高等動(dòng)物基因工程課件

7高等動(dòng)物基因工程7高等動(dòng)物基因工程1世界上第一只成年體細(xì)胞克隆羊“多利”

世界上第一只成年體細(xì)胞克隆羊“多利”2

多利的基因母親

普通白綿羊乳腺細(xì)胞

細(xì)胞核剔除了細(xì)胞核的蘇格蘭黑臉羊的卵子

科學(xué)家當(dāng)時(shí)一共培育了277個(gè)胚胎，最后只有多利成功出生。體細(xì)胞克隆技術(shù)的低成功率，一直到現(xiàn)在也沒有明顯改善?？寺?dòng)物是否會(huì)早衰，是否可能有先天缺陷，是否應(yīng)當(dāng)允許科學(xué)家進(jìn)行以培育完成人類個(gè)體為目標(biāo)的克隆人研究，都是當(dāng)前爭論的熱點(diǎn)問題。多利的健康狀況因此受備關(guān)注。多利簡介移植到第三頭羊融合、分裂、發(fā)育成胚胎多利的基因母親多利簡介移植到第三頭羊融合、分裂、發(fā)育3全球首只人羊嵌合體。

英國媒體24日報(bào)道說，科研人員已經(jīng)創(chuàng)造出全球首只人羊嵌合體，有望給需要器官移植的患者帶來福音。英國《每日郵報(bào)》報(bào)道說，美國內(nèi)華達(dá)大學(xué)教授伊斯梅爾。贊賈尼歷經(jīng)7年研究，最終利用向綿羊胚胎注射人體干細(xì)胞的技術(shù)，成功培育出一只含有15％人體細(xì)胞的綿羊。贊賈尼表示，這項(xiàng)技術(shù)的最終目的，就是要在綿羊身上培育出可向人體移植的器官。此前，贊賈尼已經(jīng)成功培育出一個(gè)人體細(xì)胞占較大比例的羊肝。但有人擔(dān)心，如果人體細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞最終結(jié)合到一起，就可能產(chǎn)生人羊“混血兒”，引發(fā)社會(huì)倫理危機(jī)。重慶晨報(bào)全球首只人羊嵌合體。4１動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本概念動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)利用轉(zhuǎn)基因的重組子構(gòu)建技術(shù)，重組分子導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化技術(shù)，轉(zhuǎn)基因在受體細(xì)胞染色體上的穩(wěn)定整合及可控制性表達(dá)技術(shù)統(tǒng)稱為轉(zhuǎn)基因技術(shù)．轉(zhuǎn)基因動(dòng)物指以實(shí)驗(yàn)方法導(dǎo)入外源基因，在染色體組內(nèi)穩(wěn)定整合并能遺傳給后代的一類動(dòng)物。1981年，第一次成功地將外源基因?qū)雱?dòng)物胚胎，創(chuàng)立了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)。

１動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本概念動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)5根據(jù)不同的目的，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物操作可以簡單地劃分為四種類型：（l）疾病型轉(zhuǎn)基因動(dòng)物；（2）利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制藥；（3）動(dòng)物改良型；（4）基礎(chǔ)生物學(xué)研究。

根據(jù)不同的目的，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物操作可以簡單地劃分為四種類型：6高等動(dòng)物基因工程課件72、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)程序①將克隆的外源基因注射到一個(gè)受精卵的細(xì)胞核中；②接種后的受精卵移植到雌性受體的子宮，使其順利完成胚胎發(fā)育；③移植后的受精卵發(fā)育生長為后代，其中的部分后代其細(xì)胞中都攜帶有轉(zhuǎn)入的外源基因；④利用這些能產(chǎn)生外源蛋白的動(dòng)物作為種畜或種禽，培育新的純合系。2、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)程序8高等動(dòng)物基因工程課件9高等動(dòng)物基因工程課件103、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的效率動(dòng)物基因轉(zhuǎn)移的起點(diǎn)和終點(diǎn)分別為受精卵和含有整合轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物子代。在這個(gè)過程中，轉(zhuǎn)基因的效率極低。以小鼠轉(zhuǎn)基因?yàn)槔鹤⑸渫庠椿蚝笫芫训拇婊盥蕿?6％；將受精卵移殖到母鼠子宮內(nèi)后受精卵的存活率為25％,母鼠的懷孕率為80％,轉(zhuǎn)基因在基因組上的整合率為24％,因此小鼠轉(zhuǎn)基因的總有效率約為4％.3、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的效率11影響因素１轉(zhuǎn)基因性質(zhì)２轉(zhuǎn)基因的程序３外源基因的大小影響因素１轉(zhuǎn)基因性質(zhì)12動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的結(jié)構(gòu)１基因組片段：分子量大，保持完整的基因結(jié)構(gòu)２小基因：同一基因的某一或若干區(qū)域３融合基因：結(jié)構(gòu)基因，非編碼序列以及表達(dá)調(diào)控序列的來源不同４靶基因：結(jié)構(gòu)基因或調(diào)控序列經(jīng)過誘變或定向突變處理，然后重新輸入回動(dòng)物體內(nèi)５插入基因：在動(dòng)物染色體上隨機(jī)或特異性插入的位點(diǎn)，根據(jù)需要也可以加裝標(biāo)記基因６置換基因；兩側(cè)含有其他的同源序列，用于動(dòng)物基因的定位分離與克隆動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的結(jié)構(gòu)１基因組片段：分子量大，保持完整的基因結(jié)構(gòu)13動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的表達(dá)特性１轉(zhuǎn)基因的時(shí)空特異性表達(dá)

相關(guān)基因的時(shí)序特異性和組織特異性２轉(zhuǎn)基因的可控性表達(dá)

根據(jù)受體細(xì)胞的性質(zhì)和啟動(dòng)子類型來摸索誘導(dǎo)被轉(zhuǎn)基因的表達(dá)控制條件３轉(zhuǎn)基因的共抑制效應(yīng)

