血清酶類測定課件

血清酶類測定

第一節(jié)概述血漿特異酶為血漿蛋白的固有成分，含量高于其他組織，在血漿中發(fā)揮特定的催化作用。多數(shù)由肝臟合成并以酶原形式分泌入血，在一定條件下被激活起作用。與凝血有關(guān)的酶或酶原、ChE、Cp及LPL等。非血漿特異酶

外分泌酶：由外分泌腺合成并分泌進(jìn)入血漿的酶,包括P-AMY、P-LPS、前列腺ACP等。

細(xì)胞內(nèi)酶：存在于細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行物質(zhì)代謝的酶，隨著細(xì)胞的不斷更新或破壞可少量釋入血液，細(xì)胞內(nèi)外濃度差異懸殊，當(dāng)其大量出現(xiàn)于血清中時，提示酶的來源組織細(xì)胞受損，最常用于臨床診斷。一、血清酶的來源

（二）血中酶的清除：

一般以血中酶的半壽期來代表酶從血中清除快慢AST半壽期17±5h

ALT半壽期47±10h（三）酶合成異常：

1、合成減少：2、合成增加：對于血漿特異酶，細(xì)胞內(nèi)酶合成下降是引起血中酶變化的重要因素（1）癌細(xì)胞LD

（2）骨骼疾病ALP（堿性磷酸酶）

（3）前列腺癌ACP（酸性磷酸酶）（四）其他：測定值受抑制劑和活化劑影響三、血清酶的生理變異1.性別少數(shù)酶如CK、ALP及GGT等有性別差異，與血清酶的來源組織有關(guān)。2.年齡血清酶的活性隨年齡而變化，ALP和GGT到老年時可有輕度升高。年齡差異也見于同工酶。3.進(jìn)食過量飲酒可使血清GGT明顯升高。4.運(yùn)動多種血清酶活性升高，如CK、LD、AST、ALD和ALT等，其升高的幅度與運(yùn)動量、持續(xù)時間、運(yùn)動頻率及骨骼肌所含的酶量有關(guān)。5.妊娠胎盤組織可分泌一些酶進(jìn)入母體血液，如耐熱ALP、LD、LAP和ALT（少數(shù)）等，引起血清中這些酶活性升高。6.其他一些酶活性與體重、身高的增長、體位改變、晝夜變化及家庭因素有關(guān)。四、酶的區(qū)域化分布血清酶符號來源丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶肌酸激酶乳酸脫氫酶堿性磷酸酶酸性磷酸酶-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶5-核苷酸酶單胺氧化酶-淀粉酶脂肪酶谷氨酸脫氫酶異檸檬酸脫氫酶膽堿酯酶山梨醇脫氫酶鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶ALTASTCKLDHALPACP-GT5-NTMAOAMSLPSGLDHICDCHESDHOCTLCAT肝、腎、心心、肝、骨骼肌骨骼肌、心、腦心、腎、骨骼肌、肝、肺小腸、胎盤、肝、腎前列腺、紅細(xì)胞、血小板肝、膽、腎、小腸肝、膽道肝、腎、腦胰、唾液腺胰肝肝、胎盤、心肝肝肝肝五、酶活性測定在臨床診斷中的應(yīng)用（一）在診斷肝膽疾病中的應(yīng)用反映肝細(xì)胞實質(zhì)病變：ALT、AST反映肝細(xì)胞合成功能：ChE、LCAT反映膽道阻塞病變：ALP、GGT反映肝纖維化病變：MAO（五）在診斷肌肉疾病中的應(yīng)用AST，CK，LDH，ALD（六）在診斷前列腺疾病中的應(yīng)用同工酶（七）在診斷腫瘤中的應(yīng)用ACP標(biāo)本（血清或血漿）臨床酶學(xué)測定酶之前，標(biāo)本還要經(jīng)過采集、分離和儲存等一系列處理過程。而酶在血中處于一個動態(tài)變化過程，血液離開機(jī)體后還會有一定變化。因此在其中任何一個階段處理不當(dāng)，都有可能引起測定值的變化。盡量用血清標(biāo)本：

