醫(yī)學(xué)課件抗人球蛋白試驗(yàn)

Coombs試驗(yàn)是利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異抗體，使紅細(xì)胞凝集?？谷饲蚍ㄊ菣z測(cè)不完全抗體的經(jīng)典方法，其方法有兩類。直接Coombs試驗(yàn)：是檢查被檢紅細(xì)胞上有無(wú)不完全抗體。間接Coombs試驗(yàn)：是檢查血清中游離的不完全抗體Coombs試驗(yàn)是利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞1天然抗體與免疫血型抗體比較天然抗體免疫血型抗體性質(zhì)完全抗體不完全抗體IgIgMIgG抗原刺激沒(méi)有可察覺(jué)的抗原刺激經(jīng)抗原刺激后才產(chǎn)生免疫發(fā)生的時(shí)間早期晚期分子量90萬(wàn)15萬(wàn)分子長(zhǎng)度950250沉淀系數(shù)19S7S電泳分析IgM球蛋白IgG球蛋白對(duì)HDN的意義＊小大通過(guò)胎盤能力＊不能能反應(yīng)溫度＊4℃比37℃強(qiáng)（冷抗體）37℃（溫抗體）對(duì)血型物質(zhì)＊能被血型物質(zhì)中和不被中和天然抗體與免疫血型抗體比較天然抗體免疫血型抗體性質(zhì)完全抗體2

IgM抗體

免疫球蛋白中8%-10%是由IgM組成IgM抗體分子量大，約為90萬(wàn)，有十個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，可直接致敏和凝集紅細(xì)胞，它的平均壽命為10天，IgM抗原抗體反應(yīng)中常激活補(bǔ)體，從而引起溶血反應(yīng)。IgM抗體3IgM抗體在鹽水介質(zhì)中凝集紅細(xì)胞示意圖IgM抗體在鹽水介質(zhì)中凝集紅細(xì)胞示意圖4

IgG抗體IgG是體液免疫應(yīng)答產(chǎn)生的主要抗體，在血清中含量最高。約占免疫球蛋白的75%。IgG是唯一的能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)的免疫球蛋白，同種IgG血型抗體通過(guò)胎盤，可引起新生兒溶血病。最常見(jiàn)的是ABO與Rh血型系統(tǒng)。IgG抗體5IgG凝集紅細(xì)胞示意圖

IgG在鹽水介質(zhì)中一般不產(chǎn)生凝集IgG凝集紅細(xì)胞示意圖IgG在鹽水介質(zhì)中一般不產(chǎn)生6抗球蛋白試驗(yàn)抗球蛋白抗球蛋白試驗(yàn)抗球蛋白7試劑及器材1、多特異性抗球蛋白試劑（lgG、C3d）；2、柱凝集抗人球卡；3、陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞（取3份正常人O型Rh（D）陽(yáng)性紅細(xì)胞等量混勻，經(jīng)生理鹽水洗滌后取少量壓積紅細(xì)胞，加抗D血清，置37℃水浴致敏1小時(shí)，取出后用生理鹽水洗滌3次，配成5%紅細(xì)胞懸液）；4、陰性對(duì)照細(xì)胞（取3份正常人O型紅細(xì)胞等量混勻，經(jīng)生理鹽水洗滌后，配成5%紅細(xì)胞懸液；或直接取Rh（D）陰性紅細(xì)胞）；5、受檢者5%（1%）紅細(xì)胞懸液；6、0.9%生理鹽水；7、柱凝集卡式配血系統(tǒng)8、滴管（加樣槍）、蠟筆或記號(hào)筆、試管、顯微鏡、37℃水浴箱、細(xì)胞洗滌離心機(jī)等。試劑及器材1、多特異性抗球蛋白試劑（lgG、C3d）；8直接抗球蛋白試驗(yàn)（DAT）直接抗球蛋白試驗(yàn)9原理患者體內(nèi)若有與紅細(xì)胞抗原不相合的不完全抗體存在，可與紅細(xì)胞結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。但因不完全抗體分子量小，不能有效地連接抗原抗體復(fù)合物，僅使紅細(xì)胞處于致敏狀態(tài)。加入抗球蛋白血清，與紅細(xì)胞上吸咐的不完全抗體結(jié)合，在致敏紅細(xì)胞之間搭橋，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集。這種直接檢測(cè)體內(nèi)被抗體或（和）補(bǔ)體致敏紅細(xì)胞的試驗(yàn)稱之為直接抗球蛋白試驗(yàn)。