共抑制效應(yīng)：當(dāng)受體細(xì)胞染色體上含有轉(zhuǎn)基因的同源伙伴時(shí)，轉(zhuǎn)基因與內(nèi)源性同源基因的表達(dá)將同時(shí)受到抑制．動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的表達(dá)特性１轉(zhuǎn)基因的時(shí)空特異性表達(dá)14共抑制效應(yīng)的特征１共抑制只發(fā)生在轉(zhuǎn)基因與同源的內(nèi)源性基因之間，對其他基因的表達(dá)不產(chǎn)生影響２如果轉(zhuǎn)基因與內(nèi)源性發(fā)生體內(nèi)重組，則共抑制效應(yīng)隨之消失，基因表達(dá)恢復(fù)正常３共抑制現(xiàn)象的發(fā)生與結(jié)構(gòu)基因編碼區(qū)有關(guān)，但不依賴于啟動(dòng)子的來源和性質(zhì)４兩個(gè)相同的轉(zhuǎn)基因之間也能發(fā)生共抑制效應(yīng)共抑制效應(yīng)的特征１共抑制只發(fā)生在轉(zhuǎn)基因與同源的內(nèi)源性基因之間15轉(zhuǎn)基因?qū)雱?dòng)物體內(nèi)的方法轉(zhuǎn)基因?qū)雱?dòng)物體內(nèi)的方法16高等動(dòng)物基因工程課件17高等動(dòng)物基因工程課件18

胸苷激酶基因的選擇系統(tǒng)胸苷激酶(thymidinekinase,TK)是核苷酸合成代謝途徑中的一種酶,能夠?qū)⑿剀辙D(zhuǎn)換為胸苷一磷酸.在單純皰疹病毒(HSV)中發(fā)現(xiàn)的tk基因,幾乎在所有的真核細(xì)胞中都能有效地表達(dá),所以選擇為遺傳標(biāo)記基因.該系統(tǒng)中,首先要建立TK-表型的細(xì)胞株.采用誘變加選擇的方法:在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)加胸苷類似物5-溴尿嘧啶脫氧核苷BUdR,TK催化其摻入細(xì)胞的DNA分子中,導(dǎo)致DNA復(fù)制出現(xiàn)錯(cuò)誤.具有BUdR-DNA的細(xì)胞對UV特別敏感,迅速被殺死,而少數(shù)TK-表型的細(xì)胞株存活.目前最常用的是小鼠L細(xì)胞的TK-突變株(優(yōu)點(diǎn):產(chǎn)生回復(fù)突變的頻率低,而且容易被外源DNA所轉(zhuǎn)化).

胸苷激酶基因的選擇系統(tǒng)19HAT選擇法1962年E.H.Szybalska和W.Szybalski設(shè)計(jì)的,由于選擇TK+細(xì)胞的培養(yǎng)基中含有次黃嘌呤(hypoxanthine),氨基蝶呤(aminopterin,APT),胸苷(thymidine),所以叫HAT選擇法.HAT選擇法20高等動(dòng)物基因工程課件21基本原理:加氨基蝶呤APT,二氫葉酸還原酶被抑制,從而阻斷dTTP,dATP,dGTP的重新合成途徑;加次黃嘌呤,啟動(dòng)dATP,dGTP的補(bǔ)救合成途徑;加胸苷,TK+細(xì)胞能通過胸苷激酶的作用合成dTTP,細(xì)胞繼續(xù)存活;TK-細(xì)胞則死亡.所以,使用HAT培養(yǎng)基能夠選擇出由tk基因轉(zhuǎn)化而來的TK+細(xì)胞.基本原理:22高等動(dòng)物基因工程課件23高等動(dòng)物基因工程課件24高等動(dòng)物基因工程課件25C高等哺乳動(dòng)物的載體系統(tǒng)8外源基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)人腺病毒DNA猴空泡病毒DNA（SV4400）人乳多瘤病毒DNA（BKV）人牛痘病毒DNAC高等哺乳動(dòng)物的載體系統(tǒng)26高等動(dòng)物基因工程課件27高等動(dòng)物基因工程課件28高等動(dòng)物基因工程課件29高等動(dòng)物基因工程課件30高等動(dòng)物基因工程課件31高等動(dòng)物基因工程課件32高等動(dòng)物基因工程課件33高等動(dòng)物基因工程課件34動(dòng)物病毒的特點(diǎn)1、有能夠被真核細(xì)胞識(shí)別的有效的啟動(dòng)子；2、在感染周期中能夠持續(xù)地復(fù)制使基因達(dá)到相當(dāng)高濃度,并實(shí)現(xiàn)有效的表達(dá)；3、病毒能具有效控制自己復(fù)制的順式元件和反式作用因子，改造后可發(fā)展成為能夠在細(xì)胞內(nèi)長時(shí)間的保持高拷貝的外源基因的復(fù)制型質(zhì)粒載體；動(dòng)物病毒的特點(diǎn)1、有能夠被真核細(xì)胞識(shí)別的有效的啟動(dòng)子；35動(dòng)物病毒的特點(diǎn)4、能高效穩(wěn)定地整合到染色體,可提高外源基因?qū)爰闹骷?xì)胞染色體的效率；5、病毒外殼蛋白能夠識(shí)別細(xì)胞接受器，能夠?qū)⑼庠吹鞍赘咝У貙?dǎo)入宿主細(xì)胞(假病毒粒子法)。動(dòng)物病毒的特點(diǎn)4、能高效穩(wěn)定地整合到染色體,可提高外源基因?qū)?6高等動(dòng)物基因工程課件37高等動(dòng)物基因工程課件38高等動(dòng)物基因工程課件39高等動(dòng)物基因工程課件40高等動(dòng)物基因工程課件41高等動(dòng)物基因工程課件42高等動(dòng)物基因工程課件43高等動(dòng)物基因工程課件44高等動(dòng)物基因工程課件45高等動(dòng)物基因工程課件46高等動(dòng)物基因工程課件47高等動(dòng)物基因工程課件48二反轉(zhuǎn)錄病毒載體類型1.簡介:

