分子診斷學(xué)復(fù)習(xí)題

基因組概論A型題：一個(gè)典型的基因不包括（）增強(qiáng)子5'非編碼區(qū)3'非編碼區(qū)啟始密碼子終止密碼子基因序列中保守性最高的序列（）內(nèi)含子外顯子整個(gè)基因5'非編碼區(qū)3'非編碼區(qū)基因組最大的生物（）人某些藻類某些細(xì)菌某些顯花植物和兩棲類動(dòng)物某些哺乳動(dòng)物基因總數(shù)最多的生物（）人藻類水稻顯花植物和兩棲類動(dòng)物某些哺乳動(dòng)物HGP研究的主要內(nèi)容不包括（ ）物理圖SNP圖連鎖圖序列圖遺傳圖模式生物基因組計(jì)劃不包括（）秀麗線蟲釀酒酵母黑腹果蠅小鼠大鼠后基因組計(jì)劃的主要目標(biāo)（）基因功能比較基因功能鑒定基因組測序基因數(shù)據(jù)分析基因結(jié)構(gòu)X型題：基因編碼的功能產(chǎn)物（）多肽蛋白質(zhì)tRNArRNA某些小分子 RNA基因組學(xué)（Genomics）研究的內(nèi)容包括（基因組作圖核苷酸序列分析基因定位基因功能分析疾病基因定位功能基因組學(xué)的主要特征。（ ）高精度高通量大規(guī)模計(jì)算機(jī)分析高分辯率名詞解釋：.開放閱讀框.密碼子偏愛.C值矛盾.基因組學(xué)問答題：.簡述基因的特點(diǎn)和鑒別標(biāo)準(zhǔn)。.簡述基因組學(xué)研究對醫(yī)學(xué)的影響。參考答案A型題：.A 2.B 3.D 4.C 5.B 6.E 7.BX型題：.ABCDE2.ABCD3.BCD三、名詞解釋：開放閱讀框 （openreadingframe,ORF）是由始于起始密碼子并終于終止密碼子的一串密碼子組成的核苷酸序列。在不同物種的基因中經(jīng)常為某種氨基酸編碼的只是其中的某一特定的密碼子，這種現(xiàn)象稱密碼子偏愛（codonbias）。生物體的進(jìn)化程度與基因組大小之間不完全成比例的現(xiàn)象稱為C值矛盾。4.基因組學(xué)（Genomics）指對所有基因進(jìn)行基因組作圖（包括遺傳圖譜、物理圖譜、轉(zhuǎn)錄圖譜），核苷酸序列分析，基因定位和基因功能分析的一門科學(xué)。五、問答題：對于數(shù)量很少的編碼tRNA、rRNA和某些小分子RNA的基因，我們較易通過核酸序列加以判斷。而對于數(shù)量極大的蛋白質(zhì)編碼基因，目前可根據(jù)其特點(diǎn)使用五項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)來鑒別：①開放閱讀框（openreadingframe,ORF）；②序列特征和密碼子偏愛；③序列保守性；④轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物；⑤基因失活。但這些標(biāo)準(zhǔn)使用起來卻往往會(huì)遇到一些困難。基因組學(xué)研究成果惠澤最多的莫過于醫(yī)學(xué)，基因組學(xué)將改變整個(gè)醫(yī)學(xué)是必然的趨勢。人類基因組中所有基因及其表達(dá)產(chǎn)物種類的確認(rèn)和功能解析，野生型基因或突變型基因及其表達(dá)產(chǎn)物與疾病的關(guān)系的研究，將會(huì)大大加快加深人們對疾病分子機(jī)理的認(rèn)識(shí)，并描繪出能準(zhǔn)確用于每一種疾病的預(yù)測、診斷及預(yù)后的基因或蛋白質(zhì)指紋圖譜，將為藥物的研究提供更多更有效的作用靶點(diǎn)。人類個(gè)體之間DNA序列差異的研究，基因芯片與蛋白質(zhì)芯片技術(shù)及快速測序技術(shù)等的發(fā)展和普及，將使基因組和蛋白質(zhì)組范圍內(nèi)的快速、準(zhǔn)確的分子診斷成為現(xiàn)實(shí)，人們將因此最大限度地了解自身對環(huán)境和疾病的易感性，增進(jìn)健康，延長壽命。醫(yī)生將根據(jù)每個(gè)人的“基因特點(diǎn)”開出最優(yōu)化的個(gè)體化處方。另外，基因組學(xué)的成就將使基因治療更為切實(shí)可行。隨著更安全更有效的載體的研制（這只是時(shí)間問題），基因治療終究會(huì)被人們接受并得到普及。蛋白質(zhì)組學(xué)與基因組學(xué)相輔相成，優(yōu)勢互補(bǔ)。原核生物基因組A型題：下列敘述哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的（ ）原核生物基因組具有操縱子結(jié)構(gòu)原核生物結(jié)構(gòu)基因是斷裂基因原核生物基因組中含有插入序列原核生物基因組中含有重復(fù)順序原核生物結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為多順反子型 mRNA可以自我轉(zhuǎn)移的質(zhì)粒，其分子量一般在（）1.5X107以上1.5X107以下1.5X107與2.5X107之間2.5X107以下2.5X107以上下列哪項(xiàng)不符合轉(zhuǎn)位因子的含義（）轉(zhuǎn)位因子是 DNA重組的一種形式可在質(zhì)粒與染色體之間移動(dòng)的DNA片段轉(zhuǎn)座子是轉(zhuǎn)位因子的一個(gè)類型可移動(dòng)的基因成分能在一個(gè)DNA分子內(nèi)部或兩個(gè) DNA分子之間移動(dòng)的DNA片段質(zhì)粒的主要成分是（）多糖蛋白質(zhì)氨基酸衍生物DNA分子脂類下列哪項(xiàng)不能被列入可移動(dòng)基因的范疇（）插入序列質(zhì)粒染色體DNA轉(zhuǎn)座子可轉(zhuǎn)座噬菌體大腸桿菌類核結(jié)構(gòu)的組成是（）雙鏈DNARNA蛋白質(zhì)+DNA支架蛋白R(shí)NA歧架蛋白+雙鏈DNA以下哪項(xiàng)描述是錯(cuò)誤的（）細(xì)菌是單細(xì)胞生物細(xì)菌是原核生物細(xì)菌生長快個(gè)體小細(xì)菌以有絲分裂的方式增殖細(xì)菌無細(xì)胞核結(jié)構(gòu)操縱子結(jié)構(gòu)不存在（）細(xì)菌基因組中病毒基因組中真核生物基因組中大腸桿菌基因組中原核生物基因組中下列哪項(xiàng)敘述不正確（ ）F質(zhì)粒的主要特征是帶有耐藥性基因R質(zhì)粒又稱抗藥性質(zhì)粒Col質(zhì)粒可產(chǎn)生大腸桿菌素F質(zhì)粒是一種游離基因R質(zhì)粒在基因克隆中應(yīng)用最多下列說法正確的是（）質(zhì)粒的主要成分是 RNA質(zhì)粒的復(fù)制依賴于宿主細(xì)胞宿主細(xì)胞離開了質(zhì)粒就不能生存質(zhì)粒的存在對宿主細(xì)胞沒有任何影響不同類群的質(zhì)粒不能共存于同一菌株B型題：基因重疊現(xiàn)象類核結(jié)構(gòu)斷裂基因質(zhì)?？梢苿?dòng)基因成分原核生物具有（）真核生物基因是（ ）病毒基因組存在（ ）轉(zhuǎn)座因子是（）染色體以外的遺傳物質(zhì)是（）X型題：下列哪些屬于染色體以外的遺傳因子（）轉(zhuǎn)座子病毒核酸細(xì)菌的質(zhì)粒高等植物的葉綠體轉(zhuǎn)位因子插入序列G.真核生物的線粒體原核生物基因組的特征包括（ ）具有類核結(jié)構(gòu)只有一個(gè)DNA復(fù)制起點(diǎn)有大量的基因重疊現(xiàn)象存在可移動(dòng)基因成分基因組中有重復(fù)序列存在結(jié)構(gòu)基因多數(shù)是多拷貝的G.廣泛存在操縱子結(jié)構(gòu)原核生物基因組與真核生物基因組的區(qū)別有（）編碼序列所占的比例操縱子結(jié)構(gòu)重復(fù)序列內(nèi)含子細(xì)胞核結(jié)構(gòu)G.復(fù)制起點(diǎn)的個(gè)數(shù)質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)有（）A．以環(huán)狀雙鏈DNA分子存在質(zhì)粒 DNA有超螺旋結(jié)構(gòu)以環(huán)狀單鏈 DNA分子存在質(zhì)粒 DNA有半開環(huán)結(jié)構(gòu)以環(huán)狀雙鏈 RNA分子存在質(zhì)粒DNA有線性結(jié)構(gòu)G.以線性雙鏈DNA分子存在質(zhì)粒按功能分類主要有（）接合型質(zhì)粒F型質(zhì)粒松弛型質(zhì)粒可移動(dòng)型質(zhì)粒R型質(zhì)粒G．Col質(zhì)粒有關(guān)R質(zhì)粒敘述正確的是（ ）R質(zhì)粒帶有抗性轉(zhuǎn)移因子R質(zhì)粒又稱耐藥性質(zhì)粒R質(zhì)粒帶有抗性決定因子R質(zhì)粒能決定細(xì)菌的性別R質(zhì)粒具有自我轉(zhuǎn)移能力G．R質(zhì)粒能進(jìn)行自我復(fù)制質(zhì)粒的生物學(xué)性質(zhì)有（）質(zhì)粒攜帶的遺傳性狀也能被轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的復(fù)制可獨(dú)立于宿主細(xì)胞質(zhì)粒對宿主細(xì)胞的生存是必需的D.質(zhì)粒帶有選擇性標(biāo)志質(zhì)粒有不相容性G.質(zhì)?？梢耘c染色體發(fā)生整合細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移的方式有（）接合轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)座名詞解釋：1．質(zhì)粒2．類核3．轉(zhuǎn)座4．基因組5．基因重疊6．質(zhì)粒的不相容性問答題：.敘述原核生物基因組的結(jié)構(gòu)特征。.簡述原核生物的類核組成。.描述質(zhì)粒DNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。.試述質(zhì)粒的類型有哪些？.簡述原核生物轉(zhuǎn)座子的類型及特點(diǎn)。.通過轉(zhuǎn)座可引起哪些遺傳效應(yīng)？參考答案一、A型題：1.B2.E3.A4.D5.C6.E7.D8.C9.A10.B二、B型題：1.B2.C3.A4.E5.D三、X型題：1.ACDEFG2.ABDEG3.ABDF4.CDEF5.BEG6.ABCEG7.ADEG8.ABDE四、名詞解釋：.質(zhì)粒：細(xì)菌染色體以外，能獨(dú)立復(fù)制并穩(wěn)定遺傳的共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(covalentlyclosedcircularDNA,cccDNA分子稱為質(zhì)粒(plasmid)。.類核：原核生物基因組DNA通常位于菌細(xì)胞的中央，與支架蛋白和RNA結(jié)合在一起，以復(fù)合體的形式存在，經(jīng)高度盤旋聚集形成一個(gè)較為致密的區(qū)域，稱為類核(nucleoid)。.轉(zhuǎn)座：轉(zhuǎn)座(transposition)是指遺傳物質(zhì)被轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象。