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Amino-2-Hydroxy-5-NitrobenzoicAcid注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。1mL/一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))15001mL提(203秒,關(guān)1030次800,1020.1g1mL8000g,4℃10min3漿0.1L漿.9L800g,二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,蒸餾水調(diào)零。2、將10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL,現(xiàn)用現(xiàn)配,標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表。序號(hào)稀釋前濃度(mg/mL)標(biāo)準(zhǔn)液體積(μL)蒸餾水體積(μL)稀釋后濃度(mg/mL)110100900121160400.831120800.641801200.451401600.2備注:實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需180μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。3、樣本測(cè)定(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑):試劑名稱(chēng)(μL)對(duì)照管測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣本180180--標(biāo)準(zhǔn)液--180-蒸餾水--180試劑一300220300300試劑二-80--置于37℃(哺乳動(dòng)物)水浴鍋/恒溫水浴鍋或25℃(其它物種)水浴鍋中,準(zhǔn)確反應(yīng)時(shí)間10min試劑三400400400400試劑四400400400400105(5nAΔA=A-AΔA=A標(biāo)準(zhǔn)-A1-2三、THL活力計(jì)算1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立y,gL)A(xAA(xAy,g2、按照蛋白濃度計(jì)算單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。THL活力(U/mgprot)=1000×y÷Cpr÷T=100×y÷Cpr3、按樣本質(zhì)量計(jì)算單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。THL活力(U/g質(zhì)量)=1000×y÷(W÷V樣總)÷T=100×y÷W4、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。THL活力(U/104cell)=1000×y÷(500÷V樣總)÷T=0.2×y5、按血清(漿)體積計(jì)算單位的定義:每mL血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。THL活力(U/mL)=1000
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