分子生物學(xué)課間重點(diǎn)

組：是負(fù)責(zé)編碼DNA或一條多肽鏈的DN段，包括編碼序列、編碼以外的側(cè)翼序列和序列。結(jié)構(gòu)：中編碼RNA或蛋白質(zhì)的DNA序列部分。啟動(dòng)子：RNA并與其結(jié)合，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA列增強(qiáng)子：其含有多個(gè)作用原件，可以特異性地與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，增強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄活性的段短DNA序列。多順?lè)醋觤RNA：能夠合成多條RNA、翻譯多種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)；DNA：是出DNA反向重復(fù)序列：是指兩個(gè)順序相同的拷貝在DNA向排列。多數(shù)是以GT開(kāi)始，3’端大多是以AG列和蛋白質(zhì)形成的一種復(fù)合體，僅在真核細(xì)胞末端存在。端粒DNA由重復(fù)序列組成，人類端粒一端是TTAGGG另一端是AATCCC.結(jié)構(gòu)特原核生真核生組龐重復(fù)序很大轉(zhuǎn)錄的多順?lè)磫雾樂(lè)丛?組通常僅由一條環(huán)狀雙鏈DNA分子組成。其DNA是與蛋白質(zhì)結(jié)合，不形成結(jié)構(gòu) 現(xiàn)象，組中任何一段DNA不會(huì)用于編碼2種蛋白質(zhì) 組中GC含量變化很大 外，還有能自主的雙鏈環(huán)狀DNA分子，稱為質(zhì)粒。 2 、。 組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順?lè)醋?，即一分子mRNA只能翻譯成一種蛋白質(zhì)。、。4 5 8組中也存在一些可移動(dòng)的遺傳因素這些DNA順序并無(wú)明顯生物學(xué)功能似乎為自己的目的而組織，故有自私DNA多被RNA有被DNA導(dǎo)的。1、轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成：真核生物RNA聚合酶識(shí)別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上，形成有功能的啟動(dòng)子，才能被RNA聚合酶所識(shí)別并個(gè)閉合的復(fù)合物；其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié)合形成一個(gè)開(kāi)放復(fù)合物。在這個(gè)過(guò)程中，反式作用因子的作用是：促進(jìn)或抑制TFⅡD與TATA盒結(jié)合；促進(jìn)或抑制RNA別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的順式作用元件；對(duì)的表達(dá)有正性或負(fù)性調(diào)控作用。3、轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控（1）、5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化的調(diào)控意義：5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化是保持穩(wěn)定的一個(gè)重要因素，它至少保證mRNA、mRNA選擇性剪接對(duì)表達(dá)調(diào)控的作、mRNA的控cAMP－PKA途徑-失活：信息分子與受體解離，受體失活→G蛋白失活（GTP被水解成GDP，αβγ亞基重新聚合）→AC失活→cAMP被磷酸二酯酶水解→PKA失活?！a(chǎn)生IP3、DAG1、受體二聚化的形成及其磷酸化：表皮2、募集接頭蛋白Grb2：表皮生長(zhǎng)因子受而且其構(gòu)象發(fā)生變化，從而適合與含SH23、調(diào)控分子SOS的活化：SOS含有可與SH3結(jié)構(gòu)域相結(jié)合的富含脯氨酸基序，當(dāng)Grb2結(jié)合到磷酸化的表皮生長(zhǎng)因子受體后，它的兩個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域即可結(jié)合SOS，使之活化。4、低分子量G蛋白R(shí)as的活化：SOS可促進(jìn)Ras釋放GDP，結(jié)合GTP的反應(yīng)，使Ras激活?；罨腞as作用其下游分子Raf，使之活化。Raf是MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)的第一個(gè)分子，由此啟動(dòng)了MAPK的三級(jí)5MAPK的級(jí)聯(lián)激活：Raf是一種MAPKKK，它作用于MEK，使之磷酸化而激活，活化的MEK在作用于MAPK的ERK1，使之磷酸化激活由此完成了三級(jí)激活。6、轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用：活化的ERK可以轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi)，使某些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子發(fā)生磷酸GG7a與配體結(jié)合，激活G分子1a與配體結(jié)合被激活，多數(shù)受體表現(xiàn)某種酶促活性，介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)選擇性剪接：同一前體mRNA的成熟mRNA子RNA將與mRNA正義RNA反義RNA的雙RNA(dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞，可以使mRNA生特異性的降解，導(dǎo)致其相應(yīng)的沉默。這種轉(zhuǎn)錄后沉默機(jī)制被稱為RNA干擾（RNAi）乳糖子的調(diào)控機(jī)制酶就不能與啟動(dòng)子結(jié)合，不能轉(zhuǎn)錄。B誘導(dǎo)作用：乳糖存在時(shí)，其代謝產(chǎn)生物可與阻遏蛋白結(jié)合，使阻遏協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖子中的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制，互相協(xié)調(diào)、互相制約真核生物DNA水平的調(diào)控方a染色質(zhì)丟失；b擴(kuò)增：某些腫瘤中c-myc的擴(kuò)增；c重排：免疫球蛋白、TCR的重排等；d合順式作用元件而調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)因子。