植物組織培養(yǎng)試題及答案總結(jié)

-.z"緒論"復(fù)習(xí)題及參考答案*1、根據(jù)培養(yǎng)的材料，植物組織培養(yǎng)分：愈傷組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)等類型。2、植物組織培養(yǎng)的開展分為三個(gè)階段：萌芽階段、奠基階段和快速開展和應(yīng)用階段。3、1902年，Haberlandt提出了植物細(xì)胞

"全能性〞學(xué)說(shuō)，1934年，White出版了"植物組織培養(yǎng)手冊(cè)"從而使植物組織培養(yǎng)為一門新興學(xué)科。*1、植物組織培養(yǎng)(planttissueculture)：是指通過(guò)無(wú)菌和人工控制的環(huán)境條件下，利用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，對(duì)離體的植物器官、組織、細(xì)胞及原生質(zhì)體進(jìn)展培養(yǎng)，使其再生細(xì)胞或完整植株的技術(shù)。由于培養(yǎng)材料已脫離了母體，又稱為植物離體培養(yǎng)〔Plantcultureinvitro〕。2、脫分化〔dedifferentiation〕：由高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程，稱為植物細(xì)胞的脫分化。3、再分化〔redifferentiation〕：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)展培養(yǎng)又可以重新分化成根或芽等器官，這一過(guò)程稱為植物細(xì)胞的再分化。*4、外植體(e*plant)：由活體〔invivo)植物體上切取下來(lái)的，用于組織培養(yǎng)的各種接種材料。包括各種器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等*5、愈傷組織(callus)：原指植物在受傷之后于傷口外表形成的一團(tuán)薄壁細(xì)胞，在組培中則指在離體培養(yǎng)過(guò)程中形成的具有分生能力的一團(tuán)不規(guī)則的薄壁細(xì)胞，多在植物體切面上產(chǎn)生。1、簡(jiǎn)述植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)？植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)是細(xì)胞全能性學(xué)說(shuō)，即植物體的每一個(gè)細(xì)胞都攜帶有一套完整的基因組，并具有發(fā)育成為完整植株的潛在能力。*2、植物組織培養(yǎng)有哪些特點(diǎn)？〔1〕培養(yǎng)條件可以人為控制〔2〕生長(zhǎng)周期短，繁殖率高：〔3〕管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制：*3、植物組織培養(yǎng)的分類？〔1〕根據(jù)培養(yǎng)對(duì)象不同：組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等；〔2〕根據(jù)培養(yǎng)物培養(yǎng)過(guò)程：初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)；〔3〕根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)：固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)。*4、植物組織培養(yǎng)主要應(yīng)用于哪些方面？〔1〕快速繁殖運(yùn)用組織培養(yǎng)的途徑，一個(gè)單株一年可以繁殖幾萬(wàn)到幾百萬(wàn)個(gè)植株；〔2〕種苗脫毒針對(duì)病毒對(duì)農(nóng)作物造成的嚴(yán)重危害，通過(guò)組織培養(yǎng)可以有效地培育出大量的無(wú)病毒種苗；〔3〕培育和創(chuàng)制新品種利用組織培養(yǎng)可以使難度很大的遠(yuǎn)緣雜交取得成功，從而育成一些罕見的新物種；〔4〕大量生產(chǎn)次生代物質(zhì)通過(guò)植物細(xì)胞培養(yǎng)獲得的生物堿、維生素、色素、抗生素以及抗腫瘤藥物不下50多個(gè)大類，其中已有30多種次生物質(zhì)的含量在人工培養(yǎng)時(shí)已到達(dá)或超過(guò)親本植物的水平。植物細(xì)胞次生物質(zhì)的研制與生產(chǎn)碩果累累，后來(lái)居上?！?〕植物種質(zhì)資源的離體保存植物組織培養(yǎng)結(jié)合超低溫保存技術(shù)，可以給植物種質(zhì)保存帶來(lái)一次大的飛躍。因?yàn)楸４嬉粋€(gè)細(xì)胞就相當(dāng)于保存一粒種子，但所占的空間僅為原來(lái)的幾萬(wàn)分之一，而且在-193度的液氮中可以長(zhǎng)時(shí)間保存，不像種子那樣需要年年更新或經(jīng)常更新?！?〕人工種子人工種子便于貯藏和運(yùn)輸，適合機(jī)械化播種；繁殖速度快，不受季節(jié)和環(huán)境限制，利于工廠化生產(chǎn)；體細(xì)胞胚由無(wú)性繁殖體系產(chǎn)生，可以固定雜種優(yōu)勢(shì)。第1章"實(shí)驗(yàn)室及根本操作"復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室必要的設(shè)備有超凈工作臺(tái)、高壓滅菌器、空調(diào)機(jī)、天平、顯微鏡、蒸餾水發(fā)生器、酸度計(jì)等。*2、培養(yǎng)基成分主要包括①無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分、②有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分〕、③植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、④碳水化合物、⑤其它物質(zhì)。3、培養(yǎng)基最常用的碳源是蔗糖，使用濃度在1%-5%常用3%。4、糖在植物組織培養(yǎng)中是不可缺少的，它不但作為離體組織賴以生長(zhǎng)的碳源，而且還能維持培養(yǎng)基滲透壓。5、在固體培養(yǎng)時(shí)瓊脂是使用最方便、最好的凝固劑和支持物，一般用量為6-10g／L之間。6、馴化的目的：在于提高試管苗對(duì)外界環(huán)境條件的適應(yīng)性，提高其光合作用的能力，促使試強(qiáng)健，提高苗的移裁成活率。*7、生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素的上下決定著外植體的發(fā)育方向，其比值高：有利于根的形成和愈傷組織的形成；低：有利于芽的形成。8、培養(yǎng)基滅菌一般在108kPa的壓力下，鍋溫度達(dá)121℃，維持20-30min。9、選擇外植體時(shí)應(yīng)選擇①選擇優(yōu)良的種質(zhì)、②選強(qiáng)健的植株、③選最適的時(shí)期和④選取適宜的大小。10、誘導(dǎo)胚狀體比誘導(dǎo)芽的優(yōu)點(diǎn)：(1)數(shù)量多、(2)速度快、(3)構(gòu)造完整。11、試管苗的生態(tài)環(huán)境：高溫且恒溫、高濕、弱光、無(wú)菌。12、培養(yǎng)基中參加活性炭的目的：利用其吸附能力，減少一些有害物質(zhì)的影響。*13、篩選培養(yǎng)基的方法：?jiǎn)我蜃釉囼?yàn)法、多因子試驗(yàn)法、光譜實(shí)驗(yàn)法*14、植物培養(yǎng)技術(shù)：滅菌、接種、培養(yǎng)、馴化四個(gè)環(huán)節(jié)*15、試管苗的馴化注意：基質(zhì)、溫、光、水、肥、氣的綜合管理二、名詞解釋：1、MS培養(yǎng)基〔MSculturemedium〕：它是1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。