他汀個體化檢測的臨床意義

他汀個體化基因SLCO1B1和ApoE多態(tài)性診斷的介紹【項目背景】汀類藥物分為天然化合物(如洛伐他丁、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀)和完全人工合成化合物(如氟伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、羅伐他汀、pitavastatin)是最為經(jīng)典和有效的降脂藥物，廣泛應(yīng)用于高脂血癥的治療。他汀類藥物(statins)是羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，此類藥物通過競爭性抑制內(nèi)源性膽固醇合成限速酶(HMG-CoA)還原酶，阻斷細胞內(nèi)羥甲戊酸代謝途徑，使細胞內(nèi)膽固醇合成減少，從而反饋性刺激細胞膜表面(主要為肝細胞)低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein，LDL)受體數(shù)量和活性增加、使血清膽固醇清除增加、水平降低。自1987年起，他汀開始應(yīng)用于臨床，旨在防范心腦血管事件，處方量很大。因而，臨床對于他汀的安全性和預(yù)后一直存在顧慮，特別是他汀與肌肉安全性的問題，嚴重時可致命，雖然發(fā)生率很低，但卻直接影響患者的生存質(zhì)量及預(yù)后，且可影響患者是否應(yīng)該長期服用他汀的選擇。研究表明，肌肉安全性與他汀代謝中的關(guān)鍵酶SLCO1B1基因編碼的OATP1B1密切相關(guān)【1】，有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽(OATP1B1)參與多種藥物的轉(zhuǎn)運，在他汀藥物代謝中負責將血液中的藥物轉(zhuǎn)移至肝臟直接發(fā)揮藥效或代謝轉(zhuǎn)化成為有活性的物質(zhì)。SLCO1B1定位于12號染色體，研究顯示SLCO1B1基因具有遺傳多態(tài)性，其中388A>G、521T>C是兩種常見的單核苷酸多態(tài)性，可以形成4種單倍型SLCO1B1*1a(388A-521T)、SLCO1B1*1b(388G-521T)、SLCO1B1*5(388A-521C)和SLCO1B1*15(388G-521C)。突變型SLCO1B1基因會引起編碼的OATP1B1轉(zhuǎn)運蛋白活力減弱，表現(xiàn)為肝臟攝取藥物能力降低，引起他汀類藥物血藥濃度上升，增加橫紋肌溶解癥或肌病的發(fā)生風險。研究表明，他汀的療效及預(yù)后與載脂蛋白ApoE密切相關(guān)【2】，載脂蛋白E(ApoE)通過多種途徑參與機體的脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)，是影響機體血脂水平的重要內(nèi)在因素。ApoE多肽被認為是高脂蛋白血癥及動脈粥樣硬化性血管病的易感候選基因，與冠心病【3】、老年癡呆【4】等疾病風險密切相關(guān)，人類ApoE基因定位于19號染色體上，主要有兩種單核苷酸多態(tài)性526C>T和388T>C，可以形成3種單倍型分別是ApoE3(388T-526C)、ApoE2(388T-526T)、ApoE4(388C-526C)。文獻報道，ApoE4攜帶者患冠心病的風險要高40%，并且他汀類藥物對ApoE4攜帶者療效往往不佳或無療效【2】，而對ApoE2攜帶者的降脂作用最強?！痉椒ㄔ怼勘井a(chǎn)品使用的方法為多重熒光定量PCR技術(shù)，該技術(shù)基于熒光定量PCR平臺，首先針對SNP位點上下游設(shè)計特異性引物，分別針對野生型及突變型位點設(shè)計不同熒光基團標記的特異性探針，然后對引物及探針進行科學的配比組合，配置SNP位點檢測體系，通過熒光定量PCR儀對臨床樣本DNA進行PCR擴增，同時收集擴增信號，如果信號為野生型探針信號，那么樣本為純合野生型；如果信號為突變型探針信號，那么樣本為純合突變型;如果信號同時有野生型及突變型探針信號，那么樣本為雜合突變型。該方法及相關(guān)產(chǎn)品具有以下明顯優(yōu)勢：1.操作簡便，檢測時間短、結(jié)果易判讀；2.特異性及靈敏度更高，確保結(jié)果客觀準確；3.可實現(xiàn)一管檢測一個SNP位點，通量大；4.具有UNG防污染體系，可有效預(yù)防臨床氣溶膠污染，避免假陽性；5.具有獨特的內(nèi)標系統(tǒng)，可監(jiān)控操作過程；6.具有弱陽性對照及空白對照，可監(jiān)控試劑及環(huán)境質(zhì)量。