這種轉(zhuǎn)移可以發(fā)生在同一染色體中也可以發(fā)生在不同染色體之間，被轉(zhuǎn)移的DNA片段稱為轉(zhuǎn)座因子(或轉(zhuǎn)座元件)。.基因組：基因組(genome)是一個(gè)細(xì)胞或一個(gè)生物體中的全套遺傳物質(zhì)。.基因重疊：(geneoverlapping),指基因組DNA中某些序列被兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因所共用。6.質(zhì)粒的不相容性：同一類群的不同質(zhì)粒通常不能在同一菌株內(nèi)穩(wěn)定共存，當(dāng)細(xì)胞分裂時(shí)就會(huì)分別進(jìn)入不同的子代細(xì)胞，這種現(xiàn)象叫做質(zhì)粒的不相容性(incompatibility)。五、問答題：.在原核生物基因組中只有一個(gè) DNA復(fù)制起點(diǎn)?；蚪MDNA通常是由一條環(huán)狀雙鏈DNA(doublestrandedDNA,dsDNA)分子組成?；蚪MDNA與支架蛋白和RNA結(jié)合在一起，以復(fù)合體的形式存在。廣泛存在操縱子結(jié)構(gòu)。操縱子結(jié)構(gòu)是原核生物基因組的功能單位，在原核基因調(diào)控中具有普遍的意義。原核生物的結(jié)構(gòu)基因多數(shù)是單拷貝的并且結(jié)構(gòu)基因中沒有內(nèi)含子成分。編碼順序一般不重疊。具有編碼同工酶的不同基因?；蚪M中編碼區(qū)所占比例為50%,不編碼區(qū)中常常含有基因表達(dá)調(diào)控的序列。 基因組DNA分子中存在多種功能的識(shí)別區(qū)域，這些區(qū)域經(jīng)常有反向重復(fù)序列存在，并能形成特殊的結(jié)構(gòu)。原核生物基因組存在著可移動(dòng)的DNA序列，這些可移動(dòng)的DNA序列，通過不同的轉(zhuǎn)移方式發(fā)生基因重組，使生物體更適應(yīng)環(huán)境的變化。.原核生物與真核生物的主要區(qū)別在細(xì)胞核上。原核生物沒有典型的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)， 基因組DNA位于細(xì)胞中央的核區(qū)，沒有核膜將其與細(xì)胞質(zhì)隔開，但能在蛋白質(zhì)的協(xié)助下，以一定的組織形式盤曲、折疊包裝起來，形成類核(nucleoid)也稱擬核。類核的中央部分由RNA和支架蛋白(scaffoldingprotein)組成，外圍是雙鏈閉環(huán)的超螺旋 DNA。在超螺旋結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上， DNA分子再扭結(jié)成許多活結(jié)樣或花瓣樣的放射狀結(jié)構(gòu)的 DNA環(huán)。每個(gè)環(huán)形的活結(jié)狀結(jié)構(gòu)代表一個(gè)結(jié)構(gòu)域，在各結(jié)木^域中DNA呈負(fù)超螺旋狀態(tài)。每個(gè)DNA環(huán)是一個(gè)相對獨(dú)立的功能區(qū)，可以獨(dú)立完成不同區(qū)域的基因表達(dá)與調(diào)控。在類核中 80%為DNA,其余為RNA和蛋白質(zhì)。如果用DNA酶處理后可使基因組DNA鏈斷裂；如果用RNA酶或蛋白酶處理類核，則類核變得松散，不能維持DNA鏈的折疊結(jié)構(gòu)，這表明RNA和蛋白質(zhì)對維持類核分子的折疊以及形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)是必不可少的。.多數(shù)細(xì)菌來源的質(zhì)粒核酸是環(huán)狀雙鏈 DNA分子，沒有游離的末端，每條鏈上的核甘酸通過共價(jià)鍵頭尾相連。質(zhì)粒DNA分子通常具有三種不同的構(gòu)型。當(dāng)其兩條核甘酸鏈均保持完整環(huán)形結(jié)構(gòu)時(shí)，為共價(jià)閉合環(huán)狀DNA分子，這樣的DNA常以超螺旋狀態(tài)存在；如果兩條鏈中只有一條鏈保持完整環(huán)形結(jié)構(gòu)，另一條鏈出現(xiàn)一至數(shù)個(gè)缺口時(shí)，為半開環(huán)DNA;若兩條鏈均有缺口并發(fā)生斷裂則成為線性DNA分子。.根據(jù)細(xì)菌染色體對質(zhì)粒復(fù)制的控制程度是否嚴(yán)格可將質(zhì)粒分為：嚴(yán)緊型質(zhì)粒和松弛型質(zhì)粒。按轉(zhuǎn)移方式分為：接合型質(zhì)粒、可移動(dòng)型質(zhì)粒、自傳遞型質(zhì)粒。按質(zhì)粒大小分為：小型質(zhì)粒、大型質(zhì)粒。按質(zhì)粒的宿主范圍分為：窄宿主譜型質(zhì)粒、廣宿主譜型質(zhì)粒。按質(zhì)粒的功能分為：F質(zhì)粒、R質(zhì)粒、Col質(zhì)粒。.⑴插入序列(insertionsequence,IS)長度約700bp~2000bp,由一個(gè)轉(zhuǎn)位酶基因及兩側(cè)的反向重復(fù)序列 (16bp?41bp)組成。反向重復(fù)序列的對稱結(jié)構(gòu)使IS可以雙向插入(正向插入或反向插入)靶位點(diǎn)。并在插入后于兩側(cè)形成一定長度 (3bp?11bp)的順向重復(fù)序列稱靶序列 (targetsequence)IS的轉(zhuǎn)位頻率為10-7/拷貝，即在一個(gè)世代的107細(xì)菌中有1次插入。⑵轉(zhuǎn)座子 (transposon,Tn)是一類復(fù)雜的轉(zhuǎn)位因子。Tn比IS大，約4500?20000bp,除了攜帶有關(guān)轉(zhuǎn)座的必需基因外，還含有能決定宿主菌遺傳性狀的基因，主要是抗生素和某些藥物的抗性基因，轉(zhuǎn)座子中的轉(zhuǎn)位酶稱為轉(zhuǎn)座酶 (transposase),其功能是介導(dǎo)轉(zhuǎn)座子從一個(gè)位點(diǎn)轉(zhuǎn)座到另一個(gè)位點(diǎn)，或從一個(gè)復(fù)制子轉(zhuǎn)座到另一個(gè)復(fù)制子，其轉(zhuǎn)座過程與 IS相似。⑶Mu噬菌體是一類具有轉(zhuǎn)座功能的溫和性噬菌體。溫和

性噬菌體有多種，如大腸桿菌入噬菌體、大腸桿菌 Mu-1、P1和P2噬菌體等。這類噬菌體具有整合能力， 可以整合到細(xì)菌染色體中去，也稱可轉(zhuǎn)座的噬菌體(transposablephage)。當(dāng)它們感染細(xì)菌后，其溶源性整合和裂解周期的復(fù)制均以轉(zhuǎn)座方式進(jìn)行，但轉(zhuǎn)座位點(diǎn)是隨機(jī)的。.⑴引起突變 轉(zhuǎn)位可能引起多種基因突變。當(dāng)轉(zhuǎn)位因子插入一個(gè)基因內(nèi)部，會(huì)引起這個(gè)基因的插入失活；當(dāng)插入多順反子前端的基因中時(shí)，可引起下游的所有基因停止轉(zhuǎn)錄，因?yàn)檗D(zhuǎn)位因子中含P依賴的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)；當(dāng)插入染色體或質(zhì)粒中時(shí)，常引起缺失和倒位突變。⑵引入新的基因在插入位點(diǎn)上引入新的基因，如含有抗藥基因R質(zhì)粒的轉(zhuǎn)位因子，轉(zhuǎn)位到染色體中時(shí)，可在該部位出現(xiàn)抗藥性基因。若將帶有Amp+R質(zhì)粒的細(xì)菌與不含R質(zhì)粒的帶有Kan+轉(zhuǎn)座子的細(xì)菌進(jìn)行接合，結(jié)果產(chǎn)生了 Amp+Kan+的細(xì)菌，并且能夠在含有氨士青霉素及卡那霉素的培養(yǎng)板上生長。經(jīng)過轉(zhuǎn)位作用，在這種細(xì)菌內(nèi)產(chǎn)生 Amp+及Kan+的質(zhì)粒，經(jīng)過再次接合作用，即可產(chǎn)生含Amp+Kan+R質(zhì)粒細(xì)菌。⑶引起生物進(jìn)化 基因重排經(jīng)常發(fā)生，轉(zhuǎn)座作用是基因重排的重要機(jī)理之一，如通過轉(zhuǎn)座，可將兩個(gè)本來相隔遙遠(yuǎn)的基因靠攏，從而進(jìn)行協(xié)調(diào)的控制作用，這兩段基因順序經(jīng)過轉(zhuǎn)座作用連接在一起有可能在進(jìn)化過程中產(chǎn)生新的蛋白質(zhì)。真核生物基因組一、選擇題：.下列哪一個(gè)調(diào)控序列在斷裂基因側(cè)翼序列上不存在啟動(dòng)子增強(qiáng)子終止子外顯子.下列不屬于真核生物染色體基因組一般特征的是基因組龐大線狀雙鏈DNA和二倍體編碼區(qū)遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于非編碼區(qū)重復(fù)序列.組蛋白家族中核小體組蛋白組蛋白包括H1、H2A、H2B、H3H1、H2A、H2B、H3AH2A、H2B、H3、H4H2A、H2B、H3A、H4.線粒體DNA(mtDNA)與核DNA主要不同之處有非孟德爾的母系遺傳低突變率C.異質(zhì)性和復(fù)制分離D. 閾值效應(yīng).能夠引起遺傳性視神經(jīng)病的線粒體病遺傳學(xué)分類類型是點(diǎn)突變mtDNA的大規(guī)模缺失mtDNA的大規(guī)模插入源于核DNA缺陷引起mtDNA缺失.下列哪項(xiàng)與短串聯(lián)重復(fù)序列 （STR）位點(diǎn)的不穩(wěn)定性相關(guān)脆性X綜合癥、重癥肌無力和Huntington舞蹈癥脆性X綜合癥、重癥肌無力和Kearns-sayr咨合癥Kearns-sayre綜合癥、慢性進(jìn)行，卜^眼外肌癱瘓和Huntington舞蹈癥Kearns-sayr收合癥、慢性進(jìn)行f眼外肌癱瘓和Kearns-sayre綜合癥二、名詞解釋：.外顯子與內(nèi)含子.單拷貝基因.單順反子mRNA.微衛(wèi)星DNA.斷裂基因.基因家族.假基因.端粒酶.后基因組研究.遺傳圖譜.單核昔酸多態(tài)性.甲基特異性PCR三、問答題：.真核生物染色體基因組的一般特點(diǎn)？.真核生物基因組含有的重復(fù)序列有哪些？.線粒體DNA與核DNA有哪些不同之處？.何謂線粒體??？簡述線粒體病的遺傳學(xué)分類。.假基因的分類及其發(fā)生機(jī)理。.簡述CpG島與DNA甲基化調(diào)控。.作為一種遺傳標(biāo)記，人類短串聯(lián)重復(fù)序列（ STR）的主要用途有哪幾個(gè)方面？.人類單核昔酸的多態(tài)性（SNP）的特點(diǎn)及主要用途有哪幾個(gè)方面？.人類基因組研究的主要內(nèi)容是什么？答案一、問答題1.D 2.C 3.C 4.B 5.A 6.A二、名詞解釋.外顯子與內(nèi)含子：斷裂基因的內(nèi)部非編碼序列稱為內(nèi)含子，編碼序列稱為外顯子。.單拷貝基因：在基因組中僅出現(xiàn)一次的基因稱單拷貝基因，多為編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。.單順反子mRNA:真核生物中每一個(gè)基因單獨(dú)構(gòu)成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位轉(zhuǎn)錄而產(chǎn)生的mRNA,僅編碼一種蛋白質(zhì)。.