是目前應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽離子濃度較高，有高含量的N、K，硝酸鹽量大，營(yíng)養(yǎng)豐富。*2、母液：是欲配制液的濃縮液。配成比所需濃度高10-100倍。母液配制時(shí)可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類等。好處:①保證各物質(zhì)成分的準(zhǔn)確性②配制時(shí)的快速移取③便于低溫保藏。3、褐變：是指外植體在培養(yǎng)中體的多酚氧化酶被激活，使細(xì)胞里的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類物質(zhì)，有時(shí)使整個(gè)培養(yǎng)基變褐，從而抑制其他酶的活性，影響材料的培養(yǎng)。4、玻璃化現(xiàn)象〔vitrificationphenomenon〕：在長(zhǎng)期的離體培養(yǎng)繁殖時(shí)，有些試管苗的嫩莖、葉片呈現(xiàn)半透明水漬狀，這種現(xiàn)象稱為玻璃化。5、消毒：指殺死、消除或充分抑制局部微生物，使之不再發(fā)生危害作用。6、滅菌：是指用物理或化學(xué)的方法，殺死物體外表和孔隙的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質(zhì)全部殺死。7、接種：在無(wú)菌條件下，用灼燒過(guò)的鑷子將外植體放到培養(yǎng)基上的操作過(guò)程。1、一般組織培養(yǎng)的操作工序：〔1〕、培養(yǎng)器皿的清洗；〔2〕、培養(yǎng)基的配制、分裝和高壓滅菌；〔3〕、無(wú)菌操作——材料的外表滅菌和接種；〔4〕、將培養(yǎng)物放到培養(yǎng)室培養(yǎng)；〔5〕、試管苗的馴化、移栽和初期管理。*2、論述植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)在組織培養(yǎng)中的作用？并列舉常見的種類(1)生長(zhǎng)素類：主要被用于誘導(dǎo)愈傷組織形成，促進(jìn)細(xì)胞脫分化；促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)；誘導(dǎo)根的分化，促進(jìn)生根。如：IAA〔吲哚乙酸〕；NAA(萘乙酸)；IBA(吲哚丁酸)；2,4—D(2,4—二氯苯氧乙酸)(2〕細(xì)胞分裂素類：①誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)。②促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。③抑制根的分化。抑制衰老，減少葉綠素分解，有保鮮效果。如：包括6—BA(6—芐基腺嘌呤)、Kt(沖動(dòng)素)、Zt(玉米素)等。*3、常用的培養(yǎng)基有哪些？說(shuō)明其特點(diǎn)(1〕MS培養(yǎng)基：1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。是目前應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基。特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽離子濃度較高white培養(yǎng)基：無(wú)機(jī)鹽濃度較低，適于生根培養(yǎng)。(3)N6培養(yǎng)基：KNO3和〔NH4〕2SO4含量高，不含鉬。廣泛應(yīng)用于禾谷類植物的花粉和花藥培養(yǎng)。(4〕B5培養(yǎng)基：主要特點(diǎn)是含有較低的銨鹽，較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素。適宜雙子葉植物特別是木本植物的培養(yǎng)*4、如何配制MS培養(yǎng)基？(1〕配制母液：一般母液配成比所需濃度高10-100倍的濃縮液，配制時(shí)可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類等。配制方法：①將母液按順序擺放②取適量的蒸餾水參加配制容器中③按需要量依次取母液及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)④參加蔗糖〔30g/L〕溶解⑤定容⑥調(diào)pH值⑦加瓊脂(6-10g/L)，完全融化后，分裝至培養(yǎng)瓶中，封口⑧高壓滅菌*5、如何對(duì)外植體進(jìn)展外表消毒？(1)將需要的材料用水洗干凈。(2)外表滅菌：用70%酒精浸30-60s左右。(3)滅菌劑處理：0.1%升汞10分鐘、或在2%次氯酸鈉液中浸泡20-25分鐘。(4)用無(wú)菌水沖洗3-5次左右6、接種后離體培養(yǎng)物對(duì)光、溫、濕等環(huán)境條件的要求？(1)光照：愈傷組織的誘導(dǎo)不需光照或弱光，器官分化需要光照，一般12－16h/d，光照度1000－5000l*。(2)溫度：一般25±2℃(3)濕度：培養(yǎng)室的濕度要求保持70％－80％的相對(duì)濕度。7、論述離體培養(yǎng)污染產(chǎn)生的原因及防治措施。污染：污染原因從病源分面主要有細(xì)菌和真菌和兩大類。原因：〔1〕外植體材料消毒不徹底〔2〕培養(yǎng)基滅菌不徹底〔3〕操作環(huán)境不干凈〔4〕操作人員操作不規(guī)、不熟練。預(yù)防措施：(1)減少或防止材料帶菌(2)外植體滅菌要徹底(3)培養(yǎng)基滅菌要徹底(4)玻璃器皿和金屬器皿的滅菌要徹底(5)無(wú)菌室的消毒(6)操作人員一定要嚴(yán)格按照無(wú)菌操作的程序進(jìn)展接種。8、固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基相比有何特點(diǎn)？?jī)?yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便，通氣問(wèn)題易于解決，便于經(jīng)常觀察研究.缺點(diǎn):培養(yǎng)物與培養(yǎng)基的接觸(即吸收)面積小，各種養(yǎng)分在瓊脂中擴(kuò)散較慢，影響?zhàn)B分的充分利用，同時(shí)培養(yǎng)物排出的一些代廢物，聚集在吸收外表，對(duì)組織產(chǎn)生毒害作用。9、在培養(yǎng)基中參加活性炭有什么作用？〔1〕主要是利用其吸附作用，減少一些有害物質(zhì)的影響〔2〕活性炭使培養(yǎng)基變黑，有利于*些植物生根〔3〕對(duì)形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好的效應(yīng)*10、植物組織培養(yǎng)技術(shù)主要包括哪些環(huán)節(jié)？各環(huán)節(jié)的主要工作容？〔1〕培養(yǎng)基的配制及滅菌〔2〕外植體的選擇及滅菌〔3〕外植體的接種及培養(yǎng)〔4〕試管苗的馴化與移栽*11、組織培養(yǎng)中常用的滅菌方法？分為物理的和化學(xué)的兩類，〔1〕物理方法如干熱(烘燒和灼燒)、濕熱(常壓或高壓蒸煮)、射線處理(紫外線、超聲波、微波)、過(guò)濾和大量無(wú)菌水沖洗等措施；〔2〕化學(xué)方法是使用升汞、甲醛、過(guò)氧化氫、高錳酸鉀、來(lái)兒、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理。12、怎樣進(jìn)展培養(yǎng)基的高壓濕熱滅菌"方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到49kPa時(shí)，翻開放氣閥，放出空氣〔注意完全排除鍋空氣，使鍋全部是水蒸氣，滅菌才能徹底〕，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。