Retroviruses,是一類含有單鏈RNA的動(dòng)物病毒.基因組含有2條相同的正鏈RNA分子,包裝成二倍體病毒顆粒.此外,顆粒內(nèi)還含有tRNA引物分子,反轉(zhuǎn)錄酶,RNaseH,整合酶等.2.分3個(gè)類群:

泡沫病毒(foamyviruses)類群,慢病毒(entiviruses)類群(如HIV-I,II型),致癌病毒oncoviruses類群.二反轉(zhuǎn)錄病毒載體類型1.簡介:493.反轉(zhuǎn)錄病毒的優(yōu)點(diǎn)

(1)大多數(shù)情況下,反轉(zhuǎn)錄病毒的腫瘤基因都能在正常細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄,利用之作為天然轉(zhuǎn)導(dǎo)因子,改建成載體.(2)寄主范圍廣,包括無脊椎和脊椎動(dòng)物;(3)具有強(qiáng)啟動(dòng)子,有效表達(dá)外源基因;(4)不但感染率高,而且不會(huì)導(dǎo)致宿主細(xì)胞死亡,且形成感染性病毒顆粒.3.反轉(zhuǎn)錄病毒的優(yōu)點(diǎn)50反轉(zhuǎn)錄病毒的一般生物學(xué)特性1生命周期第一時(shí)相從病毒顆粒脫殼到整合到寄主基因染色體上,成為原病毒(provirus);第二時(shí)相原病毒開始轉(zhuǎn)錄,合成并加工成mRNA,進(jìn)而轉(zhuǎn)譯蛋白,組裝顆粒,釋放病毒.反轉(zhuǎn)錄病毒的一般生物學(xué)特性1生命周期51反轉(zhuǎn)錄病毒的一般生物學(xué)特性2基因組特點(diǎn)

有4條RNA鏈,r序列,U3(轉(zhuǎn)錄加尾信號)和U5(轉(zhuǎn)錄起始信號)序列.3編碼讀框

核心部分有3個(gè)開放讀框,兩側(cè)是控制表達(dá)的信號區(qū).反轉(zhuǎn)錄病毒的一般生物學(xué)特性2基因組特點(diǎn)52高等動(dòng)物基因工程課件53高等動(dòng)物基因工程課件54高等動(dòng)物基因工程課件555.反轉(zhuǎn)錄病毒載體類型1、輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體；2、無需輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體；3、廣寄主范圍的反轉(zhuǎn)錄病毒載體；4、反轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體.5.反轉(zhuǎn)錄病毒載體類型1、輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)561、輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體構(gòu)建:從原病毒DNA上移去gag,pol,env等3個(gè)基因的全部或大部分序列,保留下5‘-LTR,3’-LTR以及pBS+ve,PBS+ve和包裝位點(diǎn)psi.然后加入選擇標(biāo)記基因構(gòu)成重組載體.標(biāo)記基因的ATG要恰好插在gag基因的原來位置.1、輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體構(gòu)建:從原病毒57高等動(dòng)物基因工程課件582、無需輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體利用包裝細(xì)胞株,在它的染色體基因組DNA的某個(gè)位點(diǎn)整合有缺失了psi序列的原病DNA.因此可以合成全部蛋白質(zhì),但不能包裝自己的基因組,而包裝反轉(zhuǎn)錄病毒載體.2、無需輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體利用包裝細(xì)胞株59利用動(dòng)物轉(zhuǎn)基因研究基因的表達(dá)與功能目的：１基因?qū)雱?dòng)物受體細(xì)胞后在體內(nèi)的表達(dá)調(diào)控特征以及相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)２研究發(fā)育過程中相關(guān)基因的表達(dá)順序，調(diào)控開關(guān)以及表達(dá)的時(shí)空特異性利用動(dòng)物轉(zhuǎn)基因研究基因的表達(dá)與功能目的：60利用轉(zhuǎn)報(bào)告基因探測動(dòng)物基因組的調(diào)控序列作為報(bào)告基因，在遺傳選擇和篩選檢測方面必須具有以下幾個(gè)條件：(1)已被克隆和全序列已測定；(2)表達(dá)產(chǎn)物在受體細(xì)胞中不存在，即無背景，在被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中無相似的內(nèi)源性表達(dá)產(chǎn)物；(3)其表達(dá)產(chǎn)物能進(jìn)行定量測定。

利用轉(zhuǎn)報(bào)告基因探測動(dòng)物基因組的調(diào)控序列作為報(bào)告基因，在遺傳選61ＧＦＰ轉(zhuǎn)基因動(dòng)物ＧＦＰ轉(zhuǎn)基因動(dòng)物62高等動(dòng)物基因工程課件63報(bào)告基因(reportergene)一種編碼可被檢測的蛋白質(zhì)或酶的基因，一個(gè)其表達(dá)產(chǎn)物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達(dá)調(diào)節(jié)序列相融合形成嵌合基因，或與其它目的基因相融合，在調(diào)控序列控制下進(jìn)行表達(dá)，從而利用它的表達(dá)產(chǎn)物來標(biāo)定目的基因的表達(dá)調(diào)控，篩選得到轉(zhuǎn)化體。報(bào)告基因(reportergene)64高等動(dòng)物基因工程課件65常用的報(bào)告基因氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因(cat)、β-半乳糖苷酶基因、二氫葉酸還原酶基因、熒光酶基因等。cat基因，檢測可通過放射自顯影觀察。熒光酶基因，具有檢測速度快、靈敏度比cat基因高30～1000倍、費(fèi)用低、不需使用放射性同位素等優(yōu)點(diǎn)。常用的報(bào)告基因66分析教材Ｐ341－342

圖7－１２．7－１３

轉(zhuǎn)報(bào)告基因及生物學(xué)效應(yīng)分析分析教材Ｐ341－342

圖7－１２．7－１３

轉(zhuǎn)報(bào)告基因及67利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因同源重組

重組(recombination)的本質(zhì)基因的重排或交換.即2個(gè)DNA分子間或一個(gè)DNA分子的不同部位間,通過斷裂和重接,交換DNA片段從而改變基因的組合和序列.