在結(jié)構(gòu)上含有與DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。反式作用因子在轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程中的作用是：促進(jìn)或抑制TFⅡD與TATA盒結(jié)合；促進(jìn)或抑制RNA①一般具有三個(gè)功能結(jié)構(gòu)域：DNA錄激②能識(shí)別并結(jié)合調(diào)控區(qū)的順式作用元件③對(duì)表達(dá)有正性或負(fù)性的調(diào)控作用DNA體外重組技分子克?。涸隗w外DNA宿主中擴(kuò)增和繁殖，以獲得該DNA貝。工程(geneticengineering)：有目的地通過(guò)分子克隆技術(shù)，人為地操作改造，改變生物遺獲取目的的方1從組文庫(kù)(genomicDNAlibrary)分離篩2過(guò)cDNA庫(kù)(cDNAlibrary3化學(xué)合成法要求：已知目的的核苷酸序列或其產(chǎn)物的氨基酸序4聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增(polymerasechain 工程的基本過(guò)程（如圖表限制性核酸內(nèi)切酶是細(xì)菌產(chǎn)生的一類能識(shí)別和切割雙鏈DNA的載體：能在連接酶作用下和外源DN段連接并運(yùn)送DNA分子進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子克隆載體(cloningvector)是能攜帶目的DN段并將其入宿主細(xì)胞的DNA分子表達(dá)載體(expressionvector)為使的外源DNA序列可轉(zhuǎn)錄翻譯成多肽鏈而特意設(shè)計(jì)的載體。般不整合到宿主上?，F(xiàn)在常用的質(zhì)粒大多數(shù)是經(jīng)過(guò)改造或人工構(gòu)建的，常含抗生素抗性，是組DNA文庫(kù)：含有某種生物體全部的隨機(jī)片段的重組DNA克隆群體，它象一個(gè)有組全cDNA含重組cDNA全部的mRNA轉(zhuǎn)移和獲得細(xì)胞DNA上并在此外源DNA時(shí)，載體上原有的抗藥即被破壞。由此重組體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，則對(duì)這個(gè)抗生DNA序列測(cè)DNA常用的SANGER雙脫氧鏈終止法的原理1.DNApolymerase作用下的引物延伸；2.特異性的鏈終止；3.可區(qū)別單堿基長(zhǎng)度的變性聚丙烯酰胺凝所用的底物是DNA4dNTP中加入少量的一種ddNTP，鏈延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止競(jìng)爭(zhēng)，產(chǎn)物是一系列的核苷酸鏈，其長(zhǎng)度取決于引物末端到出現(xiàn)過(guò)早鏈終止位置的距離。在4組獨(dú)立酶反應(yīng)中分別采用4種不同的ddNTP，結(jié)果將產(chǎn)生4組寡核苷酸，它們將分別終止于模板鏈的A、C、G或T位置。timePCRPCR技術(shù)的基本原理：依據(jù)DNA半保留的機(jī)理；體外DNA分子于不同溫度下可變性和復(fù)性的性質(zhì)。作為引物的一對(duì)寡核苷酸與模板DNA同源序列按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則形成局部雙鏈，然后在聚合酶作用下引導(dǎo)新鏈DNA的合成，經(jīng)過(guò)25-30個(gè)變性、退火和延伸的循環(huán)，獲得特異性的DN段擴(kuò)RT-PCR先在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下、以mRNA為模板合成互補(bǔ)的cDNA（complementary再以cDNA為模板進(jìn)行PCR（一）受體途Fas結(jié)合FasLFas三聚體，激活結(jié)構(gòu)域募集FADD分子Fas-FasL-FADD形成誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合物（DISC），并激活效應(yīng)域caspase8自我激活激活caspase3細(xì)胞凋亡。通常在生長(zhǎng)因子缺乏、生長(zhǎng)環(huán)境不適、化學(xué)物質(zhì)或射線導(dǎo)致DNAC是關(guān)鍵步驟，需要調(diào)節(jié)蛋白Bcl2參與。CApaf1、ATP/dATP形成凋亡體Apaf1域（CARD）與caspase9體的CARD募集caspase9體caspase9激活caspase3細(xì)胞凋癌與抑原癌（proto-oncogene)是一類廣泛存在生物體中，高度保守的，其產(chǎn)物具有調(diào)控細(xì)胞增生原癌的活化機(jī)制1、點(diǎn)突2、擴(kuò)3、重4、易5、誘APC（成后，也能多泛素化連接姐妹的蛋白，使姐妹分離。RB抑制轉(zhuǎn)錄的途徑Rb蛋白成員活性受磷酸化的調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖G1期去磷酸化或低磷酸化的Rb蛋白能與E2F-DP1結(jié)合，使E2F-DP1不能引起的轉(zhuǎn)錄，起負(fù)調(diào)控的作用。表達(dá)CyclinD結(jié)合并激活表達(dá)CyclinE結(jié)合并激活CDK2通過(guò)G1-S表達(dá)CyclinA結(jié)合并活化CDK2Rb蛋白磷酸化而釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，啟動(dòng)DNA a作為關(guān)卡調(diào)控因子調(diào)節(jié)DNA過(guò)b現(xiàn)DNA復(fù)系統(tǒng)損傷的DNA活化Chk2使P53磷酸化、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定P53濃度升高↗①P21增加抑制Cyclin-cdkG1、G2細(xì)胞周期停滯③結(jié)合Cdk4mRNA5’非翻譯區(qū)Cdk4技術(shù)方法1.核酸分子雜 2.PCR.（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）3.SSCP（單鏈構(gòu)象多態(tài)