亞硝酸還原酶（NiR）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書-微量法UPLC-MS-4523

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)亞硝酸還原酶（NiR）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。貨號(hào)：UPLC-MS-4523規(guī)格：100T/48S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體3mL×1瓶2-8℃保存試劑二粉劑×2瓶2-8℃保存試劑三粉劑×1瓶2-8℃保存試劑四液體10mL×1瓶2-8℃保存試劑五液體10mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品液體1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、試劑二：每瓶臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存2周；2、試劑三：臨用前加入5mL蒸餾水，可70-80℃加熱溶解；2-8℃可以保存3個(gè)月3、試劑五：若出現(xiàn)沉淀，可70-80℃加熱溶解；4、標(biāo)準(zhǔn)品：10μmol/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液；5、工作液：臨用前根據(jù)樣本量將試劑四和試劑五按1:1的比例混合，現(xiàn)用現(xiàn)配。產(chǎn)品說(shuō)明：（Nitritereductase，NiR）2 亞硝酸還原酶可將NO-還原為NO，使樣本中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO-減少，即2 注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：可見(jiàn)分光光度計(jì)//96/冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）（g）:提取液體積（mL）1:5~10比例（0.1g1.0mL提取液）4℃，10000g10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測(cè)。（mL）500~1000:1的比例（5001.0mL提取液）加入提取液，冰浴超聲破碎細(xì)胞（200w3s7s3min10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測(cè)。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。2、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將10μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水等比稀釋至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。3、標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：序號(hào)（μmol/mL）標(biāo)準(zhǔn)液體積（μL）蒸餾水體積（μL）（μmol/mL）110201801211004000.230.22002000.140.12002000.0550.052002000.02560.0252002000.012570.01252002000.0062580.006252002000.003125試劑名稱（μL）基質(zhì)管對(duì)照管測(cè)定管試劑名稱（μL）基質(zhì)管對(duì)照管測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣本-2020--蒸餾水2040試劑一40-40--試劑二404040--混勻后，25℃反應(yīng)1h試劑三404040--充分震蕩30s，常溫靜置5min，取上清--上清液707070--標(biāo)準(zhǔn)品70-蒸餾水70工作液140140140140140充分混勻，常溫靜置5min，于微量玻璃比色皿或96孔板中測(cè)定540nm各管吸光值，分別記為A質(zhì)管、對(duì)照管、測(cè)定管、A標(biāo)準(zhǔn)管和空白管，計(jì)算測(cè)定=A基質(zhì)管-（測(cè)定管-A對(duì)照管，標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-空白管。空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和基質(zhì)管只需測(cè)1-2次，每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。三、亞硝酸還原酶活性計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制x（xLAy（yA標(biāo)準(zhǔn)y=kx+bAx（。酶活計(jì)算按照蛋白濃度計(jì)算2酶活單位定義：每mg組織蛋白每小時(shí)還原1μmolNOˉ的量為一個(gè)酶活力單位。2NiR（U/mgprot）=x×V1÷V2÷Cpr÷T=x×7÷Cpr按照樣本質(zhì)量計(jì)算2酶活單位定義：每g組織每小時(shí)還原1μmolNOˉ的量為一個(gè)酶活力單位。2NiR（U/g質(zhì)量）=x×V1÷V2×V提÷W÷T=x×7÷W按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算2酶活單位定義：每104個(gè)細(xì)菌/細(xì)胞每小時(shí)還原1μmolNOˉ的量為一個(gè)酶活力單位。2N