微衛(wèi)星DNA:存在于常染色體由2?6個(gè)核昔酸長的重復(fù)序列組成，又稱簡單串聯(lián)重復(fù)序列，以（CA）n、（GT）n、（CAG）n較常見，重復(fù)次數(shù)多為15?60次，總長度一般在400bp以下。.斷裂基因：細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)基因并非全由編碼序列組成，而是在編碼序列中插入了非編碼序列，這類基因被稱為斷裂基因。.基因家族：一組功能相似且核音酸序列具有同源性的基因，可能由某一共同祖先基因經(jīng)重復(fù)和突變產(chǎn)生，這一組基因就稱為基因家族。.假基因：基因家族中一類與具正常功能的基因序列相似， 但無轉(zhuǎn)錄功能或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物無功能的基因稱為假基因。.端粒酶：一種由蛋白質(zhì)和RNA兩部分組成的以自身的RNA為模板，可合成端粒重復(fù)序列而延長端粒的特殊逆轉(zhuǎn)錄酶。.后基因組研究：以全基因組測序?yàn)槟繕?biāo)的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)和以基因功能鑒定為目標(biāo)的功能基因組學(xué)，又稱后基因組研究。.遺傳圖譜：是指通過計(jì)算連鎖遺傳標(biāo)志之間的重組頻率， 得到基因線性排列從而確定相對距離的圖譜，又稱連鎖圖。.單核甘酸多態(tài)性：因單個(gè)堿基的變異（主要是置換，也有缺失和插入）引起的DNA序列多態(tài)性，在特定核甘酸位置上存在兩種不同的堿基，其中最少一種在群體中的頻率不小于 1%。12.甲基特異性PCRDNA經(jīng)亞硫酸鈉處理后，非甲基化的C轉(zhuǎn)變?yōu)閁,而甲基化的胞嗑咤保持不變，利用兩套不同的引物擴(kuò)增可判斷甲基化是否發(fā)生的一種特異性 PCR三、問答題1答案：①真核生物基因組遠(yuǎn)大于原核生物基因組， 結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大，具有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)； ②真核細(xì)胞的基因組DNA都是線狀雙鏈DNA,而不是環(huán)狀雙鏈分子； ③基因組中非編碼區(qū)多于編碼區(qū)；④真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因， 由外顯子和內(nèi)含子鑲嵌而成；⑤存在大量重復(fù)序列。2答案：（一）高度重復(fù)序列重復(fù)頻度＞105。根據(jù)衛(wèi)星DNA的長度，又可分成3種：衛(wèi)星DNA、小衛(wèi)星DNA、微衛(wèi)星DNAo（二）中度重復(fù)序列這類重復(fù)序列主要由比較大的片段（由100bp到幾千bp）串聯(lián)重復(fù)組成，分散在整個(gè)基因組中，重復(fù)頻度不等，如Alu家族、rRNA、tRNA和組蛋白等。3答案：（一）非孟德爾的母系遺傳mtDNA因位于細(xì)胞質(zhì)中，表現(xiàn)為嚴(yán)格的母性遺傳，不服從孟德爾遺傳，絕大部分mtDNA是通過卵細(xì)胞遺傳。（二）高突變率mtDNA突變率約為nDNA的10?100倍，此外mtDNA與有毒物質(zhì)的結(jié)合頻率比核DNA高數(shù)倍至數(shù)十倍。（三）異質(zhì)性和復(fù)制分離異質(zhì)性即突變mtDNA與野生型mtDNA以不同的比例共存于一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的現(xiàn)象。復(fù)制分離即在細(xì)胞分裂的復(fù)制過程中，突變的和野生型的mtDNA隨機(jī)進(jìn)入子細(xì)胞的過程，復(fù)制分離的結(jié)果使突變mtDNA雜合體向突變純合或野生純合方向轉(zhuǎn)變，但因突變復(fù)制具有優(yōu)勢，故易產(chǎn)生突變積累，突變積累的程度不同 ，突變mtDNA在群體中的多態(tài)性程度也不同。（四）閾值效應(yīng)每個(gè)細(xì)胞的mtDNA有多種拷貝，而一個(gè)細(xì)胞mtDNA編碼基因的表現(xiàn)型依賴于一個(gè)細(xì)胞內(nèi)突變型 mtDNA和野生型mtDNA的相對比例，mtDNA突變導(dǎo)致氧化磷酸化水平降低，當(dāng)能量降低到維持組織正常功能所需能量的最低值時(shí)即達(dá)到了 mtDNA表達(dá)的能量閾值，可引起某組織或器官的功能異常而出現(xiàn)臨床癥狀，這就是閾值效應(yīng)。（五）半自主復(fù)制與協(xié)同作用mtDNA雖有自我復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和編碼功能，但該過程還需要數(shù)十種nDNA編碼的酶參加，因此mtDNA基因的表達(dá)同時(shí)也受nDNA的制約，兩者具有協(xié)同作用。4答案：線粒體病（mitochondriopathy）是指由于線粒體呼吸鏈功能不良所導(dǎo)致的臨床表現(xiàn)多樣化的一組疾病。臨床表現(xiàn)常見為眼瞼下垂、外眼肌麻痹、視神經(jīng)萎縮、神經(jīng)性耳聾、痙攣或驚厥、癡呆、偏頭痛、類卒中樣發(fā)作等。從核基因缺陷和線粒體基因缺陷的角度對線粒體病進(jìn)行遺傳學(xué)分類可分為三種類型： 點(diǎn)突變，mtDNA的大規(guī)模缺失或插入和源于核DNA缺陷引起mtDNA缺失。5答案：與正常功能的基因序列相似，但無轉(zhuǎn)錄功能或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物無功能的基因稱假基因（pseudogene）。根據(jù)是否保留相應(yīng)功能基因的間隔序列（如內(nèi)含子），假基因分兩大類：一類保留了間隔序列，稱為非加工假基因（non-processedpseudogene）,通常因基因的復(fù)制修飾，如點(diǎn)突變、插入、缺失和移碼突變而導(dǎo)致復(fù)制后的基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯時(shí)出現(xiàn)異常，喪失正常功能，它與功能基因一般在同一染色體上，也稱復(fù)制型假基因（duplicatedpseudogene）。假基因中大多數(shù)則缺少間隔序列的稱為已加工假基因（processedpseudogene）,主要是轉(zhuǎn)錄過程中mRNA以cDNA的方式重新整合進(jìn)入基因組（很可能發(fā)生在生殖細(xì)胞中），在長期進(jìn)化選擇過程中因?yàn)殡S機(jī)突變積累而喪失功能，通常這種假基因無內(nèi)含子，兩邊有小的側(cè)翼定向重復(fù)序列（flankingdirectrepeat）,3'端多具多聚腺苷酸尾。答案:大約有一半的人類基因富含 CpG的順序，稱為CpG島（CpGisland），CpG島常位于轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)或其附近，主要存在于看家基因和一些組織特異性表達(dá)基因。在正常組織，除印記基因和失活的X染色體外，包括啟動(dòng)子區(qū)在內(nèi)的基因 5'端CpG島大部分是非甲基化的。DNA甲基化與基因表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，DNA甲基化調(diào)控基因表達(dá)直接的機(jī)制可能是因?yàn)榧谆鶑腄NA分子的大溝中突出，阻止了轉(zhuǎn)錄因子與基因相互作用，還可能直接抑制RNA聚合酶活性而抑制基因的表達(dá)。間接的機(jī)制包括兩種類型：①與甲基化DNA結(jié)合蛋白結(jié)合；②改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)，這都間接阻礙轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合而抑制轉(zhuǎn)錄。DNA甲基化對胚胎發(fā)育非常重要，與X染色體失活，基因組印記，特別是腫瘤密切相關(guān)。答案：主要用途①人類基因遺傳圖譜的制作。②目的基因篩選和基因診斷。通常目的基因若與 STR位點(diǎn)有連鎖關(guān)系，則其位置與STR位點(diǎn)鄰近，故通過對STR附近區(qū)域克隆測序，就可能發(fā)現(xiàn)目的基因。通過家系和對照研究,運(yùn)用連鎖和相關(guān)分析 ,可以找到與疾病高度相關(guān)的 STR位點(diǎn)。③法醫(yī)學(xué)個(gè)體識(shí)別和親權(quán)鑒定。法醫(yī)案例中,對于量極少和降解嚴(yán)重的生物檢材 ,通過PCR進(jìn)行STR位點(diǎn)擴(kuò)增并將幾個(gè)STR位點(diǎn)聯(lián)合起來分析，可得到相當(dāng)高的累積個(gè)體識(shí)別率和父權(quán)排除率。因而 STR用于法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著廣闊的前景，為司法偵案、破案提供有利的科學(xué)依據(jù)。答案：疾病的連鎖分析與基因的定位：包括復(fù)雜疾病（如骨質(zhì)疏松癥、糖尿病、心血管疾病、精神性紊亂、各種腫瘤等）的基因定位、關(guān)聯(lián)分析，并可用于遺傳病的單倍型診斷。指導(dǎo)用藥和藥物設(shè)計(jì)：SN移態(tài)性能充分反映個(gè)體間的遺傳差異。通過研究遺傳多態(tài)性與個(gè)體對藥物敏感性或耐受性的相關(guān)性,可以闡明遺傳因素對藥物效用的影響,從而對醫(yī)生針對性的用藥和藥物的開發(fā)提供指導(dǎo)和依據(jù)。用于進(jìn)化和種群多樣性的研究：生物界的進(jìn)化及進(jìn)化過程中物種多樣性的形成與基因組的突變和突變的選擇密切相關(guān) ,構(gòu)建整個(gè)基因組的SNP圖譜對于直接研究人類的起源、進(jìn)化具極大意義。對比人群之間SNP圖譜的異同情況可以對人類的起源、遷移等作出估計(jì),從而理清人類進(jìn)化過程中源與流的問題。答案：人類基因組研究主要包括兩方面的內(nèi)容：以全基因組測序?yàn)槟繕?biāo)的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)和以基因功能鑒定為目標(biāo)的功能基因組學(xué)，又稱后基因組研究。結(jié)構(gòu)基因組學(xué)代表基因組分析的早期階段，通過基因作圖、核苷酸序列分析確定基因組成、基因定位的科學(xué)，包括規(guī)模化地測定蛋白質(zhì)、RNA及其它生物大分子的三維結(jié)構(gòu)等內(nèi)容 ,以獲得一幅完整的、能夠在細(xì)胞中定位以及在各種生物學(xué)代謝途徑、生理途徑、信號(hào)傳導(dǎo)途徑中全部蛋白質(zhì)在原子水平的三維結(jié)構(gòu)全息圖。