【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件

化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)第一節(jié)發(fā)光與化學(xué)發(fā)光劑第二節(jié)發(fā)光酶免疫測定(CLEIA)(chemiluminescenceenzymeimmunoassay第三節(jié)化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)(CLIA(chemiluminescenceimmunoassay第四章電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)(ECLI)(electrochemiluminescenceimmunoassay)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)1概念Lei必化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù):集靈敏的化學(xué)目發(fā)光分析和特異的抗原抗體免疫測定于一體的檢測技術(shù)。特點:特異性高、敏感性高、分離簡便、快速、試劑無毒、安全穩(wěn)定可自動化。概2化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的類型按發(fā)光劑不同分為1.發(fā)光酶免疫測定(CLEIA)chemiluminescenceenzymeimmunoassay2.化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)CLIAchemiluminescenceimmunoassay3電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)(ECLelectrochemiluminescencelmmunoassay按分離方法不同分1.微粒子化學(xué)發(fā)光免疫測定2.磁顆粒化學(xué)發(fā)光免疫測定化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的類型3第一節(jié)發(fā)光與化學(xué)牧光劑發(fā)光一種物質(zhì)由電子激發(fā)態(tài)回復(fù)到基態(tài)時,釋放出的能量表現(xiàn)為光的發(fā)射1.光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進(jìn)入激發(fā)態(tài),當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。2.牛物發(fā)光:反應(yīng)底物在熒光素酶的催化下利用ATP產(chǎn)能,生成激發(fā)態(tài)的氧化熒光素,后者在回復(fù)到基態(tài)時多余的能量以光子形式放出。3.化學(xué)發(fā)光:在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光的發(fā)射?；瘜W(xué)發(fā)光是一個多步驟的過程。第一節(jié)發(fā)光與化學(xué)牧光劑4生物發(fā)光螢火蟲熒光素pn-00熒光素酶ATP:O,:Mg2+光+AMP+O2+CO2+氧化螢火蟲熒光素生物發(fā)光5機(jī)制:某些化合物可以利用化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的能量使其產(chǎn)物分子或反應(yīng)中間態(tài)分子上升至電子激發(fā)態(tài)。當(dāng)此產(chǎn)物分子或中間態(tài)分子衰退至基態(tài)時,以發(fā)射光子的形式釋放能量(即發(fā)光)?；瘜W(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物:在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物。發(fā)光劑分為熒光素、生物發(fā)光劑、化學(xué)發(fā)光劑機(jī)制:某些化合物可以利用化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的能6化學(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下幾個條件①能參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng);②與抗原或抗體偶聯(lián)后形成穩(wěn)定的結(jié)合物試劑;③偶聯(lián)后仍保留高的量子效應(yīng)和反應(yīng)動力;④應(yīng)不改變或極少改變被標(biāo)記物的理化特性,特別是免疫活性化學(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下幾個條件71.酶促反應(yīng)的發(fā)光底物是指經(jīng)酶的降解作用而發(fā)出光的一類發(fā)光底物。CLE|A中常用的酶有HRP和APHRP的發(fā)光底物有魯米諾、對羥基苯乙酸AP的發(fā)光底物有AMPD、4-MUP(熒光底物)特點:可作標(biāo)記物、也可作過氧化物酶的底物1.1魯米諾HONHNH/OHtn+hoHRP1.酶促反應(yīng)的發(fā)光底物8對-羥基苯乙酸(HPA)HPA在HO2存在下被HRP氧化成氧化二聚體(熒光物質(zhì)),在350mm激發(fā)光作用下,發(fā)出450mm波長的熒光,可用熒光光度計測量。1.2HPA-CH-COOHHO十HO.CHTCOOH一HRP熒光ChrCOoh氧化二聚體對-羥基苯乙酸(HPA)9AMPPDAMPPD在堿性條件下,被AP酶解生成相當(dāng)穩(wěn)定的AMPD陰離子,其有2~30min的分解半衰期,發(fā)出波長為470mm的持續(xù)性光,在15min時其強度達(dá)到高峰,15~60min內(nèi)光強度保持相對穩(wěn)定。1.3AMPPDOCH3AP/OHAMPPDOPoSHPO4AMPPD10【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件11【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件12【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件13【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件14【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件15【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件16【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件17【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件18【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件19【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件20【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件21【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件22【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件23【