蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件

蛋白質(zhì)與非含氮化合物檢驗(yàn)

蛋白質(zhì)與非含氮化合物檢驗(yàn)教學(xué)要求掌握：血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)；個(gè)別血漿蛋白質(zhì)（前白蛋白、白蛋白）的來(lái)源、生理功能和臨床檢測(cè)意義；血清總蛋白和白蛋白的測(cè)定方法、原理、評(píng)價(jià)和臨床檢測(cè)意義。熟悉：急性時(shí)相反應(yīng)蛋白的概念和種類(lèi)；血清蛋白電泳組分的臨床分析了解：其他蛋白質(zhì)的來(lái)源和生理功能教學(xué)要求掌握：血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)；個(gè)別血漿蛋白質(zhì)（蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是生命的標(biāo)志。許多疾病情況下，均有蛋白質(zhì)代謝紊亂，可反映到血漿蛋白中。血漿蛋白質(zhì)是血漿固體成分中含量最多、組成極為復(fù)雜、功能廣泛的一類(lèi)化合物。500多種，其中200多種已被分離出接近純品。血漿蛋白質(zhì)的研究在以下幾個(gè)領(lǐng)域進(jìn)展迅速：1.各種血漿蛋白質(zhì)的合成、降解、轉(zhuǎn)換更新和代謝調(diào)節(jié)2.各種血漿蛋白質(zhì)生理功能的進(jìn)一步研究。3.血漿蛋白質(zhì)的遺傳變異，通過(guò)它了解人群與家族遺傳特征。4.以新技術(shù)對(duì)血漿蛋白質(zhì)進(jìn)行微量和特異檢測(cè)分析。5.在進(jìn)化與個(gè)體發(fā)育的生化研究中，發(fā)現(xiàn)不少正常胎兒期蛋白可以在惡性腫瘤病人重新出現(xiàn)。6.血漿蛋白質(zhì)在實(shí)際工作中廣泛用于組織與細(xì)胞培養(yǎng)。7.在動(dòng)脈粥樣硬化及腫瘤等發(fā)病學(xué)研究中對(duì)血漿蛋白質(zhì)有廣泛涉及。第一節(jié)概述蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是生命的標(biāo)志。血漿蛋白質(zhì)的研究在以下蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件一血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)（一）組成

（二）功能可概括為：1.營(yíng)養(yǎng)作用2.維持血漿膠體滲透壓3.維持血漿正常pH值4.運(yùn)輸作用5.免疫與防御功能6.催化作用7.代謝調(diào)控8.凝血、抗凝血及纖溶作用等。一血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)（三）分類(lèi)鹽析法：白蛋白和球蛋白電泳：白蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白（臨床最常用）正常參考值：白蛋白：57-68%α1球蛋白：1.0-5.7%α2球蛋白：4.9-11.2%β球蛋白：7-13%γ球蛋白：9.8-18.2%（三）分類(lèi)蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件α1球蛋白：ＡＡＴＡＡＧＡＦＰＨＤＬα2球蛋白：α2ＭＧＨpＣＥＲβ球蛋白：ＴＲＦＬＤＬ＆ＶＬＤＬＣ3，Ｃ４β2-mFgγ球蛋白：Ig(IgM,IgA,IgG)CRPα1球蛋白：α2球蛋白：β球蛋白：γ球蛋白：功能分類(lèi):功能分類(lèi):二、個(gè)別血漿蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)、功能與臨床意義(一)前白蛋白(prealbuminPA)來(lái)源：肝細(xì)胞合成。理化性質(zhì)：MW5.4萬(wàn)，因pH8.6時(shí)電泳位于白蛋白之前而得名，半壽期2天。生理功能：結(jié)合甲狀腺激素。臨床意義：蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良和肝功不全的指標(biāo)。營(yíng)養(yǎng)不良：200-400mg/L為正常；<150mg/L為缺乏；<50mg/L為嚴(yán)重缺乏。肝功不全：其濃度降低早于其他血清蛋白質(zhì)常用測(cè)定方法：免疫化學(xué)法二、個(gè)別血漿蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)、功能與臨床意義（二）視黃醇結(jié)合蛋白（retinolbindingproteinRBP）視黃醇結(jié)合蛋白是血液中維生素的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由肝臟合成、廣泛分布于血液、腦脊液、尿液及其他體液中。測(cè)定視黃醇結(jié)合蛋白能早期發(fā)現(xiàn)腎小管的功能損害，并能靈敏反映腎近曲小管的損害程度，還可作為肝功能早期損害和監(jiān)護(hù)治療的指標(biāo)。

（二）視黃醇結(jié)合蛋白（retinolbindingpro(三)白蛋白(albuminAlb)來(lái)源：肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞。理化性質(zhì)：血漿含量最多的蛋白，占血漿總蛋白的57－68％，半壽期15-19d，pH7.4環(huán)境中帶負(fù)電荷。功能：1.營(yíng)養(yǎng)2.中許多激素和藥物的主要載體，運(yùn)輸作用，可與某些金屬離子和化合物結(jié)合，如Cu2+、Ca2+、BIL，將其運(yùn)輸?shù)礁髯缘陌屑?xì)胞。3.維持血漿膠體滲透壓。4.具有相當(dāng)?shù)木彌_酸堿的功能。5.屬于APR－。(三)白蛋白(albuminAlb)臨床意義：1.個(gè)體營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)。>35g/L為正常；<34g/L為缺乏；<21g/L為嚴(yán)重缺乏。2.監(jiān)測(cè)脫水的一項(xiàng)指標(biāo)。3.低白蛋白血癥為臨床常見(jiàn)。4.白蛋白遺傳性變異。

臨床意義：(四)α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsinα1AT)理化性質(zhì)：MW5.5萬(wàn)，是α1區(qū)帶中主要成分，含糖10-12%。功能：具有蛋白酶抑制作用，占血清中抑制蛋白酶活力的90%左右，主要是對(duì)抗由多形核白細(xì)胞吞噬作用時(shí)釋放的溶酶體蛋白水解酶，其作用具明顯pH依賴性，中性/弱堿性環(huán)境中活力大，pH4.5時(shí)活性基本喪失，屬于APR。(四)α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsinα1A臨床意義：低血漿AAT見(jiàn)于胎兒呼吸窘迫綜合征；M型AAT缺陷時(shí)，蛋白水解酶的過(guò)度作用損傷組織彈性纖維，可導(dǎo)致肺氣腫，肝硬化等。

測(cè)定方法：目前主要采用免疫化學(xué)法。蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件(五)α1-酸性糖蛋白(α1--acidglycoprteinAAG)理化性質(zhì)：MW近4萬(wàn)，含糖45%。來(lái)源：肝及某些腫瘤組織；膿毒癥時(shí)粒/單核細(xì)胞。功能：APR，急性炎癥時(shí)顯著升高，與免疫防御有關(guān)。臨床意義：作為急性時(shí)相反應(yīng)指標(biāo)，炎癥、風(fēng)濕病、惡性腫瘤、心肌梗死等上升；是活動(dòng)性潰瘍性結(jié)腸炎最可靠的指標(biāo)之一。糖皮質(zhì)激素增加，可引起AAG的升高。營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝損傷、腎病綜合癥以及胃腸道疾病致蛋白嚴(yán)重丟失等情況下降低。雌激素使AAG降低測(cè)定方法：使用AAG抗體，進(jìn)行免疫散射法或免疫比濁法檢測(cè)(五)α1-酸性糖蛋白(α1--acidglycoprt(六)結(jié)合珠蛋白（haptoglotinHp）理化性質(zhì)：電泳中屬α2-區(qū)帶球蛋白，分子為α2β2兩對(duì)肽鏈四聚體。生理功能：1.與紅細(xì)胞中釋出的自由形式存在的血紅蛋白不可逆結(jié)合，Hp-Hb轉(zhuǎn)運(yùn)至肝降解，重新利用氨基酸和鐵，可防止Hb從腎丟失，為機(jī)體有效保留鐵。2.屬APR。臨床意義：監(jiān)測(cè)急性時(shí)相反應(yīng)和溶血是否處于進(jìn)行狀態(tài)，溶血時(shí)因血紅蛋白大量釋出，Hp下降。(六)結(jié)合珠蛋白（haptoglotinHp）測(cè)定方法

