消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法和標(biāo)準(zhǔn)

消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法和標(biāo)準(zhǔn)消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法和標(biāo)準(zhǔn)消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法和標(biāo)準(zhǔn)資料僅供參考文件編號(hào)：2022年4月消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法和標(biāo)準(zhǔn)版本號(hào)：A修改號(hào)：1頁(yè)次：1.0審核：批準(zhǔn):發(fā)布日期：中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)GB15981-1995Evaluatingmethodandstandardfortheefficacyofdisinfectionandsterilization第一篇壓力蒸汽滅菌效果評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)1主題內(nèi)容與適用范圍本方法規(guī)定了壓力蒸汽滅菌技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)及其評(píng)價(jià)滅菌效果的檢測(cè)方法本方法適用于對(duì)壓力蒸汽滅菌設(shè)備滅菌效果的評(píng)價(jià)。2試劑本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑，凡未說(shuō)明規(guī)格者，均為分析純(AR)，水為蒸餾水。蛋白胨。葡萄糖。溴甲酚紫酒精溶液：取溴甲酚紫，溶于100mL95%乙醇中。溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基配制：蛋白胨，葡萄糖，溶于1000mL蒸餾水中，調(diào)pH值至～，然后再加2%溴甲酚紫酒精溶液，搖勻后，按5mL/管，分裝包口，置壓力蒸汽滅菌器中，于115℃滅菌40min后備用。3指示菌嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC7953或SSIK31)菌片，含菌量為5×105～5×106cfu/片，121℃下，殺滅90%微生物所需時(shí)間D121值為～，殺滅時(shí)間(KT值)為≤19min，存活時(shí)間(ST值)為≥。4化學(xué)指示劑需用衛(wèi)生部批準(zhǔn)的化學(xué)指示劑。5技術(shù)要求壓力蒸汽滅菌器壓力，MPa/cm2溫度，℃滅菌時(shí)間，min下排氣式1154012130預(yù)真空式1344-66檢測(cè)方法生物學(xué)指標(biāo)(用作壓力蒸汽滅菌設(shè)備滅菌效果的依據(jù))。將嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片兩個(gè)分別放入滅菌小紙袋內(nèi)，置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包中心部位。滅菌柜室內(nèi)，上、中層中央和排氣口處各放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包(由3件平紋長(zhǎng)袖手術(shù)衣，4塊小手術(shù)巾，2塊中手術(shù)巾，1塊大手術(shù)巾，30塊10cm×10cm、8層紗布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小)。