當(dāng)壓力表上升到達(dá)108kPa時(shí)，鍋溫度達(dá)121℃〔在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的芽孢〕，維持20-30min。13、無(wú)菌操作時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？(1)在接種4h前用甲醛熏蒸接種室；(2)在接種前15-20min，翻開超凈工作臺(tái)的風(fēng)機(jī)以及臺(tái)上的紫外燈；(3)接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實(shí)驗(yàn)服，并換穿拖鞋等；(4)上工作臺(tái)后，用酒精棉球擦拭雙手，特別是指甲處。然后70%酒精噴霧降塵，并擦拭工作臺(tái)面；(5)接種工具蘸95%酒精，灼燒；(6)接種時(shí)將試管斜著，使試管口在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動(dòng)，灼燒數(shù)秒鐘。接完種后，將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒鐘。(7)接種時(shí)，接種員雙手不能離開工作臺(tái)，不能說(shuō)話、走動(dòng)和咳嗽等；(8)接種完畢后要清理干凈并用酒精擦工作臺(tái)。14、在植物組織培養(yǎng)中，通過(guò)哪些途徑可以得到完整的植株？(1)外植體→愈傷組織→根、芽→試管苗①同時(shí)長(zhǎng)芽和根②先長(zhǎng)芽，再長(zhǎng)根③先長(zhǎng)根，再長(zhǎng)芽(2)外植體→胚狀體→試管苗(3)外植體→根、芽→試管苗。15、與常規(guī)苗相比，試管苗具有哪些特點(diǎn)？(1)生長(zhǎng)細(xì)弱；(2)光合作用差(3)葉片氣孔數(shù)目少，活性差(4)根的吸收功能弱(5)對(duì)逆境的適應(yīng)和抵抗能力差16、如何提高試管苗移栽的成活率？〔1〕試管苗的生理狀況應(yīng)選擇壯苗，以提高移栽后的成活率〔2〕參加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)如生長(zhǎng)素〔3〕降低無(wú)機(jī)鹽的濃度〔4〕參加少量活性炭，尤其是用酸、堿和有機(jī)溶劑洗過(guò)的活性炭〔5〕環(huán)境因子適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件能提高移栽的成活率〔6〕移栽過(guò)程中讓試管苗從無(wú)菌向有菌逐漸過(guò)渡*17、接種程序：〔1〕植物材料外表的消毒〔2〕切割外植體〔3〕將外植體移入培養(yǎng)基第2章"根本原理"復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、絕大多數(shù)培養(yǎng)植物再生植株時(shí)都先經(jīng)過(guò)愈傷組織階段。*2、愈傷組織形成大致經(jīng)歷誘導(dǎo)期、分裂期和分化期三個(gè)時(shí)期。3、使用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)時(shí)要注意：種類和濃度生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值。*4、愈傷組織的形態(tài)發(fā)生方式主要有不定芽方式和胚狀體方式。5、組織培養(yǎng)細(xì)胞再分化包括四個(gè)水平：細(xì)胞水平的再分化、組織水平的再分化、器官水平的再分化〔器官發(fā)生〕和植株水平的分化二、名詞解釋：*1、愈傷組織培養(yǎng)(callusculture):是指將母體植株上的外植體，接種到無(wú)菌的培養(yǎng)基上，進(jìn)展愈傷組織誘導(dǎo)、生長(zhǎng)和發(fā)育的一門技術(shù)。*2、繼代培養(yǎng)(subculture)：愈傷組織在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間以后，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代產(chǎn)物的積累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)。這個(gè)過(guò)程叫做繼代培養(yǎng)3、體細(xì)胞胚〔somaticembryo〕又稱胚狀體〔embryoid〕：指在組織培養(yǎng)中，由一個(gè)非合子細(xì)胞(體細(xì)胞)，經(jīng)過(guò)胚胎發(fā)生和胚胎發(fā)育過(guò)程〔經(jīng)過(guò)原胚、球形胚、心形胚、魚雷胚和子葉胚5個(gè)時(shí)期〕，形成的具有雙極性的胚狀構(gòu)造。4、體細(xì)胞胚胎發(fā)生：植物組織培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生胚狀體的過(guò)程，稱為體細(xì)胞胚胎發(fā)生。5、細(xì)胞全能性〔celltotipotency〕：每一個(gè)植物細(xì)胞具有該植物的全部遺傳信息，在適當(dāng)條件下可表達(dá)出該細(xì)胞的所有遺傳信息，分化出植物有機(jī)體所有不同類型細(xì)胞，形成不同類型的器官甚至胚狀體，直至形成完整再生植株*6、形態(tài)建成：外植體細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下發(fā)生脫分化、再分化，產(chǎn)生芽和根，或者形成胚狀體，發(fā)育成苗或完整植株。三、問(wèn)答題*1、愈傷組織細(xì)胞的分化一般分幾個(gè)時(shí)期？各有何特點(diǎn)？〔1〕誘導(dǎo)期〔起動(dòng)期〕：是細(xì)胞準(zhǔn)備分裂的時(shí)期。細(xì)胞大小幾不變，部發(fā)生生理生化變化，迅速合成蛋白質(zhì)和核酸?！?〕分裂期：外層細(xì)胞分裂，中間細(xì)胞常不分裂，形成小芯。細(xì)胞分裂快，構(gòu)造疏松，缺少構(gòu)造，淺而透明。在原培養(yǎng)基上，細(xì)胞必分化，及時(shí)轉(zhuǎn)移，其可無(wú)限制地進(jìn)展細(xì)胞分裂，維持不分化狀態(tài)。〔3〕分化期：細(xì)胞在形態(tài)和生理功能上的分化，出現(xiàn)形態(tài)和功能各異的細(xì)胞。2、優(yōu)良的愈傷組織必須具備哪4個(gè)特性？〔1〕高度的胚性或再分化能力，以便從這些愈傷組織得到再生植物〔2〕容易散碎，以便用這些愈傷組織建立優(yōu)良的懸浮系，并且在需要時(shí)能從中別離出全能性的原生質(zhì)體〔3〕旺盛的自我增殖能力，以便用這些愈傷組織建立大規(guī)模的愈傷組織無(wú)性系?！?〕經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期繼代保存而不喪失胚性，便有可能對(duì)它們進(jìn)展各種遺傳操作。3、愈傷組織的形態(tài)發(fā)生有哪些情況？〔1〕愈傷組織僅有根或芽器官的分別形成，即無(wú)根的芽或無(wú)芽的根；〔2〕先形成芽，再在芽伸長(zhǎng)后，在其莖的基部長(zhǎng)出根而形成小植株，多數(shù)植物屬這種情況；〔3〕先產(chǎn)生根，再?gòu)母植炕鲅慷纬尚≈仓?。這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成，尤其對(duì)于單子葉植物；〔4〕先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結(jié)合起來(lái)形成一株小植株。少見。