大多數(shù)抗凝劑都在一定程度上影響酶活性，臨床上除非測定與凝血或纖溶有關(guān)的酶，一般都應(yīng)以血清作為首選測定標(biāo)本。

及時測定，如不能及時測定，應(yīng)放入冰箱保存（但有些標(biāo)本不能冷凍）為防止酶蛋白變性，一般至少應(yīng)在血清分離后的當(dāng)天進(jìn)行測定，否則應(yīng)放冰箱冷藏有些酶如LD及其同工酶(LD4和LD5)在低溫(特別是20℃冰凍)可引起不可逆性失活，反而不如室溫穩(wěn)定（“冷變性”）。氨基轉(zhuǎn)移酶活性測定氨基轉(zhuǎn)移酶又稱轉(zhuǎn)氨酶，在機(jī)體內(nèi)多達(dá)60余種，廣泛存在于肝臟、心肌、骨骼肌、腎、腦、胰、肺、白細(xì)胞、紅細(xì)胞中。其中以丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT或GPT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST或GOT)兩種最為重要，它們催化機(jī)體內(nèi)氨基酸的轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)：

ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸?丙酮酸+L-谷氨酸

ASTL-天門冬氨酸+α-酮戊二酸?草酰乙酸+L-谷氨酸A-NH2+BA+B-NH2轉(zhuǎn)氨酶[測定方法]一、速率法（連續(xù)監(jiān)測法）原理NADH在340nm處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測NADH消耗引起的340nm吸光度變化,根據(jù)340nm處吸光度下降速率（－△A/min）計算ALT活性參考方法血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性測定1.該ALT測定法中存在兩個消耗NADH的副反應(yīng)評價雙試劑法：血清與缺少α-酮戊二酸的底物溶液混合，37℃保溫5min，使樣品中所含內(nèi)源性α-酮酸（如丙酮酸）引起的副反應(yīng)進(jìn)行完畢。然后，加入α-酮戊二酸啟動ALT的催化反應(yīng)，在波長340nm處連續(xù)監(jiān)測吸光度下降速率。根據(jù)線性反應(yīng)期吸光度下降速率(-△A／min)，計算出ALT活力單位。（ALT測定的首選方法）血清中存在的游離α-酮酸（如丙酮酸）和增多的谷氨酸脫氫酶（GLDH）能消耗NADH，使測定值偏高。2.在IFCC推薦的試劑盒中含有P5P，這是轉(zhuǎn)氨酶的輔基，能使血清中ALT發(fā)揮最大活性。（二）定時比色法（兩點法）國內(nèi)采用的比色測定法有三種：

賴氏法（30min）金氏法（60min）改良穆氏法（30min）三種方法的原理、試劑、操作步驟和酶作用溫度都相似，單位定義和標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法有差異?；钚詥挝毁囀戏ㄒ钥ㄩT單位報告測定結(jié)果卡門單位定義：血清1ml，反應(yīng)液總體積3ml，25℃，波長340nm，比色杯光徑1.0cm，每分鐘吸光度下降0.001A為一個單位（相當(dāng)于每升反應(yīng)體系中0.1608μmolNADH被氧化）。方法評價操作簡便，不需要紫外分光光度計，易于普及，所用的酶活性單位通過卡門氏分光光度速率法矯正，使其結(jié)果與速率法較為一致，能較好反映酶的真實活性。故衛(wèi)生部臨檢中心建議國內(nèi)無條件使用連續(xù)監(jiān)測法的單位使用賴氏法。2.不適用自動分析儀；試劑穩(wěn)定性差,底物緩沖液不易保存(易長菌);由于賴氏法必須降低底物α-酮戊二酸及2，4-二硝基苯肼的濃度，造成ALT測定不是在最佳條件下進(jìn)行，反應(yīng)中丙酮酸生成量與ALT活性不能呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，這是賴氏法的最大缺陷。ALT廣泛分布于全身各組織器官，尤以肝細(xì)胞中含量最多，其次是腎臟、心臟及骨骼肌，通常只有極少量釋放入血液，所以血清中此酶的活力很低，當(dāng)這些組織病變時，細(xì)胞壞死或通透性增加，細(xì)胞內(nèi)酶大量釋放入血，使血清中該酶活力顯著增高。[臨床意義](1)肝膽疾?。杭毙圆《拘愿窝住⒙曰顒有透窝?、脂肪肝、肝癌、肝硬變活動期、中毒性肝炎、膽結(jié)石、膽管炎和膽囊炎等。(2)心血管疾病：急性心肌梗死、急性心肌炎、急性心力衰竭、腦出血等。(3)骨骼肌疾?。憾喟l(fā)性肌炎、進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良等。（4）一些藥物和毒物可引起ALT活性升高：如氯丙嗪、異菸肼、苯巴比妥、奎寧、水楊酸制劑及酒精、鉛、汞、四氯化碳或有機(jī)磷等