手提壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒(22cm×13cm×6cm)代替標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包，盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位兩只滅菌試管內(nèi)(試管口用滅菌牛皮紙包封)，將盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，在無(wú)菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，56℃培養(yǎng)48h，觀察培養(yǎng)基顏色變化?；瘜W(xué)指標(biāo)在物品包外用化學(xué)指示膠帶，可作為物品是否經(jīng)過(guò)滅菌的處理標(biāo)志。在物品包內(nèi)中心部位用化學(xué)指示劑，可作為物品是否滅菌的參考標(biāo)志。7結(jié)果判定及評(píng)價(jià)同次檢測(cè)中，標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒內(nèi)，每個(gè)指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基全部不變色，判定為滅菌合格。指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，判定為滅菌不合格?；瘜W(xué)指示劑的顏色變?yōu)榕c滅菌合格標(biāo)準(zhǔn)色相同時(shí)，或熔化時(shí)作為滅菌合格的參考標(biāo)準(zhǔn)。第二篇紫外線表面消毒效果評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)8主題內(nèi)容與適用范圍本方法規(guī)定了物體表面消毒用紫外線的波長(zhǎng)、強(qiáng)度及評(píng)價(jià)其消毒效果的物理學(xué)指標(biāo)和生物學(xué)檢測(cè)方法。本方法適用于紫外線直接照射到的物體表面消毒效果評(píng)價(jià)。9指示菌大腸桿菌(8099或ATCC25922)?？莶輻U菌黑色變種芽胞(ATCC9372)。10物理學(xué)指標(biāo)在電壓220V時(shí)，普通30W直管型紫外線燈，在室溫為20～25℃的使用情況下，紫外線輻射強(qiáng)度(垂直1m處)應(yīng)≥70μW/cm2。在電壓220V時(shí)，高強(qiáng)度紫外線燈，在室溫為20～25C的使用情況下，紫外線輻射強(qiáng)度(垂直1m處)應(yīng)≥200μW/cm2。照射劑量按式(1)計(jì)算：劑量(μW·s/cm2)＝強(qiáng)度(μW/cm2)×?xí)r間(s)………(1)11檢測(cè)方法物理學(xué)檢測(cè)方法燈管的紫外線強(qiáng)度(μW/cm2)用中心波長(zhǎng)為的紫外線強(qiáng)度測(cè)定儀(標(biāo)定有效期內(nèi))，在燈管垂直位置1m處測(cè)定。在實(shí)際應(yīng)用中消毒表面的照射強(qiáng)度應(yīng)以燈管與消毒對(duì)象的實(shí)際距離測(cè)定。表面消毒接受的照射劑量，應(yīng)達(dá)殺滅目標(biāo)微生物所需。對(duì)大腸桿菌，照射劑量應(yīng)達(dá)到20000μW·s/cm2，對(duì)枯草桿菌黑色變種芽胞應(yīng)達(dá)到100000μW·s/cm2。生物學(xué)檢測(cè)方法采用載體定量消毒試驗(yàn)。載體制備按本標(biāo)準(zhǔn)附錄C進(jìn)行。開(kāi)啟紫外線燈5min后，將8個(gè)染菌玻片平放于滅菌器皿中，水平放于適當(dāng)距離照射，于4個(gè)不同間隔時(shí)間各取出2個(gè)染菌玻片，分別投入2個(gè)盛有5mL洗脫液(1%吐溫80，1%蛋白胨生理鹽水)試管中，振打80次。經(jīng)適當(dāng)稀釋后，取洗脫液，作平板傾注，每個(gè)染菌玻片接種兩個(gè)，放37℃培養(yǎng)48h作活菌計(jì)數(shù)。