同源重組(Homologousrecombination)指DNA同源序列間的重組,常發(fā)生于兩個(gè)較長的同源DNA片段或同源染色體之間?？赏ㄟ^同源重組將外源基因定位整合到細(xì)胞基因組中.

利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因同源重組68利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因69利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因一方面可序列特異性滅活細(xì)胞內(nèi)源基因，直接構(gòu)建功能喪失型缺陷株，闡明內(nèi)源基因的生物學(xué)效應(yīng)另一方面可將外源基因置換細(xì)胞內(nèi)源基因或染色體區(qū)域，形成功能獲得型突變體，用于改良動(dòng)物物種和人體基因治療利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因一方面可序列特異性滅活細(xì)胞內(nèi)源基70利用反義基因抑制細(xì)胞基因表達(dá)目的阻斷其mRNA的翻譯而不是破壞基因本身途徑一從細(xì)胞中分離靶基因的mRNA，并以此為模板由細(xì)菌利用反義基因抑制細(xì)胞基因表達(dá)目的71高等動(dòng)物基因工程課件72動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)異源蛋白的基本原理動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)異源蛋白的基本原理73高等動(dòng)物基因工程課件74高等動(dòng)物基因工程課件75高等動(dòng)物基因工程課件76高等動(dòng)物基因工程課件77高等動(dòng)物基因工程課件78高等動(dòng)物基因工程課件79高等動(dòng)物基因工程課件80利用動(dòng)物乳腺組織生產(chǎn)蛋白藥物乳腺作為生物反應(yīng)器的優(yōu)點(diǎn)１乳汁是可連續(xù)合成并分泌的機(jī)體液體２頻繁采集不會(huì)對轉(zhuǎn)基因動(dòng)物構(gòu)成危害３轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物只局限在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，不會(huì)干擾動(dòng)物整個(gè)機(jī)體的正常生理狀態(tài)４在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)后對人體不容易產(chǎn)生免疫反應(yīng)５動(dòng)物乳汁中蛋白組分不多，且性質(zhì)和含量已知，大規(guī)模分離純化十分方便利用動(dòng)物乳腺組織生產(chǎn)蛋白藥物乳腺作為生物反應(yīng)器的優(yōu)點(diǎn)81轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物遺傳性狀改良中的應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物遺傳性狀改良中的應(yīng)用82高等動(dòng)物基因工程課件83基因治療

第一次白色革命是建立公共健康設(shè)施及衛(wèi)生制度；第二次白色革命是將麻醉技術(shù)用于外科手術(shù)；第三次白色革命是疫苗和抗生素的出現(xiàn)與使用；

第四次白色革命是分子水平上的基因療法它可以治療許多不治之癥。基因治療第一次白色革命是建立公共健康設(shè)施及衛(wèi)生制度；84基因治療的歷史1990年9月14日,美國政府首次批準(zhǔn)了一項(xiàng)基因治療臨床研究計(jì)劃：

對一臺(tái)患有腺苷脫氨酶（ADA）缺陷的重度聯(lián)合免疫缺陷癥（SCID）4歲女童進(jìn)行基因治療并獲得成功。該患者今年已經(jīng)10歲了。從而開創(chuàng)了醫(yī)學(xué)界的新紀(jì)元。

在1980年，cline等人就對兩名重度地中海貧血癥患者進(jìn)行了基因治療，未獲成功。基因治療的歷史1990年9月14日,美國政府首次批準(zhǔn)了一85基因治療的概念

在某一個(gè)體的細(xì)胞中導(dǎo)入新基因，利用該基因的表達(dá)產(chǎn)物治療疾病.

用正常基因取代病人細(xì)胞中的缺陷基因，達(dá)到戰(zhàn)勝分子病的目的．

在基因治療中，目的基因被導(dǎo)入到靶細(xì)胞，它們或者與宿主細(xì)胞染色體整合成為宿主遺傳物質(zhì)的一部分，或不與宿主染色體整合而位于染色體外，但都能在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)基因治療的對象：基因病或分子病患者

基因治療的概念

在某一個(gè)體的細(xì)胞中導(dǎo)入新基因，利用該基因的表86根據(jù)病變基因所處的細(xì)胞類型可分為：遺傳性分子病，病變基因位于生殖細(xì)胞中，可遺傳后代。如血友病。非遺傳性分子病，病變基因位于體細(xì)胞中。如癌癥，病毒感染癥。根據(jù)病變基因的數(shù)目，可分為：單基因病，如家族性高膽固醇血癥、囊狀纖維變性癥、神經(jīng)肌肉癥多基因病，如癌癥、艾滋病、糖尿病、心血管疾病、神經(jīng)變性病。根據(jù)病變基因所處的細(xì)胞類型可分為：87基因治療的內(nèi)容基因診斷、基因分離、載體構(gòu)建、基因轉(zhuǎn)移四項(xiàng)基本內(nèi)容?；蛟\斷：基因發(fā)生缺陷的主要原因如基因突變、基因缺失、基因插入、基因重排等；缺陷基因的定位方法很多。

如：限制性片段長度多態(tài)性分析（RPLE）；

PCR擴(kuò)增靶序列及序列分析（PCR）；

單鏈構(gòu)型多態(tài)性分析（PCR-SSCP）；

HGP序列庫搜尋。基因治療的內(nèi)容88基因分離：用于治療的基因的克隆、重組、鑒定、擴(kuò)增、純化?；蜉d體構(gòu)建：用于治療的基因可通過載體導(dǎo)入體內(nèi)，也可以將基因直接注入體內(nèi)。載體可分為病毒類或非病毒類二種，病毒類載體一般都需要重新構(gòu)建，去除其復(fù)制區(qū)和感染區(qū)，并將治療基因插入其中?；蜣D(zhuǎn)移：將基因通過載體或直接導(dǎo)入病變細(xì)胞中，這存在著兩種方式：生殖細(xì)胞或胚胎細(xì)胞：這種治療方法面臨倫理學(xué)和法學(xué)方面的問題，目前無人敢去碰它。體細(xì)胞：它又有兩種方法：