ALT在肝臟疾病中的應(yīng)用價值A(chǔ)LT急性明顯升高，常達(dá)200U以上，病情較重者可達(dá)400-600U以上，甚至更高，個別重型病人甚至可超過1000U。ALT越高，肝臟細(xì)胞損害越嚴(yán)重。慢性活動性肝炎：ALT持續(xù)輕度升高幾十或100U以上（100～200U）慢性肝炎急性肝炎重型肝炎由于肝細(xì)胞發(fā)生大量變性，壞死，使ALT大量進(jìn)入血液，因此，ALT迅速升高，高達(dá)數(shù)百～1000U以上，如果ALT含量越高，上升越快，說明肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重，病情進(jìn)展也越快。當(dāng)病情發(fā)展到一定的嚴(yán)重程度，肝細(xì)胞大量壞死，肝臟生產(chǎn)ALT的能力喪失，這時血液中的ALT降低，但是黃疸卻持續(xù)升高（膽紅素上升），這種現(xiàn)象即所謂“酶膽分離”，往往提示病情正在惡化，常是肝壞死征兆。血清天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性測定[測定方法]一、速率法（連續(xù)監(jiān)測法）NADH在340nm處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測NADH消耗引起的340nm吸光度變化,根據(jù)340nm處吸光度下降速率（－△A/min）計算AST活性參考方法ASTL-天門冬氨酸+α-酮戊二酸?草酰乙酸+L-谷氨酸自發(fā)↓脫羧丙酮酸（二）賴氏比色法[參考區(qū)間]賴氏比色法：8～28卡門單位（反應(yīng)溫度為37℃）速率法：8～40U/L（反應(yīng)溫度為37℃，試劑不含P5P）

AST/ALT比值大小有助于臨床判斷肝病嚴(yán)重程度急性肝炎的AST/ALT均值為0.56:1肝硬化的AST/ALT均值為1.13：1肝癌組AST/ALT均值為2.41：1急性肝壞死組AST/ALT均值為3.61：1肝細(xì)胞中的總含量：AST（主要存在于肝細(xì)胞線粒體內(nèi)）＞ALT（主要存在于肝細(xì)胞胞漿內(nèi)）肝細(xì)胞輕度損傷時主要是胞漿酶釋放出來，血清中ALT＞AST；而肝細(xì)胞重度損傷時胞漿酶、線粒體酶均釋放出來，血清中AST＞＞ALT；隨著肝病由輕變重，AST/ALT的比值就由＜1變?yōu)椋?血清堿性磷酸酶（ALP）活性測定堿性磷酸酶(ALP或AKP)是一組底物特異性較低,在堿性條件下（最適pH為10左右）能水解很多磷酸單酯化合物的酶。

ALP廣泛分布定位于細(xì)胞膜表面，其含量依次為肝、腎、胎盤、小腸、骨骼等。血清中的ALP主要來自肝臟和骨骼，主要用于診斷肝膽和骨骼疾病[測定方法]一、速率法原理以對-硝基苯酚磷酸鈉（PNPP）為底物，AMP或二乙醇胺（DEA）為磷酸?；氖荏w。在堿性條件下，ALP催化PNPP水解釋放出磷酸基團(tuán)，生成游離對-硝基酚（p-nitrophenol,PNP），PNP在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。根據(jù)405nm處吸光度增加的速率（△A/min）推算出血清ALP活性單位。1．測定ALP活性受緩沖液種類的影響2.血清標(biāo)本應(yīng)新鮮，置室溫(25℃)6h測定，ALP活性約增高1％；置室溫1～4d，ALP活性增高3％～6％；若冰凍保存，血清復(fù)溶后ALP活性升高可達(dá)30％。3．血清稀釋度對ALP活性測定有影響。血清與底物緩沖液之比一般在1：50～1：100之間。稀釋度低于1：50時，酶活力降低。4．一般用血清與肝素抗凝血漿測定ALP活性?？鼓齽┤鏓DTA-Na2、草酸鹽、檸檬酸鹽等因能絡(luò)合Mg2+而抑制ALP活性，故不能使用這類抗凝劑的血漿做于ALP活性測定。5．ALP測定受年齡與性別、飲食、運(yùn)動和妊娠等因素的影響。注意事項靈敏度高、線性范圍寬（500U/L以上）和精密度高，是我國及IFCC的推薦方法方法評價二、金氏比色法原理在pHl0的堿性條件下，ALP催化磷酸苯二鈉底物水解，生成游離的酚和磷酸氫二鈉。酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林結(jié)合，并經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色的醌類衍生物，根據(jù)紅色深淺計算出ALP活力的大小。磷酸苯二鈉比色法與更早的布氏法相比具有較大的優(yōu)點，如水解速度快，保溫時間較短、靈敏度較高、顯色穩(wěn)定、不需去蛋白、操作簡單、快速。但與磷酸對硝基酚速率法相比，準(zhǔn)確度、精密度較低；操作比較繁瑣,，靈敏度低。方法評價活性單位ALP金氏單位定義是100ml血清，37℃與底物保溫15分鐘，產(chǎn)生1mg酚為1個金氏單位。[參考區(qū)間]金氏比色法：成人：3～13金氏單位，兒童：5～28金氏單位速率法：女性：1～12歲<500U/L>15歲40～150U/L男性：1～12歲<500U/L12～15歲<750U/L>25歲40～150U/L。