①測(cè)定Hp-Hb復(fù)合物中過(guò)氧化物酶活性。②在血漿中加入過(guò)量Hb，生成Hp-Hb復(fù)合物，凝膠層折法收復(fù)合物分離，測(cè)定結(jié)合的Hb③電泳法。④免疫化學(xué)法。測(cè)定方法(七)α2-巨球蛋白(α2-macroglobinα2MG)來(lái)源：肝細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)合成。理化性質(zhì)：MW62.5-80萬(wàn),含糖8%，血漿蛋白中分子量最大,由4個(gè)亞基單位組成。功能：可與多種分子與離子結(jié)合，與許多蛋白水解酶結(jié)合而影響酶活性，是血漿中主要的蛋白酶抑制劑。臨床意義：在低白蛋白血癥、妊娠期及口服避孕藥等情況下可見(jiàn)升高。測(cè)定方法：免疫化學(xué)法(七)α2-巨球蛋白(α2-macroglobinα2(八)銅藍(lán)蛋白(ceruloplasminCp/CER)理化性質(zhì)：主要由肝細(xì)胞合成，分子量12-16萬(wàn)，含銅而呈藍(lán)色，屬α2球蛋白。功能：1具氧化酶活性，催化多酸及多胺類(lèi)底物氧化。2銅代謝庫(kù)，血液中Cp可視為銅的無(wú)毒代謝庫(kù)。3抗氧化劑作用，減少組織中脂質(zhì)過(guò)氧化物及自由基的生成。4APR。(八)銅藍(lán)蛋白(ceruloplasminCp/CER臨床意義：在感染、創(chuàng)傷、腫瘤時(shí)升高；Wilson?。ǜ味?fàn)詈俗冃?，主要因體內(nèi)銅代謝障礙所致）時(shí)血漿Cp明顯下降；嚴(yán)重肝、腎疾病及妊娠期時(shí)下降。測(cè)定方法：免疫化學(xué)法或酶活性測(cè)定臨床意義：(九)轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrinTRF)來(lái)源：肝細(xì)胞及MPS合成。理化性質(zhì)：Mw7.7萬(wàn)，單鏈糖蛋白，半壽期7天。功能：血漿中主要含鐵蛋白，負(fù)責(zé)以TRF-Fe３＋形式運(yùn)載消化道吸收及紅細(xì)胞降解的鐵至骨髓再利用合成血紅蛋白。臨床意義：1.用于貧血診斷和對(duì)治療的監(jiān)測(cè)。IDA時(shí)TRF升高，但鐵飽和度下降；鐵利用障礙性貧血時(shí)，TRF正常下降，但鐵飽和度升高。2.急性時(shí)相反應(yīng)時(shí)下降。3.妊娠或服用雌激素時(shí)升高。測(cè)定方法：放免法、散射比濁法(九)轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrinTRF)(十)β2-微球蛋白(β2-microglobwlinB-MG)來(lái)源：存在于所有有核細(xì)胞表面，尤其淋巴/腫瘤細(xì)胞，并釋放入血。理化性質(zhì)：Mw11800，半壽期107min，人類(lèi)白細(xì)胞抗原的輕鏈部分，分子內(nèi)含一對(duì)二硫鏈。因其分子量小，可自由透過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜，但在腎小管近曲約99％被重吸收。臨床意義：在腎功衰竭、炎癥及腫瘤時(shí)血漿濃度上升，主要用于監(jiān)測(cè)腎小管功能，也是一種惡性腫瘤標(biāo)志物。測(cè)定方法：常用放免法，ELISA法(十)β2-微球蛋白(β2-microglobwlin(十一)C-反應(yīng)蛋白(C-reactiveproteinCRP)來(lái)源：肝細(xì)胞。理化性質(zhì)MW11.5-14萬(wàn)，5個(gè)多肽鏈亞單位非共價(jià)結(jié)合為盤(pán)形多聚體，電泳位于慢г帶，有時(shí)可延伸至β區(qū)帶。功能：可以和肺炎鏈球菌Ｃ-多糖結(jié)合，結(jié)合多種細(xì)菌，真菌等體內(nèi)多糖物質(zhì)及卵磷脂、核酸等，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，是第一個(gè)被認(rèn)定的APR。臨床意義：作為急性時(shí)相反應(yīng)的一個(gè)極靈敏指標(biāo)。(十一)C-反應(yīng)蛋白(C-reactiveprotei（十二）降鈣素原（procalcitonin，PCT）

PCT甲狀腺C細(xì)胞分泌的降鈣素的前體，當(dāng)嚴(yán)重細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)感染以及膿毒癥和多臟器功能衰竭時(shí)它在血漿中的水平升高。自身免疫、過(guò)敏和病毒感染時(shí)PCT不會(huì)升高。局部有限的細(xì)菌感染、輕微的感染和慢性炎癥不會(huì)導(dǎo)致其升高。

（十二）降鈣素原（procalcitonin，PCT）小結(jié)1、除免疫球蛋白外，主要由肝細(xì)胞合成2、除PA、ALB、C-RP為多為糖蛋白3、含糖量最高的是α1–AG，約45%4、半壽期較短：PA12h5、等電點(diǎn)小于7.36、分子量較大：α2-MG715KDIgM900KD小結(jié)1、除免疫球蛋白外，主要由肝細(xì)胞合成急性時(shí)相反應(yīng):在急性炎癥性疾病如手術(shù)、創(chuàng)傷、心肌梗死、感染、腫瘤等，包括AAT、AAG、Hp、Cp、C4、C3、纖維蛋白原、C-反應(yīng)蛋白等等，在血漿中的濃度顯著上升。PA、Alb及TRF則出現(xiàn)相應(yīng)的低下。這一現(xiàn)象可稱為。急性時(shí)相反應(yīng)蛋白:以上這類(lèi)蛋白質(zhì)統(tǒng)稱為急性時(shí)相反應(yīng):在急性炎癥性疾病如手術(shù)、創(chuàng)傷、心肌梗死、感染、三、血漿蛋白電泳組分的臨床分析圖形分析：含量分析：直接法：電泳染色后，直接觀察圖形的變化，大概判斷各區(qū)帶的增減。如需定量，可進(jìn)一步脫色、比色。光密度掃描法：可直接觀察各區(qū)帶的掃描圖形，且可以以數(shù)值表示各組分的含量。三、血漿蛋白電泳組分的臨床分析圖形分析：異常電泳圖譜的臨床意義異常血白蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征圖譜類(lèi)型TPAlbα1α2βγ腎病型↓↓↓↓↑↑↑不定肝硬化型↑N↓↓↓N↓N↓β-γ融合急性炎癥NN↓↑↑N慢性炎癥↓↑↑↑蛋白質(zhì)缺乏型個(gè)別區(qū)帶出現(xiàn)特征性缺乏

異常電泳圖譜的臨床意義異常血白蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型肝硬化主要特征：白蛋白在所有病例中均有不同程度的減低，α1、α2和β球蛋白正?；蚪档?，γ球蛋白常明顯增高，γ區(qū)帶的寬度也明顯增加，可見(jiàn)β-γ橋，為本病的特征。β-γ橋的出現(xiàn)與血清免疫球蛋白,特別是IgG、IgA、IgM同時(shí)增加有關(guān),其中又以IgA影響較大,IgAIgM泳動(dòng)在β2與γ之間時(shí),使β與γ區(qū)融合而形成β-γ橋。肝硬化主要特征：白蛋白在所有病例中均有不同程度的減低，α1、第二節(jié)體液蛋白質(zhì)檢測(cè)

第二節(jié)體液蛋白質(zhì)檢測(cè)假定：所有血漿蛋白質(zhì)是單純的多肽鏈所有蛋白質(zhì)與化學(xué)試劑的反應(yīng)性一致蛋白質(zhì)的測(cè)定一般基于以下四種蛋白質(zhì)的性質(zhì)：重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu)酪氨酸和色氨酸殘基對(duì)酚試劑紫外光吸收與色素的結(jié)合能力沉淀后借助濁度測(cè)定假定：所有血漿蛋白質(zhì)是單純的多肽鏈一血清總蛋白質(zhì)測(cè)定1.凱氏定氮法—參考標(biāo)準(zhǔn)方法結(jié)果較準(zhǔn)確，是蛋白質(zhì)測(cè)定的參考方法，但操作復(fù)雜，影響因素較多，不適用于日常工作，多用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白的標(biāo)定及校正其它的常規(guī)方法。一血清總蛋白質(zhì)測(cè)定1.凱氏定氮法－參考標(biāo)準(zhǔn)方法(0.05mgN0.3gpro)消化用濃硫酸將蛋白質(zhì)消化為硫酸銨；（耗時(shí)）

蒸餾用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā)；

吸收用酸性溶液（硼酸）吸收氣態(tài)氨（使[H+]

）滴定用已標(biāo)定的無(wú)機(jī)酸滴（使[H+]恢復(fù)），計(jì)算總氮量定蛋白（總氮量-非蛋白氮）×6.25=蛋白含量納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應(yīng)生成淡黃棕色膠態(tài)化合物，其色度與氨氮含量成正比。