體內(nèi)療法：將基因直接導(dǎo)入病變細(xì)胞內(nèi)；

體外療法：將病變細(xì)胞取出體外，在體外將基因?qū)?，并?jīng)體外增殖，再將細(xì)胞輸回體內(nèi)。基因分離：用于治療的基因的克隆、重組、鑒定、擴(kuò)增、純化。89基因轉(zhuǎn)移的基本方式分別適用于基因治療的體外療法和體內(nèi)療法：用于體內(nèi)療法的基因轉(zhuǎn)移方式重組病毒顆粒的直接注射、組織、器官、血液

重組DNA分子直接注射橫紋肌，如骨骼肌、心肌。

呼吸通氣溶膠：重組基因包裹在脂質(zhì)體中，做成氣溶膠，通過呼吸作用進(jìn)入機(jī)體呼吸道的上皮細(xì)胞。

粒子轟擊基因轉(zhuǎn)移技術(shù)－基因槍：將治療基因或涂抹在金顆粒表面或包在金顆粒內(nèi)。然后采用高壓電極產(chǎn)生的動(dòng)力將金顆粒打入器官、組織或細(xì)胞內(nèi)。

電穿孔技術(shù)：將質(zhì)粒DNA皮下注射，使之暴露于真皮上，然后在表皮和真皮之間加400~600v/cm的電場，適用于皮膚組織。

基因轉(zhuǎn)移的基本方式90基因轉(zhuǎn)移：將基因通過載體或直接導(dǎo)入病變細(xì)胞中，這存在著兩種方式：生殖細(xì)胞或胚胎細(xì)胞：這種治療方法面臨倫理學(xué)和法學(xué)方面的問題，目前無人敢去碰它。體細(xì)胞：它又有兩種方法：

體內(nèi)療法：將基因直接導(dǎo)入病變細(xì)胞內(nèi)；

體外療法：將病變細(xì)胞取出體外，在體外將基因?qū)耄⒔?jīng)體外增殖，再將細(xì)胞輸回體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移：將基因通過載體或直接導(dǎo)入病變細(xì)胞中，這存在著兩種方91腫瘤的基因治療增強(qiáng)腫瘤免疫原性、提供細(xì)胞因子、抑制癌基因的表達(dá)、促進(jìn)抑癌基因的表達(dá)、改變腫瘤和正常細(xì)胞的藥物敏感性。腫瘤的基因治療92基因治療的基本內(nèi)容基因缺陷的原因１進(jìn)化障礙２基因點(diǎn)突變，缺失，插入和重排基因診斷，基因分離，載體構(gòu)建和基因轉(zhuǎn)移基因治療的基本內(nèi)容基因缺陷的原因93演講完畢，謝謝觀看！演講完畢，謝謝觀看！947高等動(dòng)物基因工程7高等動(dòng)物基因工程95世界上第一只成年體細(xì)胞克隆羊“多利”

世界上第一只成年體細(xì)胞克隆羊“多利”96

多利的基因母親

普通白綿羊乳腺細(xì)胞

細(xì)胞核剔除了細(xì)胞核的蘇格蘭黑臉羊的卵子

科學(xué)家當(dāng)時(shí)一共培育了277個(gè)胚胎，最后只有多利成功出生。體細(xì)胞克隆技術(shù)的低成功率，一直到現(xiàn)在也沒有明顯改善?？寺?dòng)物是否會(huì)早衰，是否可能有先天缺陷，是否應(yīng)當(dāng)允許科學(xué)家進(jìn)行以培育完成人類個(gè)體為目標(biāo)的克隆人研究，都是當(dāng)前爭論的熱點(diǎn)問題。多利的健康狀況因此受備關(guān)注。多利簡介移植到第三頭羊融合、分裂、發(fā)育成胚胎多利的基因母親多利簡介移植到第三頭羊融合、分裂、發(fā)育97全球首只人羊嵌合體。

英國媒體24日報(bào)道說，科研人員已經(jīng)創(chuàng)造出全球首只人羊嵌合體，有望給需要器官移植的患者帶來福音。英國《每日郵報(bào)》報(bào)道說，美國內(nèi)華達(dá)大學(xué)教授伊斯梅爾。贊賈尼歷經(jīng)7年研究，最終利用向綿羊胚胎注射人體干細(xì)胞的技術(shù)，成功培育出一只含有15％人體細(xì)胞的綿羊。贊賈尼表示，這項(xiàng)技術(shù)的最終目的，就是要在綿羊身上培育出可向人體移植的器官。此前，贊賈尼已經(jīng)成功培育出一個(gè)人體細(xì)胞占較大比例的羊肝。但有人擔(dān)心，如果人體細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞最終結(jié)合到一起，就可能產(chǎn)生人羊“混血兒”，引發(fā)社會(huì)倫理危機(jī)。重慶晨報(bào)全球首只人羊嵌合體。98１動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本概念動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)利用轉(zhuǎn)基因的重組子構(gòu)建技術(shù)，重組分子導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化技術(shù)，轉(zhuǎn)基因在受體細(xì)胞染色體上的穩(wěn)定整合及可控制性表達(dá)技術(shù)統(tǒng)稱為轉(zhuǎn)基因技術(shù)．轉(zhuǎn)基因動(dòng)物指以實(shí)驗(yàn)方法導(dǎo)入外源基因，在染色體組內(nèi)穩(wěn)定整合并能遺傳給后代的一類動(dòng)物。1981年，第一次成功地將外源基因?qū)雱?dòng)物胚胎，創(chuàng)立了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)。

１動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的基本概念動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)99根據(jù)不同的目的，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物操作可以簡單地劃分為四種類型：（l）疾病型轉(zhuǎn)基因動(dòng)物；（2）利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制藥；（3）動(dòng)物改良型；（4）基礎(chǔ)生物學(xué)研究。