ALP檢測主要用于診斷肝膽和骨骼疾病[臨床意義](1)肝膽系統(tǒng)疾病：各種肝內(nèi)、外膽管阻塞引起的膽汁淤積性疾?。篈LP明顯升高，且ALP升高與血清膽紅素升高相平行，肝內(nèi)局限性膽道阻塞（如肝癌、肝膿腫）：ALP明顯增高，血清膽紅素大多正常。

累及肝實質(zhì)細(xì)胞的肝膽疾?。ǜ窝住⒏斡不篈LP輕度升高。(2)骨骼疾?。海?）妊娠后期及兒童生長期ALP生理性增高由于骨的損傷或疾病使成骨細(xì)胞內(nèi)所含高濃度的ALP釋放入血液中，引起血清ALP活力的增高。如纖維性骨炎、成骨不全癥、佝僂病、骨軟化病、骨轉(zhuǎn)移癌和骨折修復(fù)愈合期等。血清酸性磷酸酶（ACP）活性測定酸性磷酸酶是一組對底物專一性不強(qiáng)、在酸性條件下水解各種正磷酸單酯的酶。

ACP主要分布于前列腺、肝、脾、紅細(xì)胞等，但以前列腺含量最為豐富，可為其它組織中酶活力的1000倍。血清中ACP主要來源于前列腺，稱為前列腺ACP（PAP），它可被酒石酸抑制；非前列腺ACP，不被酒石酸抑制。正常男性血清中的ACP約有1/3～1/2來自前列腺，其余則與女性血中的ACP一樣可能來自血小板或破骨細(xì)胞。ACP的測定底物、原理和方法與ALP相似，只是反應(yīng)pH為酸性。如利用磷酸苯二鈉法和磷酸對硝基酚法等在酸性條件下測定ACP。國外多推薦使用磷酸麝香草酚為底物的比色法。由于ACP不穩(wěn)定，酶活性測定困難，目前已發(fā)展一些免疫學(xué)方法特異而靈敏地測定ACP（特別是PAP）。因紅細(xì)胞及血小板富含ACP，標(biāo)本不能溶血且血標(biāo)本采取后必須盡快分離血清（血漿）并立即測定。不同方法參考范圍也不同。[測定方法][臨床意義]前列腺疾病血清PAP測定是診斷前列腺癌最重要的指標(biāo)之一。在前列腺肥大、前列腺炎、急性尿潴留時亦可升高。酒石酸抑制試驗可區(qū)別PAP與非PAP。骨病惡性骨腫瘤、變形性骨炎、多發(fā)性骨髓瘤、骨質(zhì)疏松、代謝性骨病等輕度增高。肝病肝癌、肝硬化肝炎時ACP增高。血液病溶血性疾病、白血肉、血小板疾病等，ACP均有不同程度的升高。血清-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）活性測定

GGT是催化-谷氨?；茡Q反應(yīng)的一種酶GGT分布于腎、胰、肺、肝、腸和前列腺等多種組織中，其中以腎臟含量最多。血清中GGT主要來源于肝膽系統(tǒng)。

GGT在肝臟中廣泛分布于肝細(xì)胞的毛細(xì)膽管一側(cè)和整個膽管系統(tǒng)，因此當(dāng)肝內(nèi)合成亢進(jìn)或膽汁排出受阻時，血清中GGT增高。

[測定方法]一、速率法以L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺為底物，雙甘肽為谷氨?；氖荏w，在GGT的催化下，谷氨?；D(zhuǎn)移到雙甘肽分子上，同時釋放出黃色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，根據(jù)405nm處吸光度增加的速率（△A/min）推算出GGT活性單位原理