單子葉植物：與雙子葉植物誘導(dǎo)發(fā)生過(guò)程類似，只是在形態(tài)上無(wú)魚雷形胚等階段，成熟體胚上有盾片、胚芽鞘和胚根等構(gòu)造。4、簡(jiǎn)述細(xì)胞脫分化過(guò)程。細(xì)胞的脫分化過(guò)程可分為3個(gè)階段：第一階段為啟動(dòng)階段，表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)增生，并開場(chǎng)向細(xì)胞中央伸出細(xì)胞質(zhì)絲，液泡蛋白體出現(xiàn)；第二階段為演變階段，此時(shí)細(xì)胞核開場(chǎng)向中央移動(dòng)，質(zhì)體演變成原質(zhì)體；5、影響植物離體形態(tài)發(fā)生的因素有哪些？〔不是重點(diǎn)〕〔1〕植物種類和基因型〔2〕培養(yǎng)材料的生理狀態(tài)發(fā)育年齡：一般幼態(tài)比老態(tài)組織形態(tài)發(fā)生能力高；培養(yǎng)器官或組織類型：細(xì)胞分裂旺盛的器官較好；培養(yǎng)時(shí)間和細(xì)胞倍性：一般取處于旺盛生長(zhǎng)期的愈傷來(lái)誘導(dǎo)器官形成。〔3〕培養(yǎng)基a營(yíng)養(yǎng)成分：一般認(rèn)為，培養(yǎng)基中的銨態(tài)氮和K+有利于胚狀體形成，提高無(wú)機(jī)磷的含量可促進(jìn)器官發(fā)生;莖尖培養(yǎng)和芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基主要是MS及其修改的培養(yǎng)和B5培養(yǎng)基;碳水化合物種類及濃度對(duì)胚狀體發(fā)育有重要作用,缺糖或低糖無(wú)法形成胚狀體。b植物激素及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑

〔起主導(dǎo)作用，通過(guò)影響源激素的平衡起作用c培養(yǎng)基的性質(zhì)：愈傷組織誘導(dǎo)：在固體培養(yǎng)基上；細(xì)胞和胚狀體的誘導(dǎo)在液體培養(yǎng)基上〔4〕培養(yǎng)條件：光照；溫度；氣體；濕度等*6、分裂期愈傷組織的共同特征：細(xì)胞分裂快，構(gòu)造疏松，缺少有組織的構(gòu)造，維持其不分化的狀態(tài)，顏色淺而透明。*7、胚狀體發(fā)生途徑與器官發(fā)生途徑形成植株的區(qū)別:①胚狀體具有兩極性，即在發(fā)育的早期階段，從其方向相反的兩端分化出莖端和根端；而不定芽和不定根都為單向極性。②胚狀體的維管組織與外植體的維管組織無(wú)解剖構(gòu)造上的聯(lián)系。而不定芽或不定根往往總是與愈傷組織的維管組織相聯(lián)系。③胚狀體維管組織的分布是獨(dú)立的"Y〞字形。而不定芽的維管組織無(wú)此現(xiàn)象。*8、器官發(fā)生形成小苗的方式〔1〕愈傷組織僅有根或芽器官的分別形成，即無(wú)根的芽或無(wú)芽的根；〔2〕先長(zhǎng)芽，后長(zhǎng)根，多數(shù)情況；〔3〕先長(zhǎng)根，再?gòu)母幕块L(zhǎng)芽。這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成，尤其對(duì)于單子葉植物；〔4〕先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結(jié)合起來(lái)形成一株植株。第3章"器官和組織培養(yǎng)"復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、植物器官培養(yǎng)主要是指植物的根、莖、葉、花器和幼小果實(shí)的無(wú)菌培養(yǎng)。*2、莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)目的和取材大小分為莖尖分生組織培養(yǎng)和普通莖尖培養(yǎng)兩種類型。前者主要是對(duì)莖尖長(zhǎng)度不超過(guò)0.1mm，最小只有幾十微米的莖尖進(jìn)展培養(yǎng)，目的是獲得無(wú)病毒植株；后者是對(duì)幾毫米乃至幾十毫米長(zhǎng)的莖尖、芽尖及側(cè)芽的培養(yǎng)，目的是離體快繁。3、不定芽產(chǎn)生的途徑：一是從外植體上直接產(chǎn)生二是從由外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織上產(chǎn)生。4、離體葉培養(yǎng)是指包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉等葉組織的無(wú)菌培養(yǎng)。5、在離體葉培養(yǎng)中，6-BA和KT利于芽的形成；2,4-D利于愈傷組織的形成二、名詞解釋：*1、植物器官培養(yǎng)〔OrganCulture〕：是指對(duì)植物*一器官的全部或局部或器官原基進(jìn)展離體培養(yǎng)的技術(shù)。分為營(yíng)養(yǎng)器官〔根、莖、葉〕和繁殖器官〔果實(shí)、種子、花器官〕培養(yǎng)。2、花器官培養(yǎng)：是指對(duì)植物的整朵花或花的組成局部〔包括花托、花瓣、花絲、花藥、子房、胚珠〕進(jìn)展離體培養(yǎng)的技術(shù)。3、植物分生組織(meristemculture)培養(yǎng)：是指對(duì)植物的分生組織進(jìn)展離體培養(yǎng)的技術(shù)，包括植物根尖、莖尖等頂端分生組織和形成層組織的培養(yǎng)。其中莖尖培養(yǎng)廣泛應(yīng)用于植物再生和脫病毒研究。三：?jiǎn)柎痤}：*1、離體葉組織中再生植株發(fā)生途徑有哪些？在離體葉組織脫分化和再分化培養(yǎng)中，莖和芽分化的4個(gè)途徑：〔1〕直接產(chǎn)生不定芽〔2〕離體葉-----愈傷組織------不定芽〔3〕離體葉--------愈傷組織------胚狀體-----不定芽〔4〕離體葉→小鱗莖或球狀體↘愈傷組織↗*2、根培養(yǎng)的取材部位：答：一端切取長(zhǎng)1.2厘米的根尖，接種于培養(yǎng)基中。這些根的培養(yǎng)物生長(zhǎng)甚快，幾天后發(fā)育出側(cè)根。待側(cè)根生長(zhǎng)約1周后，即切取側(cè)根的根尖進(jìn)展擴(kuò)大培養(yǎng)，它們又迅速生長(zhǎng)并長(zhǎng)出側(cè)根，又可切下進(jìn)展培養(yǎng)，如此反復(fù)，就可得到從單個(gè)根尖衍生而來(lái)的離體根的無(wú)性系。這種根可用來(lái)進(jìn)展根系生理生化和代方面的實(shí)驗(yàn)研究。培養(yǎng)條件為暗光和25～27℃。*3、離體根培養(yǎng)的一般方法：〔1〕100ml三角瓶，裝40~50ml培養(yǎng)液；〔2〕液體培養(yǎng)，〔3〕反復(fù)繼代培養(yǎng)，〔4〕流動(dòng)式*4、根培養(yǎng)的培養(yǎng)基的選擇：無(wú)機(jī)離子較低White培養(yǎng)基或者其他培養(yǎng)基MS、B5也可用，但其濃度要稀釋2/3或1/2*5、影響離體根生長(zhǎng)的因素1、基因型：品種差異大。2、培養(yǎng)基：生根培養(yǎng)基—鹽濃度為MS的一半或四分之一。3、生長(zhǎng)物質(zhì)：適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)素，常用NAA和IBA，濃度為0.1-10.0毫克每升。但水仙，草莓等無(wú)需激素。4、PH：中性偏酸。5、光照和溫度：暗培養(yǎng)和25～27℃6、莖尖培養(yǎng)的含義：是切取莖的先端局部或莖尖分生組織局部，進(jìn)展無(wú)菌培養(yǎng)。7、莖尖培養(yǎng)的類型：莖尖分生組織培養(yǎng)：對(duì)長(zhǎng)度0.1mm左右，含1-2個(gè)葉原基的莖尖進(jìn)展培養(yǎng)，即微莖尖培養(yǎng)；目的是獲得無(wú)病毒植株普通莖尖培養(yǎng)：對(duì)幾毫米至幾十毫米長(zhǎng)的莖尖、芽尖及側(cè)芽的培養(yǎng)，目的是快速繁殖和用于植物開花生理的研究。