原理：1.凱氏定氮法－參考標(biāo)準(zhǔn)方法(0.05mgN0.3g三聚氰胺是怎么加到牛奶中的許多人喝牛奶是為了補(bǔ)鈣，不過(guò)你如果留心一下國(guó)內(nèi)鮮牛奶包裝上的標(biāo)注，一般沒(méi)有列出鈣的含量，標(biāo)明的營(yíng)養(yǎng)成分含量只有兩種：脂肪和蛋白質(zhì)。鮮牛奶有全脂、低脂、脫脂之分，其脂肪含量各不相同，而且在脂肪被視為健康殺手的今天，一般人不會(huì)在乎脂肪含量是否達(dá)標(biāo)。蛋白質(zhì)才是牛奶中的主要營(yíng)養(yǎng)成分，鮮牛奶包裝上都會(huì)注著蛋白質(zhì)含量為100毫升≥2.9克,以表明符合鮮牛奶的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（100毫升≥2.95克）。三聚氰胺是怎么加到牛奶中的許多人喝牛奶是為了補(bǔ)鈣，不生鮮牛奶的蛋白質(zhì)含量一般在3%以上，所以一般都能達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，除非往原奶中兌水。食品工業(yè)上普遍采用的、被定為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的是凱氏定氮法。這是19世紀(jì)后期丹麥人約翰·凱達(dá)爾發(fā)明的方法。三聚氰胺含氮量高達(dá)66.6%，白色無(wú)味，是一種重要的化工原料，廣泛用于生產(chǎn)合成樹(shù)脂、塑料、涂料等。在生產(chǎn)三聚氰胺過(guò)程中，會(huì)出現(xiàn)廢渣，廢渣中還含有70%的三聚氰胺。造假者用來(lái)冒充蛋白質(zhì)的就是三聚氰胺渣。在飼料、奶制品中添加“蛋白精”冒充蛋白質(zhì)。生鮮牛奶的蛋白質(zhì)含量一般在3%以上，所以一般都能達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺是怎么加到牛奶中的呢？有兩種可能途徑。一種是奶站加到原奶中。因?yàn)槿矍璋肺⑷苡谒?，常溫下溶解度?．1克／升。也就是說(shuō)，100毫升水可以溶解0．31克三聚氰胺，含氮0．2克，相當(dāng)于1．27克蛋白質(zhì)，由此可以算出，要達(dá)到100毫升≥2.95克蛋白質(zhì)的要求，100毫升牛奶最多只能兌75毫升水（并加入0．54克三聚氰胺）。另一種途徑是在奶粉制造過(guò)程中加入三聚氰胺，這就不受溶解度限制了，想加多少都可以。三聚氰胺是怎么加到牛奶中的呢？有兩種可能途徑。一種是奶站加到2.雙縮脲比色法—血清總蛋白測(cè)定推薦方法蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性條件下與Cu2+絡(luò)合成紫紅色化合物，產(chǎn)生的顏色在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)含量成正比。此反應(yīng)和二分子尿素縮合后的產(chǎn)物雙縮脲（

H2N-CO-NH-CO-NH2）與堿性銅溶液作用形成紫紅色化合物的反應(yīng)相似，故稱為雙縮脲反應(yīng)。2.雙縮脲比色法—血清總蛋白測(cè)定推薦方法原理：蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性溶液中能與Cu2+作用而產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)。條件：至少含兩個(gè)肽鍵（-CONH-）基團(tuán)才能和Cu2+形成絡(luò)合物,氨基酸及二肽無(wú)反應(yīng),三肽以上才能反應(yīng)。雙縮脲生成

加熱＋NH322H－180022222N端C端原理：蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性溶液中能與氨基酸

R-CH-COOHNH2甘氨酰甘氨酸（二肽）

NH2-CH2-C-NH-CH2-C=OOOH因至少含2個(gè)-CONH-基團(tuán)才能與Cu2+絡(luò)合，所以氨基酸和二肽無(wú)此反應(yīng)。體液中小分子肽含量極低，故血漿中除蛋白質(zhì)外幾乎不存在可與雙縮脲試劑顯色的物質(zhì)，且各種蛋白質(zhì)顯色程度基本相同。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，但靈敏度較其它方法稍差，是目前臨床上最常規(guī)的方法。氨基酸因至少含2個(gè)-CONH-基團(tuán)才能與Cu2+絡(luò)合，所以氨3.酚試劑法原理：蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸殘基和色氨酸殘基能夠和酚試劑中的磷鎢酸-磷鉬酸反應(yīng)生成藍(lán)色化合物鎢藍(lán)和鉬藍(lán)，藍(lán)色深淺與蛋白質(zhì)濃度呈正比。

Lowry改良法：在酚試劑中加入Cu2+（75%呈色），提高了呈色的靈敏度，為雙縮脲法的100倍左右。3.酚試劑法原理：蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸殘基和色氨酸殘?jiān)u價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，改良法靈敏度高（10μg-60μg），適合測(cè)定蛋白含量少的標(biāo)本。缺點(diǎn)：由于各種蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸的比例不同，如白蛋白含色氨酸為0.2％，而在一些球蛋白中色氨酸含量高達(dá)2％-3％，因此使用本法測(cè)定純粹的、單一的蛋白質(zhì)較合適。此法靈敏度較高，為10-60ug／ml，因而適用于測(cè)定蛋白質(zhì)含量較少的標(biāo)本(如腦脊液)，但試劑反應(yīng)易受還原性化合物糖類(lèi)、酚類(lèi)及多種藥物如水楊酸、氯丙嗪和某些磺胺藥的干擾。評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，改良法靈敏度高（10μg-60μ4.紫外分光光度法

蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸使蛋白質(zhì)溶液在280nm處有一吸收峰?？捎糜跍y(cè)定蛋白質(zhì)。

原理：4.紫外分光光度法蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸和色氨酸評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：敏感而簡(jiǎn)便，可保留蛋白生物活性，常用與較純的酶和免疫球蛋白。需紫外分光光度計(jì)及石英比色皿。缺點(diǎn)：各種蛋白質(zhì)中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm測(cè)定易受游離色aa和酪aa以及尿酸和膽紅素的干擾；導(dǎo)致準(zhǔn)確性和特異性受影響。評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：敏感而簡(jiǎn)便，可保留蛋白生物活性，常用與較純5.染料結(jié)合法在酸性環(huán)境下，帶正電的蛋白質(zhì)（-NH3+)與染料的陰離子產(chǎn)生顏色反應(yīng)，使染料的吸收峰改變，可用分光光度法比色測(cè)定。原理：常用染料：氨基黑，考馬斯亮藍(lán)等常用方法：鄰苯三酚紅鉬法

1976年，Bradford根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理建立了考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)含量。此法簡(jiǎn)單快捷，且不受游離氨基酸和酚類(lèi)物質(zhì)的影響，適合于大量樣品的分析。

考馬斯亮藍(lán)G-250(CBG)在酸性溶液中呈茶棕色，在465nm有最大吸收峰。當(dāng)與蛋白質(zhì)結(jié)合后，其轉(zhuǎn)變成深藍(lán)色，吸收峰移至595nm。在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)濃度與吸光度成正比，可做定量分析。5.染料結(jié)合法在酸性環(huán)境下，帶正電的蛋白質(zhì)（-評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，靈敏度高，且干擾因素少。缺點(diǎn)：特異性不高；不同蛋白質(zhì)和染料的結(jié)合力不一致，標(biāo)準(zhǔn)物不易確定。

鄰苯三酚紅鉬法檢測(cè)原理：在酸性條件下，鄰苯三酚紅和鉬酸絡(luò)合形成紅色復(fù)合物，該復(fù)合物與蛋白質(zhì)形成復(fù)合體，其吸收峰移至604nm，通過(guò)比色法求出樣本中蛋白質(zhì)的含量。用于人或動(dòng)物腦脊液樣本中的總蛋白含量測(cè)定。評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，靈敏度高，且干擾因素少蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件6.比濁法原理：

評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便不需特殊儀器。缺點(diǎn)：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應(yīng)溫度，蛋白絮狀沉淀，混勻的方式等）

某些酸類(lèi)（磺基水楊酸等）和血白蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生沉淀，懸浮液濁度大小與蛋白質(zhì)濃度成正比，可獲得蛋白含量。6.比濁法原理：評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便不需特殊儀器。透射比濁法：自動(dòng)化生化分析儀散射比濁法：散射比濁儀（特定蛋白分析儀）促聚劑：聚乙二醇（加速大的免疫復(fù)合物生成）免疫比濁法：評(píng)價(jià)：靈敏度高受血脂影響免疫比濁法：評(píng)價(jià)：參考范圍：成人65－85g/L臨床意義：總蛋白升高：總蛋白降低：主要由白蛋白下降引起①合成減少②消耗增加③丟失過(guò)多④分布異常

⑤血液稀釋⑥少數(shù)由免疫球蛋白含量的明顯下降引起

真性升高：多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等假性升高：機(jī)體明顯失水，總蛋白含量相對(duì)升高，

A/G幾乎不變參考范圍：成人65－85g/L臨床意義：總蛋白升高：總蛋白降二、血清白蛋白測(cè)定方法：1.染料結(jié)合法(推薦)