本法準(zhǔn)確度好；精密度好線性范圍寬（460U/L）；操作簡便；底物溶解度高、穩(wěn)定性好，自身水解作用小，是IFCC的推薦方法。但對試劑純度要求高方法評價以γ-谷氨酰α-萘胺作為γ-谷氨?；墓w，雙甘肽作為受體，在GGT作用下，產(chǎn)生α-萘胺，后者與重氮試劑反應(yīng)，產(chǎn)生紅色α-萘胺-對-偶氮苯磺酸，其色澤的深淺與GGT活力成正比。二、重氮反應(yīng)比色法原理操作簡便，顏色穩(wěn)定，線性關(guān)系好，適合一般分光光度計應(yīng)用，但底物水溶性較差，緩沖液和pH對結(jié)果影響較大，現(xiàn)已較少應(yīng)用。

方法評價每100ml血清37℃作用2小時釋放出1μmolα-萘胺為一單位活性單位[參考區(qū)間]男性11～50U/L（37℃），女性7～32U/L（37℃）成年男性3～17U/L，成年女性2～13U/L重氮反應(yīng)比色法：速率法：[臨床意義]尿中GGT活性：

可能有助于診斷腎疾病

血清GGT用于診斷肝膽疾病1.原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌2.阻塞性黃疸3.病毒性肝炎和肝硬化4.乙醇性肝炎血清淀粉酶（AMS/AMY）活性測定人和動物只含α-AMY，此酶以Ca2+為必需因子（除肝素外，各種抗凝劑可通過螯合Ca2+

抑制AMS活性，故標(biāo)本必須用血清或肝素抗凝血漿），其最適pH在6.5～7.5之間，鹵素和其他陰離子有激活作用。血清中的AMS主要有胰型(P型)和唾液型(S型)及其亞型同工酶組成人體中胰腺含AMY最多，唾液腺也分泌大量AMY。