陽(yáng)性對(duì)照，除不作照射處理外，取2個(gè)染菌玻片分別投入2個(gè)盛有5mL洗脫液中振打80次，余按進(jìn)行。計(jì)算殺滅率陽(yáng)性對(duì)照回收菌數(shù)–試驗(yàn)組回收菌數(shù)殺滅率（%）=×100······（2）陽(yáng)性對(duì)照回收菌數(shù)12判定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)指示菌殺滅率≥%判為消毒合格。達(dá)物理學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，作為消毒合格的參考標(biāo)準(zhǔn)。第三篇液體消毒劑消毒效果評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)13主題內(nèi)容與適用范圍本方法具體規(guī)定了消毒劑消毒效果生物學(xué)檢測(cè)方法及其評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。本方法適用于消毒劑對(duì)各種物體的消毒效果評(píng)價(jià)。14理化指標(biāo)置20±2℃水浴中，測(cè)定在使用濃度下殺滅指示微生物達(dá)到消毒或滅菌所需的最短時(shí)間(min)。15指示微生物細(xì)菌細(xì)菌繁殖體：金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099或ATCC25922)。細(xì)菌芽胞：枯草桿菌黑色變種芽胞(ATCC9732)。真菌：白色念珠菌(ATCC10231)。乙型肝炎表面抗原：純化抗原mL)。16檢測(cè)方法中和試驗(yàn)(見(jiàn)附錄A)。消毒劑定性消毒試驗(yàn)(見(jiàn)附錄B)。消毒劑定量消毒試驗(yàn)(見(jiàn)附錄C)。消毒劑殺菌能量試驗(yàn)(見(jiàn)附錄D)。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗原性破壞試驗(yàn)(見(jiàn)附錄E)。17消毒效果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)細(xì)菌和真菌的殺滅率≥%，對(duì)HBsAg，將檢測(cè)方法靈敏度104倍或5×104倍(載體試驗(yàn))的HBsAg抗原性破壞，可判為消毒合格。對(duì)枯草桿菌黑色變種芽胞全部殺滅，可判為滅菌合格。在實(shí)際應(yīng)用中消毒效果評(píng)價(jià)以有機(jī)物保護(hù)試驗(yàn)的最低濃度和最短時(shí)間為該消毒劑達(dá)到實(shí)用消毒所需的濃度和時(shí)間。附錄A中和劑中和效果試驗(yàn)(補(bǔ)充件)A1內(nèi)容提要為了準(zhǔn)確評(píng)價(jià)消毒劑對(duì)微生物的殺滅作用，消毒試驗(yàn)中要求選擇適當(dāng)中和劑。所選中和劑不僅能及時(shí)中止消毒劑的殺微生物作用，且中和劑本身及其與消毒劑的反應(yīng)產(chǎn)物(下稱中和產(chǎn)物)尚需對(duì)微生物無(wú)抑制或殺滅作用，對(duì)培養(yǎng)基無(wú)不良影響。A2培養(yǎng)基和試劑營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分：蛋白胨10g牛肉膏3g氯化鈉5g瓊脂15g-20g蒸餾水1000mL制法：除瓊脂外，其他成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至，加入瓊脂后加熱溶解，過(guò)濾分裝，經(jīng)121℃、壓力蒸汽作用30min，滅菌后備用。L磷酸鹽緩沖液～，下稱PBS)。成分：磷酸氫二鈉磷酸二氫鉀蒸餾水制法：將磷酸氫二鈉與磷酸二氫鉀溶解于蒸餾水中，pH為～，分裝，經(jīng)121℃、30min壓力蒸汽滅菌后備用。A3器材錐形燒瓶。平皿(直徑9cm)。量筒。精密pH試紙。無(wú)菌試管。無(wú)菌刻度吸管，，。