*8、莖段的培養(yǎng)材料的選擇、處理和培養(yǎng)基的調(diào)整選擇：取生長(zhǎng)強(qiáng)健無(wú)病蟲的幼嫩枝條或鱗莖盤，假設(shè)是木本，取當(dāng)年生嫩枝或一年生枝條，剪去葉片，剪成3～4cm的小段。處理：在自來(lái)水中沖洗1～3h，在無(wú)菌條件下用75％酒精滅菌30～60s，再用濃度為0.1％升汞浸泡3～8min，或用飽和漂白粉浸泡10～20min，因材料老嫩和蠟質(zhì)多少而定時(shí)間。最后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，以備接種。培養(yǎng)基的調(diào)整：最常用的根本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，參加3％蔗糖，用0.7％的瓊脂固化。9莖尖微繁過(guò)程有哪幾個(gè)階段莖尖微繁殖過(guò)程一般包括五個(gè)階段:1無(wú)菌培養(yǎng)的建立。2芽的增殖。3中間繁殖體的增殖。4誘導(dǎo)生根。5試管苗的移栽第4章"胚胎培養(yǎng)及離體授粉"復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：*1、胚胎培養(yǎng)包括幼胚培養(yǎng)、成熟胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)以及子房培養(yǎng)。2、離體胚的培養(yǎng)分為二種類型：成熟胚培養(yǎng)和幼胚培養(yǎng)。*3、胚珠培養(yǎng)分二類：受精胚珠的培養(yǎng)和未受精胚珠的培養(yǎng)。受精胚珠培養(yǎng)目的一是打破種子的休眠；二是挽救胚的發(fā)育，以獲得雜交種。未受精胚珠培養(yǎng)的目的是獲得單倍體植株。4、子房培養(yǎng)分授粉子房培養(yǎng)和未授粉子房的培養(yǎng)。前者培養(yǎng)的目的是挽救雜種胚，后者培養(yǎng)的目的是獲得單倍體植株。5、離體授粉的類型有離體柱頭授粉、離體子房授粉、離體胚珠授粉。*6、離體胚培養(yǎng)方法：成熟胚和幼胚培養(yǎng)7、胚珠培養(yǎng)的培養(yǎng)基：Nitsch或N5,B5,MS，子房培養(yǎng)的培養(yǎng)基：N6,MS二、名詞解釋：*1、胚胎培養(yǎng)〔embryoculture〕：指對(duì)植物的胚、子房、胚珠和胚乳進(jìn)展離體培養(yǎng)，使其發(fā)育成完整植物的技術(shù)。包括幼胚培養(yǎng)、成熟胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)以及子房培養(yǎng)。*2、胚培養(yǎng)〔embryoculture〕：采用人工的方法將胚從種子、子房或胚珠中別離出來(lái)，再放在無(wú)菌的條件下，讓其進(jìn)一步生長(zhǎng)發(fā)育，以至形成幼苗的過(guò)程。*3、胚乳培養(yǎng)〔endospermculture〕：是指將胚乳從母體上別離出來(lái)，放在無(wú)菌的人工環(huán)境條件下，讓其進(jìn)一步生長(zhǎng)發(fā)育，以至形成幼苗的過(guò)程。4、胚珠培養(yǎng)〔ovuleculture〕：是指將胚珠從母體上別離出來(lái)，在無(wú)菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)發(fā)育形成幼苗的過(guò)程。5、子房培養(yǎng)〔ovaryculture〕：是指將子房從母體上別離出來(lái)，在無(wú)菌的人工環(huán)境條件下培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)發(fā)育形成幼苗的過(guò)程。6、植物離體授粉：指將未授粉的胚珠或子房從母體上別離下來(lái)，進(jìn)展無(wú)菌培養(yǎng)，并以一定的方式授以無(wú)菌花粉，使之在試管實(shí)現(xiàn)受精的技術(shù)。三、問(wèn)答題：*1、胚培養(yǎng)的作用有哪些？1)在遠(yuǎn)緣雜交育種中的應(yīng)用:克制雜種胚不能正常發(fā)育2)克制珠心胚的干擾,提高育種效率3)縮短育種周期4)測(cè)定休眠種子的萌發(fā)率5)理論研究中的應(yīng)用2、簡(jiǎn)述離體授粉的程序?！舱n件上沒有〕〔1〕確定開花、花藥開裂及授粉時(shí)間〔2〕去雄后將花蕾套袋隔離〔3〕制備無(wú)菌子房或胚珠〔4〕制備無(wú)菌花粉〔5〕胚珠或子房的試管授粉*3、胚胎培養(yǎng)的操作步驟。取子房常規(guī)外表消毒解剖鏡下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。固體培養(yǎng)*4、幼胚的發(fā)育方式：1〕胚性發(fā)育：繼續(xù)進(jìn)展正常的胚胎發(fā)育2〕早熟發(fā)育：迅速萌發(fā)成幼苗3〕產(chǎn)生愈傷組織：再分化形成多個(gè)胚狀體或芽原基。*5、胚胎培養(yǎng)的意義①、克制遠(yuǎn)緣雜種的不育性②、使胚胎發(fā)育不完全的植株獲得后代③、縮短育種年限，提高育種效率*6、胚乳培養(yǎng)過(guò)程胚乳外植體制備:種子消毒---取出胚乳培養(yǎng):White或MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基---參加2，4-D或NAA0.5～2.0mg/L，BA0.1～1.0mg／L——25-27℃--暗或弱光發(fā)育:約6～lOd胚乳開場(chǎng)膨大，再誘導(dǎo)形成愈傷組織----轉(zhuǎn)到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，分化培養(yǎng)基可參加0.5～3.0mg／L的BA及少量的NAA。待愈傷組織長(zhǎng)出芽后，切下不定芽，插入生根培養(yǎng)基中，光下培養(yǎng)10～15d，切口處可長(zhǎng)出白色的不定根。*7、檢查胚乳植株的染色體數(shù)目的方法取根尖、幼葉或愈傷組織0.2%-0.5%秋水仙素堿溶液在25℃浸泡4-8hr流水沖洗5-10min卡諾氏液或FAA液固定1mol鹽酸，60℃水浴8-10min染色、壓片、鏡檢、計(jì)數(shù)*8、胚珠培養(yǎng)的根本過(guò)程1〕、首先從花中取出子房進(jìn)展外表消毒，2〕、然后在無(wú)菌的條件下進(jìn)展解剖，取出胚珠，放在培養(yǎng)基上進(jìn)展培養(yǎng)，將胚珠培養(yǎng)成植株的關(guān)鍵是選擇胚的發(fā)育時(shí)期，實(shí)驗(yàn)證明發(fā)育到球形胚期的胚珠較易培養(yǎng)成功，另外為了培養(yǎng)成功，可取用帶胎座甚至帶局部子房的胚珠進(jìn)展培養(yǎng)。*9、子房培養(yǎng)的培養(yǎng)過(guò)程1、制備外植體：在開花前后適宜時(shí)期取子房或幼花，消毒2、子房培養(yǎng)：固體或液體培養(yǎng)均可*10、子房的發(fā)育的發(fā)育途徑。性細(xì)胞〔卵細(xì)胞、助細(xì)胞、極核、反足細(xì)胞〕----胚狀體或愈傷組織----單倍體植株；體細(xì)胞〔珠被、子房壁〕---胚狀體或愈傷組織----二倍體植株；*11、胚珠的發(fā)育途徑。1〕、受精胚珠：一是形成種子；二是形成愈傷組織2〕、未受精胚珠：形成單倍體植株。第5章"花藥和花粉培養(yǎng)"復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、花藥和花粉培養(yǎng)的共同特點(diǎn)是利用花粉(小孢子)染色體數(shù)目的單倍性，培育出單倍體植株。