AMY分子量較小，易由腎臟排出，半壽期很短（約2h），所以病變時血清AMY增高持續(xù)時間很短。[測定方法]天然淀粉底物方法：（分子組成）確定底物方法：碘-淀粉比色法目前應(yīng)用最多的方法是以人工合成的麥芽多糖為底物的方法如2-氯-對硝基苯麥芽三糖苷（CNP-G3）和亞乙基封閉的對硝基苯麥芽庚糖苷法（亦稱EPS法），以后者最常用，也是IFCC的推薦方法。原理一、EPS法對硝基苯酚生成量在一定范圍內(nèi)與AMY活性成比，在405nm可以進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測即可測出AMY的活性。方法評價：試劑穩(wěn)定，水解產(chǎn)物確定，化學(xué)計量關(guān)系明確，是最常用的AMS測定方法，也是IFCC的推薦方法。二、碘-淀粉比色法原理α-淀粉酶淀粉葡萄糖+麥芽糖+糊精+碘液蘭色復(fù)合物血清(尿)中α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1，4-糖苷鍵水解，產(chǎn)生葡萄糖、麥芽糖及含有α-1，6-糖苷鍵支鏈的糊精。在底物充分（已知濃度）的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被水解的淀粉結(jié)合，生成藍(lán)色復(fù)合物，其藍(lán)色的深淺與未經(jīng)酶促反應(yīng)的空白管(此處亦相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)管)比較，從而推算出AMS的活力單位?；钚詥挝?00ml血清(尿)中的淀粉酶，在37℃15min水解5mg淀粉為1個單位(U)。成本低、檢測不需要昂貴儀器、試劑穩(wěn)定、操作簡便；但重復(fù)性差、準(zhǔn)確率低方法評價：[參考區(qū)間]EPS法：碘-淀粉比色法：[臨床意義]血清(尿)AMS活性是診斷胰腺疾病的重要指標(biāo)。升高——急性胰腺炎、流行性腮腺炎；——急性膽囊炎、腸梗阻、胰腺癌、膽石癥、潰瘍病穿孔及嗎啡注射后。降低——肝炎、肝硬化、肝癌；——腎功能障礙。急性胰腺炎時血、尿淀粉酶升高的不同表現(xiàn)開始升高時間高峰時間恢復(fù)時間血清8-12h12-24h2-5d尿液12-24h5-7d1-2w血清脂肪酶（LPS）活性測定脂肪酶(Lipase，LPS)是胰腺外分泌酶。LPS可被巰基化合物、膽汁酸、Ca2+及輔脂肪酶等激活劑激活，而被重金屬、絲氨酸所抑制。血清中LPS主要來自胰腺，少量來自胃腸粘膜。[測定方法]比濁法（以橄欖油懸液為底物），以連續(xù)監(jiān)測法為常用。分光光度法：酶偶聯(lián)顯色比色法（多用1,2-甘油二酯為底物）采用人工合成底物1,2-二月桂基-rac-丙三氧基-3-戊二酸試靈酯設(shè)計的連續(xù)監(jiān)測法。此法為一步速率法，具有簡便、快速、靈敏、穩(wěn)定和抗干擾能力強(qiáng)等特點。[臨床意義]主要用于診斷胰腺疾病，在急性胰腺炎發(fā)作后2～12h，血清LPS可顯著升高，24h至峰值，48～72h可能恢復(fù)正常，但隨后又可持續(xù)升高8～15天。血清LPS在急性胰腺炎時活性升高的時間早，上升幅度大，持續(xù)時間長，故其診斷價值優(yōu)于AMY。在酗酒、乙醇性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌、肝膽疾患等血清LPS也可有不同程度的升高。血清單胺氧化酶（MAO）活性測定單胺氧化酶(MAO)是一組催化多種單胺類化合物氧化脫氨的酶，其底物特異性不高。在有氧條件下，MAO能催化多種伯胺，如酪胺、多巴胺和色胺等脫去氨基，生成相應(yīng)的醛、NH3等MAO有MAO-Ⅰ，MAO-Ⅱ及MAO-Ⅲ三型，血清MAO-Ⅰ活性升高常見于器官纖維化，特別是肝硬化和肢端肥大癥;血清MAO-Ⅱ活性升高常見于大面積肝壞死，是診斷肝硬化的重要指標(biāo)。[測定方法]速率法以芐胺為底物，在O2和H2O參與下，MAO催化生成芐醛、NH3和H2O2，產(chǎn)生的NH3再在谷氨酸脫氫酶催化下，與α-酮戊二酸和NADH反應(yīng)，生成谷氨酸和NAD+。在340nm波長下監(jiān)測NADH吸光度的下降速率，即可計算出MAO活力。醛苯腙法底物芐胺在MAO作用下氧化生成芐醛，芐醛與2，4-二硝基苯肼反應(yīng)生成醛苯腙，在堿性溶液中呈紅棕色，在470nm比色測定。[臨床意義]血清MAO活性測定是檢查肝纖維化病變的重要指標(biāo)血清MAO-Ⅰ活性升高主要見于肝硬化和肢端肥大癥（器官纖維化患者血清MAO活性升高與結(jié)締組織代謝亢進(jìn)有關(guān)）；血清MAO-Ⅱ升高則主要見于大面積肝壞死（爆發(fā)性肝炎患者血清MAO活性升高與MAO從壞死的肝細(xì)胞線粒體上脫落有關(guān)）血清乳酸脫氫酶（LDH）活性測定乳酸脫氫酶(LD或LDH)催化乳酸氧化成丙酮酸，同時將氫轉(zhuǎn)移給輔酶NAD+而成為NADH。L-乳酸+NAD+丙酮酸+NADH+H+

LD是一種含鋅的糖酵解酶，廣泛存在于人體各組織中，以肝、心肌、腎、肌肉、紅細(xì)胞含量較多。組織中LDH活力約比血清高1000倍，紅細(xì)胞內(nèi)LDH活力較血清約高100倍（溶血可引起LDH明顯升高）。LDH有5種同工酶。