根據(jù)不同的目的，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物操作可以簡單地劃分為四種類型：100高等動(dòng)物基因工程課件1012、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)程序①將克隆的外源基因注射到一個(gè)受精卵的細(xì)胞核中；②接種后的受精卵移植到雌性受體的子宮，使其順利完成胚胎發(fā)育；③移植后的受精卵發(fā)育生長為后代，其中的部分后代其細(xì)胞中都攜帶有轉(zhuǎn)入的外源基因；④利用這些能產(chǎn)生外源蛋白的動(dòng)物作為種畜或種禽，培育新的純合系。2、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)程序102高等動(dòng)物基因工程課件103高等動(dòng)物基因工程課件1043、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的效率動(dòng)物基因轉(zhuǎn)移的起點(diǎn)和終點(diǎn)分別為受精卵和含有整合轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物子代。在這個(gè)過程中，轉(zhuǎn)基因的效率極低。以小鼠轉(zhuǎn)基因?yàn)槔鹤⑸渫庠椿蚝笫芫训拇婊盥蕿?6％；將受精卵移殖到母鼠子宮內(nèi)后受精卵的存活率為25％,母鼠的懷孕率為80％,轉(zhuǎn)基因在基因組上的整合率為24％,因此小鼠轉(zhuǎn)基因的總有效率約為4％.3、動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的效率105影響因素１轉(zhuǎn)基因性質(zhì)２轉(zhuǎn)基因的程序３外源基因的大小影響因素１轉(zhuǎn)基因性質(zhì)106動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的結(jié)構(gòu)１基因組片段：分子量大，保持完整的基因結(jié)構(gòu)２小基因：同一基因的某一或若干區(qū)域３融合基因：結(jié)構(gòu)基因，非編碼序列以及表達(dá)調(diào)控序列的來源不同４靶基因：結(jié)構(gòu)基因或調(diào)控序列經(jīng)過誘變或定向突變處理，然后重新輸入回動(dòng)物體內(nèi)５插入基因：在動(dòng)物染色體上隨機(jī)或特異性插入的位點(diǎn)，根據(jù)需要也可以加裝標(biāo)記基因６置換基因；兩側(cè)含有其他的同源序列，用于動(dòng)物基因的定位分離與克隆動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的結(jié)構(gòu)１基因組片段：分子量大，保持完整的基因結(jié)構(gòu)107動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的表達(dá)特性１轉(zhuǎn)基因的時(shí)空特異性表達(dá)

相關(guān)基因的時(shí)序特異性和組織特異性２轉(zhuǎn)基因的可控性表達(dá)

根據(jù)受體細(xì)胞的性質(zhì)和啟動(dòng)子類型來摸索誘導(dǎo)被轉(zhuǎn)基因的表達(dá)控制條件３轉(zhuǎn)基因的共抑制效應(yīng)

共抑制效應(yīng)：當(dāng)受體細(xì)胞染色體上含有轉(zhuǎn)基因的同源伙伴時(shí)，轉(zhuǎn)基因與內(nèi)源性同源基因的表達(dá)將同時(shí)受到抑制．動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的表達(dá)特性１轉(zhuǎn)基因的時(shí)空特異性表達(dá)108共抑制效應(yīng)的特征１共抑制只發(fā)生在轉(zhuǎn)基因與同源的內(nèi)源性基因之間，對其他基因的表達(dá)不產(chǎn)生影響２如果轉(zhuǎn)基因與內(nèi)源性發(fā)生體內(nèi)重組，則共抑制效應(yīng)隨之消失，基因表達(dá)恢復(fù)正常３共抑制現(xiàn)象的發(fā)生與結(jié)構(gòu)基因編碼區(qū)有關(guān)，但不依賴于啟動(dòng)子的來源和性質(zhì)４兩個(gè)相同的轉(zhuǎn)基因之間也能發(fā)生共抑制效應(yīng)共抑制效應(yīng)的特征１共抑制只發(fā)生在轉(zhuǎn)基因與同源的內(nèi)源性基因之間109轉(zhuǎn)基因?qū)雱?dòng)物體內(nèi)的方法轉(zhuǎn)基因?qū)雱?dòng)物體內(nèi)的方法110高等動(dòng)物基因工程課件111高等動(dòng)物基因工程課件112

胸苷激酶基因的選擇系統(tǒng)胸苷激酶(thymidinekinase,TK)是核苷酸合成代謝途徑中的一種酶,能夠?qū)⑿剀辙D(zhuǎn)換為胸苷一磷酸.在單純皰疹病毒(HSV)中發(fā)現(xiàn)的tk基因,幾乎在所有的真核細(xì)胞中都能有效地表達(dá),所以選擇為遺傳標(biāo)記基因.該系統(tǒng)中,首先要建立TK-表型的細(xì)胞株.采用誘變加選擇的方法:在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)加胸苷類似物5-溴尿嘧啶脫氧核苷BUdR,TK催化其摻入細(xì)胞的DNA分子中,導(dǎo)致DNA復(fù)制出現(xiàn)錯(cuò)誤.具有BUdR-DNA的細(xì)胞對UV特別敏感,迅速被殺死,而少數(shù)TK-表型的細(xì)胞株存活.目前最常用的是小鼠L細(xì)胞的TK-突變株(優(yōu)點(diǎn):產(chǎn)生回復(fù)突變的頻率低,而且容易被外源DNA所轉(zhuǎn)化).