2、花藥和花粉培養(yǎng)時(shí)，花粉發(fā)育的最適宜時(shí)期是單核中、晚期〔單核靠邊期〕。3、MS和H培養(yǎng)基適合雙子葉植物花藥培養(yǎng)；B5培養(yǎng)基適合豆科和十字花科花藥培養(yǎng)；N6培養(yǎng)基適合禾谷類作物的花藥培養(yǎng)。4、花藥培養(yǎng)前的預(yù)處理:低溫冷藏是最常用的方法。5、壓片染色法是檢測(cè)花粉發(fā)育時(shí)期的簡(jiǎn)便有效方法，常用染色劑為醋酸洋紅。6、花藥培養(yǎng)包括：選擇材料-消毒-接種培養(yǎng)-愈合組織生成-分化出單倍體植株。7、花粉的四大發(fā)育途徑包括：營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育、生殖細(xì)胞發(fā)育、營(yíng)養(yǎng)和生殖細(xì)胞同時(shí)發(fā)育及花粉均等分裂發(fā)育*8、花粉培養(yǎng)大致過(guò)程包括：花粉的別離-預(yù)處理-培養(yǎng)過(guò)程9、花藥培養(yǎng)一般選擇花粉的單核期進(jìn)展接種10、花藥培養(yǎng)是器官培養(yǎng)，花粉培養(yǎng)屬細(xì)胞培養(yǎng)11、較高濃度蔗糖可誘導(dǎo)花粉形成愈傷組織；較低濃度蔗糖可使愈傷組織分化成苗二、名詞解釋：*1、花藥培養(yǎng)(antherculture)：是將花粉發(fā)育至一定階段的花藥接種到人工培養(yǎng)基上進(jìn)展培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進(jìn)而分化成植株的技術(shù)。*2、花粉培養(yǎng)(pollenculture)：是將花粉從花藥中別離出來(lái)進(jìn)展離體培養(yǎng)的過(guò)程。三、問(wèn)答題：1、如何確定水稻單核靠邊期的花粉？〔1〕在水稻中，在外部形態(tài)上可根據(jù)葉枕距為5-15cm，穎片淡黃綠色、雄蕊長(zhǎng)度接近穎片長(zhǎng)度的1/2這些條件鑒定?！?〕利用這些外部標(biāo)志，選擇符合條件的花蕾，經(jīng)鏡檢確定花粉發(fā)育的準(zhǔn)確時(shí)期。〔3〕壓片染色法是檢測(cè)劃分發(fā)育時(shí)期的簡(jiǎn)便有效方法，常用染色劑為醋酸洋紅。*2、比擬花粉培養(yǎng)與花藥培養(yǎng)一樣點(diǎn)：〔1〕利用小孢子染色體數(shù)目的單倍性，培育出單倍體植株?！?〕成苗途徑一樣，即有胚狀體成苗和愈傷組織再分化成苗兩條途徑。不同點(diǎn)：〔1〕花藥培養(yǎng)屬于器官培養(yǎng)；而花粉培養(yǎng)屬于細(xì)胞培養(yǎng)?！?〕花粉培養(yǎng)沒有藥壁組織干擾；可計(jì)數(shù)小孢子產(chǎn)胚率；可觀察雄核發(fā)育的全過(guò)程；單倍體產(chǎn)量高。但技術(shù)更復(fù)雜。3、簡(jiǎn)述花粉別離方法〔1〕自然散落法(漂浮培養(yǎng)散落小孢子收集法)將花藥接種在預(yù)處理液或液體培養(yǎng)基上，待花粉自動(dòng)散落后，收集培養(yǎng)。〔2〕擠壓法在燒杯或研缽中擠壓花藥，將花粉擠出后收集培養(yǎng)。(3)機(jī)械游離A磁攪拌法用磁力攪拌器攪拌培養(yǎng)液中的花藥，使花粉游離出來(lái)；B超速旋切法通過(guò)攪拌器中的高速旋轉(zhuǎn)刀具破碎花蕾、穗子、花藥，使小孢子游離出來(lái)4、花藥培養(yǎng)的大致過(guò)程1〕預(yù)處理:低溫冷藏是最常用的方法,另有離心、低劑量輻射、化學(xué)試劑處理2〕外表消毒：因?yàn)槲撮_放的花蕾中的花藥為花被包裹，本身處于無(wú)菌狀態(tài)，可僅用70％酒精棉球?qū)⒒ǖ耐獗聿料醇纯?。也可按?duì)其他器官消毒處理方法進(jìn)展，先用70％的酒精浸一下后，在飽和漂白粉溶液中浸10～20min，或用0.1％升汞液消毒7～lOmin，然后用無(wú)菌水洗3～5次。將花蕾剪下放入水中，在冰箱4～5℃下保持3～4d。3〕接種：接種時(shí)把花蕾用解剖刀、鑷子小心剝開花蕾，取出花藥，注意去掉花絲，然后散落接種到培養(yǎng)基上，一個(gè)l0ml的試管可接種20個(gè)花藥。培養(yǎng)溫度在23～28℃左右，每天11～16h的光照，光照強(qiáng)度2000～4000L*。脫分化培養(yǎng)時(shí)，可用MS+2,4-D的培養(yǎng)基，或N6+2,4-D的培養(yǎng)基，經(jīng)10～30d，可誘導(dǎo)生成愈傷組織，或少數(shù)生成胚狀體。4〕培養(yǎng)：一種植物的花藥可以在一種培養(yǎng)基上長(zhǎng)幼苗，而在另一種培養(yǎng)基上則形成愈傷組織。如水稻通常在含有生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出愈傷組織，而在不含任何激素的N6培養(yǎng)基上長(zhǎng)出胚狀體。但在辣椒的花藥培養(yǎng)中，只要培養(yǎng)基適宜，甚至可以在同一花藥上一局部花粉形成胚狀體，而另一局部只形成愈傷組織。5〕植株的誘導(dǎo)誘導(dǎo)愈傷組織分化芽或根，需將其轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基花粉---愈傷組織---苗花粉---胚狀體---苗第6章"細(xì)胞培養(yǎng)"復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、一般平板培養(yǎng)要求細(xì)胞密度每毫升為1*103∽100*103個(gè)。*2、條件培養(yǎng)基是懸浮培養(yǎng)過(guò)一段時(shí)間組織或細(xì)胞的液體培養(yǎng)基。*3、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)主要應(yīng)用于植物有用物質(zhì)的生產(chǎn)、誘發(fā)和篩選突變體、原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞器別離、食品生產(chǎn)等。4、由植物葉片別離單細(xì)胞的方法有機(jī)械法和酶解法。*5、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法：成批培養(yǎng)；連續(xù)培養(yǎng)*6、連續(xù)培養(yǎng)的種類：(1)半連續(xù)培養(yǎng)；(2)連續(xù)培養(yǎng)*7、連續(xù)培養(yǎng)的方法:〔1〕濁度恒定法;〔2〕化學(xué)恒定法二、名詞：1、看護(hù)培養(yǎng)法(nurseculture)：是指用一塊活潑生長(zhǎng)的愈傷組織塊來(lái)看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，并使其生長(zhǎng)和增殖的方法。*2、平板培養(yǎng)法(planteculture)：是把單細(xì)胞懸浮液與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合，平鋪一薄層在培養(yǎng)基底上的培養(yǎng)方法。*3、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)〔suspensionculture〕：是指將單個(gè)游離細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)在液體培養(yǎng)基中進(jìn)展培養(yǎng)增殖的技術(shù)。4、初始植板密度〔initalplantingdensity〕：?jiǎn)渭?xì)胞固體平板培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞懸浮液接種到瓊脂培養(yǎng)基上最初細(xì)胞密度。