pH8.8～9.8pH7.4～7.8[測定方法]目前根據(jù)LDH催化反應(yīng)方向的不同，有兩大類測LD方法：以丙酮酸為底物（反應(yīng)方向PL）的逆向反應(yīng)(稱LD-P法)以乳酸為底物（反應(yīng)方向LP）的順向反應(yīng)(稱LD-L法)我國多采用目前IFCC參考方法LD-L法，用連續(xù)監(jiān)測法進(jìn)行測定。一、乳酸為底物的速率法（LD-L法）原理方法評價①乳酸鹽和NAD+底物液的穩(wěn)定性比丙酮酸鹽和NADH底物液的穩(wěn)定性大，試劑若冰凍保存，前者可穩(wěn)定6個月以上，而后者只能保存數(shù)天；②保持線性速率反應(yīng)的時間范圍較寬③重復(fù)性比LD－P法好。LD-L法與LD-P法相比的主要優(yōu)點：注意事項由于逆向反應(yīng)速度比正向反應(yīng)速度快，所以測定方法不同，正常值也有差別，LD－P法的參考值約二倍于LD－L法。不同的LDH同工酶對冷的敏感性有差異。LDH4和LDH5對冷特別不穩(wěn)定。在低溫(特別是20℃冰凍)可引起不可逆性失活，反而不如室溫穩(wěn)定（“冷變性”）。故血清標(biāo)本應(yīng)存放在室溫中，室溫存放2～3天將不出現(xiàn)活性的喪失。如果血清標(biāo)本必須存放較長時間，應(yīng)加入NAD或谷胱甘肽后保存于4℃環(huán)境中以降低LDH4和LDH5的失活速率。標(biāo)本采集：用血清或肝素抗凝血漿測定LDH活性的效果令人滿意，草酸鹽抗凝劑對LDH活性有抑制作用。標(biāo)本應(yīng)嚴(yán)格避免溶血。乳酸脫氫酶在有輔酶I(NAD+)存在的情況下，催化乳酸脫氫生成丙酮酸。丙酮酸與2，4-二硝基苯肼反應(yīng)，生成丙酮酸-二硝基苯腙，在堿性溶液中呈棕紅色。其顏色深淺與丙酮酸濃度成正比，同樣處理丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色，即可求得LDH的活力單位。反應(yīng)式如下：二、比色法原理LDH乳酸+NAD+丙酮酸+NADH+H+丙酮酸+2，4-二硝基苯肼丙酮酸-二硝基苯腙+H2ONaOH活性單位100ml血清在37℃，與底物作用15min，產(chǎn)生lμmol丙酮酸為1個金氏單位。[參考區(qū)間]乳酸為底物的速率法：109～245U／L比色法：190～437金氏單位[臨床意義]LDH測定常用于心肌梗死、肝病和某些惡性腫瘤的輔助診斷。LDH與LDH同工酶測定有助于判定LDH的組織來源(見LDH同工酶測定)。LDH與CK-MB、AST聯(lián)合可判定心肌梗死的病程。LDH活力增高主要見于以下疾?。?．心血管疾病

LDH由于分子量較大，在常用心肌酶中升高最遲，心肌梗死患者在發(fā)生胸痛后8～12hLDH開始升高，24～48h達(dá)高峰，升高水平通常為正常的3～4倍，最高可達(dá)10倍。因其半壽期較長，增高持續(xù)時間可維持7d左右或更長。此時其他酶已恢復(fù)正常，在亞急性心肌梗死診斷上有一定價值。LDH中度升高見于心肌炎，伴有肝淤血的心衰，重度休克及缺氧。2．肝病伴有黃疸的中毒性肝炎患者，LDH可達(dá)正常10倍。LDH升高亦可見于病毒性肝炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、肝硬化等。3．惡性腫瘤70％有肝轉(zhuǎn)移的腫瘤患者及20％～60％無肝轉(zhuǎn)移的腫瘤患者有LDH水平升高?；羝娼鸩?、腹部及肺部腫瘤、胚胎細(xì)胞腫瘤、白血病等亦有LDH升高。4．其它疾病溶血性疾病、腎病、進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良、肺栓塞亦伴有LDH升高。測定血清及胸腹水中LD含量常用來鑒別其為漏出液抑或滲出液，若胸水LD／血清LD>0.6、腹水LD／血清LD>0.4為滲出液，反之為漏出液。LDH是由H（心型）和M型（肌型）兩種不同亞基組成的四聚體，形成5種結(jié)構(gòu)不同的同工酶。按電泳速度命名。血清乳酸脫氫酶同工酶測定心肌，腎和紅細(xì)胞中以LDH1和LDH2最多骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多肺，脾，胰，甲狀腺，腎上腺和淋巴結(jié)等組織中以LDH3最多[測定方法]測定LDH同工酶的方法主要有5類：①電泳法；②離子交換柱層析法；③免疫學(xué)法；④抑制劑法；⑤酶水解法等。其中電泳法為應(yīng)用最早且目前應(yīng)用最廣泛的方法，在電泳法中有瓊脂糖電泳法、乙酸纖維素膜電泳法、聚丙烯酰胺凝膠電泳和全自動電泳（也是一種瓊脂糖電泳）等。+LDH1LDH2LDH3LDH4LDH5[參考區(qū)間]健康成年人血清中LD同工酶存在如下規(guī)律：LD2>LDl>LD3>LD4>LD5部分正常兒童血中可見LDl>LD2。臨床上測定LD同工酶有助于相應(yīng)組織病變的診斷。[臨床意義]心肌梗死和心肌炎：以LD1和LD2升高為主，LD1升高最為顯著，LD1/LD2＞1，即所謂“反轉(zhuǎn)比率”現(xiàn)象，且持續(xù)的時間長，故視為診斷AMI的一個特異指標(biāo)。骨骼肌和肝細(xì)胞損傷：LDH5增高且LDH5＞LDH4，是診斷肝細(xì)胞壞死的敏感指標(biāo)。其它：肺、胰、脾、淋巴結(jié)壞死和炎癥及各種惡性疾病時LD2、LD3、LD4升高；溶血性疾病時LD1和LD2升高，但仍為LD2>LD1；惡性腫瘤如轉(zhuǎn)移到肝臟往往伴有LD4、LD5升高。血清肌酸激酶（CK）活性測定肌酸激酶(CK)催化肌酸和ATP或磷酸肌酸和ADP之間的磷酸轉(zhuǎn)移的可逆性反應(yīng)，反應(yīng)平衡點與體系pH有關(guān)。

