體內(nèi)藥物分析終極復(fù)習(xí)資料

體內(nèi)藥物分析定義。P1研究藥物及其代謝物在生物體內(nèi)數(shù)量和質(zhì)量變化規(guī)律的方法學(xué)科,獲得藥物在體內(nèi)吸收、分布、代謝排泄等各種動力參數(shù)，藥物與大分子的相互作用，代謝產(chǎn)物、代謝途徑等信息，對藥物評價，為臨床合理用藥、研發(fā)新藥等提供科學(xué)依據(jù)。影響血藥濃度的因素（理解）.P3-5（1）機(jī)體因素：包括生理、病理、遺傳因素（2）藥物因素：包括劑型因素、藥物相互作用（3）（3）其他因素：大氣污染、食品、煙、酒、茶等藥物進(jìn)入體內(nèi)后，血液循環(huán)為藥物體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的樞紐。大多數(shù)藥物只有達(dá)到作用部位和受體部位，并達(dá)到一定的濃度后，才產(chǎn)生一定的藥理作用。多數(shù)藥物的血藥濃度與藥理效應(yīng)呈平行關(guān)系，部分藥物的血藥濃度與藥效無明顯相關(guān)關(guān)系。體內(nèi)藥物分析的生物樣本及分析對象。P8生物樣本：凡是體液所到之處，如血液、尿液、唾液、毛發(fā)、各種器官、組織、呼出氣體等都是取樣對象，還包括細(xì)胞懸液微粒體孵育液、器官灌流液等體外試驗中的各種生物介質(zhì)。分析對象：母體藥物、代謝產(chǎn)物、必要的內(nèi)源性物質(zhì)或與之相關(guān)的其他藥物。體內(nèi)藥物分析的特點（1）干擾雜質(zhì)多（2）被測濃度低（3）供試樣品量少（4）待測物的易變性（5）要求較快提供結(jié)果（6）要有一定的儀器設(shè)備（7）工作量大生物樣品選擇的基本原則。常用的生物樣品及其應(yīng)用特點?P19選擇原則：（1）必須能反映濃度與藥效的關(guān)系（2）易于獲得（3）便于處理（4）根據(jù)不同目的要求選取常用生物樣品及應(yīng)用特點：血液優(yōu)點：較好體現(xiàn)藥物濃度與治療的關(guān)系缺點：（1）損傷性取樣，取樣量有限制（2）需要專業(yè)人員操作尿液優(yōu)點：（1）非損傷性取樣（2）藥物濃度高（3）收集方便缺點：（1）濃度變化大,與血藥濃度相關(guān)性差（2）:不易采集，保存（3）:腎功能不全、嬰兒不宜用此法唾液優(yōu)點：(1)非損傷性取樣含蛋白濃度低，易處理CS/Cp較恒定時，可代替血樣進(jìn)行TDM及藥物動力學(xué)研究缺點：(1)適用藥少取樣量變化大毛發(fā)優(yōu)點：(1)取樣方便，可重復(fù)取樣(2)通過測某特定代謝物區(qū)別濫用藥、臨床藥可獲得長期用藥信息缺點：(1)預(yù)處理繁雜，干擾多分析對象含量低，需精密儀器6.血液樣品的采集和制備.P21米集：通常用一次性針頭插入靜脈血管內(nèi)抽取，取下針頭，轉(zhuǎn)移到相應(yīng)容器，不能用力推壓以免血細(xì)胞破裂制備：血漿：多以肝素作抗凝劑，取適量于離心管，旋轉(zhuǎn)使均勻分布于管壁，傾去多余液體，干燥試管；然后加入血樣，離心后取上層黃色液體即可，其量約為全血的50%血清：等血樣中血塊凝結(jié)，在室溫25°下凝結(jié)速度較慢，可在37°水浴加快血清析出，離心后取上清液即可，其量約為全血的40%(3)全血:在血樣中加入含有抗凝劑的試管，輕輕混勻即可。6.生物樣品的儲存。P23-24冷凍儲存加穩(wěn)定劑(酶抑制劑、抗氧劑)加防腐劑或調(diào)節(jié)pH去除蛋白的方法及原理，各種常用的蛋白沉淀劑及其效果。P27-28蛋白質(zhì)沉淀法：生成不溶性鹽沉淀,低于蛋白質(zhì)等電點的pH時，酸根與帶正電荷的蛋白質(zhì)形成不溶性鹽沉淀；高于蛋白質(zhì)等電點pH時，金屬離子與蛋白質(zhì)中帶負(fù)電荷的羧基形成不溶性鹽沉淀.