L多重熒光定量PCR體系L特異性探針識別特異性模板3.反應(yīng)正常進行，釋放熒光信號EII■■II■IRes'<rs<L多重熒光定量PCR體系L特異性探針識別特異性模板3.反應(yīng)正常進行，釋放熒光信號G[I11111iIiIIIiIIILLLL1【適應(yīng)癥】心內(nèi)科（服用他汀患者的個體化基因診斷，用于風險預(yù)測、療效及預(yù)后）體檢科、老年科（用于冠心病、老年癡呆等發(fā)病風險預(yù)測，提供健康管理方案）【臨床意義】SLCO1B1基因檢測的位點為388A>C、521T>C，其可形成4種單倍型*1a、*1b、*5、*15,SLCO1B1基因編碼的蛋白主要參與藥物的轉(zhuǎn)運，負責將血液中的藥物轉(zhuǎn)移至肝臟中直接發(fā)揮藥效或代謝轉(zhuǎn)化為有活性的物質(zhì)。突變型SLCO1B1基因引起自身轉(zhuǎn)運活力減弱，表現(xiàn)為肝臟攝取藥物能力降低，引起他汀藥物血藥濃度上升，增加橫紋肌溶解癥或肌病的發(fā)生風險。

臨床指導基因基因型臨床意義SLCO1B1*1a/*1a,*1a/*1b,*1b/*1b正常肌病風險，他汀耐受劑量較高*1a/*5,*1a/*15,*1b/*15中度肌病風險，他汀耐受劑量中等*5/*5,*5/*15,*15/*15高度肌病風險，他汀耐受劑量較低ApoE基因檢測的位點為526C>T、388T>C,其可形成3種單倍型ApoE2、ApoE3、ApoE4,ApoE基因編碼的蛋白是影響機體血脂水平的重要內(nèi)在因素，文獻報道，ApoE4的攜帶者服用他汀療效往往不佳或無效，ApoE2攜帶者服用他汀效果最佳。臨床指導基因型建議飲食預(yù)防疾病提示用藥提示E2/E2魚油降脂效果最好適量飲酒風險明顯降低注意黃斑變性、III類高脂血癥；老年癡呆、腦梗塞有保護因子，冠心病風險低他汀療效較好E2/E3E2/E4魚油降脂效果最好適量飲酒風險明顯降低正?；蛐?，老年癡呆、腦梗塞、冠心病正常他汀治療療效正常E3/E3E3/E4魚油降脂風險加大適量飲酒風險明顯大增增加冠心病、心梗、腦梗、老年癡呆風險，宜低脂低鹽低糖，忌煙酒魚肉他汀療效較差【參考文獻】MikkoNiemi,MarjaK.Pasanen,andPerttiJ.Neuvonen.OrganicAnionTransportingPolypeptide1B1:aGeneticallyPolymorphicTransporterofMajorImportanceforHepaticDrugUptake.PharmacolRev63:157181,2011.JohnF.Thompson,PhD;CraigL.Hyde,PhD;LindaS.Wood,MS;SaraA.Paciga,MA;DavidA.Hinds,PhD;DavidR.Cox,MD,PhD;G.KeesHovingh,MD,PhD;JohnJ.P.Kastelein,MD,PhD.ComprehensiveWhole-GenomeandCandidateGeneAnalysisforResponsetoStatinTherapyintheTreatingtoNewTargets(TNT)Cohort.CircCardiovascGenet.2009;2:173-181.RaphaelChouinard-WatkinsandMelaniePlourdeFattyAcidMetabolisminCarriersofApolipoproteinEEpsilon4Allele:IsItContributingtoHigherRiskofCognitiveDeclineandCoronaryHeartDisease?Nutrients2014,6,4452-4471;doi:10.3390/nu6104452PingWu1,2Hong-LeiLi1Zhi-JunLiu1Qing-QingTao1MiaoXu1Qi-HaoGuo1Zh