功能基因組學(xué)代表基因分析的新階段，是利用結(jié)構(gòu)基因組學(xué)提供的信息研究基因功能，使人們有可能在基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子細(xì)胞生物學(xué)以致生物體整體水平上理解生命的原理。對疾病的防治和機(jī)理的闡明有重要應(yīng)用意義。病毒基因組十、A型題：只含小分子量RNA而不含蛋白質(zhì)的病毒稱（ ）類病毒（ Viroids）衛(wèi)星（ Satellites）類病毒（viroid）朊病毒（ Prions）擬病毒（ virusoid ）只含蛋白質(zhì)而不含核酸的的病毒稱（）類病毒（ Viroids）衛(wèi)星（ Satellites）類病毒（ viroid）朊病毒（ Prions）擬病毒（ virusoid ）RNA病毒基因組的帽子結(jié)構(gòu)與第二個(gè)核苷酸相連的化學(xué)鍵（）5＇，5＇-三磷酸二酯鍵3＇，3＇-三磷酸二酯鍵5＇，5＇-磷酸二酯鍵3＇，5＇-磷酸二酯鍵以上都不是HBV基因組是（）完全雙鏈 DNA分子不完全雙鏈 DNA 分子完全雙鏈 RNA分子不完全雙鏈 RNA 分子單鏈DNA分子具mRNA模板活性的病毒基因組是（ ）正鏈 DNA病毒負(fù)鏈 DNA病毒負(fù)鏈 RNA病毒逆轉(zhuǎn)錄科的正鏈 RNA病毒正鏈 RNA病毒（逆轉(zhuǎn)錄科的正鏈 RNA 病毒除外）關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄病毒敘述不正確的是（）迄今發(fā)現(xiàn)的 RNA腫瘤病毒均屬 RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒B.嗜肝DNA病毒科屬DNA逆轉(zhuǎn)錄病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒 RNA為正鏈病毒顆粒均攜帶逆轉(zhuǎn)錄酶E.前病毒DNA可以整合到宿主細(xì)胞染色體 DNA中逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)不包括（）5＇端帽子結(jié)構(gòu)3/端poly（A）尾兩端各有一個(gè)長末端重復(fù)序列（ LTR）編碼逆轉(zhuǎn)錄酶神經(jīng)酰胺酶分段基因組（segmentedgenome）是指病毒基因組（由數(shù)條不同的核酸分子組成由數(shù)條相同的核酸分子組成由數(shù)條互補(bǔ)的核酸分子組成由可分成不同功能區(qū)段的一個(gè)核酸分子組成以上都不對HBV基因組序列的利用率（編碼基因效率）達(dá)（）90%?100%100%?150%150%-200%200%?250%250%-300%SARS-CoV勺分子診斷主要是（ ）根據(jù)基因組序列設(shè)計(jì)特異性引物作 PCR根據(jù)基因組序列設(shè)計(jì)特異性引物作 RT-PCR根據(jù)病毒膜蛋白作 ELISA根據(jù)病毒核衣殼蛋白作 ELISA根據(jù)病毒滴度十一、B型題：A.雙鏈DNAB.單鏈DNAC.雙鏈RNAD.正鏈RNAE.負(fù)鏈RNA1.HBIV基艮聞是（流感病毒基因組是（）人類免疫缺陷病毒的基因組（）十二、X型題：述一個(gè)病毒基因組，應(yīng)涉及到（）A.核酸（DNA或RNA）的性質(zhì)B.核酸鏈的數(shù)量和核音酸序列C.鏈末端的結(jié)構(gòu)D.編碼基因E.調(diào)控元件病毒基因組末端重復(fù)序列結(jié)構(gòu)有()粘性末端末端插入序列末端反向重復(fù)序列末端正向重復(fù)序列長末端重復(fù)序列甲型流感病毒亞型的分型依據(jù)()核衣殼蛋白(nucleocapsidprotein，NP)基質(zhì)蛋白(matrixprotein，M)C.血凝素(hemagglutinin,HA)的抗原性D.神經(jīng)酰胺酶(neuraminidase,NA)的抗原性宿主種屬逆轉(zhuǎn)錄病毒編碼的基本結(jié)構(gòu)基因()gag(編碼核心蛋白)。pol(編碼逆轉(zhuǎn)錄酶等)rex(編碼rex調(diào)節(jié)蛋白)tax(編碼tax調(diào)節(jié)蛋白)env基因(編碼包膜蛋白)HIV基因組編碼的附加基因和調(diào)節(jié)基因()vifvprneftatrevHIV-1( )A.引起AIDSB.主要攻擊輔助性T淋巴細(xì)胞導(dǎo)致免疫系統(tǒng)紊亂和免疫缺陷屬逆轉(zhuǎn)錄病毒使被感染的細(xì)胞喪失功能但不會(huì)死亡十三、名詞解釋：重疊基因分段基因組抗原漂移前病毒DNA十四、問答題：病毒的基本結(jié)構(gòu)成份主要有哪些？國際病毒分類委員會(huì)(ICTV)將病毒分成哪幾類？簡述長病毒末端重復(fù)序列的特點(diǎn)和作用。參考答案A型題：.C2.D3.A4.B5.E6.D7.E8.A9.C10.BB型題：.A2.E3.DX型題：.ABCDE2.ACDE3.CD4.ABE5.ABCDE6.ABCD四、名詞解釋：許多病毒基因組的一段 DNA序列有兩個(gè)或兩個(gè)以上的開放讀碼框架，可以編碼兩種或兩種以上的多肽鏈，稱為重疊基因(overlappinggene)分段基因組(segmentedgenome)是指病毒基因組由數(shù)條不同的核酸分子組成。分段基因組多見于正鏈 RNA病毒、負(fù)鏈RNA病毒及雙鏈RNA病毒。當(dāng)宿主細(xì)胞同時(shí)感染兩種不同亞型的病毒時(shí)，毒株之間會(huì)發(fā)生基因重配現(xiàn)象，子代病毒可獲得兩個(gè)親代病毒的基因片段，導(dǎo)致子代病毒表面抗原發(fā)生變化，從而逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的攻擊，這種現(xiàn)象又稱為抗原漂移(antigenshift)。當(dāng)逆轉(zhuǎn)錄病毒感染敏感細(xì)胞后，首先以其自身的RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下合成 DNA中間體，這種 DNA分子稱原病毒或前病毒 DNA(provirusDNA)。五、問答題：2.毒沒有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，由四種基本結(jié)構(gòu)成份組成：①由一種核酸(DNA或RNA用成的病毒基因組。②由病毒基因組編碼的衣殼蛋白組成的衣殼。③來源于宿主細(xì)胞質(zhì)膜系統(tǒng)(細(xì)胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜或高爾基體膜)的包膜。④病毒顆粒中的其它內(nèi)容物，包括酶、核酸結(jié)合蛋白及金屬離子等。.國際病毒分類委員會(huì)(ICTV)制定了《國際病毒分類與命名原則》。根據(jù)病毒的基因組組成及復(fù)制方式，可將病毒分為如下幾類：DNA病毒(DNAViruses)第一組：雙鏈 DNA病毒( GroupI:dsDNAViruses)第二組：單鏈 DNA病毒( GroupII:ssDNAViruses)RNA病毒( RNAviruses)第三組：雙鏈RNA病毒(GroupIII:dsRNAViruses)第四組：正鏈RNA病毒(GroupIV:(+)ssRNAViruses第五組：負(fù)鏈RNA病毒(GroupV:(-)ssRNAViruses)DNA與RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒(DNAandRNAReverseTranscribingViruses)第六組 ： RNA逆 轉(zhuǎn)錄病毒 (GroupVI: RNAReverseTranscribingViruses)第七組 ： DNA逆 轉(zhuǎn)錄病毒 (GroupVII: DNAReverseTranscribingViruses)亞病毒因子( SubviralAgents)衛(wèi)星( Satellites)類病毒( Viroids)朊病毒( Prions).逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組RNA在逆轉(zhuǎn)錄后生成的雙鏈DNA中，兩端有長末端重復(fù)序列(longterminalrepeat,LTR結(jié)構(gòu)。LTR在結(jié)構(gòu)與功能上與上述重復(fù)序列不同。LTR中的重復(fù)序列只占一部分，另外還包括單一序列。5＇端的LTR包含許多特定的基因表達(dá)調(diào)控區(qū)域，是一組真核生物增強(qiáng)子和啟動(dòng)子單位，而3＇端的LTR具有轉(zhuǎn)錄終止的作用。另外，逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組利用 LTR中的重復(fù)序列形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，在整合酶作用下整合入宿主細(xì)胞基因組內(nèi)。蛋白質(zhì)組學(xué)選擇題TOC\o"1-5"\h\z．目前研究蛋白質(zhì)間相互作用最常采用的方法是 。A質(zhì)譜分析B二維凝膠電泳C酵母雙雜交技術(shù) DDNaseI足紋分析．目前進(jìn)行蛋白質(zhì)分離最有效的方法是 。A質(zhì)譜分析B二維凝膠電泳C酵母雙雜交技術(shù) DDNaseI足紋分析．二維凝膠電泳是根據(jù)蛋白質(zhì)的 來進(jìn)行分離的。A分子量和分子構(gòu)像B分子量和電荷 C電荷和分子構(gòu)像D分子量．質(zhì)譜分析技術(shù)主要是用來檢測蛋白質(zhì)的 。A分子量B分子組成 C分子構(gòu)像D分子大?。铝屑夹g(shù)中，不能用來檢測溶液中蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)是A核磁共振 B圓二色譜法 C氫同位素交換法 D小角中子衍射法TOC\o"1-5"\h\z.DNaseI足紋分析技術(shù)中，DNaseI水解的是DNA分子中的 。A氫鍵B磷酸二酯鍵C疏水鍵D肽鍵．蛋白質(zhì)之間相互作用的形式主要包括 。A分子和亞基的聚合B分子識(shí)別C分子自我裝配 D多酶復(fù)合體E分子雜交名詞解釋． 蛋白質(zhì)組． 蛋白質(zhì)組學(xué)． 二維凝膠電泳． 質(zhì)譜技術(shù)． 凝膠滯后實(shí)驗(yàn)問答題1．蛋白質(zhì)組學(xué)的研究特點(diǎn)有哪些？2．蛋白質(zhì)組學(xué)的研究內(nèi)容有哪些？3．目前在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中主要采用了哪些技術(shù)？4．等電聚焦凝膠電泳的原理是什么？5．簡述酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)。