5、臨界密度(criticaldensity)：?jiǎn)渭?xì)胞培養(yǎng)時(shí)，初始植板密度低于*值培養(yǎng)細(xì)胞就不能進(jìn)展分裂和發(fā)育成細(xì)胞團(tuán)，則該值就是臨界密度?！舱n件沒有〕6、植物細(xì)胞培養(yǎng)〔plantcellculture〕：是指對(duì)植物器官或愈傷組織上別離出的單細(xì)胞〔或小細(xì)胞團(tuán)〕進(jìn)展離體培養(yǎng)，形成單細(xì)胞無(wú)性系或再生植株的技術(shù)。7、條件培養(yǎng)基：曾懸浮培養(yǎng)過(guò)一段時(shí)間組織或細(xì)胞的液體培養(yǎng)基。8、植板率：是指已形成細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞與接種總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)三、問(wèn)答題：1、如何得到單細(xì)胞無(wú)性系？在細(xì)胞培養(yǎng)中，常由分散性較好的愈傷組織或懸浮培養(yǎng)物來(lái)制備單細(xì)胞，也可以用機(jī)械法和酶解法從植物器官直接制備單細(xì)胞。

由別離的單細(xì)胞經(jīng)看護(hù)培養(yǎng)法、微室培養(yǎng)法或平板培養(yǎng)法，即可得到單細(xì)胞無(wú)性系*2、單細(xì)胞培養(yǎng)有哪些方法？各有何含義及特點(diǎn)單細(xì)胞培養(yǎng)：看護(hù)培養(yǎng)；微室培養(yǎng)；平板培養(yǎng)看護(hù)培養(yǎng)法：指用一塊活潑生長(zhǎng)的愈傷組織塊來(lái)看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，并使其生長(zhǎng)和增殖的方法。

特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：①簡(jiǎn)便易行。②效果好，易于成功。

缺點(diǎn)：①不能在顯微鏡下直接觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程。用途：誘導(dǎo)形成單細(xì)胞系?！?〕微室培養(yǎng)：即將細(xì)胞培養(yǎng)在很少量的培養(yǎng)基中。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：在培養(yǎng)過(guò)程中，可以連續(xù)進(jìn)展顯微觀察一個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂和形成細(xì)胞團(tuán)的全部過(guò)程

缺點(diǎn)：培養(yǎng)時(shí)間較短用途:主要用來(lái)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂、形成細(xì)胞團(tuán)的過(guò)程?！?〕平板培養(yǎng)法：把單細(xì)胞懸浮液與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合，平鋪一薄層在培養(yǎng)基底上的培養(yǎng)方法。

特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：①可以定點(diǎn)觀察；②別離單細(xì)胞系容易；

缺點(diǎn)：培養(yǎng)細(xì)胞氣體交換不暢。用途:別離單細(xì)胞無(wú)性系，研究其生理、生化、遺傳上的差異而設(shè)計(jì)的一種單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞、原生質(zhì)體及融合產(chǎn)物的培養(yǎng)。*3、什么是植板率？小細(xì)胞團(tuán)的計(jì)數(shù)方法有哪幾種？植板率是指已形成細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞與接種總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)。小細(xì)胞團(tuán)計(jì)數(shù)方法：①低倍顯微鏡直接計(jì)算；②細(xì)胞團(tuán)顯影法4、什么是細(xì)胞懸浮培養(yǎng)？簡(jiǎn)述成批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)的的特點(diǎn)？細(xì)胞懸浮培養(yǎng)：是使離體的植物細(xì)胞懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)展的無(wú)菌培養(yǎng)?！?〕成批培養(yǎng)的特點(diǎn)：①細(xì)胞生長(zhǎng)在固定體積的培養(yǎng)基上，直至養(yǎng)分耗盡②用攪拌的方法使細(xì)胞團(tuán)和細(xì)胞均勻分布③細(xì)胞數(shù)目呈現(xiàn)慢—快—慢—停頓生長(zhǎng)的變化，但必須更換新鮮培養(yǎng)基才能進(jìn)展下一批培養(yǎng)〔2〕連續(xù)培養(yǎng)的特點(diǎn)：①由于不斷參加新鮮培養(yǎng)基，保證了養(yǎng)分的充分供給，不會(huì)出現(xiàn)懸浮培養(yǎng)物發(fā)生營(yíng)養(yǎng)缺乏的現(xiàn)象②可在培養(yǎng)期間使細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中。細(xì)胞增殖速度快③適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)*5、影響單細(xì)胞培養(yǎng)的因子1、條件培養(yǎng)基：條件培養(yǎng)基可有利于單細(xì)胞的生長(zhǎng)與分裂2、細(xì)胞密度(>臨界密度)：臨界密度：?jiǎn)渭?xì)胞培養(yǎng)時(shí)，初始植板密度低于*值培養(yǎng)細(xì)胞就不能進(jìn)展分裂和發(fā)育成細(xì)胞團(tuán)，則該值就是臨界密度。初始植板密度應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)狀況而改變，培養(yǎng)基越復(fù)雜則植板細(xì)胞的臨界密度越低，反之則相反。一般要求每毫升在1000個(gè)細(xì)胞以上。3、生長(zhǎng)激素：生長(zhǎng)激素加1種細(xì)胞分裂素和幾種氨基酸(如：丙氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺)。臨界密度只需25-30細(xì)胞/毫升。4、pH：偏酸。5、CO2：可誘導(dǎo)細(xì)胞分裂。6、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)主要應(yīng)用1〕、植物有用物質(zhì)的生產(chǎn)：在植物組織培養(yǎng)研究中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)胞中含有各種特殊的代產(chǎn)物。2〕、誘發(fā)和篩選突變體：在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一些突變體，常采用不同培養(yǎng)基來(lái)進(jìn)展選擇，也就是把懸浮細(xì)胞培養(yǎng)于缺少*種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或生長(zhǎng)因子，或是添加*種抑制劑的培養(yǎng)基里，使突變細(xì)胞和正常細(xì)胞區(qū)別開來(lái)3〕、原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞別離：利用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法，對(duì)細(xì)胞原生質(zhì)進(jìn)展別離，在適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)展培養(yǎng)，使之生成完整植株，或?qū)υw的生理特性進(jìn)展觀察、研究。