海藻糖合成酶（TS）活性檢測試劑盒說明書-可見分光光度法UPLC-MS-502

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可見分光光度法試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體30mL×1瓶4℃保存試劑一液體7mL×1瓶4℃保存試劑二粉劑×1瓶4℃保存試劑三液體30mL×1瓶4℃保存試劑四液體30mL×1瓶4℃保存標準品粉劑×1支4℃保存溶液的配制：114mL（）4℃2周。2、工作液的配制：臨用前將試劑三和試劑四1:1等體積混合，根據(jù)樣本實際所需用量現(xiàn)配現(xiàn)用。31mL50μmol/mL4℃2163.125μmol/mL（25μL50μmol/mL375μL）海藻糖是功能性低聚糖，具有非還原性、保濕性、熱酸穩(wěn)定性、抗凍結(jié)性等特性，是細胞在不良環(huán)境條件下產(chǎn)生的一種重要的抗逆應激物之一，它對生物大分子和生物組織有著非特異性的保護作用。海藻糖合成酶（TrehaloseSynthase，TS）能催化麥芽糖生成海藻糖，是海藻糖生物合成的關鍵途徑之一。本試劑盒使用糖化酶分解剩余麥芽糖為葡萄糖，通過葡萄糖氧化酶法測定葡萄糖含量，按照麥芽糖減少的量表示海藻糖合成酶的活性。2-3可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、低溫離心機、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、蒸餾水。一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細胞（功率200W，超聲3s，間隔9s，重復30次）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清（若上清不夠澄清，建議重復上述離心步驟），置于冰上待檢。:1:5~100.1g1mL8000g，4℃10min（1、分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至505nm，蒸餾水調(diào)零。2、在EP管中進行如下操作：加入試劑（μL）對照管測定管標準管空白管樣本100100--試劑一-100--標準溶液--100-蒸餾水--10020025min--試劑一100試劑二200200200200（12510000g離心10取上清待測。（在EP）加入試劑（μL）對照管測定管標準管空白管上清液100100100100工作液90090090090037℃301mL505nmAAAAΔA測定=A對照ΔA=A標準注：空白管和標準管只需測1~2次。三、酶活性計算1、按樣本蛋白濃度計算：單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol麥芽糖生成1nmol海藻糖定義為一個酶活力單位。TS酶活（U/mgprot）=C標×ΔA測定÷ΔA標準×V樣÷（V樣×Cpr）÷T×F÷2=13.02×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr×F2、按樣本質(zhì)量計算：g1nmol1nmolTS（U/g）C×ΔA測定÷ΔA樣÷（V樣樣總=13.02×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F3、按細菌或細胞數(shù)量計算：單位的定義：每104個細菌或細胞每分鐘催化1nmol麥芽糖生成1nmol海藻糖定義為一個酶活力單位。TS酶活（U/104cell）=C標×ΔA測定÷ΔA標準×V樣÷（V樣÷V樣總×cell）÷T×F÷2=13.02×ΔA測定÷ΔA標準÷cell×FC