2.鹽析法3.電泳法4.免疫化學(xué)法二、血清白蛋白測(cè)定方法：1.染料結(jié)合法(推薦)2.鹽析1.染料結(jié)合法(推薦)原理:血清白蛋白具有與陰離子染料結(jié)合的特性,其他蛋白則無(wú)。在酸性條件下,染料可與白蛋白形成有顏色的復(fù)合物,顏色的深淺與白蛋白濃度成正比。而球蛋白很少結(jié)合外源性染料,可在不分離球蛋白的情況下直接測(cè)定白蛋白。1.染料結(jié)合法(推薦)原理:應(yīng)用及評(píng)價(jià):BCG法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性較好，既適合手工也適合自動(dòng)化分析。嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間來(lái)避免非特異性反應(yīng)。臨床上推薦使用。應(yīng)用及評(píng)價(jià):BCG法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性較好，既適合手工也適合自染料溴甲酚綠（BCG）溴甲酚紫（BCP）優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)易于和非人源性白蛋白結(jié)合與白蛋白結(jié)合特異性較差與非人源性白蛋白結(jié)合力弱與白蛋白結(jié)合特異性好在30秒內(nèi)測(cè)可提高特異性溴甲酚綠法的原理：在pH4.2的緩沖液中，在有非離子型表面活性劑存在時(shí)，可與帶負(fù)電荷的染料溴甲酚綠結(jié)合生成藍(lán)綠色復(fù)合物，在波長(zhǎng)630nm處有吸收峰，該復(fù)合物的吸光度（顏色深淺）與白蛋白濃度成正比例，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，可求得待測(cè)樣品中白蛋白含量。溴甲酚紫法的原理：在pH5.2的緩沖液中，在有非離子型表面活性劑存在時(shí)，可與帶負(fù)電荷的染料溴甲酚紫結(jié)合生成綠色復(fù)合物，在波長(zhǎng)603nm處有吸收峰，該復(fù)合物的吸光度（顏色深淺）與白蛋白濃度成正比，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，可求得待測(cè)樣品中白蛋白濃度。染料溴甲酚綠（BCG）溴甲酚紫（BCP）優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)易于蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件原理:

鹽析是由于加入大量的中性鹽破壞了蛋白質(zhì)的水化膜、中和其所帶的電荷從而使蛋白質(zhì)分子聚集而沉淀析出。各種蛋白質(zhì)的親水性和帶電荷不同，故鹽析時(shí)所需鹽濃度與pH不同。GLB在生理pH下帶電荷及水化膜比ALB少，可被較低濃度中性鹽沉淀。2.鹽析法中性鹽：硫酸銨、硫酸鈉等原理:2.鹽析法中性鹽：硫酸銨、硫酸鈉等應(yīng)及評(píng)價(jià):操作繁瑣，不宜自動(dòng)化，基本不用應(yīng)及評(píng)價(jià):操作繁瑣，3.電泳法操作：醋纖膜電泳染色晾干透明光密度儀掃描洗脫比色染色分離測(cè)得蛋白組分百分比計(jì)算得出各種蛋白質(zhì)含量半定量定量3.電泳法操作：醋纖膜電泳染色晾干透明光密度儀掃描洗脫比色染評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：電泳特異性好，可了解血白蛋白質(zhì)全貌．缺點(diǎn)：電泳技術(shù)繁瑣，不易自動(dòng)化；白蛋白與染料親和力高會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏高評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：電泳特異性好，可了解血白蛋白質(zhì)全貌．缺點(diǎn)：4.免疫化學(xué)法原理及特點(diǎn):應(yīng)用：特異性高,但成本較高,費(fèi)時(shí),生化檢驗(yàn)用的不多.4.免疫化學(xué)法原理及特點(diǎn):應(yīng)用：特異性高,但成本較高,費(fèi)時(shí),參考范圍:成人40－55g/L.臨床意義：白蛋白升高：白蛋白降低：①合成不足：肝功能下降，營(yíng)養(yǎng)不良，吸收不良

②丟失過(guò)多：尿液丟失，胃腸道丟失，皮膚丟失

③分解代謝、消耗增加：創(chuàng)傷感染等

④分布異常：胸腹水

⑤血液稀釋⑥先天性ALB缺乏病真性升高：未見(jiàn)假性升高：機(jī)體明顯失水，或治療輸入過(guò)多白蛋白參考范圍:成人40－55g/L.臨床意義：白蛋白升高：白蛋白三、血清球蛋白測(cè)定方法：間接法:TP-ALB=GLB

參考范圍:成人20－30g/L.A/G：1.5－2.5三、血清球蛋白測(cè)定方法：間接法:TP-ALB=GLB參考臨床意義：球蛋白升高：球蛋白降低：合成減少、低或無(wú)γ-球蛋白血癥

真性升高（常見(jiàn)）：自身免疫性疾病、感染反應(yīng)、多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥。假性升高（少見(jiàn)）：機(jī)體明顯失水。臨床意義：球蛋白升高：球蛋白降低：合成減少、低或無(wú)γ-球蛋白四、血漿纖維蛋白原測(cè)定血漿纖維蛋白原：結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：血漿纖維蛋白原（Fib）是一種參與血液凝固的糖蛋白，又稱凝血因子Ⅰ，分子量34萬(wàn)，在肝臟合成，電泳時(shí)位于β球蛋白區(qū)帶。血漿纖維蛋白原測(cè)定對(duì)于出血性疾病和肝臟損傷的診斷有重要意義。功能特點(diǎn)：參與凝血血凝過(guò)程中的作用：

纖維蛋白原纖維蛋白網(wǎng)血凝塊纖維蛋白細(xì)絲血液凝塊構(gòu)造（紅色為紅血球，蘭色為血小板，黃色為纖維蛋白）四、血漿纖維蛋白原測(cè)定血漿纖維蛋白原：結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：血漿纖維蛋白測(cè)定方法及特點(diǎn)：1.纖維蛋白原凝塊測(cè)定法：2.免疫化學(xué)法：免疫電泳、擴(kuò)散用人纖維蛋白原免疫動(dòng)物獲得抗人纖維蛋白原抗體，應(yīng)用免疫電泳法、免疫擴(kuò)散法和ELISA法測(cè)定纖維蛋白原含量。應(yīng)用：特異性不高,常使結(jié)果偏高.2)鹽析雙縮脲法在血漿中加入12.5%的亞硫酸鈉使纖維蛋白原沉淀而與其他血漿蛋白質(zhì)分離，將纖維蛋白原用雙縮脲試劑顯色，求出其含量。

3)比濁法在pH7.0時(shí)，用13.3%的硫酸銨溶液沉淀纖維蛋白原，而血漿中其他蛋白質(zhì)保持溶解狀態(tài)，此時(shí)溶液的濁度完全由纖維蛋白原產(chǎn)生，通過(guò)比濁可求得其含量。應(yīng)用：影響因素較多，測(cè)定結(jié)果不夠準(zhǔn)確。1)復(fù)鈣雙縮脲法在稀釋血漿中加入鈣離子使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為不溶性纖維蛋白凝塊，將凝塊分離后用雙縮脲法測(cè)定纖維蛋白含量。測(cè)定方法及特點(diǎn)：1.纖維蛋白原凝塊測(cè)定法：2.免疫化學(xué)法：免臨床意義：急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，出血性疾病的診斷參考范圍:2.0－4.0g/L降低：營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝功損傷、ＤＩＣ、胎盤(pán)早期剝離，先天性缺乏等。升高：感染、組織損傷、休克、外科手術(shù)后、腎炎、風(fēng)濕病、惡性腫瘤；放射治療等臨床意義：急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，出血性疾病的診斷參考范圍:2.0五、尿液蛋白質(zhì)測(cè)定五、尿液蛋白質(zhì)測(cè)定六、腦脊液蛋白質(zhì)測(cè)定六、腦脊液蛋白質(zhì)測(cè)定第三節(jié)、體液氨基酸代謝及紊亂氨基酸代謝概況來(lái)源主要外源性氨基酸和機(jī)體合成非必要氨基酸，代謝包括脫氨基生成氨基、相應(yīng)的酮酸及脫羧基生成CO2、胺類(lèi)氨基酸代謝紊亂氨基酸代謝紊亂主要原因是代謝過(guò)程中的酶的缺乏或活性降低、氨基酸代謝有關(guān)的器官病變致繼發(fā)性氨基酸紊亂在氨基酸代謝起點(diǎn)產(chǎn)生的造成氨基酸血癥1、原發(fā)性2、繼發(fā)性第三節(jié)、體液氨基酸代謝及紊亂氨基酸代謝概況第四節(jié)、嘌呤核苷酸代謝及紊亂核苷酸是核酸的基本組成單位。嘌呤核苷酸核苷酸嘧啶核苷酸第四節(jié)、嘌呤核苷酸代謝及紊亂核苷酸是核酸的基本組成單位。痛風(fēng)與高尿酸血癥