胸苷激酶基因的選擇系統(tǒng)113HAT選擇法1962年E.H.Szybalska和W.Szybalski設(shè)計(jì)的,由于選擇TK+細(xì)胞的培養(yǎng)基中含有次黃嘌呤(hypoxanthine),氨基蝶呤(aminopterin,APT),胸苷(thymidine),所以叫HAT選擇法.HAT選擇法114高等動(dòng)物基因工程課件115基本原理:加氨基蝶呤APT,二氫葉酸還原酶被抑制,從而阻斷dTTP,dATP,dGTP的重新合成途徑;加次黃嘌呤,啟動(dòng)dATP,dGTP的補(bǔ)救合成途徑;加胸苷,TK+細(xì)胞能通過胸苷激酶的作用合成dTTP,細(xì)胞繼續(xù)存活;TK-細(xì)胞則死亡.所以,使用HAT培養(yǎng)基能夠選擇出由tk基因轉(zhuǎn)化而來的TK+細(xì)胞.基本原理:116高等動(dòng)物基因工程課件117高等動(dòng)物基因工程課件118高等動(dòng)物基因工程課件119C高等哺乳動(dòng)物的載體系統(tǒng)8外源基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)人腺病毒DNA猴空泡病毒DNA（SV4400）人乳多瘤病毒DNA（BKV）人牛痘病毒DNAC高等哺乳動(dòng)物的載體系統(tǒng)120高等動(dòng)物基因工程課件121高等動(dòng)物基因工程課件122高等動(dòng)物基因工程課件123高等動(dòng)物基因工程課件124高等動(dòng)物基因工程課件125高等動(dòng)物基因工程課件126高等動(dòng)物基因工程課件127高等動(dòng)物基因工程課件128動(dòng)物病毒的特點(diǎn)1、有能夠被真核細(xì)胞識(shí)別的有效的啟動(dòng)子；2、在感染周期中能夠持續(xù)地復(fù)制使基因達(dá)到相當(dāng)高濃度,并實(shí)現(xiàn)有效的表達(dá)；3、病毒能具有效控制自己復(fù)制的順式元件和反式作用因子，改造后可發(fā)展成為能夠在細(xì)胞內(nèi)長時(shí)間的保持高拷貝的外源基因的復(fù)制型質(zhì)粒載體；動(dòng)物病毒的特點(diǎn)1、有能夠被真核細(xì)胞識(shí)別的有效的啟動(dòng)子；129動(dòng)物病毒的特點(diǎn)4、能高效穩(wěn)定地整合到染色體,可提高外源基因?qū)爰闹骷?xì)胞染色體的效率；5、病毒外殼蛋白能夠識(shí)別細(xì)胞接受器，能夠?qū)⑼庠吹鞍赘咝У貙?dǎo)入宿主細(xì)胞(假病毒粒子法)。動(dòng)物病毒的特點(diǎn)4、能高效穩(wěn)定地整合到染色體,可提高外源基因?qū)?30高等動(dòng)物基因工程課件131高等動(dòng)物基因工程課件132高等動(dòng)物基因工程課件133高等動(dòng)物基因工程課件134高等動(dòng)物基因工程課件135高等動(dòng)物基因工程課件136高等動(dòng)物基因工程課件137高等動(dòng)物基因工程課件138高等動(dòng)物基因工程課件139高等動(dòng)物基因工程課件140高等動(dòng)物基因工程課件141高等動(dòng)物基因工程課件142二反轉(zhuǎn)錄病毒載體類型1.簡介:

Retroviruses,是一類含有單鏈RNA的動(dòng)物病毒.基因組含有2條相同的正鏈RNA分子,包裝成二倍體病毒顆粒.此外,顆粒內(nèi)還含有tRNA引物分子,反轉(zhuǎn)錄酶,RNaseH,整合酶等.2.分3個(gè)類群:

泡沫病毒(foamyviruses)類群,慢病毒(entiviruses)類群(如HIV-I,II型),致癌病毒oncoviruses類群.二反轉(zhuǎn)錄病毒載體類型1.簡介:1433.反轉(zhuǎn)錄病毒的優(yōu)點(diǎn)

(1)大多數(shù)情況下,反轉(zhuǎn)錄病毒的腫瘤基因都能在正常細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄,利用之作為天然轉(zhuǎn)導(dǎo)因子,改建成載體.(2)寄主范圍廣,包括無脊椎和脊椎動(dòng)物;(3)具有強(qiáng)啟動(dòng)子,有效表達(dá)外源基因;(4)不但感染率高,而且不會(huì)導(dǎo)致宿主細(xì)胞死亡,且形成感染性病毒顆粒.3.反轉(zhuǎn)錄病毒的優(yōu)點(diǎn)144反轉(zhuǎn)錄病毒的一般生物學(xué)特性1生命周期第一時(shí)相從病毒顆粒脫殼到整合到寄主基因染色體上,成為原病毒(provirus);第二時(shí)相原病毒開始轉(zhuǎn)錄,合成并加工成mRNA,進(jìn)而轉(zhuǎn)譯蛋白,組裝顆粒,釋放病毒.反轉(zhuǎn)錄病毒的一般生物學(xué)特性1生命周期145反轉(zhuǎn)錄病毒的一般生物學(xué)特性2基因組特點(diǎn)

有4條RNA鏈,r序列,U3(轉(zhuǎn)錄加尾信號)和U5(轉(zhuǎn)錄起始信號)序列.3編碼讀框

核心部分有3個(gè)開放讀框,兩側(cè)是控制表達(dá)的信號區(qū).反轉(zhuǎn)錄病毒的一般生物學(xué)特性2基因組特點(diǎn)146高等動(dòng)物基因工程課件147高等動(dòng)物基因工程課件148高等動(dòng)物基因工程課件1495.反轉(zhuǎn)錄病毒載體類型1、輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體；2、無需輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體；3、廣寄主范圍的反轉(zhuǎn)錄病毒載體；4、反轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體.5.反轉(zhuǎn)錄病毒載體類型1、輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)1501、輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體構(gòu)建:從原病毒DNA上移去gag,pol,env等3個(gè)基因的全部或大部分序列,保留下5‘-LTR,3’-LTR以及pBS+ve,PBS+ve和包裝位點(diǎn)psi.然后加入選擇標(biāo)記基因構(gòu)成重組載體.標(biāo)記基因的ATG要恰好插在gag基因的原來位置.1、輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體構(gòu)建:從原病毒151高等動(dòng)物基因工程課件1522、無需輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體利用包裝細(xì)胞株,在它的染色體基因組DNA的某個(gè)位點(diǎn)整合有缺失了psi序列的原病DNA.因此可以合成全部蛋白質(zhì),但不能包裝自己的基因組,而包裝反轉(zhuǎn)錄病毒載體.2、無需輔助病毒互補(bǔ)的重組的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體利用包裝細(xì)胞株153利用動(dòng)物轉(zhuǎn)基因研究基因的表達(dá)與功能目的：１基因?qū)雱?dòng)物受體細(xì)胞后在體內(nèi)的表達(dá)調(diào)控特征以及相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)２研究發(fā)育過程中相關(guān)基因的表達(dá)順序，調(diào)控開關(guān)以及表達(dá)的時(shí)空特異性利用動(dòng)物轉(zhuǎn)基因研究基因的表達(dá)與功能目的：154利用轉(zhuǎn)報(bào)告基因探測動(dòng)物基因組的調(diào)控序列作為報(bào)告基因，在遺傳選擇和篩選檢測方面必須具有以下幾個(gè)條件：(1)已被克隆和全序列已測定；(2)表達(dá)產(chǎn)物在受體細(xì)胞中不存在，即無背景，在被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中無相似的內(nèi)源性表達(dá)產(chǎn)物；(3)其表達(dá)產(chǎn)物能進(jìn)行定量測定。