恒溫培養(yǎng)箱。冰箱。菌落計(jì)數(shù)器。酒精燈。A4中和劑(注明生產(chǎn)廠家，批號(hào))A5操作方法用PBS將指示菌制成5×105～5×106cfu/mL懸液。將消毒劑用滅菌蒸餾水配制成3種不同濃度，在不加中和劑的情況下，測(cè)知該消毒劑10min抑殺指示菌%以上的最低有效濃度。取消毒劑10min抑殺指示菌的最低有效濃度與待選擇中和劑進(jìn)行試驗(yàn)，選出中和劑種類并依據(jù)等當(dāng)量中和原則，調(diào)整中和劑濃度，選出試驗(yàn)濃度的消毒劑使用中和劑的濃度。中和劑選擇試驗(yàn)時(shí)，先將消毒劑與中和劑溶液混合，制成中和產(chǎn)物溶液，再按表A1分組進(jìn)行。表A1中和劑選擇試驗(yàn)組號(hào)菌液加于：混勻作用10min取混勻液加入：（加入后總量為5mL）作用10min后，取原液或稀釋液接種平板（2個(gè)/樣本）：1消毒劑PBS原液，×102消毒劑中和劑原液，×103中和產(chǎn)物PBS×100，×10004PBSPBS×100，×10005中和劑PBS×100，×10006PBS原液然后，傾注平板置37℃培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，按稀釋倍數(shù)計(jì)算出回收菌數(shù)（cfu/mL）。A6中和試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告方法(如表A2)表A2中和試驗(yàn)結(jié)果舉例中和劑各組回收菌落數(shù)，cfu/mL3、4、5組間誤差率，%1234561%卵磷脂0708×106×106×10601%卵磷脂+%吐溫800794×106×106×10601%吐溫800194×106×106×1060%硫代硫酸鈉0132×106×106×10603、4、5組間誤差率計(jì)算公式誤差率（%）=[（∣三組均數(shù)-3組菌數(shù)∣+∣三組均數(shù)-4組菌數(shù)∣+∣三組均數(shù)-5組菌數(shù)∣）/（3×三組均數(shù)）]×100A7判定標(biāo)準(zhǔn)3、4、5組菌數(shù)相似，其誤差率≤10%。6組無(wú)菌生長(zhǎng)。2組菌數(shù)明顯少于3、4、5組。1組不長(zhǎng)菌或明顯少于2組。符合上述標(biāo)準(zhǔn)的中和劑表明可消除消毒劑對(duì)指示菌的作用，中和劑及其與消毒劑的中和產(chǎn)物對(duì)指示菌無(wú)毒害，判定為該消毒劑的中和劑。A8消毒試驗(yàn)用中和劑濃度的選擇按步驟進(jìn)行，按～的標(biāo)準(zhǔn)判定。附錄B消毒劑定性消毒試驗(yàn)(補(bǔ)充件)B1內(nèi)容提要定性消毒試驗(yàn)是測(cè)定受消毒因子作用后的樣本有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的試驗(yàn)方法。用于對(duì)消毒因子滅菌效果的鑒定和消毒劑殺滅細(xì)菌效果的初步評(píng)價(jià)。B2培養(yǎng)基與試劑普通肉湯培養(yǎng)基成分：蛋白胨氯化鈉肉浸液制法：取蛋白胨、氯化鈉加入肉浸液內(nèi)，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH至弱堿性，煮沸、濾清，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為～，壓力蒸汽滅菌備用。試劑稀釋液：含1%蛋白胨的LPBS～。滅菌蒸餾水。中和劑：按本標(biāo)準(zhǔn)附錄A選擇。B3器材滅菌刻度吸管，，。滅菌試管。滅菌三角燒瓶。酒精燈。恒溫水浴箱。恒溫培養(yǎng)箱。B4試驗(yàn)方法將菌液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，并用稀釋液配制成含菌量為5×105～5×106cfu/mL的菌懸液。將滅菌試管10支排列于試管架上，標(biāo)記管號(hào)。每個(gè)試管加滅菌蒸餾水，放20±2℃水浴中。