。Screeningforrecombinantplasmids〔重組質(zhì)粒的篩選〕Expressingaclonedgene〔克隆基因的表達〕內(nèi)含子：真核生物細胞DNA外顯子：為蛋白質(zhì)氨基酸編碼的DNA基因組：一個細胞或者生物體所攜帶的一套完整的單倍體序列，包括全套基因和間隔序列。真核細胞基因組的特征DNA/〔DNA性、不存在操縱子構(gòu)造、微衛(wèi)星(microsatellite1bp~6bp，60350bp。操縱子(operon)：(structuralgenes)串聯(lián)在一起，包括上游的調(diào)控區(qū)共同構(gòu)成。試述轉(zhuǎn)錄前水平的表達調(diào)控的方式：基因喪失〔體細胞分化過程中，必需將某些基因永久性關(guān)閉。最簡潔有效的方式是將這些基因喪失。將要分化為生殖細胞的細胞則始終保存著整套基因組〔需要量急劇增加－－增加該基因的拷貝數(shù)、重排〔某些基因片段轉(zhuǎn)變原來存在的、甲基化修飾〔脊椎動物中，DNACpGC生甲基化修飾5m、染色體構(gòu)造。>50055%G+C0.65更大比率的觀看和預(yù)期[o/e]CpG二核苷酸頻率)，定義為CpG順式調(diào)控元件(cis-actingelement,CAE)：基因四周能與特異轉(zhuǎn)錄因子