答案：選擇題：C、B、B、A、D、B、ABCDE名詞解釋：蛋白質(zhì)組是指特定細(xì)胞、組織乃至機(jī)體作為一個(gè)生命單元中所擁有蛋白質(zhì)的集合，即生命體中攜帶的基因信息在某一時(shí)段所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)是指對在特定的時(shí)間和環(huán)境下所表達(dá)的群體蛋白質(zhì)研究的一門學(xué)問。主要在蛋白質(zhì)水平上探索蛋白質(zhì)的表達(dá)模式、作用模式、功能機(jī)制、調(diào)節(jié)控制以及蛋白質(zhì)群體內(nèi)的相互作用。是在生物體或其細(xì)胞的整體蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行的，并從一個(gè)機(jī)體或一個(gè)細(xì)胞的蛋白質(zhì)整體活動(dòng)來揭示生命的規(guī)律。二維凝膠電泳是目前蛋白質(zhì)組研究中最有效的分離技術(shù)。它由兩向電泳組成，第一向以蛋白質(zhì)電荷差異為基礎(chǔ)進(jìn)行分離的等電聚焦凝膠電泳，第二向是以蛋白質(zhì)分子量差異為基礎(chǔ)的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。質(zhì)譜技術(shù)是樣品分子離子化后， 根據(jù)不同離子間的質(zhì)量、電荷比值（質(zhì)荷比，m/z）差異來確定分子量的技術(shù)。凝膠滯后實(shí)驗(yàn)是近年來發(fā)展起來的用聚丙烯酰胺凝膠電泳直接分析核酸與蛋白質(zhì)結(jié)合的簡單、快速、敏感方法。通過蛋白質(zhì)與末端標(biāo)記的核酸探針特異性結(jié)合，電泳時(shí)這種復(fù)合物較無蛋白結(jié)合的探針在凝膠中的泳動(dòng)速度要慢，即表現(xiàn)為相對滯后。問答題：①整體性②揭示生命的動(dòng)態(tài)性過程③體現(xiàn)生命現(xiàn)象的復(fù)雜性．蛋白質(zhì)組學(xué)的研究包括兩個(gè)方面：一是針對蛋白質(zhì)表達(dá)模式的研究，一是在蛋白質(zhì)功能模式方面的深入分析。①蛋白質(zhì)的分離技術(shù)：二維凝膠電泳蛋白質(zhì)的鑒定技術(shù)主要包括：質(zhì)譜技術(shù)、Edman降解分析技術(shù)、蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)分析技術(shù)蛋白質(zhì)與核酸間相互作用的研究技術(shù)：凝膠滯后實(shí)驗(yàn)、DNaseI足紋分析、核酸一蛋白質(zhì)雜交實(shí)驗(yàn)④蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間相互作用的研究技術(shù)：酵母雙雜交技術(shù)．依據(jù)蛋白質(zhì)分子的凈電荷或等電點(diǎn)進(jìn)行分離的技術(shù)。在等電聚焦過程中，電場所采用的載體兩性電解質(zhì)含有脂肪族多氨基多羧酸，可在電場中形成正極為酸性，負(fù)極為堿性的連續(xù)pH梯度，蛋白質(zhì)分子在一個(gè)載體兩性電解質(zhì)（ampholyte）形成的連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移到其等電點(diǎn)位置時(shí)，凈電荷為零，在電場中不再移動(dòng)，因此可將各種不同等電點(diǎn)性質(zhì)的蛋白質(zhì)分離開來.酵母雙雜交系統(tǒng)所具有的優(yōu)點(diǎn)：①蛋白質(zhì)作為被研究的對象不用被純化；②檢測在活細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，可以在一定程度上反映體內(nèi)（細(xì)胞內(nèi)）的真實(shí)情況；③由于這一系統(tǒng)可以反映基因表達(dá)產(chǎn)物的累積效應(yīng)，因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間微弱或短暫的相互作用；④采用不同組織、器官、細(xì)胞類型和分化時(shí)期材料構(gòu)建cDNA文庫，可用于分析多種不同功能的蛋白。局限性：①雙雜交系統(tǒng)分析蛋白間的相互作用定位于細(xì)胞核內(nèi)，而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工如糖基化、二硫鍵形成等，這些反應(yīng)在核內(nèi)無法進(jìn)行。②由于某些蛋白本身具有激活轉(zhuǎn)錄功能或在酵母中表達(dá)時(shí)發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用，從而引起報(bào)告基因的表達(dá)，產(chǎn)生“假陽性”結(jié)果。③雙雜交只是反映蛋白質(zhì)間能發(fā)生作用的可能性，這種可能還必須經(jīng)過其他實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，尤其要與生理功能研究相結(jié)合，否則可能會(huì)誤入歧途。核酸的分離與純化一、選擇題真核生物染色體DNA主要以下列哪種形式存在A環(huán)狀單鏈分子B線性單鏈分子C環(huán)狀雙鏈分子D線性雙鏈分子E線性或環(huán)狀雙鏈分子[本題答案 ]CDNA在細(xì)胞核內(nèi)通常與下列哪種物質(zhì)結(jié)合A蛋白質(zhì)B糖類C脂類D無機(jī)鹽E水[本題答案 ]ARNA主要存在于A細(xì)胞質(zhì)B線粒體C細(xì)胞核D溶酶體E內(nèi)質(zhì)網(wǎng)[本題答案 ]A4.人的二倍體細(xì)胞DNA大約由多少堿基對（bp）組成A.1.0X91spB.2.0xlbpC.3.0X1bpD.4.0X9bpE.5.0X1bp[本題答案 ]C5.紫外分光光度法測定核酸溶液選用的光波波長為A200nmB230nmC260nmD280nmE320nm[本題答案 ]C在純化核酸時(shí)往往含有少量共沉淀的鹽，常用下列哪種濃度的乙醇洗滌去除A100%B95%C70~75%D50~60%E30~40%[本題答案 ]C在核酸的分離與純化過程中，不需去除的污染物是A蛋白質(zhì)B脂類C對后續(xù)實(shí)驗(yàn)有影響的溶液和試劑D不需要的核酸分子E水[本題答案 ]E紫外分光光度法對DNA進(jìn)行測定中，下列哪項(xiàng)是正確的ADNA的最大吸收波長為280nmBA260為1的光密度大約相當(dāng)于50間/ml雙鏈DNACA260為1的光密度大約相當(dāng)于40聞/ml雙鏈DNADA260為1的光密度大約相當(dāng)于 33必ml雙鏈DNAEA260/A280大于2.0[本題答案 ]B在核酸的提取過程中，將整個(gè)操作過程的 pH盡可能控制在A2?3B4?10C10?11D11?12E12?14TOC\o"1-5"\h\z[本題答案 ]B紫外分光光度法可對核酸純度進(jìn)行鑒定，下列說法是正確的A 純 DNA的 A270/A280比值為 2.0B 純 DNA的 A260/A280比值為 1.8C 純 DNA的 A260/A280比值為 2.0D 純 DNA的 A27C/A280比值為1.8E 純 DNA的 A230/A270比值為 1.8[本題答案 ]B通過凝膠電泳法可對 RNA分子完整性進(jìn)行鑒定，提示無 RNA的降解時(shí)應(yīng)A28SRNA的熒光強(qiáng)度約為18S的2倍B18SRNA的熒光強(qiáng)度約為28S的2倍C5sRNA的熒光強(qiáng)度約為18S的2倍D5SRNA的熒光強(qiáng)度約為28S的2倍E28SRNA的熒光強(qiáng)度約為5S的2倍[本題答案 ]A總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳EB染色后觀察不到的是AmRNAB28SrRNAC18SrRNAD5SrRNAE5.8SrRNA[本題答案 ]A以下哪項(xiàng)有利于 DNA的保存A溶于TE中DNA在室溫可儲(chǔ)存數(shù)年B加入少量 DNaseC溶于pH3.0溶液D加入少量 DNase和RNaseE在DNA樣品中加入少量氯仿，可有效避免細(xì)菌污染[本題答案 ]E酚抽提法可用于高分子量 DNA的分離純化，所用試劑分別有不同的功能，下列正確的是ASDS為陽離子去污劑，主要引起細(xì)胞膜的降解并能乳化脂質(zhì)和蛋白質(zhì)BEDTA為二價(jià)金屬離子螯合劑，可促進(jìn)DNase的活性C蛋白酶 K只可消化 K類蛋白質(zhì)D酚可使蛋白質(zhì)變性沉淀E無RNase的DNase可有效地水解RNA[本題答案]C下列哪種不是對核酸分子完整性進(jìn)行鑒定的方法A凝膠電泳法BNorthern雜交CELISADWesternblottingE生物芯片技術(shù)[本題答案 ]D下列哪種方法不是分離純化高分子量 DNA的A酚抽提法B煮沸裂解法C甲酰胺解聚法D玻棒纏繞法E異丙醇沉淀法[本題答案 ]B下列哪種不是從瓊脂糖凝膠中回收 DNA片段的方法A DEAE纖維素膜插片電泳法B電泳洗脫法C冷凍擠壓法D低熔點(diǎn)瓊脂糖挖塊回收法E漂洗法[本題答案 ]E適合從瓊脂糖凝膠中回收 5kb的DNA片段的方法是ADEAE纖維素膜插片電泳法B非透析袋電泳洗脫法C透析袋電泳洗脫法D壓碎與浸泡法E冷凍擠壓法[本題答案 ]C適合從瓊脂糖凝膠中回收 500bp~5kb的DNA片段的方法是ADEAE纖維素膜插片電泳法B非透析袋電泳洗脫法C透析袋電泳洗脫法D壓碎與浸泡法E冷凍擠壓法[本題答案 ]A20.適合從聚丙烯酰胺凝膠中回收 DNA片段的標(biāo)準(zhǔn)方法是ADEAE纖維素膜插片電泳法B非透析袋電泳洗脫法C透析袋電泳洗脫法D壓碎與浸泡法E冷凍擠壓法[本題答案 ]D大多數(shù)質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)一般為A單鏈線性 DNAB雙鏈線性 DNAC閉合環(huán)狀單鏈 DNAD閉合環(huán)狀雙鏈 DNAEDNA-RNA雜交體[本題答案 ]D目前使用較為廣泛的質(zhì)粒DNA小量提取的方法是A牙簽少量制備法B小量一步提取法CSD眼解法D堿裂解法E煮沸裂解法TOC\o"1-5"\h\z[本題答案 ]D有關(guān)煮沸裂解法提取質(zhì)粒DNA的正確敘述是A該法是一種條件比較溫和的物理方法B煮沸能完全滅活核酸內(nèi)酶 AC不適用于大多數(shù) E.coli菌株D適用于HB101菌株E適用于<15kb的質(zhì)粒 DNA制備[本題答案 ]ECsC2-EB法中在過量EB存在的下，超速離心后密度最大沉于管底的是A蛋白質(zhì)B帶切口的環(huán)狀或線性 DNACRNAD復(fù)合糖類E閉環(huán)質(zhì)粒DNA［本題答案］C用柱層析法純化質(zhì)粒DNA時(shí)DNA的何種殘基與硅基質(zhì)結(jié)合A嘌呤B磷酸鹽殘基C嘧啶D糖基E氫離子［本題答案］B在 RNA純化時(shí)，常使用的水飽和酚的 pH值為A3.5-4.0B4.5-5.5C6.0-7.5D7.0-8.5E9.0-10.0［本題答案］B分離與純化mRNA可采用下列哪種方法Aoligo（dT）-纖維素柱層析法Boligo（dA）-纖維素液相結(jié)合離心法Coligo（U）-濾紙法Doligo（dC）-纖維素柱層析法Eoligo（dG）-纖維素液相結(jié)合離心法［本題答案］A名詞解釋.RNA酶蛋白抑制劑［本題答案］RNA酶蛋白抑制劑（RNasin）是從人胎盤分離的一種蛋白質(zhì)可與多種 RNA酶緊密結(jié)合形成非共價(jià)結(jié)合的等摩爾復(fù)合物，使RNA酶失活。.