于第1管內(nèi)加適當(dāng)濃度消毒液，混勻后取移入第2管，再次混勻，從第2管中取移入第3管，以此類推至第9管，混勻后棄去，第10管中不加消毒液作對(duì)照。加菌懸液于各管中，混勻并記錄各管加菌時(shí)間，使菌藥混合液中含菌量均為105～106cfu/mL。各管分別于加菌后4個(gè)不同間隔時(shí)間，取出，加入中和劑內(nèi)，中和10min后，取出加入營(yíng)養(yǎng)肉湯管內(nèi)。將接種細(xì)菌的肉湯管放37℃培養(yǎng)48h，觀察初步結(jié)果，無(wú)菌生長(zhǎng)管繼續(xù)培養(yǎng)至第7天。試驗(yàn)重復(fù)5次。B5結(jié)果判定若肉湯管混濁，則表示有菌生長(zhǎng)，記為陽(yáng)性，以(+)表示。若培養(yǎng)至第7天，肉湯管澄清，則表示無(wú)菌生長(zhǎng)，記為陰性，以(—)表示。對(duì)難以判定的肉湯管，取接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，用滅菌L棒涂勻，放37℃培養(yǎng)48h，觀察菌落形態(tài)；并做涂片染色鏡檢，判斷是否有指示菌生長(zhǎng)。有指示菌生長(zhǎng)記為陽(yáng)性。5次試驗(yàn)，均無(wú)指示菌生長(zhǎng)表示達(dá)到滅菌。附錄C消毒劑定量消毒試驗(yàn)(補(bǔ)充件)C1內(nèi)容提要定量消毒試驗(yàn)是測(cè)定受消毒因子作用后，樣本殘存微生物數(shù)量的試驗(yàn)方法，以殺滅率表示結(jié)果。用于對(duì)消毒劑殺滅效果的評(píng)價(jià)。C2培養(yǎng)基與試劑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：按本標(biāo)準(zhǔn)制備。試劑稀釋液：含1%蛋白胨的LPBS～。滅菌蒸餾水。中和劑：按本標(biāo)準(zhǔn)附錄A選擇。LPBS～。洗脫液：含中和劑、1%蛋白胨、%吐溫80的PBS。C3器材滅菌刻度吸管，，。滅菌試管。滅菌三角燒瓶。滅菌平皿(直徑為9cm)。恒溫水浴箱。恒溫培養(yǎng)箱。酒精燈。菌落計(jì)數(shù)器。微量進(jìn)樣器。載體：根據(jù)需要及試驗(yàn)?zāi)康倪x用經(jīng)脫脂處理×大小的布片、紙片、玻片、橡膠片、塑料片、不銹鋼片或鋁片。C4試驗(yàn)方法定量懸液試驗(yàn)將菌液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，并用稀釋液稀釋成含菌量為5×105～5×106cfu/mL的菌懸液。將消毒劑用滅菌蒸餾水稀釋成3個(gè)不同濃度，各吸取分別加入三個(gè)試管內(nèi)，放20±2℃水浴中。待試管內(nèi)液體溫度與水浴溫度平衡后，在三個(gè)試管中分別加入菌懸液(含菌量為5×105～5×106cfu/mL)，混勻并開(kāi)始記時(shí)。分別于4個(gè)不同間隔時(shí)間，各取菌液混合液移入中和劑中混勻。中和10min，作適當(dāng)稀釋后進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。陽(yáng)性對(duì)照以洗脫液代替消毒液，同時(shí)按進(jìn)行。按不同稀釋度推算出每個(gè)樣本存活菌數(shù)(cfu/mL)，按式(C1)計(jì)算殺滅率：試驗(yàn)重復(fù)5次。載體定量試驗(yàn)將滅菌載體平放于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)載體滴注定量菌液(載體回收菌量達(dá)5×105～5×106cfu/片)，涂勻，放37℃培養(yǎng)箱待干。應(yīng)用市售染菌載體時(shí)，回收菌量亦應(yīng)達(dá)5×105～5×106cfu/片)。用滅菌蒸餾水將消毒劑稀釋成3個(gè)不同濃度，各吸取5mL分別加入三個(gè)試管內(nèi)，放20±2℃水浴中。