原理患者體內(nèi)若有與紅細(xì)胞抗原不相合的不完全抗體存在，可與紅細(xì)10直接Coombs試驗(yàn)抗人球蛋白自身抗體致敏RBC可見(jiàn)凝集直接Coombs試驗(yàn)抗人球蛋白自身抗體致敏RBC可見(jiàn)凝集11手工法操作1、取患者抗凝全血適量于試管中，加生理鹽水洗滌3次，最后一次洗滌離心后，棄上清液，用生理鹽水配成5%紅細(xì)胞懸液；2、取3支試管，作好標(biāo)記（患者、陽(yáng)性、陰性）；3、取患者5%紅懸液1滴于試管中，加生理鹽水洗滌一次；盡可能棄凈上清液；4、在陽(yáng)、陰性試管中分別加入陽(yáng)性和陰性對(duì)照紅懸液1滴；5、在各管中滴加多特異性抗球蛋白試劑1滴，混勻；6、同時(shí)以1000r/min離心1分鐘，輕輕搖動(dòng)，先用肉眼觀察管底紅細(xì)胞的凝集，再用低倍鏡觀察手工法操作1、取患者抗凝全血適量于試管中，加生理鹽水洗滌312柱凝集卡式法操作1、取出柱凝集Coombs卡、室溫平衡并做好標(biāo)記（患者、陽(yáng)性、陰性）。2、分別加入1%被檢紅懸、陽(yáng)性紅懸、陰性紅懸各50ul。3、不孵育，將卡放入專用離心機(jī)離心。4、取出凝集Coombs卡，觀察試驗(yàn)結(jié)果。柱凝集卡式法操作1、取出柱凝集Coombs卡、室溫平衡并做好13DAT操作表反應(yīng)物檢測(cè)管陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照被檢紅細(xì)胞懸液1滴陽(yáng)性紅細(xì)胞懸液1滴陰性紅細(xì)胞懸液1滴抗人球蛋白試劑1滴1滴1滴DAT操作表反應(yīng)物檢測(cè)管陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照被檢紅細(xì)胞懸14微柱卡Coombs試驗(yàn)RBC可免洗滌因?yàn)镽BC的密度遠(yuǎn)大于血清中的球蛋白，當(dāng)離心時(shí)，RBC的沉降速率遠(yuǎn)大于球蛋白，故RBC首先和凝膠中的抗人球蛋白反應(yīng)，而不受血清中的球蛋白干擾，從而可免除洗滌這一步驟。微柱卡Coombs試驗(yàn)RBC可免洗滌因?yàn)镽BC的密度遠(yuǎn)大于血15結(jié)果判斷先觀察陰性和陽(yáng)性對(duì)照管，陰性對(duì)照管無(wú)凝集，陽(yáng)性對(duì)照管出現(xiàn)+++—++++凝集，說(shuō)明檢測(cè)管結(jié)果可信。被檢測(cè)管凝集，直接抗球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性，不凝集者為陰性。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性，要加陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明該陰性結(jié)果可靠。結(jié)果判斷先觀察陰性和陽(yáng)性對(duì)照管，陰性對(duì)照管無(wú)凝集，陽(yáng)性對(duì)照管16柱凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)柱凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)17間接Coombs試驗(yàn)（IAT）間接Coombs試驗(yàn)18原理用已知抗原的紅細(xì)胞檢測(cè)受檢者血清中相應(yīng)的不完全抗體；或用已知的不完全抗體檢測(cè)紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原。在37℃條件下，若被檢血清或紅細(xì)胞有對(duì)應(yīng)的不完全抗體或抗原，則抗原抗體作用使紅細(xì)胞致敏再加抗人球蛋白試劑，與紅細(xì)胞上不完全抗體結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)凝集。這種通過(guò)體外將紅細(xì)胞致敏后，再檢測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)不完全抗體或抗原的試驗(yàn)稱為間接抗人球蛋白試驗(yàn)。