（Goutandhyperuricemia)概念

由于遺傳性和（或）獲得性的尿酸排泄減少和（或）嘌呤代謝障礙，導(dǎo)致高尿酸血癥及尿酸鹽結(jié)晶形成和沉積，從而引起特征性急性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石、間質(zhì)性腎炎，嚴(yán)重者呈關(guān)節(jié)畸形及功能障礙；常伴尿酸性尿路結(jié)石。病因原發(fā)性：嘌呤代謝紊亂（酶缺陷），尿酸排泄障礙繼發(fā)性：高嘌呤飲食，腎臟疾病，血液病，藥物等

痛風(fēng)與高尿酸血癥

（Goutandhyperuricem痛風(fēng)的發(fā)生機(jī)理---尿酸鹽結(jié)晶的沉積

血清中尿酸>溶解度尿酸鈉結(jié)晶析出

沉積結(jié)締組織、軟骨、關(guān)節(jié)腔

WBC吞噬（溶酶體膜破壞）酶釋放

損傷WBC和周?chē)M織炎癥反應(yīng)（可表現(xiàn)有急性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石和間質(zhì)性腎炎等）

痛風(fēng)的發(fā)生機(jī)理---尿酸鹽結(jié)晶的沉積病例分析【病史】患者女性，25歲，因面色蒼白、頭暈、乏力1年余，加重伴心慌1個(gè)月來(lái)診。1年前無(wú)明顯誘因頭暈、乏力，家人發(fā)現(xiàn)面色不如從前紅潤(rùn)，但能照常上班，近1個(gè)月來(lái)加重伴活動(dòng)后心慌，曾到醫(yī)院檢查血紅蛋白低，給硫酸亞鐵口服，因胃難受僅用過(guò)1天，病后進(jìn)食正常，不挑食，二便正常，無(wú)便血、黑便、尿色異常、鼻衄和齒齦出血。睡眠好，體重?zé)o明顯變化。既往體健，無(wú)胃病史，無(wú)藥物過(guò)敏史。結(jié)婚半年，月經(jīng)初潮14歲，7天/27天，末次月經(jīng)半月前，近2年月經(jīng)量多，半年來(lái)更明顯。

【查體】T36℃，P104次/分，R18次/分，Bp120/70mmHg，一般狀態(tài)好，貧血貌，皮膚粘膜無(wú)出血點(diǎn)，淺表淋巴結(jié)不大，鞏膜不黃，口唇蒼白，舌乳頭正常，心肺無(wú)異常，肝脾不大?！緦?shí)驗(yàn)室檢查】Hb60g/L,RBC3.0×1012/L,MCV70fl,MCH25pg,MCHC30%,WBC6.5×109/L,分類(lèi)：中性分葉70%，淋巴27%，單核3%，plt260×109/L，網(wǎng)織紅細(xì)胞1.5%，

尿蛋白(-)，鏡檢(-)，大便潛血(-)，血清鐵50mg/dl。病例分析【病史】患者女性，25歲，因面色蒼白、頭暈、乏力1年問(wèn)題：一、診斷及診斷依據(jù)

二、鑒別診斷三、進(jìn)一步檢查四、治療原則問(wèn)題：一、診斷及診斷依據(jù)

(一)診斷：1.缺鐵性貧血月經(jīng)過(guò)多所致2.月經(jīng)過(guò)多原因待查

(二)診斷依據(jù)：1.月經(jīng)過(guò)多2.化驗(yàn)：小細(xì)胞低色素性貧血3.血清鐵低

二、鑒別診斷鐵幼粒細(xì)胞貧血三、進(jìn)一步檢查1.骨髓檢查+鐵染色2.血清鐵蛋白、總鐵結(jié)合力3.婦科檢查：包括B超、必要時(shí)診刮四、治療原則1.去除病因：治療婦科病2.補(bǔ)充鐵劑

一、診斷及診斷依據(jù)ThankYouThankYou蛋白質(zhì)與非含氮化合物檢驗(yàn)

蛋白質(zhì)與非含氮化合物檢驗(yàn)教學(xué)要求掌握：血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)；個(gè)別血漿蛋白質(zhì)（前白蛋白、白蛋白）的來(lái)源、生理功能和臨床檢測(cè)意義；血清總蛋白和白蛋白的測(cè)定方法、原理、評(píng)價(jià)和臨床檢測(cè)意義。熟悉：急性時(shí)相反應(yīng)蛋白的概念和種類(lèi)；血清蛋白電泳組分的臨床分析了解：其他蛋白質(zhì)的來(lái)源和生理功能教學(xué)要求掌握：血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)；個(gè)別血漿蛋白質(zhì)（蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是生命的標(biāo)志。許多疾病情況下，均有蛋白質(zhì)代謝紊亂，可反映到血漿蛋白中。血漿蛋白質(zhì)是血漿固體成分中含量最多、組成極為復(fù)雜、功能廣泛的一類(lèi)化合物。500多種，其中200多種已被分離出接近純品。血漿蛋白質(zhì)的研究在以下幾個(gè)領(lǐng)域進(jìn)展迅速：1.各種血漿蛋白質(zhì)的合成、降解、轉(zhuǎn)換更新和代謝調(diào)節(jié)2.各種血漿蛋白質(zhì)生理功能的進(jìn)一步研究。3.血漿蛋白質(zhì)的遺傳變異，通過(guò)它了解人群與家族遺傳特征。4.以新技術(shù)對(duì)血漿蛋白質(zhì)進(jìn)行微量和特異檢測(cè)分析。5.在進(jìn)化與個(gè)體發(fā)育的生化研究中，發(fā)現(xiàn)不少正常胎兒期蛋白可以在惡性腫瘤病人重新出現(xiàn)。6.血漿蛋白質(zhì)在實(shí)際工作中廣泛用于組織與細(xì)胞培養(yǎng)。7.在動(dòng)脈粥樣硬化及腫瘤等發(fā)病學(xué)研究中對(duì)血漿蛋白質(zhì)有廣泛涉及。第一節(jié)概述蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是生命的標(biāo)志。血漿蛋白質(zhì)的研究在以下蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件一血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)（一）組成

（二）功能可概括為：1.營(yíng)養(yǎng)作用2.維持血漿膠體滲透壓3.維持血漿正常pH值4.運(yùn)輸作用5.免疫與防御功能6.催化作用7.代謝調(diào)控8.凝血、抗凝血及纖溶作用等。一血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類(lèi)（三）分類(lèi)鹽析法：白蛋白和球蛋白電泳：白蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白（臨床最常用）正常參考值：白蛋白：57-68%α1球蛋白：1.0-5.7%α2球蛋白：4.9-11.2%β球蛋白：7-13%γ球蛋白：9.8-18.2%（三）分類(lèi)蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件α1球蛋白：ＡＡＴＡＡＧＡＦＰＨＤＬα2球蛋白：α2ＭＧＨpＣＥＲβ球蛋白：ＴＲＦＬＤＬ＆ＶＬＤＬＣ3，Ｃ４β2-mFgγ球蛋白：Ig(IgM,IgA,IgG)CRPα1球蛋白：α2球蛋白：β球蛋白：γ球蛋白：功能分類(lèi):功能分類(lèi):二、個(gè)別血漿蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)、功能與臨床意義(一)前白蛋白(prealbuminPA)來(lái)源：肝細(xì)胞合成。理化性質(zhì)：MW5.4萬(wàn)，因pH8.6時(shí)電泳位于白蛋白之前而得名，半壽期2天。生理功能：結(jié)合甲狀腺激素。臨床意義：蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良和肝功不全的指標(biāo)。營(yíng)養(yǎng)不良：200-400mg/L為正常；<150mg/L為缺乏；<50mg/L為嚴(yán)重缺乏。肝功不全：其濃度降低早于其他血清蛋白質(zhì)常用測(cè)定方法：免疫化學(xué)法二、個(gè)別血漿蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)、功能與臨床意義（二）視黃醇結(jié)合蛋白（retinolbindingproteinRBP）視黃醇結(jié)合蛋白是血液中維生素的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由肝臟合成、廣泛分布于血液、腦脊液、尿液及其他體液中。測(cè)定視黃醇結(jié)合蛋白能早期發(fā)現(xiàn)腎小管的功能損害，并能靈敏反映腎近曲小管的損害程度，還可作為肝功能早期損害和監(jiān)護(hù)治療的指標(biāo)。