待試管內(nèi)液體溫度與水浴溫度平衡后，加入染菌載體，作用至規(guī)定時(shí)間，將染菌載體移入含中和劑的5mL洗脫液試管內(nèi)，中和10min，振打80次，適當(dāng)稀釋，接種兩個(gè)平板。放37℃培養(yǎng)24～48h，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。陽(yáng)性對(duì)照，以洗脫液代替消毒液按進(jìn)行。C5結(jié)果判定5次試驗(yàn)的殺滅率均≥%判為消毒合格。對(duì)枯草桿菌黑色變種芽胞5次試驗(yàn)均全部殺滅判為消毒合格。附錄D有機(jī)物保護(hù)試驗(yàn)(補(bǔ)充件)D1內(nèi)容提要有機(jī)物保護(hù)試驗(yàn)是測(cè)定消毒劑對(duì)有機(jī)物保護(hù)條件下的微生物的殺滅作用，以殺滅率表示之，其結(jié)果與該消毒劑定量消毒試驗(yàn)相比較，用于評(píng)價(jià)有機(jī)物對(duì)消毒劑的殺菌能力的影響。D2培養(yǎng)基與試劑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，按本標(biāo)準(zhǔn)制備。試劑：稀釋液：同。滅菌蒸餾水。中和劑：按本標(biāo)準(zhǔn)附錄A進(jìn)行選擇。L磷酸緩沖液～(簡(jiǎn)稱PBS)。洗脫液：含1%蛋白胨，%吐溫80的生理鹽水。小牛血清加入菌懸液中，使其最終濃度為10%。D3器材同本標(biāo)準(zhǔn)C3。D4試驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)前預(yù)先將菌液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，用稀釋液稀釋，加入小牛血清，使其最終含血清量為10%，含菌數(shù)為5×105～5×106cfu/mL，以此作為試驗(yàn)菌懸液。以下步驟同本標(biāo)準(zhǔn)。D5結(jié)果判定5次試驗(yàn)的殺滅率均大于%所需最低濃度和最短時(shí)間，判為該消毒劑在有機(jī)物存在下，可以達(dá)到消毒的有效濃度和時(shí)間。此有效濃度和時(shí)間與定量消毒試驗(yàn)達(dá)到消毒的有效濃度和時(shí)間相同或相近，判為有機(jī)物對(duì)消毒劑殺菌作用無(wú)明顯影響。達(dá)到消毒最低有效濃度增加一倍以上或最短作用時(shí)間延長(zhǎng)一倍以上者可視為有明顯影響。附錄E乙型肝炎表面抗原破壞試驗(yàn)(補(bǔ)充件)E1內(nèi)容提要乙型肝炎表面抗原(HBsAg)破壞試驗(yàn)是以HBsAg的抗原活性為間接標(biāo)志，評(píng)價(jià)消毒因子對(duì)乙型肝炎病毒(HBV)滅活能力的試驗(yàn)方法。適用于評(píng)價(jià)化學(xué)消毒劑、紫外線對(duì)HBV的消毒效果。E2試劑小牛血清(56℃，30min滅活)。L磷酸鹽緩沖液(PBS，～。純化HBsAgmL)。固相放射免疫分析法試劑，要求特異性100%，精密性CV≤15%，靈敏度≤mL，線性r＞。酶聯(lián)免疫吸附法試劑，要求特異性100%，精密性CV≤15%，靈敏度≤mL，線性r＞。E3器材吸量器：包括試管、吸管，，和種)和微量進(jìn)樣器μL)。載體(直徑大小的不銹鋼片)。免疫計(jì)數(shù)儀。酶聯(lián)免疫測(cè)定儀。E⒊5低溫冰箱(—30℃～—70℃)。E4HBsAg懸液的配制取LPBS～加入小牛血清，配成含6%小牛血清的懸液。再取該P(yáng)BS，加入濃度為mL的純化HBsAg懸液，使成含%小牛血清，HBsAg濃度為100μg/mL的試驗(yàn)用HBsAg懸液。將試驗(yàn)用HBsAg懸液盛裝入容量為的玻璃安瓿中，封口，放-30℃～-70℃冰箱保存?zhèn)溆?。保存期為三個(gè)月。E5HBsAg的檢測(cè)方法固相放射免疫分析法(SPRIA)。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。