電泳洗脫法［本題答案］電泳洗脫法是將待回收的DNA片段電泳出凝膠介質(zhì)，使其進(jìn)入一個(gè)便于回收的固定的小容積溶液中；再通過一些方法分離純化出DNA片段。目前主要有透析袋電泳洗脫法與非透析袋電泳洗脫法兩大類。.A260/A280［本題答案 ］指核酸溶液在 260nm和280nm紫外波長下的吸光度的比值，根據(jù)比值來判斷核酸樣品有無蛋白質(zhì)和酚等的污染。問答題在核酸的分離和純化過程中，如何保持核酸的完整性？［本題答案］為了保證核酸的完整性，首先在操作過程中，應(yīng)盡量簡化操作步驟，減少各種破壞核酸的有害因素，包括物理、化學(xué)與生物學(xué)的因素。提取應(yīng)在0?4c的條件下進(jìn)行；另外避免強(qiáng)力的機(jī)械剪切力對核酸的破壞。細(xì)胞內(nèi)或外來的核酸酶對核酸的生物降解，而破壞核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，使用 EDTA、檸檬酸鹽并在低溫條件下操作，基本上就可以抑制DNA酶的活性；并盡可能地抑制RNA酶的活性。試述舉2種質(zhì)粒DNA提取的方法及應(yīng)用。［答案］質(zhì)粒DNA提取的方法包括堿裂解法、煮沸裂解法和 SDS裂解法。1）堿裂解法：在NaOH存在的強(qiáng)堿性（pH12.0?14.0）的條件下，用強(qiáng)陽離子去垢劑SDS＜?jí)募?xì)胞壁和裂解細(xì)胞，并使宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)與染色體DNA發(fā)生變性，釋放出質(zhì)粒DNA。它是一種適用范圍很廣的方法，能從所有的大腸桿菌（E.coli）菌株中分離出質(zhì)粒DNA,制備量可大可小。2）煮沸裂解法：是將細(xì)菌懸浮于含 TritonX-100和溶菌酶的緩沖液中，TritonX-100和溶菌酶能破壞細(xì)胞壁，再用沸水浴裂解細(xì)胞，使宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)與染色體DNA發(fā)生變性。對CCC質(zhì)粒DNA因結(jié)構(gòu)緊密不會(huì)解鏈，當(dāng)溫度下降后，CCC質(zhì)粒DNA可重新回復(fù)其超螺旋結(jié)構(gòu)，通過離心去除變性的蛋白質(zhì)和染色體 DNA,然后回收上清液中的質(zhì)粒DNA。本法只能用于小質(zhì)粒DNA（小于15kb）的小量或大量制備，適用于大多數(shù)從大腸桿菌（E.coli）菌株中分離出質(zhì)粒 DNA。SDSg解法：它是將細(xì)菌懸浮于等滲的蔗糖溶液中， 用溶菌酶和EDTA處理以破壞細(xì)胞壁，再用 SDS裂解去壁細(xì)菌，從而溫和地釋放出質(zhì)粒DNA到等滲溶液中，然后用酚 /氯仿抽提。適用于大質(zhì)粒DNA的提取。簡述哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因組DNA抽提的主要方法有哪幾種？［本題答案 ］哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因組DNA抽提的主要方法有：酚提取法、甲酰胺解聚法、玻棒纏繞法和異丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。簡述從瓊脂糖凝膠中回收 DNA片段的主要方法有哪幾種？［本題答案 ］從瓊脂糖凝膠中回收 DNA片段的方法主要包括DEAE纖維素膜插片電泳法、電泳洗脫法、低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠挖塊回收法、冷凍擠壓法及現(xiàn)在有試劑盒供應(yīng)的以硅為基礎(chǔ)的純化系統(tǒng)等。簡述磁性球珠分離法分離 mRNA的原理。［本題答案］磁性球珠分離法是基于寡聚（dT）與poly（A）的互補(bǔ)配對特性、用生物素標(biāo)記寡聚（dT）,通過寡聚（dT）與mRNA3'端poly（A）形成雜交體，這種雜交非常迅速，在1－2分鐘內(nèi)就可完成，可有效地除去rRNA,tRNA以及其他RNA而后通過生物素與鏈親和素順磁性磁珠之間的相互作用來捕獲這些雜交物而達(dá)到分離純化。重組DNA技術(shù)一、選擇題、下列有關(guān)重組 DNA技術(shù)的敘述，正確的是（ ）A.重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運(yùn)載體B.所有的限制酶都只能識(shí)別一種特定的核音酸序列C.選細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因?yàn)榧?xì)菌繁殖快D.只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)、下列不屬于獲取目的基因的方法是（ ）A．“鳥槍法”B.轉(zhuǎn)錄法C.反轉(zhuǎn)錄法D.根據(jù)已知氨基酸序列合成法3、作為基因的運(yùn)輸工具 -運(yùn)載體，必須具備的條件之一及理由是（）A.能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地保存下來并大量復(fù)制，以便提供大量的目的基因B.具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便于目的基因的表達(dá)C.具有某些標(biāo)記基因，以便為目的基因的表達(dá)提供條件D.能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存，以便于進(jìn)行篩選4、基因治療是把健康的外源基因?qū)耄?）A.有基因缺陷的DNA分子中B.有基因缺陷的染色體中C.有基因缺陷的細(xì)胞器中D.有基因缺陷的細(xì)胞中

5、應(yīng)用重組 DNA技術(shù)診斷疾病的過程中必須使用基因探針才能達(dá)到檢測疾病的目的。這里的基因探針是指（）A.用于檢測疾病的醫(yī)療器械B.用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的 DNA分子C.合成為球蛋白的DNAD.合成苯丙羥化酶的 DNA片段6、基因工程的操作步驟：①使目的基因與運(yùn)載體結(jié)合②將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞③檢測目的基因的表達(dá) ④提取目的基因。正確的順序是（）A．③②④①B．②④①③C．④①②③D．③④①②二、名詞解釋1、限制性核酸內(nèi)切酶 2、載體 3、黏粒 4、轉(zhuǎn)化5、轉(zhuǎn)染 6、轉(zhuǎn)導(dǎo)三、問答題簡述質(zhì)粒的概念和特性，常用的質(zhì)粒載體有哪幾種？簡述重組DNA技術(shù)的原理及技術(shù)。簡述黏性末端 DNA重組體的構(gòu)建過程。舉例說出重組 DNA技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。答案一、選擇題B2．B3．A4．A5．B6．C二、名詞解釋1、限制性核酸內(nèi)切酶簡稱限制酶，是一類能識(shí)別雙鏈 DNA分子中某特定的核苷酸序列，并在識(shí)別序列內(nèi)或附近切割 DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。它是一類專一性很強(qiáng)的核酸內(nèi)切酶，在基因的分離、DNA結(jié)構(gòu)的分析、載體的改造以及體外重組中均有重要作用。2、是指能攜帶目的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的一類DNA分子。載體按照基本組成元件的來源不同，可分為質(zhì)粒載體、噬菌體載體、噬菌粒載體、粘粒載體、人工染色體載體等。按功能可分為克隆載體和表達(dá)載體。3、黏粒又稱柯斯質(zhì)粒，是一種 人噬菌體以為基礎(chǔ)，專門為克隆大片段而設(shè)計(jì)并和質(zhì)粒共同構(gòu)建的雜合載體。 它由人噬菌體DNA的cos位點(diǎn)序列和質(zhì)粒的復(fù)制子構(gòu)建而成。把帶有目的基因的重組質(zhì)粒DNA引入受體細(xì)胞的過程成為轉(zhuǎn)化。將重組噬菌體 DNA直接引入受體細(xì)胞的過程則稱為轉(zhuǎn)染。若重組噬菌體 DNA被包裝到噬菌體頭部成為有感染力的噬菌體顆粒，再以此噬菌體為運(yùn)載體，將頭部重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞中，這一過程成為轉(zhuǎn)導(dǎo)，通常成為感染。三、問答題1、質(zhì)粒為細(xì)菌染色體外一些雙鏈、共價(jià)閉合環(huán)狀DNA分子，是能夠進(jìn)行獨(dú)立復(fù)制并保持穩(wěn)定遺傳的復(fù)制子。質(zhì)粒具有復(fù)制和控制機(jī)構(gòu)，能夠在細(xì)胞質(zhì)中獨(dú)立自主的進(jìn)行自身復(fù)制，并使子代細(xì)胞保持它們恒定的拷貝數(shù)。質(zhì)粒一般具有以下特性：①自主復(fù)制性，它能獨(dú)立于宿主細(xì)胞的染色體DNA而自主復(fù)制；②質(zhì)粒不相容性；③可擴(kuò)增性；④可轉(zhuǎn)移性。理想質(zhì)粒載體應(yīng)具備 ①具有松弛型復(fù)制子；②在復(fù)制子外存在幾個(gè)單一的酶切位點(diǎn)；③具有插入失活的篩選標(biāo)記；④分子量相對較小，有較高的拷貝數(shù)。常見的質(zhì)粒載體有：pBR322質(zhì)粒、pUC質(zhì)粒載體、pGEM系列載體等。2、重組DNA是在體外利用限制性內(nèi)切酶，將不同來源的DNA分子進(jìn)行特異的切割，獲得的目的基因或 DNA片段與載體連接，從而組成一個(gè)新的DNA分子。重組的DNA分子能夠通過一定的方式進(jìn)入相應(yīng)的宿主細(xì)胞，并在宿主細(xì)胞中進(jìn)行無性繁殖，獲得大量的目的基因或 DNA片段。經(jīng)重組的DNA分子能在宿主細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，獲得相應(yīng)的蛋白質(zhì)。大致步驟包括：①目的基因的獲?。虎谳d體的選擇；③目的基因與運(yùn)載體連接成重組DNA；④重組DNA導(dǎo)入受種細(xì)胞；⑤重組體的篩選。3、目的基因和載體可由同一種限制酶切割后產(chǎn)生，或由不同的限制酶切割形成互補(bǔ)黏性末端，經(jīng)退火，彼此間很容易按堿基配對原則形成氫鍵。然后由DNA連接酶催化連接接頭處的缺口，形成重組質(zhì)粒。