（二）視黃醇結(jié)合蛋白（retinolbindingpro(三)白蛋白(albuminAlb)來(lái)源：肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞。理化性質(zhì)：血漿含量最多的蛋白，占血漿總蛋白的57－68％，半壽期15-19d，pH7.4環(huán)境中帶負(fù)電荷。功能：1.營(yíng)養(yǎng)2.中許多激素和藥物的主要載體，運(yùn)輸作用，可與某些金屬離子和化合物結(jié)合，如Cu2+、Ca2+、BIL，將其運(yùn)輸?shù)礁髯缘陌屑?xì)胞。3.維持血漿膠體滲透壓。4.具有相當(dāng)?shù)木彌_酸堿的功能。5.屬于APR－。(三)白蛋白(albuminAlb)臨床意義：1.個(gè)體營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)。>35g/L為正常；<34g/L為缺乏；<21g/L為嚴(yán)重缺乏。2.監(jiān)測(cè)脫水的一項(xiàng)指標(biāo)。3.低白蛋白血癥為臨床常見(jiàn)。4.白蛋白遺傳性變異。

臨床意義：(四)α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsinα1AT)理化性質(zhì)：MW5.5萬(wàn)，是α1區(qū)帶中主要成分，含糖10-12%。功能：具有蛋白酶抑制作用，占血清中抑制蛋白酶活力的90%左右，主要是對(duì)抗由多形核白細(xì)胞吞噬作用時(shí)釋放的溶酶體蛋白水解酶，其作用具明顯pH依賴性，中性/弱堿性環(huán)境中活力大，pH4.5時(shí)活性基本喪失，屬于APR。(四)α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsinα1A臨床意義：低血漿AAT見(jiàn)于胎兒呼吸窘迫綜合征；M型AAT缺陷時(shí)，蛋白水解酶的過(guò)度作用損傷組織彈性纖維，可導(dǎo)致肺氣腫，肝硬化等。

測(cè)定方法：目前主要采用免疫化學(xué)法。蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件(五)α1-酸性糖蛋白(α1--acidglycoprteinAAG)理化性質(zhì)：MW近4萬(wàn)，含糖45%。來(lái)源：肝及某些腫瘤組織；膿毒癥時(shí)粒/單核細(xì)胞。功能：APR，急性炎癥時(shí)顯著升高，與免疫防御有關(guān)。臨床意義：作為急性時(shí)相反應(yīng)指標(biāo)，炎癥、風(fēng)濕病、惡性腫瘤、心肌梗死等上升；是活動(dòng)性潰瘍性結(jié)腸炎最可靠的指標(biāo)之一。糖皮質(zhì)激素增加，可引起AAG的升高。營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝損傷、腎病綜合癥以及胃腸道疾病致蛋白嚴(yán)重丟失等情況下降低。雌激素使AAG降低測(cè)定方法：使用AAG抗體，進(jìn)行免疫散射法或免疫比濁法檢測(cè)(五)α1-酸性糖蛋白(α1--acidglycoprt(六)結(jié)合珠蛋白（haptoglotinHp）理化性質(zhì)：電泳中屬α2-區(qū)帶球蛋白，分子為α2β2兩對(duì)肽鏈四聚體。生理功能：1.與紅細(xì)胞中釋出的自由形式存在的血紅蛋白不可逆結(jié)合，Hp-Hb轉(zhuǎn)運(yùn)至肝降解，重新利用氨基酸和鐵，可防止Hb從腎丟失，為機(jī)體有效保留鐵。2.屬APR。臨床意義：監(jiān)測(cè)急性時(shí)相反應(yīng)和溶血是否處于進(jìn)行狀態(tài)，溶血時(shí)因血紅蛋白大量釋出，Hp下降。(六)結(jié)合珠蛋白（haptoglotinHp）測(cè)定方法

①測(cè)定Hp-Hb復(fù)合物中過(guò)氧化物酶活性。②在血漿中加入過(guò)量Hb，生成Hp-Hb復(fù)合物，凝膠層折法收復(fù)合物分離，測(cè)定結(jié)合的Hb③電泳法。④免疫化學(xué)法。測(cè)定方法(七)α2-巨球蛋白(α2-macroglobinα2MG)來(lái)源：肝細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)合成。理化性質(zhì)：MW62.5-80萬(wàn),含糖8%，血漿蛋白中分子量最大,由4個(gè)亞基單位組成。功能：可與多種分子與離子結(jié)合，與許多蛋白水解酶結(jié)合而影響酶活性，是血漿中主要的蛋白酶抑制劑。臨床意義：在低白蛋白血癥、妊娠期及口服避孕藥等情況下可見(jiàn)升高。測(cè)定方法：免疫化學(xué)法(七)α2-巨球蛋白(α2-macroglobinα2(八)銅藍(lán)蛋白(ceruloplasminCp/CER)理化性質(zhì)：主要由肝細(xì)胞合成，分子量12-16萬(wàn)，含銅而呈藍(lán)色，屬α2球蛋白。功能：1具氧化酶活性，催化多酸及多胺類(lèi)底物氧化。2銅代謝庫(kù)，血液中Cp可視為銅的無(wú)毒代謝庫(kù)。3抗氧化劑作用，減少組織中脂質(zhì)過(guò)氧化物及自由基的生成。4APR。(八)銅藍(lán)蛋白(ceruloplasminCp/CER臨床意義：在感染、創(chuàng)傷、腫瘤時(shí)升高；Wilson?。ǜ味?fàn)詈俗冃?，主要因體內(nèi)銅代謝障礙所致）時(shí)血漿Cp明顯下降；嚴(yán)重肝、腎疾病及妊娠期時(shí)下降。測(cè)定方法：免疫化學(xué)法或酶活性測(cè)定臨床意義：(九)轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrinTRF)來(lái)源：肝細(xì)胞及MPS合成。理化性質(zhì)：Mw7.7萬(wàn)，單鏈糖蛋白，半壽期7天。功能：血漿中主要含鐵蛋白，負(fù)責(zé)以TRF-Fe３＋形式運(yùn)載消化道吸收及紅細(xì)胞降解的鐵至骨髓再利用合成血紅蛋白。臨床意義：1.用于貧血診斷和對(duì)治療的監(jiān)測(cè)。IDA時(shí)TRF升高，但鐵飽和度下降；鐵利用障礙性貧血時(shí)，TRF正常下降，但鐵飽和度升高。2.急性時(shí)相反應(yīng)時(shí)下降。3.妊娠或服用雌激素時(shí)升高。測(cè)定方法：放免法、散射比濁法(九)轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrinTRF)(十)β2-微球蛋白(β2-microglobwlinB-MG)來(lái)源：存在于所有有核細(xì)胞表面，尤其淋巴/腫瘤細(xì)胞，并釋放入血。理化性質(zhì)：Mw11800，半壽期107min，人類(lèi)白細(xì)胞抗原的輕鏈部分，分子內(nèi)含一對(duì)二硫鏈。因其分子量小，可自由透過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜，但在腎小管近曲約99％被重吸收。臨床意義：在腎功衰竭、炎癥及腫瘤時(shí)血漿濃度上升，主要用于監(jiān)測(cè)腎小管功能，也是一種惡性腫瘤標(biāo)志物。測(cè)定方法：常用放免法，ELISA法(十)β2-微球蛋白(β2-microglobwlin(十一)C-反應(yīng)蛋白(C-reactiveproteinCRP)來(lái)源：肝細(xì)胞。理化性質(zhì)MW11.5-14萬(wàn)，5個(gè)多肽鏈亞單位非共價(jià)結(jié)合為盤(pán)形多聚體，電泳位于慢г帶，有時(shí)可延伸至β區(qū)帶。功能：可以和肺炎鏈球菌Ｃ-多糖結(jié)合，結(jié)合多種細(xì)菌，真菌等體內(nèi)多糖物質(zhì)及卵磷脂、核酸等，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，是第一個(gè)被認(rèn)定的APR。臨床意義：作為急性時(shí)相反應(yīng)的一個(gè)極靈敏指標(biāo)。(十一)C-反應(yīng)蛋白(C-reactiveprotei（十二）降鈣素原（procalcitonin，PCT）

PCT甲狀腺C細(xì)胞分泌的降鈣素的前體，當(dāng)嚴(yán)重細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)感染以及膿毒癥和多臟器功能衰竭時(shí)它在血漿中的水平升高。自身免疫、過(guò)敏和病毒感染時(shí)PCT不會(huì)升高。局部有限的細(xì)菌感染、輕微的感染和慢性炎癥不會(huì)導(dǎo)致其升高。