原理用已知抗原的紅細(xì)胞檢測(cè)受檢者血清中相應(yīng)的不完全抗體；或用19間接Coombs試驗(yàn)抗人免疫球蛋白同種異型抗體間接Coombs試驗(yàn)抗人免疫球蛋白同種異型抗體20手工法操作取被檢血清200ul于試管中，加入等量5%已知抗原紅懸液（或被檢5%紅懸液加入等量已知抗體血清），置37℃水浴1小時(shí)。如血清與紅細(xì)胞存在相應(yīng)特異性抗原抗體，則會(huì)使紅細(xì)胞致敏。取出試管，用生理鹽水洗滌后，參照直接Coombs試驗(yàn)方法操作。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明受檢者血清中有與已知紅細(xì)胞抗原相對(duì)應(yīng)的不完全抗體（或被檢者紅細(xì)胞上有與已知抗體相對(duì)應(yīng)的抗原手工法操作取被檢血清200ul于試管中，加入等量5%已知抗21柱凝集卡式法操作1、取出柱凝集Coombs卡、室溫平衡并做好標(biāo)記（患者、陽(yáng)性、陰性）。2、在患者孔中加入被檢血清和1%已知抗原紅懸液各50ul（或加入已知抗體血清和1%待檢抗原紅懸液各50ul）3、在陽(yáng)性、陰性孔中加入相應(yīng)1%紅懸液50ul4、同時(shí)放入專用孵育器孵育5、取出用專用離心機(jī)離心。6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果同手工法柱凝集卡式法操作1、取出柱凝集Coombs卡、室溫平衡并做好22Coombs’試驗(yàn)臨床意義正常人Coombs試驗(yàn)直接與間接試驗(yàn)均為陰性本試驗(yàn)是診斷自身免疫性溶血性貧血(AIHA)的重要依據(jù)，特別是IgG型引起的溶血性貧血，直接反應(yīng)常呈強(qiáng)陽(yáng)性，間接反應(yīng)大多陰性，但亦可陽(yáng)性新生兒同種免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血病，直接及間接反應(yīng)均強(qiáng)陽(yáng)性，持續(xù)數(shù)周、換血輸血后數(shù)天內(nèi)可變?yōu)殛幮裕捎凇癆BO”血型不合引起的溶血病，直接常為陰性或弱陽(yáng)性，間接反應(yīng)為陽(yáng)性Coombs’試驗(yàn)臨床意義正常人Coombs試驗(yàn)直接與間接試23藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血①α-甲基多巴型：直接及間接反應(yīng)均陽(yáng)性。②青霉素型：直接反應(yīng)陽(yáng)性，間接反應(yīng)陰性③福阿亭型：（奎寧等藥物）抗體通常為IgM，偶有IgG型者，直接反應(yīng)為陽(yáng)性，間接反應(yīng)陰性冷凝集素綜合征：直接反應(yīng)陽(yáng)性，間接反應(yīng)陰性（37℃）。由于本病紅細(xì)胞膜附著的是補(bǔ)體C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗IgG或抗IgM抗血清做試驗(yàn)時(shí)則結(jié)果陰性，如以抗補(bǔ)體的抗血清做試驗(yàn)則直接反應(yīng)陽(yáng)性。藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血24紅細(xì)胞血型不合引起的輸血反應(yīng)ABO或Rh血型不合輸血，供者的紅細(xì)胞被受者的血型抗體致敏，在供者被致敏的紅細(xì)胞完全破壞以前，直接反應(yīng)陽(yáng)性Rh陰性者如過(guò)去不曾接受過(guò)Rh陽(yáng)性者的血或曾沒(méi)有妊娠Rh陽(yáng)性胎兒者，間接反應(yīng)陽(yáng)性，第一次輸血后（Rh陽(yáng)性的血），數(shù)天之內(nèi)間接反應(yīng)也會(huì)變?yōu)殛?yáng)性紅細(xì)胞血型不合引起的輸血反應(yīng)25其它：在傳染性單核細(xì)胞增多癥、SLE、惡性淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、癌腫、鉛中毒、結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周圍炎、EVan氏綜合征等，病人直接反應(yīng)亦可陽(yáng)性陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿癥患者中，急性發(fā)作后用抗補(bǔ)體血清做試驗(yàn)直接反應(yīng)常為陽(yáng)性。