4〕、食品生產(chǎn)：通過(guò)對(duì)許多食用植物培養(yǎng)組織的細(xì)胞團(tuán)生產(chǎn)的研究。7、平板培養(yǎng)的根本技術(shù)〔1〕單細(xì)胞懸浮液的制備(2)懸浮細(xì)胞密度的調(diào)制〔3〕瓊脂培養(yǎng)基配制:0.7%瓊脂條件培養(yǎng)基?！?〕平板制作〔5)培養(yǎng)第7章"原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞融合"復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：*1、原生質(zhì)體的別離方法有機(jī)械別離法和酶法別離法。2、原生質(zhì)體培養(yǎng)基常用的滲透劑是甘露醇和山梨醇。*3、原生質(zhì)體的純化方法有：沉降法、漂浮法和界面法。*4、原生質(zhì)體活力的測(cè)定：形態(tài)識(shí)別；染色識(shí)別。*5、原生質(zhì)體培養(yǎng)方法：液體淺層培養(yǎng)；平板法培養(yǎng)；懸滴法培養(yǎng)；雙層培養(yǎng)法；飼喂層培養(yǎng)*6、原生質(zhì)體融合的方法：無(wú)機(jī)鹽誘導(dǎo)融合；高pH高鈣離子法；PEG法；聚乙二醇與高pH高鈣相結(jié)合的誘導(dǎo)融合；電融合技術(shù)*7、雜種細(xì)胞的篩選與鑒定：互補(bǔ)選擇；機(jī)械別離雜種細(xì)胞法；雙熒光標(biāo)記選擇法*8、雜種植株的鑒定：形態(tài)學(xué)鑒定；細(xì)胞學(xué)觀察；DNA切圖譜分析；同工酶分析二、名詞解釋：*1、原生質(zhì)體融合(protoplastfusion)：也稱體細(xì)胞雜交〔somatichybridization〕，就是使別離下來(lái)的不同親本的原生質(zhì)體，在離體條件下通過(guò)誘導(dǎo)發(fā)生的質(zhì)膜融合進(jìn)而細(xì)胞核融合，像性細(xì)胞受精作用那樣互相融合成一體的現(xiàn)象。2、原生質(zhì)體〔protoplast〕：是指除去了細(xì)胞壁后的裸露的植物細(xì)胞。三、問(wèn)答題：1、簡(jiǎn)述原生質(zhì)體作為遺傳操作和生理生化研究的材料有何特點(diǎn)？〔1〕沒有細(xì)胞壁，有利于體細(xì)胞融合、體細(xì)胞雜交、基因轉(zhuǎn)移和單細(xì)胞培養(yǎng)。〔2〕原生質(zhì)體能比擬容易攝取外來(lái)的遺傳物質(zhì)。2、酶法別離原生質(zhì)體時(shí)使用的酶的種類有哪些？〔1〕纖維素酶類〔2〕半纖維素酶類〔3〕果膠酶類〔4〕崩潰酶3、簡(jiǎn)述一步酶法別離原生質(zhì)體的方法一步別離法：把一定量纖維素酶和果膠酶組成混合酶液，對(duì)材料進(jìn)展一次性處理而別離出原生質(zhì)體。處理溫度25-30oC，處理的時(shí)間根據(jù)材料及酶濃度的不同而不同，可為2-24h。4、如何純化別離的植物原生質(zhì)體并鑒定其活力？(1)原生質(zhì)體的純化①沉降法：應(yīng)用原生質(zhì)體的比重大于溶液的性質(zhì)而使原生質(zhì)體沉于底部。②漂浮法：應(yīng)用滲透劑含量較高的洗滌液使原生質(zhì)體漂浮于液體外表。③梯度離心法：選兩種不同滲透濃度的溶液，其中一種溶液密度大于原生質(zhì)體的密度，另一種溶液小于原生質(zhì)體的密度。(2)原生質(zhì)體活力的測(cè)定①形態(tài)識(shí)別：形態(tài)上完整，呈圓形，含有飽滿的細(xì)胞質(zhì)，顏色鮮艷的即為存活的原生質(zhì)體。②染色識(shí)別1〕0.1%酚番紅或Evans藍(lán)染色：有活力的不被染色，死亡的被染上色。2〕雙醋酸鹽熒光素(FDA)染色法：在熒光顯微鏡下有熒光的即為有活性的原生質(zhì)體。*5、原生質(zhì)體培養(yǎng)的方法有哪些？〔1〕液體淺層培養(yǎng)〔2〕平板法培養(yǎng)〔3〕微懸滴法培養(yǎng)〔4〕雙層培養(yǎng)法〔5〕飼養(yǎng)層培養(yǎng)*6、原生質(zhì)體融合有哪幾種主要方法？〔1〕化學(xué)法誘導(dǎo)融合；〔2〕高PH-高鈣離子法；〔3〕PEG法；〔4〕PEG結(jié)合高鈣-高pH誘導(dǎo)法；〔3〕電融合技術(shù)7、原生質(zhì)體培養(yǎng)的意義*8、酶的種類及特點(diǎn)。纖維素酶類〔Cellulase〕：纖維素酶是從綠色木霉中提取的一種復(fù)合酶制劑，可降解纖維素，得到裸露的原生質(zhì)體。果膠酶類〔Pectolyase〕：果膠酶是從根霉中提取的，使細(xì)胞間的果膠質(zhì)降解，把細(xì)胞從組織別離出來(lái)。半纖維素酶類〔Hemicellulase〕：降解半纖維素為單糖或單糖衍生物。崩潰酶：一種粗制酶。蝸牛酶：主要用于別離小孢子〔花粉母細(xì)胞和四分體細(xì)胞〕的原生質(zhì)體第8章"植物離體快繁和人工種子"復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、原球莖發(fā)生型是蘭科植物特有的一種快繁方式。2、離體快繁商業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)注意的問(wèn)題是快繁苗的污染、玻璃化、褐化和黃化。3、根據(jù)繁殖體的類型人工種子可分為兩類：一類是體細(xì)胞胚人工種子；另一類是非體細(xì)胞胚人工種子。4、人工種子包裹方法離子交換法；枯燥法；冷卻法。二、名詞解釋：1、離體繁殖〔invitropropagation)：微型繁殖〔micropropagation)，指利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)外植體進(jìn)展離體培養(yǎng)，使其在短期獲得遺傳性一致的大量再生植株的方法。是工廠化育苗的技術(shù)根底。*2、人工種子(artificialseeds)：亦稱體細(xì)胞種子，任何一種經(jīng)人工種皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖體均可稱之為人工種子。三、問(wèn)答題：1、植物快繁的器官再生主要類型？短枝發(fā)生型；叢生芽發(fā)生型；不定芽發(fā)生型；胚狀體發(fā)生型；原球莖發(fā)生型2、植物快繁的程序?！?〕無(wú)菌〔或初代〕培養(yǎng)的建立〔2〕繁殖體增殖〔3〕芽苗生根〔4〕小植株的移栽馴化3、人工種子的優(yōu)點(diǎn)?！?〕使自然條件下不易結(jié)實(shí)或種子昂貴的材料能快速繁殖和保存；〔2〕繁殖速度快；〔3〕為基因工程技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)提供橋梁；〔4〕固定雜種優(yōu)勢(shì)；〔5〕提高植物抗逆性；〔6〕取代天然種子，節(jié)約糧食。第9章"植物無(wú)病毒苗木培育"復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、目前培育無(wú)病毒苗最廣泛和最重要的一個(gè)途徑是莖尖培養(yǎng)脫毒。*2、通過(guò)莖尖培養(yǎng)脫毒時(shí)，常以帶1-3個(gè)幼葉原基的莖尖〔約0.3—0.5mm〕作外植體較適宜。3、無(wú)病毒苗的保存分：隔離保存和長(zhǎng)期保存兩種方法。二、名詞解釋：1、無(wú)病毒苗〔virus-freeplantlets〕：是指不含該種植物的主要危害病毒，即經(jīng)檢測(cè)主要病毒在植物的存在表現(xiàn)陰性反響的苗木。2、微尖