CK廣泛分布于全身，在骨骼肌含量最高，其次是心肌和腦。紅細(xì)胞不含CK，輕度溶血不影響結(jié)果。

pH9.0Cr+ATPCrP+ADP

pH6.7[測定方法]CK活性測定可利用正向反應(yīng)，也可利用逆向反應(yīng)，由于以磷酸肌酸為底物的逆向反應(yīng)速度快，約為正向反應(yīng)速度的6倍，所以采用逆向反應(yīng)進(jìn)行測定較為普及。測定方法有比色法（如肌酸顯色法）、速率法(酶偶聯(lián)法)和熒光分析法。其中以速率法最常用，有兩種工具酶及指示酶參與反應(yīng)。IFCC測定CK的參考方法為速率法(酶偶聯(lián)法)

。

一、速率法(酶偶聯(lián)法)可在340nm波長下測定NADPH生成速率而計算CK活性濃度。二、肌酸顯色法磷酸肌酸和二磷酸腺苷(ADP)在肌酸激酶催化下，生成肌酸和三磷酸腺苷(ATP)。肌酸與雙乙酰(2，3-丁二酮)及α-萘酚結(jié)合生成紅色化合物。在一定范圍內(nèi)，紅色深淺與肌酸含量成正比，從而可求得血清中CK活力。在反應(yīng)體系中加入Mg2+作激活劑。半胱氨酸供給巰基，保持CK活性中心必需基團(tuán)不被氧化。氫氧化鋇和硫酸鋅沉淀蛋白并中止反應(yīng)。[臨床意義]骨骼肌中CK含量較高，在各種類型的進(jìn)行性肌萎縮時CK活性均可增高。臨床上主要用于診斷心肌梗死。急性心肌梗死后3～6h就開始急劇升高，可高達(dá)正常上限的10～12倍，20～30h達(dá)高峰。CK對診斷心肌梗死較AST、LDH的特異性高，但此酶增高持續(xù)時間短，在2～4d后就恢復(fù)正常。病毒性心肌炎時，CK活力也明顯升高，對診斷及判斷預(yù)后有參考價值。CK總酶與CK同工酶聯(lián)合測定可判定CK的來源(見CK同工酶測定)。血清肌酸激酶同工酶測定在細(xì)胞質(zhì)有三種同工酶：

CK-BB（CK-1）腦型同工酶腦、前列腺、腸、肺、膀胱、子宮、胎盤及甲狀腺占優(yōu)勢，正常血清CK-BB含量極少，用一般方法測不出。

CK-MB（CK-2）心型同工酶主要分布于心肌中，正常血清含有少量的CK-MB，不超過總活性的5%。

CK-MM（CK-3）肌型同工酶（氧化型\中間型\還原型）（CK-MB1\CK-MB2）（CK-MM1\CK-MM2\CK-MM3）骨骼肌及心肌占優(yōu)勢，正常血清絕大部分為CK-MM的活性肌酸激酶（CK）分子是由M亞基和B亞基組成的二聚體。在細(xì)胞線粒體內(nèi)的另一種同工酶：CK-Mt（CK-4）CK-Mt存在于細(xì)胞的線粒體膜上，在正常血清中CK-Mt是不出現(xiàn)的。當(dāng)線粒體崩解時，線粒體膜的小碎片進(jìn)入血液，故CK-Mt成低聚狀態(tài)。[臨床意義]不同組織受損、壞死，血清中就有不同的CK同工酶增高血清中CK-MB升高是公認(rèn)的診斷AMI和確定有