（十二）降鈣素原（procalcitonin，PCT）小結(jié)1、除免疫球蛋白外，主要由肝細(xì)胞合成2、除PA、ALB、C-RP為多為糖蛋白3、含糖量最高的是α1–AG，約45%4、半壽期較短：PA12h5、等電點(diǎn)小于7.36、分子量較大：α2-MG715KDIgM900KD小結(jié)1、除免疫球蛋白外，主要由肝細(xì)胞合成急性時(shí)相反應(yīng):在急性炎癥性疾病如手術(shù)、創(chuàng)傷、心肌梗死、感染、腫瘤等，包括AAT、AAG、Hp、Cp、C4、C3、纖維蛋白原、C-反應(yīng)蛋白等等，在血漿中的濃度顯著上升。PA、Alb及TRF則出現(xiàn)相應(yīng)的低下。這一現(xiàn)象可稱為。急性時(shí)相反應(yīng)蛋白:以上這類(lèi)蛋白質(zhì)統(tǒng)稱為急性時(shí)相反應(yīng):在急性炎癥性疾病如手術(shù)、創(chuàng)傷、心肌梗死、感染、三、血漿蛋白電泳組分的臨床分析圖形分析：含量分析：直接法：電泳染色后，直接觀察圖形的變化，大概判斷各區(qū)帶的增減。如需定量，可進(jìn)一步脫色、比色。光密度掃描法：可直接觀察各區(qū)帶的掃描圖形，且可以以數(shù)值表示各組分的含量。三、血漿蛋白電泳組分的臨床分析圖形分析：異常電泳圖譜的臨床意義異常血白蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征圖譜類(lèi)型TPAlbα1α2βγ腎病型↓↓↓↓↑↑↑不定肝硬化型↑N↓↓↓N↓N↓β-γ融合急性炎癥NN↓↑↑N慢性炎癥↓↑↑↑蛋白質(zhì)缺乏型個(gè)別區(qū)帶出現(xiàn)特征性缺乏

異常電泳圖譜的臨床意義異常血白蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型肝硬化主要特征：白蛋白在所有病例中均有不同程度的減低，α1、α2和β球蛋白正?；蚪档?，γ球蛋白常明顯增高，γ區(qū)帶的寬度也明顯增加，可見(jiàn)β-γ橋，為本病的特征。β-γ橋的出現(xiàn)與血清免疫球蛋白,特別是IgG、IgA、IgM同時(shí)增加有關(guān),其中又以IgA影響較大,IgAIgM泳動(dòng)在β2與γ之間時(shí),使β與γ區(qū)融合而形成β-γ橋。肝硬化主要特征：白蛋白在所有病例中均有不同程度的減低，α1、第二節(jié)體液蛋白質(zhì)檢測(cè)

第二節(jié)體液蛋白質(zhì)檢測(cè)假定：所有血漿蛋白質(zhì)是單純的多肽鏈所有蛋白質(zhì)與化學(xué)試劑的反應(yīng)性一致蛋白質(zhì)的測(cè)定一般基于以下四種蛋白質(zhì)的性質(zhì)：重復(fù)的肽鏈結(jié)構(gòu)酪氨酸和色氨酸殘基對(duì)酚試劑紫外光吸收與色素的結(jié)合能力沉淀后借助濁度測(cè)定假定：所有血漿蛋白質(zhì)是單純的多肽鏈一血清總蛋白質(zhì)測(cè)定1.凱氏定氮法—參考標(biāo)準(zhǔn)方法結(jié)果較準(zhǔn)確，是蛋白質(zhì)測(cè)定的參考方法，但操作復(fù)雜，影響因素較多，不適用于日常工作，多用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白的標(biāo)定及校正其它的常規(guī)方法。一血清總蛋白質(zhì)測(cè)定1.凱氏定氮法－參考標(biāo)準(zhǔn)方法(0.05mgN0.3gpro)消化用濃硫酸將蛋白質(zhì)消化為硫酸銨；（耗時(shí)）

蒸餾用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發(fā)；

吸收用酸性溶液（硼酸）吸收氣態(tài)氨（使[H+]

）滴定用已標(biāo)定的無(wú)機(jī)酸滴（使[H+]恢復(fù)），計(jì)算總氮量定蛋白（總氮量-非蛋白氮）×6.25=蛋白含量納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應(yīng)生成淡黃棕色膠態(tài)化合物，其色度與氨氮含量成正比。

原理：1.凱氏定氮法－參考標(biāo)準(zhǔn)方法(0.05mgN0.3g三聚氰胺是怎么加到牛奶中的許多人喝牛奶是為了補(bǔ)鈣，不過(guò)你如果留心一下國(guó)內(nèi)鮮牛奶包裝上的標(biāo)注，一般沒(méi)有列出鈣的含量，標(biāo)明的營(yíng)養(yǎng)成分含量只有兩種：脂肪和蛋白質(zhì)。鮮牛奶有全脂、低脂、脫脂之分，其脂肪含量各不相同，而且在脂肪被視為健康殺手的今天，一般人不會(huì)在乎脂肪含量是否達(dá)標(biāo)。蛋白質(zhì)才是牛奶中的主要營(yíng)養(yǎng)成分，鮮牛奶包裝上都會(huì)注著蛋白質(zhì)含量為100毫升≥2.9克,以表明符合鮮牛奶的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（100毫升≥2.95克）。三聚氰胺是怎么加到牛奶中的許多人喝牛奶是為了補(bǔ)鈣，不生鮮牛奶的蛋白質(zhì)含量一般在3%以上，所以一般都能達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，除非往原奶中兌水。食品工業(yè)上普遍采用的、被定為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的是凱氏定氮法。這是19世紀(jì)后期丹麥人約翰·凱達(dá)爾發(fā)明的方法。三聚氰胺含氮量高達(dá)66.6%，白色無(wú)味，是一種重要的化工原料，廣泛用于生產(chǎn)合成樹(shù)脂、塑料、涂料等。在生產(chǎn)三聚氰胺過(guò)程中，會(huì)出現(xiàn)廢渣，廢渣中還含有70%的三聚氰胺。造假者用來(lái)冒充蛋白質(zhì)的就是三聚氰胺渣。在飼料、奶制品中添加“蛋白精”冒充蛋白質(zhì)。生鮮牛奶的蛋白質(zhì)含量一般在3%以上，所以一般都能達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺是怎么加到牛奶中的呢？有兩種可能途徑。一種是奶站加到原奶中。因?yàn)槿矍璋肺⑷苡谒?，常溫下溶解度?．1克／升。也就是說(shuō)，100毫升水可以溶解0．31克三聚氰胺，含氮0．2克，相當(dāng)于1．27克蛋白質(zhì)，由此可以算出，要達(dá)到100毫升≥2.95克蛋白質(zhì)的要求，100毫升牛奶最多只能兌75毫升水（并加入0．54克三聚氰胺）。另一種途徑是在奶粉制造過(guò)程中加入三聚氰胺，這就不受溶解度限制了，想加多少都可以。三聚氰胺是怎么加到牛奶中的呢？有兩種可能途徑。一種是奶站加到2.雙縮脲比色法—血清總蛋白測(cè)定推薦方法蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性條件下與Cu2+絡(luò)合成紫紅色化合物，產(chǎn)生的顏色在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)含量成正比。此反應(yīng)和二分子尿素縮合后的產(chǎn)物雙縮脲（

H2N-CO-NH-CO-NH2）與堿性銅溶液作用形成紫紅色化合物的反應(yīng)相似，故稱為雙縮脲反應(yīng)。2.雙縮脲比色法—血清總蛋白測(cè)定推薦方法原理：蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性溶液中能與Cu2+作用而產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)。條件：至少含兩個(gè)肽鍵（-CONH-）基團(tuán)才能和Cu2+形成絡(luò)合物,氨基酸及二肽無(wú)反應(yīng),三肽以上才能反應(yīng)。雙縮脲生成

加熱＋NH322H－180022222N端C端原理：蛋白質(zhì)中的肽鍵（-CONH-）在堿性溶液中能與氨基酸

R-CH-COOHNH2甘氨酰甘氨酸（二肽）

NH2-CH2-C-NH-CH2-C=OOOH因至少含2個(gè)-CONH-基團(tuán)才能與Cu2+絡(luò)合，所以氨基酸和二肽無(wú)此反應(yīng)。體液中小分子肽含量極低，故血漿中除蛋白質(zhì)外幾乎不存在可與雙縮脲試劑顯色的物質(zhì)，且各種蛋白質(zhì)顯色程度基本相同。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，但靈敏度較其它方法稍差，是目前臨床上最常規(guī)的方法。氨基酸因至少含2個(gè)-CONH-基團(tuán)才能與Cu2+絡(luò)合，所以氨3.酚試劑法原理：蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸殘基和色氨酸殘基能夠和酚試劑中的磷鎢酸-磷鉬酸反應(yīng)生成藍(lán)色化合物鎢藍(lán)和鉬藍(lán)，藍(lán)色深淺與蛋白質(zhì)濃度呈正比。