載體DNA在限制酶切割后，用堿性磷酸酶處理，除去5’端磷酸基，以避免載體 DNA自身環(huán)化。4、可以利用重組DNA技術(shù)探明致病基因的結(jié)構(gòu)和功能，了解其致病機(jī)制；開發(fā)基因工程藥物和疫苗用于臨床；建立基因診斷、治療技術(shù)，為疾病的預(yù)防、治療提供新方法、新技術(shù)。具體可用于基因診斷：基因診斷是從基因水平上檢測人類遺傳性疾病的基因缺陷；基因治療：是指將人的正?；蚧蛴兄委熥饔玫幕蛲ㄟ^載體導(dǎo)入人體靶細(xì)胞取代靶細(xì)胞中的缺陷基因，從而達(dá)到治療疾病目的的方法；基因工程藥物、疫苗和抗體的研究和制備；利用基因敲除或轉(zhuǎn)基因技術(shù)可改造生物、培育新的生物品種或用于藥物篩選和新藥評價(jià)等。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)一、A型選擇題TOC\o"1-5"\h\z．下列哪種不是基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)（ D）A．PCRB．LCRC．NASBAD．bDNAE．SDA．以下基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)中，哪一種屬于等溫?cái)U(kuò)增（ E）A．PCRB．RT-PCRC．LCRD．HybridcaptureE．NASBA．能使擴(kuò)增靈敏度提高的方法是（ B）A.多重PCRB.巢式PCR C.原位PCRD.反向PCR E.不又PCR.能對未知序列進(jìn)行擴(kuò)增的 PCR是（D）A.多重PCRB.巢式PCR C.原位PCRD.反向PCR E.不又PCR5．在定量大的是（ B）PCR中，對原始模板準(zhǔn)確定量的影響因素中，最A(yù).5．在定量大的是（ B）PCR中，對原始模板準(zhǔn)確定量的影響因素中，最D.擴(kuò)增產(chǎn)物的量 E.循環(huán)閾值．外標(biāo)定量方法最大的缺點(diǎn)是（ B）A.不能測定原始模板的絕對量 B.測定的重復(fù)性和精密性有問題C.標(biāo)準(zhǔn)品制備困難 D.不能排除樣本間的測定差異E.測定必須在擴(kuò)增的指數(shù)期進(jìn)行．最早推出的熒光定量探針是（ A）A．TaqMan探針B．相鄰探針C．分子信標(biāo)D．陰陽探針 E.端粒探針.PCR測定中的污染主要是指（D）A．標(biāo)本間的交叉法治 B．環(huán)境中的細(xì)菌污染C.灰塵污染D.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染 E.試劑中的污染物．UNG防污染預(yù)防下列哪種污染（ A）A.產(chǎn)物 B.靶核酸 C.氣溶膠D.標(biāo)本間E.病原微生物．TaqMan探針采用的是（A）A.熒光標(biāo)記的探針 B.生物素標(biāo)記的探針C.同位素標(biāo)記的探針D.SYBRGreer#記引物 E.圓形探針X型題選擇題.DNA聚合酶要求下述哪些物質(zhì)才能進(jìn)行 DNA復(fù)制（ABCD）A.dDNAB.Mg2+ C.引物D.模板E.小牛血清白蛋白．核酸擴(kuò)增抑制物的主要來源是（ ABCE）A.血清中的血紅素 B.尿標(biāo)本是的尿素 C.核酸提

取中的有機(jī)溶劑D.Mg2+ E.部分抗凝劑3.臨床基因擴(kuò)增中，弱陽性室內(nèi)質(zhì)控樣本發(fā)生失控，其原因可能是(ABDE)A.核酸提取中的丟失 B.標(biāo)本中擴(kuò)增抑制物殘留C.擴(kuò)增儀孔間溫度不均一D.Taq酶和/或逆轉(zhuǎn)錄酶失后 E.擴(kuò)增產(chǎn)物污染二、名詞解釋.聚合酶鏈反應(yīng).原位PCR.RT-PCR.反向PCR.多重PCR.巢式PCR.不對稱PCR.錨定PCR.熒光定量PCR.循環(huán)閾值.TaqMan探針.分子信標(biāo).LCR三、問答題.影響PCR反應(yīng)的因素有哪些？.試證明Ct值與模板DNA的起始拷貝數(shù)成反比。.簡述bDNA信號(hào)放大系統(tǒng)的原理。.PCR檢測技術(shù)有何臨床應(yīng)用。.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)如何設(shè)置。.如何保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量。參考答案、A型選擇題D 2.EBB 7.A10.AX型題：ABCD 2.ABCE二、名詞解釋3.B 4.D8.D 9,A3.ABDE.聚合酶鏈反應(yīng)：PCR是利用DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)等在體外條件下，催化一對引物間的特異3.B 4.D8.D 9,A3.ABDE基因體外擴(kuò)增技術(shù)。由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu).原位PCR是指直接用細(xì)胞涂片或石蠟片包埋組織切片在單個(gè)細(xì)胞中進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后用特異探針進(jìn)行原位雜交檢測含該特異序列的細(xì)胞的一種方法。.RT-PCR逆車專錄PCR是一種檢測RNA的方法。其原理是先在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以mRNA為模板合成互補(bǔ)的cDNA,再以此cDNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。.反向PCR是對已知DNA片斷兩側(cè)的未知序列進(jìn)行擴(kuò)增和研究的一種方法。其原理是：用限制性內(nèi)切酶消化 DNA片斷，然后用連接酶將酶切產(chǎn)物連接成環(huán)狀，再用已知序列上兩端相反方向的引物進(jìn)行PCR.多重PCR是在一次反應(yīng)中加入多種引物，同時(shí)擴(kuò)增一份DNA樣品中的不同序列。每對引物所擴(kuò)增的產(chǎn)物序列長短不一。根據(jù)不同長短的序列存在與否，檢測是否有某些基因片斷的缺失與突變。多重PCR對于檢測疾病相關(guān)基因十分龐大的疾病很有價(jià)值。.巢式PCR巢式PCR有兩對引物，一對引物對應(yīng)的序列在模板外測，稱外引物，另一對引物互補(bǔ)序列在同一模板的外引物的內(nèi)側(cè)，稱內(nèi)引物，即外引物擴(kuò)增產(chǎn)物較長，含有內(nèi)引物擴(kuò)增的靶序列，經(jīng)過二次PCR放大將單拷貝的目的DNA序列檢出。巢式PCR最大的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度大大提高.不對稱PCR不又PCR的目的是擴(kuò)增產(chǎn)生特異長度的單鏈DNA。PCR反應(yīng)中采用兩種不同濃度的引物， 一般采用50?100:1比例，最初的10?15個(gè)循環(huán)中主要產(chǎn)物還是雙鏈DNA,但當(dāng)?shù)蜐舛鹊囊锉幌谋M后，以后的循環(huán)只產(chǎn)生高濃度引物的延伸產(chǎn)物，結(jié)果產(chǎn)生大量單鏈DNA。因PCR反應(yīng)中使用二種引物濃度不同，因此稱為不對稱PCR.錨定PCR錨定主要用于擴(kuò)增未知序列或未全知的序列。首先分離總RNA或mRNA,在逆轉(zhuǎn)錄酶彳^用下合成cDNA,通過DNA末端轉(zhuǎn)移酶在cDNA的3端上加上poly(dG)尾，與此poly(dG)相對應(yīng)的錨定引物為poly(dC),為保證擴(kuò)增特異性，poly(dC)應(yīng)在十二聚以上，5'端還可帶上某些限制性酶序列或其他序列信息。.熒光定量PCR熒光定量PCR亦稱實(shí)時(shí)熒光PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)檢測整個(gè)PCR過程，獲得在線描述PCR過程的動(dòng)力學(xué)曲線，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板核酸進(jìn)行定量分析的方法。.循環(huán)閾值：循環(huán)閾值是在PCR擴(kuò)增過程中，熒光信號(hào)開始由本底進(jìn)入指數(shù)增長階段的拐點(diǎn)所對應(yīng)的循環(huán)次數(shù)。 Ct值與模板DNA的起始拷貝數(shù)成反比。.TaqMan探針：在TaqMan探針法的定量PCR反應(yīng)體系中，包括一對引物和一條探針。探針只與模板特異性地結(jié)合，其結(jié)合位點(diǎn)在兩條引物之間。探針的 5'端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)，如FAM、VIC等，3端標(biāo)有熒光淬滅基團(tuán)，如TAMRA等。當(dāng)探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)所發(fā)射的熒光能量被淬滅基團(tuán)吸收，儀器檢測不到信號(hào)。隨著PCR的進(jìn)行，Taq酶在鏈延伸過程中遇到與模板結(jié)合的探針，其3'f外切酶活性就會(huì)將探針切斷，報(bào)告基團(tuán)遠(yuǎn)離淬滅基團(tuán)，其能量不能被吸收從而產(chǎn)生熒光信號(hào)。所以，每經(jīng)過一個(gè)PCR循環(huán)，熒光信號(hào)也和目的片段一樣，有一個(gè)同步指數(shù)增長的過程，熒光信號(hào)的弓1度就代表了模板 DNA的拷貝數(shù)。.分子信標(biāo)：分子信標(biāo)探針是TaqMan探針的一種衍生方法。探針設(shè)計(jì)與TaqMan探針相似，只不過是探針5'和3'端的一小段核甘酸序列被設(shè)計(jì)成互補(bǔ)的，沒有與靶序列雜交時(shí)會(huì)形成發(fā)夾狀態(tài)，此時(shí)熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)極端靠近，熒光幾乎完全淬滅。探針與靶序列雜交后，發(fā)夾展開，熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分開，熒光得以恢復(fù)，熒光檢測系統(tǒng)即可接收到熒光基團(tuán)的熒光信號(hào).LCR連接酶鏈反應(yīng)又稱為連接酶擴(kuò)增反應(yīng)。 LCR是以DNA連接酶將某一DNA鏈的5'磷酸與另一相鄰鏈的3'羥基連接為基礎(chǔ)的循環(huán)反應(yīng)。LCR擴(kuò)增對象不是目標(biāo)片段，而是由引物組成的探針，是一種探針擴(kuò)增技術(shù)。 LCR需要兩對引物A、B和A'、B',其中引物A與引物A'互補(bǔ)，引物B與引物B'互補(bǔ)。模板雙鏈DNA經(jīng)加熱變性后，兩對引物分別與模板鏈復(fù)性退火，復(fù)性后引物A和B'的3'端分別與引物B和A'的5'端相鄰。