利用轉(zhuǎn)報(bào)告基因探測動(dòng)物基因組的調(diào)控序列作為報(bào)告基因，在遺傳選155ＧＦＰ轉(zhuǎn)基因動(dòng)物ＧＦＰ轉(zhuǎn)基因動(dòng)物156高等動(dòng)物基因工程課件157報(bào)告基因(reportergene)一種編碼可被檢測的蛋白質(zhì)或酶的基因，一個(gè)其表達(dá)產(chǎn)物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達(dá)調(diào)節(jié)序列相融合形成嵌合基因，或與其它目的基因相融合，在調(diào)控序列控制下進(jìn)行表達(dá)，從而利用它的表達(dá)產(chǎn)物來標(biāo)定目的基因的表達(dá)調(diào)控，篩選得到轉(zhuǎn)化體。報(bào)告基因(reportergene)158高等動(dòng)物基因工程課件159常用的報(bào)告基因氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因(cat)、β-半乳糖苷酶基因、二氫葉酸還原酶基因、熒光酶基因等。cat基因，檢測可通過放射自顯影觀察。熒光酶基因，具有檢測速度快、靈敏度比cat基因高30～1000倍、費(fèi)用低、不需使用放射性同位素等優(yōu)點(diǎn)。常用的報(bào)告基因160分析教材Ｐ341－342

圖7－１２．7－１３

轉(zhuǎn)報(bào)告基因及生物學(xué)效應(yīng)分析分析教材Ｐ341－342

圖7－１２．7－１３

轉(zhuǎn)報(bào)告基因及161利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因同源重組

重組(recombination)的本質(zhì)基因的重排或交換.即2個(gè)DNA分子間或一個(gè)DNA分子的不同部位間,通過斷裂和重接,交換DNA片段從而改變基因的組合和序列.

同源重組(Homologousrecombination)指DNA同源序列間的重組,常發(fā)生于兩個(gè)較長的同源DNA片段或同源染色體之間?？赏ㄟ^同源重組將外源基因定位整合到細(xì)胞基因組中.

利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因同源重組162利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因163利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因一方面可序列特異性滅活細(xì)胞內(nèi)源基因，直接構(gòu)建功能喪失型缺陷株，闡明內(nèi)源基因的生物學(xué)效應(yīng)另一方面可將外源基因置換細(xì)胞內(nèi)源基因或染色體區(qū)域，形成功能獲得型突變體，用于改良動(dòng)物物種和人體基因治療利用同源基因滅活細(xì)胞內(nèi)源基因一方面可序列特異性滅活細(xì)胞內(nèi)源基164利用反義基因抑制細(xì)胞基因表達(dá)目的阻斷其mRNA的翻譯而不是破壞基因本身途徑一從細(xì)胞中分離靶基因的mRNA，并以此為模板由細(xì)菌利用反義基因抑制細(xì)胞基因表達(dá)目的165高等動(dòng)物基因工程課件166動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)異源蛋白的基本原理動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)異源蛋白的基本原理167高等動(dòng)物基因工程課件168高等動(dòng)物基因工程課件169高等動(dòng)物基因工程課件170高等動(dòng)物基因工程課件171高等動(dòng)物基因工程課件172高等動(dòng)物基因工程課件173高等動(dòng)物基因工程課件174利用動(dòng)物乳腺組織生產(chǎn)蛋白藥物乳腺作為生物反應(yīng)器的優(yōu)點(diǎn)１乳汁是可連續(xù)合成并分泌的機(jī)體液體２頻繁采集不會(huì)對轉(zhuǎn)基因動(dòng)物構(gòu)成危害３轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物只局限在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，不會(huì)干擾動(dòng)物整個(gè)機(jī)體的正常生理狀態(tài)４在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)后對人體不容易產(chǎn)生免疫反應(yīng)５動(dòng)物乳汁中蛋白組分不多，且性質(zhì)和含量已知，大規(guī)模分離純化十分方便利用動(dòng)物乳腺組織生產(chǎn)蛋白藥物乳腺作為生物反應(yīng)器的優(yōu)點(diǎn)175轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物遺傳性狀改良中的應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物遺傳性狀改良中的應(yīng)用176高等動(dòng)物基因工程課件177基因治療

第一次白色革命是建立公共健康設(shè)施及衛(wèi)生制度；第二次白色革命是將麻醉技術(shù)用于外科手術(shù)；第三次白色革命是疫苗和抗生素的出現(xiàn)與使用；

第四次白色革命是分子水平上的基因療法它可以治療許多不治之癥?；蛑委煹谝淮伟咨锩墙⒐步】翟O(shè)施及衛(wèi)生制度；178基因治療的歷史1990年9月14日,美國政府首次批準(zhǔn)了一項(xiàng)基因治療臨床研究計(jì)劃：

對一臺(tái)患有腺苷脫氨酶（ADA）缺陷的重度聯(lián)合免疫缺