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件24【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件25【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件26【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件27化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)第一節(jié)發(fā)光與化學(xué)發(fā)光劑第二節(jié)發(fā)光酶免疫測定(CLEIA)(chemiluminescenceenzymeimmunoassay第三節(jié)化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)(CLIA(chemiluminescenceimmunoassay第四章電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)(ECLI)(electrochemiluminescenceimmunoassay)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)28概念Lei必化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù):集靈敏的化學(xué)目發(fā)光分析和特異的抗原抗體免疫測定于一體的檢測技術(shù)。特點:特異性高、敏感性高、分離簡便、快速、試劑無毒、安全穩(wěn)定可自動化。概29化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的類型按發(fā)光劑不同分為1.發(fā)光酶免疫測定(CLEIA)chemiluminescenceenzymeimmunoassay2.化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)CLIAchemiluminescenceimmunoassay3電化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)(ECLelectrochemiluminescencelmmunoassay按分離方法不同分1.微粒子化學(xué)發(fā)光免疫測定2.磁顆?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測定化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的類型30第一節(jié)發(fā)光與化學(xué)牧光劑發(fā)光一種物質(zhì)由電子激發(fā)態(tài)回復(fù)到基態(tài)時,釋放出的能量表現(xiàn)為光的發(fā)射1.光照發(fā)光:發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照射后進(jìn)入激發(fā)態(tài),當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時發(fā)出較長波長的可見光。2.牛物發(fā)光:反應(yīng)底物在熒光素酶的催化下利用ATP產(chǎn)能,生成激發(fā)態(tài)的氧化熒光素,后者在回復(fù)到基態(tài)時多余的能量以光子形式放出。3.化學(xué)發(fā)光:在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光的發(fā)射?；瘜W(xué)發(fā)光是一個多步驟的過程。第一節(jié)發(fā)光與化學(xué)牧光劑31生物發(fā)光螢火蟲熒光素pn-00熒光素酶ATP:O,:Mg2+光+AMP+O2+CO2+氧化螢火蟲熒光素生物發(fā)光32機(jī)制:某些化合物可以利用化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的能量使其產(chǎn)物分子或反應(yīng)中間態(tài)分子上升至電子激發(fā)態(tài)。當(dāng)此產(chǎn)物分子或中間態(tài)分子衰退至基態(tài)時,以發(fā)射光子的形式釋放能量(即發(fā)光)?；瘜W(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物:在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物。發(fā)光劑分為熒光素、生物發(fā)光劑、化學(xué)發(fā)光劑機(jī)制:某些化合物可以利用化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的能33化學(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下幾個條件①能參與化學(xué)發(fā)光反應(yīng);②與抗原或抗體偶聯(lián)后形成穩(wěn)定的結(jié)合物試劑;③偶聯(lián)后仍保留高的量子效應(yīng)和反應(yīng)動力;④應(yīng)不改變或極少改變被標(biāo)記物的理化特性,特別是免疫活性化學(xué)發(fā)光劑應(yīng)符合以下幾個條件341.酶促反應(yīng)的發(fā)光底物是指經(jīng)酶的降解作用而發(fā)出光的一類發(fā)光底物。CLE|A中常用的酶有HRP和APHRP的發(fā)光底物有魯米諾、對羥基苯乙酸AP的發(fā)光底物有AMPD、4-MUP(熒光底物)特點:可作標(biāo)記物、也可作過氧化物酶的底物1.1魯米諾HONHNH/OHtn+hoHRP1.酶促反應(yīng)的發(fā)光底物35對-羥基苯乙酸(HPA)HPA在HO2存在下被HRP氧化成氧化二聚體(熒光物質(zhì)),在350mm激發(fā)光作用下,發(fā)出450mm波長的熒光,可用熒光光度計測量。1.2HPA-CH-COOHHO十HO.CHTCOOH一HRP熒光ChrCOoh氧化二聚體對-羥基苯乙酸(HPA)36AMPPDAMPPD在堿性條件下,被AP酶解生成相當(dāng)穩(wěn)定的AMPD陰離子,其有2~30min的分解半衰期,發(fā)出波長為470mm的持續(xù)性光,在15min時其強度達(dá)到高峰,15~60min內(nèi)光強度保持相對穩(wěn)定。1.3AMPPDOCH3AP/OHAMPPDOPoSHPO4AMPPD37【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件38【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件39【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件40【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件41【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件42【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件43【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件44【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件45【醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)】化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課