若引物與模板完全互補(bǔ),在DNA連接酶的作用下，使得相鄰兩個(gè)引物 A和B、A和B'的5'磷酸與3'羥基形成磷酸二酯鍵而相連。連接產(chǎn)物變性后，又可作為引物的模板參加反應(yīng)，使擴(kuò)增呈指數(shù)增長，經(jīng)過變性-復(fù)性(退火)-連接的20?30個(gè)循環(huán)，檢測連接反應(yīng)的產(chǎn)物。三、問答題.影響PCR反應(yīng)的因素有哪些？PCR^應(yīng)體系包含DNA模板、寡核昔酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需離子的反應(yīng)緩沖液，這些因素都對PCR反應(yīng)產(chǎn)生影響。.試證明Ct值與模板DNA的起始拷貝數(shù)成反比。一般來說，第n次PCR循環(huán)的熒光信號(hào)強(qiáng)度(Rn)等于背景信號(hào)強(qiáng)度(Rb)加上每個(gè)分子的熒光強(qiáng)度(即單位熒光強(qiáng)度 RS與分子數(shù)目的乘積)，用數(shù)學(xué)式表示如下：Rn=FB+Xo(1+Ex)nRs式中：Rn代表熒光信號(hào)強(qiáng)度Rb代表背景信號(hào)強(qiáng)度X。代表起始模板拷貝數(shù)Ex代表擴(kuò)增效率Rs代表單位熒光強(qiáng)度N代表循環(huán)次數(shù)當(dāng)循環(huán)次數(shù)n=Ct時(shí)，則Rt=Rb+Xo(1+Ex)CtRs兩邊取對數(shù)，則lg(Rt-Rb)=lgXo+Ctlg(1+Ex)+lgRs將其整理，則，Ct=IgXo lg(RT-RB)-lgRs

Ct=lg（1+Ex）lg（1+Ex）對每一個(gè)特定的PCR反應(yīng)來說,ExR「Rb、和Rs都是常數(shù)，所發(fā)Ct值與lgXo成反比，也就是說，Ct值與起始模板DNA的拷貝數(shù)（X。）的對數(shù)成反比，起始DNA濃度每增一倍，Ct值減小一個(gè)循環(huán)。因此，Ct值的引入確保了實(shí)時(shí)熒光PCR定量的精確和嚴(yán)格。.簡述bDNA信號(hào)放大系統(tǒng)的原理。分枝DNA是人工合成的帶有側(cè)鏈的DNA片段，在每個(gè)側(cè)鏈上都可以標(biāo)記可被激發(fā)的標(biāo)記物。以bDNA為基礎(chǔ)建立的連續(xù)放大DNA信號(hào)以檢測DNA的技術(shù)稱為分枝DNA信號(hào)放大系統(tǒng)。bDNA信號(hào)放大系統(tǒng)包括四種雜交探針，即目標(biāo)探針、前放大體、放大體和標(biāo)記探針。首先用親和素包被微孔，加入目標(biāo)探針，該組探針能與等檢核酸靶序列上不同區(qū)域互補(bǔ)，其 5'端用生物素標(biāo)記，能與微孔中的親和素高度親和結(jié)合；再向微孔中加入待測標(biāo)本，目標(biāo)核酸與固定于微孔中的目標(biāo)探針結(jié)合；再加入前放大體，該組探針的一段能與目標(biāo)核酸的不同區(qū)域互補(bǔ)結(jié)合，另一段與放大體（即分枝DNA）的主鏈部分的序列互補(bǔ)結(jié)合，分枝DNA由主鏈和數(shù)十根寡核甘酸組成，每個(gè)分枝上都有標(biāo)記探針的雜交位點(diǎn)，由酶標(biāo)寡核昔酸組成的標(biāo)記探針與 bDNA上的互補(bǔ)序列結(jié)合，加入底物后最后經(jīng)化學(xué)發(fā)光檢測儀檢測。利用bDNA信號(hào)放大系統(tǒng)可在每個(gè)靶序列上結(jié)合 60?300個(gè)酶分子，而且所有雜交反應(yīng)同時(shí)進(jìn)行，觀察到的信號(hào)與靶DNA的量成正比，可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線將靶DNA定量。.PCR檢測技術(shù)有何臨床應(yīng)用。PCR在病原微生物的檢測中的應(yīng)用；（2）PCR在遺傳病中的應(yīng)用；（3）PCR在腫瘤中的應(yīng)用；（4）其它方面的應(yīng)用：PCR技術(shù)除用于臨床診斷和治療外，還可用于 DNA指紋、個(gè)體識(shí)別、親子關(guān)系識(shí)別、法醫(yī)物證等。.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)如何設(shè)置。由于基因擴(kuò)增檢驗(yàn)是對靶核酸的指數(shù)倍擴(kuò)增過程，因而有大量的擴(kuò)增產(chǎn)物的出現(xiàn)，這種擴(kuò)增產(chǎn)物極易對以后的新擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)生污染”，為防止這種污染的發(fā)生，就需要對基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行嚴(yán)格的分區(qū)。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)分隔開的工作區(qū)域，即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)以及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。如果采用全自動(dòng)擴(kuò)增儀，后兩個(gè)區(qū)域可以合并。應(yīng)注意的是，各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按單一方向進(jìn)行，即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū) -標(biāo)本制備區(qū)一擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)一擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。各區(qū)的儀器設(shè)備包括工作服、鞋子、實(shí)驗(yàn)記錄本和筆等都必須專用，不得混淆。此外，上述四個(gè)工作區(qū)域內(nèi)還應(yīng)有固定于房頂?shù)淖贤鉄?，以便于工作后區(qū)域內(nèi)的空氣照射。.如何保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)測定由一系列步驟組成，包括樣本收集、樣本處理（核酸提?。?、核酸擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測結(jié)果報(bào)告及解釋等。室內(nèi)質(zhì)量控制僅涉及樣本處理、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析等測定分析步驟，而室間質(zhì)量評價(jià)則除了監(jiān)測測定分析步驟外，還包括較大范圍的實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)，諸如樣本接收中的可靠性、結(jié)果報(bào)告及解釋等。QA則是覆蓋更廣范圍的活動(dòng)，包括樣本收集、結(jié)果報(bào)告和解釋等。核酸分子雜交技術(shù)一、A型題：.要探知細(xì)胞內(nèi)某一蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，可以通過 實(shí)現(xiàn)。A.SouthernblotB.NorthernblotC.WesternblotD.原位分子雜交2.核酸的變性是。A.一級(jí)結(jié)構(gòu)的斷裂B.二級(jí)結(jié)構(gòu)的破壞C.伴有共價(jià)鍵的斷裂D.是DNA的降解過程。.固相雜交不包括Northern印跡雜交原位雜交C.吸附雜交Southern印跡雜交.染色體原位雜交結(jié)果如圖所示13、18、21、X染色體原位雜交結(jié)果如圖所示13、18、21、XY DNA體（紅）的探針雜交。右圖顯示細(xì)胞核與18號(hào)染色體（淺藍(lán)）、X染色體（綠）和Y染色體（紅）的探針雜交 。請根據(jù)該結(jié)果得出診斷為。A. 21三體B.女性胎兒染色體微缺失正常男性胎兒5.染色體原位雜交結(jié)果如下圖左圖：用13號(hào)染色體（綠）和21號(hào)染色體（紅）的探針與來自羊水的間期細(xì)胞雜交，右圖：用18號(hào)染色體（淺藍(lán)色）、X染色體（綠）和Y染色體（紅）的探針與羊水細(xì)胞雜交。針對該檢測結(jié)果判斷疾病為。男f21三體女卜21三體DiGeorge綜合癥正常胎兒熒光原位雜交結(jié)果如下圖X染色體著絲粒探針（熒光原位雜交結(jié)果如下圖X染色體著絲粒探針（Xcen）和Xp22.3探針都用紅色熒光標(biāo)記，根據(jù)該結(jié)果可診斷為。染色體微缺失21三體男性胎兒正常女性胎兒熒光素FITC是。A．異硫氰酸熒光素B．四乙基羅達(dá)明C．德克薩斯紅D．吲哚二羧菁B型題著絲粒探針染色體涂抹探針基因座特異探針端粒重復(fù)序列探針可用于中期及間期細(xì)胞，檢測染色體的非整倍性可用于中期及間期細(xì)胞，檢測微缺失和微重復(fù)可用于中期及間期細(xì)胞，檢測染色體的非整倍性和端粒微小末端重排只能用于中期細(xì)胞，確定小標(biāo)識(shí)染色體或畸變重復(fù)序列探針固相雜交液相雜交Western印跡FISHRx-FISH菌落原位雜交斑點(diǎn)和狹縫雜交Southern印跡雜交Northern印跡雜交復(fù)性速率液相雜交吸附雜交發(fā)光液相雜交液相夾心雜交原位雜交DNA的濃度DNA的大小和復(fù)雜性溫度離子強(qiáng)度影響 DNA復(fù)性的因素影響 DNA變性的因素影響核酸分子雜交的因素X型題根據(jù)性質(zhì)及來源不同，核酸探針又可被分為基因組DNA探針DNA探針RNA探針寡核苷酸探針等常用的核酸探針非放射性標(biāo)記物有地高辛生物素酶熒光素系統(tǒng)常用的核酸探針熒光素標(biāo)記物有A．異硫氰酸熒光素B．四乙基羅達(dá)明C．德克薩斯紅D．吲哚二羧菁等非放射性探針檢測方法有A．直接法B． 間接免疫法C． 直接親合法D．間接親合法等Southern印跡技術(shù)是A． 檢測 RNA的核酸雜交技術(shù)是以發(fā)明者的名字命名的C． 屬于固相雜交的范疇D． 可用于遺傳病的檢測Northern印跡技術(shù)是A． 檢測 RNA的核酸雜交技術(shù)是以發(fā)明者的名字命名的C． 屬于固相雜交的范疇D． 與 Southern印跡雜交的方法類似，只是變性劑不同核酸原位雜交是A． 核酸分子雜交技術(shù)與組織細(xì)胞化學(xué)和免疫組織化學(xué)結(jié)合起來的一種雜交方法，B． 基本原理及探針的標(biāo)記方法與傳統(tǒng)核酸分子雜交技術(shù)相同C． 不能確定與探針互補(bǔ)的核酸序列在細(xì)胞內(nèi)的空間位置D． 不需要將核酸從細(xì)胞中提取出來熒光原位雜交的標(biāo)本A． 中期染色體． 間期核C． 完整細(xì)胞或組織