E6中和劑選擇在測(cè)定消毒劑對(duì)HBsAg的破壞效果時(shí)，應(yīng)先選出適宜的中和劑及其使用濃度，再進(jìn)行破壞試驗(yàn)。所用中和劑：a.應(yīng)能有效而及時(shí)中止消毒劑的殘余作用；b.中和劑及其與消毒劑的中和產(chǎn)物對(duì)HBsAg的抗原活性沒(méi)有影響，亦不影響檢測(cè)方法對(duì)HBsAg檢出的靈敏度。將消毒劑用無(wú)菌蒸餾水配成不同濃度，取消毒液與懸液混勻，置20±2℃水浴條件下，作用10min，測(cè)定該消毒劑10min抑制或破壞HBsAg抗原性的最低有效濃度。取消毒劑10min抑制或破壞HBsAg抗原性的最低有效濃度與待選中和劑進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)可按下列組別進(jìn)行：a.消毒液+HBsAg懸液；b.消毒液+HBsAg懸液作用10min后+含20%小牛血清的中和劑；c.先取含20%小牛血清的中和劑1mL與消毒液1mL，混勻，作用10～30min，制成中和產(chǎn)物溶液，再行試驗(yàn)。中和產(chǎn)物溶液+HBsAg懸液；d.含10%小牛血清的+HBsAg懸液；e.含10%小牛血清的中和劑+HBsAg懸液；f.中和產(chǎn)物溶液+。經(jīng)檢測(cè)只有在c、d、e組HBsAg活性的測(cè)定值相近(相差10%以下)并都明顯多于b組，a組HBsAg活性不能檢出或檢出活性明顯少于b組，f組陰性對(duì)照正常，方可證明所選中和劑及其使用劑量是適宜的。進(jìn)行消毒試驗(yàn)時(shí)，依據(jù)消毒劑與中和劑等當(dāng)量中和原則，適當(dāng)調(diào)整中和劑的用量。再次按步驟測(cè)定中和效果后，方可進(jìn)行抗原性破壞試驗(yàn)。E7破壞試驗(yàn)方法懸液法懸液法指將HBsAg在懸液中與消毒劑相互作用并進(jìn)行抗原性破壞效果觀察的試驗(yàn)方法。HBsAg懸液的濃度為檢測(cè)試劑靈敏度的104倍。如檢測(cè)試劑的靈敏度為1ng/mL，HBsAg的濃度應(yīng)為10μg/mL。取含5%小牛血清的加到含濃度為100μg/mL的HBsAg懸液中，混勻。取小牛血清20mL加到含80mL滅菌的中和劑溶液中，混勻。破壞試驗(yàn)：將預(yù)定消毒液濃度倍的消毒液與HBsAg懸液按4∶1比例混合，混合液容量不少于。然后置20±2℃水浴條件下，作用達(dá)規(guī)定時(shí)間，即刻取混合液與等體積含20%小牛血清的中和劑混勻，作用10～30min，取樣測(cè)定殘留HBsAg的活性，每一樣本平行測(cè)定2份，每份，取其平均值，判定破壞效果。每種消毒劑觀察3個(gè)濃度，每一濃度觀察4個(gè)作用時(shí)間。試驗(yàn)重復(fù)5次。陽(yáng)性對(duì)照：取含20%小牛血清的中和劑1mL，加到含1mL試驗(yàn)用消毒液的試管中混勻，作用10～30min，制成中和產(chǎn)物溶液。取該中和產(chǎn)物溶液加入試驗(yàn)濃度的HBsAg懸液取樣檢測(cè)，每一樣本檢測(cè)3份，每份，取其平均值為陽(yáng)性對(duì)照值。陰性對(duì)照：取含20%小牛血清的中和劑1mL加到含1mL試驗(yàn)用消毒液的試管中，混勻，作用10～30min，取樣檢測(cè)，每一樣本檢測(cè)3份，每份取其平均值為陰性對(duì)照值。應(yīng)注意陰性對(duì)照不能用試劑盒的陰性對(duì)照樣本。載體法載體法指將在載體表面的HBsAg與消毒因子相互作用，并進(jìn)行抗原性破壞效果觀察的試驗(yàn)方法。HBsAg載體的制備E載體為直徑大小的不銹鋼片，經(jīng)洗滌劑煮沸洗滌脫脂、壓力蒸汽滅菌備用。EHBsAg懸液的濃度為檢測(cè)方法靈敏度的5×104倍。如靈敏度為1ng/mL，HBsAg的濃度應(yīng)為50μg/mL。EHBsAg的污染方法為滴染法。滴染時(shí)，將滅菌載體平鋪于無(wú)菌平皿內(nèi)，用微量進(jìn)樣器吸取HBsAg懸液，滴注于載體中央，每個(gè)載體20μL。然后用L型白金絲將懸液涂布均勻，放37℃培養(yǎng)箱40～60min，待懸液干燥