鹽析和脫水：與水混溶的有機(jī)溶劑可以與蛋白質(zhì)爭奪水化膜，并使水的介電常數(shù)減少，從而影響蛋白質(zhì)的解離程度及所帶電荷數(shù)量，增加蛋白質(zhì)顆粒間的引力使蛋白質(zhì)沉淀。組織的酶消化法：蛋白水解酶可在溫和條件下有效水解生物蛋白，將與蛋白質(zhì)結(jié)合的藥物釋放出來常用的綴合物水解方法有哪些？P28酸水解酶水解溶劑解什么樣品需要進(jìn)行有機(jī)破壞處理？P29微量元素多數(shù)以結(jié)合的形式存在于有機(jī)物中，在分析和測定這些元素時，需將這些元素從有機(jī)物中游離出來，或者將有機(jī)物破壞后測定，根據(jù)被測的性質(zhì)，選則合適的有機(jī)物破壞法，使樣品中絕大部分有機(jī)物破壞。某些元素在破壞有機(jī)物的過程中無絲毫損失，又能在破壞有機(jī)物后測定是何物干擾。游離藥物與結(jié)合藥物分析的方法有哪些？其原理是什么?P29-30平衡透析法、超濾法、超離心法、凝膠過濾法前兩法原理:利用半透膜只允許小分子藥物通過，而不允許大分子藥物通過的原理使游離性與結(jié)合性藥物分離液液提取法的原理、影響因素及提取技術(shù)。P30—33原理：藥物與干擾成分在互不相容的兩相溶劑中的分配系數(shù)不同，選擇性地提取生物基質(zhì)中的藥物影響因素:水相pH。提取溶劑種類、離子強(qiáng)度提取技術(shù)：通常在戴塞的試管中進(jìn)行，多半進(jìn)行一次提取，用酸堿回提時也只是一次，不考慮提取盡藥物液固提取法的原理,固相萃取的主要步驟，及固相萃取的影響因素。P33—35原理：將樣品液通過合適的固相小柱,利用藥物與雜質(zhì)對固相小柱親和力的差別，用適當(dāng)溶劑沖洗、洗脫，使藥物得到凈化步驟：（1）固相柱選擇（2）固相柱處理（3）樣品液上樣（4）分離凈化（5）待測物洗脫提取率、選擇性的影響因素：（1）流速（2）樣品裝載量（3）固相柱使用要求（4）樣品上柱前的處理提取溶劑的蒸發(fā)方法。P36抽真空揮發(fā)或直接通入氣體使溶劑揮發(fā)柱切換技術(shù)的原理。見PPT是一種在線固相分離技術(shù)：選用一個3?5cm長的短柱，用低溶劑強(qiáng)度的預(yù)處理流動相使生物樣品凈化，富集切換閥后，分析流動相將組分帶入分析柱分離測定測定結(jié)束后儀器自動恢復(fù)開始狀態(tài)，準(zhǔn)備下次進(jìn)樣微透析技術(shù)的定義。P45（MD）是一種膜分離技術(shù)，利用膜透析原理，對細(xì)胞液進(jìn)行流動性連續(xù)采樣，在不破壞生物體內(nèi)環(huán)境的情況下，直接插到生物活體內(nèi)采樣進(jìn)行原位測定。基本概念P51-52生物介質(zhì)：指一種生物來源的物質(zhì)，能夠以可重復(fù)方式采集和處理。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：用于制備標(biāo)準(zhǔn)樣品和QC樣品的待測物的參比標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)構(gòu)上可以是物質(zhì)本身、其游離堿、酸、鹽、酯。標(biāo)準(zhǔn)樣品：在空白介質(zhì)中家人已知量待測物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制成的樣品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算質(zhì)控樣品和未知樣品中待測物濃度。質(zhì)控樣品：在空白生物介質(zhì)中加入已知量待測物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制成的樣品，監(jiān)測生物分析方法的重復(fù)性和評價每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。