Lowry改良法：在酚試劑中加入Cu2+（75%呈色），提高了呈色的靈敏度，為雙縮脲法的100倍左右。3.酚試劑法原理：蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸殘基和色氨酸殘?jiān)u價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，改良法靈敏度高（10μg-60μg），適合測(cè)定蛋白含量少的標(biāo)本。缺點(diǎn)：由于各種蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸的比例不同，如白蛋白含色氨酸為0.2％，而在一些球蛋白中色氨酸含量高達(dá)2％-3％，因此使用本法測(cè)定純粹的、單一的蛋白質(zhì)較合適。此法靈敏度較高，為10-60ug／ml，因而適用于測(cè)定蛋白質(zhì)含量較少的標(biāo)本(如腦脊液)，但試劑反應(yīng)易受還原性化合物糖類(lèi)、酚類(lèi)及多種藥物如水楊酸、氯丙嗪和某些磺胺藥的干擾。評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，改良法靈敏度高（10μg-60μ4.紫外分光光度法

蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸使蛋白質(zhì)溶液在280nm處有一吸收峰。可用于測(cè)定蛋白質(zhì)。

原理：4.紫外分光光度法蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸和色氨酸評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：敏感而簡(jiǎn)便，可保留蛋白生物活性，常用與較純的酶和免疫球蛋白。需紫外分光光度計(jì)及石英比色皿。缺點(diǎn)：各種蛋白質(zhì)中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm測(cè)定易受游離色aa和酪aa以及尿酸和膽紅素的干擾；導(dǎo)致準(zhǔn)確性和特異性受影響。評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：敏感而簡(jiǎn)便，可保留蛋白生物活性，常用與較純5.染料結(jié)合法在酸性環(huán)境下，帶正電的蛋白質(zhì)（-NH3+)與染料的陰離子產(chǎn)生顏色反應(yīng)，使染料的吸收峰改變，可用分光光度法比色測(cè)定。原理：常用染料：氨基黑，考馬斯亮藍(lán)等常用方法：鄰苯三酚紅鉬法

1976年，Bradford根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理建立了考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)含量。此法簡(jiǎn)單快捷，且不受游離氨基酸和酚類(lèi)物質(zhì)的影響，適合于大量樣品的分析。

考馬斯亮藍(lán)G-250(CBG)在酸性溶液中呈茶棕色，在465nm有最大吸收峰。當(dāng)與蛋白質(zhì)結(jié)合后，其轉(zhuǎn)變成深藍(lán)色，吸收峰移至595nm。在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)濃度與吸光度成正比，可做定量分析。5.染料結(jié)合法在酸性環(huán)境下，帶正電的蛋白質(zhì)（-評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，靈敏度高，且干擾因素少。缺點(diǎn)：特異性不高；不同蛋白質(zhì)和染料的結(jié)合力不一致，標(biāo)準(zhǔn)物不易確定。

鄰苯三酚紅鉬法檢測(cè)原理：在酸性條件下，鄰苯三酚紅和鉬酸絡(luò)合形成紅色復(fù)合物，該復(fù)合物與蛋白質(zhì)形成復(fù)合體，其吸收峰移至604nm，通過(guò)比色法求出樣本中蛋白質(zhì)的含量。用于人或動(dòng)物腦脊液樣本中的總蛋白含量測(cè)定。評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，靈敏度高，且干擾因素少蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件6.比濁法原理：

評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便不需特殊儀器。缺點(diǎn)：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應(yīng)溫度，蛋白絮狀沉淀，混勻的方式等）

某些酸類(lèi)（磺基水楊酸等）和血白蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生沉淀，懸浮液濁度大小與蛋白質(zhì)濃度成正比，可獲得蛋白含量。6.比濁法原理：評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便不需特殊儀器。透射比濁法：自動(dòng)化生化分析儀散射比濁法：散射比濁儀（特定蛋白分析儀）促聚劑：聚乙二醇（加速大的免疫復(fù)合物生成）免疫比濁法：評(píng)價(jià)：靈敏度高受血脂影響免疫比濁法：評(píng)價(jià)：參考范圍：成人65－85g/L臨床意義：總蛋白升高：總蛋白降低：主要由白蛋白下降引起①合成減少②消耗增加③丟失過(guò)多④分布異常

⑤血液稀釋⑥少數(shù)由免疫球蛋白含量的明顯下降引起

真性升高：多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等假性升高：機(jī)體明顯失水，總蛋白含量相對(duì)升高，

A/G幾乎不變參考范圍：成人65－85g/L臨床意義：總蛋白升高：總蛋白降二、血清白蛋白測(cè)定方法：1.染料結(jié)合法(推薦)

2.鹽析法3.電泳法4.免疫化學(xué)法二、血清白蛋白測(cè)定方法：1.染料結(jié)合法(推薦)2.鹽析1.染料結(jié)合法(推薦)原理:血清白蛋白具有與陰離子染料結(jié)合的特性,其他蛋白則無(wú)。在酸性條件下,染料可與白蛋白形成有顏色的復(fù)合物,顏色的深淺與白蛋白濃度成正比。而球蛋白很少結(jié)合外源性染料,可在不分離球蛋白的情況下直接測(cè)定白蛋白。1.染料結(jié)合法(推薦)原理:應(yīng)用及評(píng)價(jià):BCG法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性較好，既適合手工也適合自動(dòng)化分析。嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間來(lái)避免非特異性反應(yīng)。臨床上推薦使用。應(yīng)用及評(píng)價(jià):BCG法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性較好，既適合手工也適合自染料溴甲酚綠（BCG）溴甲酚紫（BCP）優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)易于和非人源性白蛋白結(jié)合與白蛋白結(jié)合特異性較差與非人源性白蛋白結(jié)合力弱與白蛋白結(jié)合特異性好在30秒內(nèi)測(cè)可提高特異性溴甲酚綠法的原理：在pH4.2的緩沖液中，在有非離子型表面活性劑存在時(shí)，可與帶負(fù)電荷的染料溴甲酚綠結(jié)合生成藍(lán)綠色復(fù)合物，在波長(zhǎng)630nm處有吸收峰，該復(fù)合物的吸光度（顏色深淺）與白蛋白濃度成正比例，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，可求得待測(cè)樣品中白蛋白含量。溴甲酚紫法的原理：在pH5.2的緩沖液中，在有非離子型表面活性劑存在時(shí)，可與帶負(fù)電荷的染料溴甲酚紫結(jié)合生成綠色復(fù)合物，在波長(zhǎng)603nm處有吸收峰，該復(fù)合物的吸光度（顏色深淺）與白蛋白濃度成正比，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，可求得待測(cè)樣品中白蛋白濃度。染料溴甲酚綠（BCG）溴甲酚紫（BCP）優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)易于蛋白質(zhì)代謝及紊亂課件原理:

鹽析是由于加入大量的中性鹽破壞了蛋白質(zhì)的水化膜、中和其所帶的電荷從而使蛋白質(zhì)分子聚集而沉淀析出。各種蛋白質(zhì)的親水性和帶電荷不同，故鹽析時(shí)所需鹽濃度與pH不同。GLB在生理pH下帶電荷及水化膜比ALB少，可被較低濃度中性鹽沉淀。2.鹽析法中性鹽：硫酸銨、硫酸鈉等原理:2.鹽析法中性鹽：硫酸銨、硫酸鈉等應(yīng)及評(píng)價(jià):操作繁瑣，不宜自動(dòng)化，基本不用應(yīng)及評(píng)價(jià):操作繁瑣，3.電泳法操作：醋纖膜電泳染色晾干透明光密度儀掃描洗脫比色染色分離測(cè)得蛋白組分百分比計(jì)算得出各種蛋白質(zhì)含量半定量定量3.電泳法操作：醋纖膜電泳染色晾干透明光密度儀掃描洗脫比色染評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：電泳特異性好，可了解血白蛋白質(zhì)全貌．缺點(diǎn)：電泳技術(shù)繁瑣，不易自動(dòng)化；白蛋白與染料親和力高會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏高評(píng)價(jià)及應(yīng)用：優(yōu)點(diǎn)：電泳特異性好，可了解血白蛋白質(zhì)全貌．缺點(diǎn)：4.免疫化學(xué)法原理及特點(diǎn):應(yīng)用：特異性高,但成本較高,費(fèi)時(shí),生化檢驗(yàn)用的不多.4.免疫化學(xué)法原理及特點(diǎn):應(yīng)用：特異性高,但成本較高,費(fèi)時(shí),參考范圍:成人40－55g/L.臨床意義：白蛋白升高：白蛋白降低：①合成不足：肝功能下降，營(yíng)養(yǎng)不良，吸收不良

②丟失過(guò)多：尿液丟失，胃腸道丟失，皮膚丟失

③分解代謝、消耗增加：創(chuàng)傷感染等

④分布異常：胸腹水

⑤血液稀釋⑥先天性ALB缺乏病真性升高：未見(jiàn)假性升高：機(jī)體明顯失水，或治療輸入過(guò)多白蛋白參考范圍:成人40－55g/L.臨床意義：白蛋白升高：白蛋白三、血清球蛋白測(cè)定方法：間接法:TP-ALB=GLB

參考范圍:成人20－30g/L.A/G：1.5－2.5三、血清球蛋白測(cè)定方法：