介質(zhì)效應(yīng)：樣品中存在除待測物以外的其他干擾物質(zhì)，對待測物響應(yīng)值造成直接或間接影響分析批：包括待測樣品、適當(dāng)數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)樣品和QC樣品的完整系列。特異性的定義及考察方法。P52定義：指樣品中存在干擾成分的情況下分析方法能準(zhǔn)確、專一測定分析物的能力?？疾旆椒?至少取六個不同個體空白樣品，采用擬定的方法進(jìn)行測定，所得結(jié)果接近于定量限濃度的模擬樣品和用藥后的實際生物樣品比較，以證明內(nèi)源性物質(zhì)、相應(yīng)的代謝物、降解產(chǎn)物及其他共服藥物不干擾樣品測定標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍，結(jié)合實驗進(jìn)行復(fù)習(xí)。P52-5420.定量下限的定義、考察方法及要求.定義：指符合準(zhǔn)確度、精密度要求的生物樣品中藥物的最低定量濃度，其反映了方法的靈敏度.考察方法：按標(biāo)準(zhǔn)曲線項下方法制備樣品，至少制備5個標(biāo)準(zhǔn)樣品，按照擬定方法進(jìn)行測定，考察精密度與準(zhǔn)確度.要求:LLOQ的準(zhǔn)確度應(yīng)在真實濃度的80%?120%范圍內(nèi)；精密度的RSD應(yīng)小于20%;LLOQ限度要求：至少能滿足測定3—5個半衰期后生物樣品中的藥物濃度（或能檢測出Cmax的1/10?120時的藥物濃度），信噪比（S/N）一般大于5.21精密度準(zhǔn)確度的定義、表示方法、考察方法和要求。準(zhǔn)確度：指用該方法測得的生物樣品中待測藥物濃度與其真實濃度的接近程度。表示方法：相對回收率（RR）或相對誤差（RE）要求：RR85%?115%（LLOQ附近80%?120%）RE±15%（LLOQ附近±20%）精密度:每次測定結(jié)果與多次測定的平均值的偏離程度。表示該分析方法的可重復(fù)性可反映分析方法的可操作性.表示方法:相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）要求：RSD一般應(yīng)小于15%LOQ附近RSD應(yīng)小于20%.需要進(jìn)行哪些穩(wěn)定性試驗？（1）短期室溫穩(wěn)定性（2）長期儲存穩(wěn)定性（3）凍融穩(wěn)定性（4）儲備液穩(wěn)定性（5）待測溶液穩(wěn)定性（6）樣品處理過程穩(wěn)定性提取回收率的定義、評價指標(biāo)和限度要求。指從生物樣本基質(zhì)中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)產(chǎn)生的響應(yīng)值的百分比，用于評價樣品預(yù)處理方法.取待測藥物對準(zhǔn)品加入空白基質(zhì)中，制備高、中、低3個濃度QC樣品，每個濃度5個樣品按樣品處理方法處理，測定.另取等量相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，不經(jīng)提取處理，直接測定。內(nèi)標(biāo)（1個濃度5個QC樣品）也需進(jìn)行提取回收率試驗。提取回收率限度要求：一般應(yīng)^50%且恒定；高、中濃度的RSD應(yīng)＜15%；低濃度的RSD應(yīng)W20%。內(nèi)標(biāo)的提取回收率應(yīng)與被測物一致或相近，一般相差不超過土10%分析方法的質(zhì)量控制方法及限度要求。每個分析批生物樣品測定時應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測定高、中、低3個濃度的QC樣品，每個濃度至少雙樣品，QC樣品數(shù)不得少于未知樣品數(shù)的5%，且不得少于6個，并均勻分布在未知樣品測試順序中.限度要求：偏差一般應(yīng)小于15%,低濃度點小于20%，最多允許33%的質(zhì)控樣品結(jié)果超限，且不得均在同一濃度血漿蛋白結(jié)合率的定義，測定常用的5種方法，平衡透析法原理。（第一組）定義：藥物血漿蛋白結(jié)合率是藥物與血漿蛋白結(jié)合的量占藥物總濃度的百分率，是藥物代謝動力學(xué)的重要參數(shù)常用方法：（1）平衡透析法（2）超濾法）（3）超速離心法（4）光譜法（5）色譜法平衡透析法原理：半透膜與蛋白質(zhì)易產(chǎn)生體積遷移效應(yīng)，對于帶電的蛋白質(zhì)可能產(chǎn)生Gibbs-Donna效應(yīng)和以非特異性的透析設(shè)備表面的藥物吸附效應(yīng)在鹽酸哌甲酯穩(wěn)定性考察實驗中,采取的提高穩(wěn)定性的方法有哪些?分別從什么方面起到提高穩(wěn)定性的作用？（第三組）28.基質(zhì)效應(yīng)的定義，來源，評定方法及消除方法。（第四組）基質(zhì)效應(yīng):來源于生物樣品中的內(nèi)源組分和樣品處理后引入的雜質(zhì)，常對樣品的測定有顯著的干擾，并影響測定結(jié)果的穩(wěn)定性，這些影響和干擾被稱為基質(zhì)效應(yīng)。來源:內(nèi)源性雜質(zhì)指生物樣品中存在的有機(jī)和無機(jī)成分，經(jīng)前處理后仍存在于提取液中.外源性雜質(zhì)外源性組分在生物樣品中不存在，但同樣會帶來基質(zhì)效應(yīng)，由樣品前處理各步驟引入。評定方法：（1）柱后灌注法（2）提取后添加法消除方法：（1）樣品前處理（2）同位素內(nèi)標(biāo)（3）色譜分離（4）質(zhì)譜分離29.手性高效液相色譜法的分類?P151（第五組）（1）手性衍生化試劑法（2）手性流動相添加法（3）手性固定相法30.Caco-2細(xì)胞模型用于什么類型的研究，花旗松素和落新婦苷在細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)情況如何？（第七組）是一種人克隆結(jié)腸腺癌細(xì)胞，結(jié)構(gòu)和功能類似于分化的小腸上皮細(xì)胞，具有微絨毛等結(jié)構(gòu)，并含有與小腸刷狀緣上皮相關(guān)的酶系。Caco—2細(xì)胞與人小腸上皮細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上相似，具有相同的細(xì)胞極性和緊密連接。可以用來進(jìn)行模擬體內(nèi)腸轉(zhuǎn)運(yùn)的實驗?；ㄆ焖伤睾吐湫聥D昔在Caco-2^胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)速率具有明顯的方向也二從BLfiSl到AP側(cè)A）的轉(zhuǎn)運(yùn)速率高于相反方向的轉(zhuǎn)運(yùn)速率（如圖）Miraln暗。111*|T"llo*nGonuntMliCNi|維|晶示eau>-2細(xì)胞對兩者rr明顯的外排h用“花恒松素和落新?lián)魪腁P側(cè)到BMH轉(zhuǎn)讓的Papp均小于JxHOX-句cm/i衰明兩者請過地脂魅力魏差.提市它們口服后生物利用度箭差。免疫分析法的原理。P178-181,當(dāng)標(biāo)記抗原與未標(biāo)記抗原同置于含有一定抗體的反應(yīng)體系中，標(biāo)記抗原（Ag）與抗體（Ab）發(fā)生競爭結(jié)合反應(yīng)免疫反應(yīng)的基本條件，什么是抗原，藥物屬于什么類型抗原.特異抗體的制備和鑒定.基本條件:特異性抗體、標(biāo)記抗原、未標(biāo)記抗原（標(biāo)準(zhǔn)品）抗原：指在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)的物質(zhì)藥物大多為小分子物質(zhì)，認(rèn)為是半抗原,與蛋白質(zhì)等載體物質(zhì)結(jié)合后成為完全抗原特異抗體的制備：抗原+福氏佐劑混合形成穩(wěn)定的油包水乳劑；注射部位：多采用腳掌、腹股溝淋巴結(jié)、大腿肌肉、皮下及靜脈等；時間：間隔一定時間注射一次，數(shù)月后可得滿意的抗血清.當(dāng)抗體達(dá)一定量時，及時采血，分取血清（抗體），經(jīng)純化分離后對抗體進(jìn)行鑒定。鑒定：（1）滴度滴度（titer）——即效價，以抗血清的稀釋度表示，稀釋倍數(shù)越大，滴度越高效價也越高（2）特異性特異性（specificity）——即免疫反應(yīng)的專屬性，用交叉反應(yīng)率來表示（3）活度活度（activity）—-指抗體與相應(yīng)抗原的親和力，即抗原抗體結(jié)合的牢固度.33.免疫分析法的分類P187，游離與結(jié)合標(biāo)記藥物的分離方法?P189—190分類：按標(biāo)記物不同，分為：放射免疫分析法（RIA）酶免疫分析法（EIA）熒光免疫分析法（FIA）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）根據(jù)抗原抗體結(jié)合反應(yīng)平衡后，是否將結(jié)合物（B）與游離物（F）分離，分為：均相免疫非均相免疫分離方法：層析法、沉淀法、吸附法、微孔濾膜法、固相法、雙抗體法藥代動力學(xué)的定義P233.臨床藥代動力學(xué)研究的對象有哪些？各自屬于哪個臨床試驗階段？目的分別是什么？（第二組）定義：藥物代謝動力學(xué)（ADME）是研究藥物在生物體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄過程及規(guī)律的一門學(xué)科。應(yīng)用動力學(xué)原理與數(shù)學(xué)處理方法，定量描述體內(nèi)藥物及代謝物濃度隨時間變化的動態(tài)規(guī)律，探討藥物在體內(nèi)的代謝途徑。臨床研究對象：（1）健康志愿者的藥代動力學(xué)研究【1期】探討藥物在體內(nèi)吸收、分布和消除的動態(tài)變化特點（2）目標(biāo)適應(yīng)癥患者的藥代動力學(xué)研究【2、3期】當(dāng)目標(biāo)適應(yīng)癥患者的疾病狀態(tài)對藥物的藥代動力學(xué)產(chǎn)生重要影響時應(yīng)進(jìn)行此試驗（3）特殊人群的藥代動力學(xué)研究【3、4期】肝腎功能損害患者、老年和兒童患者可能影響藥物代謝、排泄，因此進(jìn)行研究，指導(dǎo)合理用藥保證安全有效（4）群體藥代動力學(xué)【】關(guān)于目標(biāo)患者個體之間藥物濃度變異來源與相關(guān)性的研究生物利用度和生物等效性試驗均是評價制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，但兩者的目的各有側(cè)重，且在藥品研發(fā)的不同階段發(fā)揮不同作用。P233整段話（第二組）生物利用度和生物等效性均是評價制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，前者反映藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)的程度和速度，是新藥研究過程中選擇合適給藥途徑和確定用藥方案的重要依據(jù)之一。后者重點在以預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較，是保證含同一藥物活性成分的不同制劑體內(nèi)行為一致性的依據(jù)，是判斷研發(fā)產(chǎn)品是否可替換已上市藥品使用依據(jù)