其它：26注意事項(xiàng)標(biāo)本采取后應(yīng)立即進(jìn)行試驗(yàn)，延遲試驗(yàn)或中途停止可使抗體從細(xì)胞中丟失?？骨虻鞍自噭?yīng)按說(shuō)明書最適稀釋度使用，否則可產(chǎn)生帶現(xiàn)象而誤認(rèn)結(jié)果。本試驗(yàn)必須設(shè)陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照。如陽(yáng)性對(duì)照管不凝集，說(shuō)明抗D血清失效或抗人球蛋白血清失效，應(yīng)更換血清，重作試驗(yàn)；若陰性對(duì)照出現(xiàn)凝集，可能由于抗人球蛋白血清中含有殘余種屬抗體，或被細(xì)菌污染；本實(shí)驗(yàn)均失去意義，不能判斷結(jié)果。注意事項(xiàng)標(biāo)本采取后應(yīng)立即進(jìn)行試驗(yàn)，延遲試驗(yàn)或中途停止可使抗體27如血清與相應(yīng)紅細(xì)胞在37℃水浴中致敏1小時(shí)，則血清中75%的抗體吸附于紅細(xì)胞上，如致敏2小時(shí)，則抗體吸附達(dá)95%，如以低離子溶液代替生理鹽水配制5%紅細(xì)胞懸液，則致敏時(shí)間可減少至15～30分鐘紅細(xì)胞洗滌應(yīng)迅速，徹底、不應(yīng)中途停止。受檢紅細(xì)胞一定要用鹽水洗滌3次以上，洗滌時(shí)鹽水要足量并用力沖入管底，使壓積于管底的紅細(xì)胞松離，以除去紅細(xì)胞懸液中混雜的血清蛋白，要防止手上的蛋白污染。1滴1：4000稀釋的血清可中和抗球蛋白血清1滴，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。如血清與相應(yīng)紅細(xì)胞在37℃水浴中致敏1小時(shí)，則血清中75%的28全凝集或冷凝集血液標(biāo)本及含有Wharton膠的臍血標(biāo)本，若洗滌不充分，血液標(biāo)本中有很多網(wǎng)織紅細(xì)胞，且抗球蛋白試劑中含有抗運(yùn)鐵蛋白時(shí)，均可使紅細(xì)胞發(fā)生凝集如結(jié)果為陰性，最好對(duì)陰性結(jié)果進(jìn)行核實(shí)，即在該試管中再加一滴lgG致敏紅細(xì)胞，如結(jié)果為陽(yáng)性，則表示試管內(nèi)的抗球蛋白試劑未被消耗，陰性結(jié)果可靠。全凝集或冷凝集血液標(biāo)本及含有Wharton膠的臍血標(biāo)本，若洗29Coombs試驗(yàn)是利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異抗體，使紅細(xì)胞凝集。抗人球法是檢測(cè)不完全抗體的經(jīng)典方法，其方法有兩類。直接Coombs試驗(yàn)：是檢查被檢紅細(xì)胞上有無(wú)不完全抗體。間接Coombs試驗(yàn)：是檢查血清中游離的不完全抗體Coombs試驗(yàn)是利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞30天然抗體與免疫血型抗體比較天然抗體免疫血型抗體性質(zhì)完全抗體不完全抗體IgIgMIgG抗原刺激沒(méi)有可察覺(jué)的抗原刺激經(jīng)抗原刺激后才產(chǎn)生免疫發(fā)生的時(shí)間早期晚期分子量90萬(wàn)15萬(wàn)分子長(zhǎng)度950250沉淀系數(shù)19S7S電泳分析IgM球蛋白IgG球蛋白對(duì)HDN的意義＊小大通過(guò)胎盤能力＊不能能反應(yīng)溫度＊4℃比37℃強(qiáng)（冷抗體）37℃（溫抗體）對(duì)血型物質(zhì)＊能被血型物質(zhì)中和不被中和天然抗體與免疫血型抗體比較天然抗體免疫血型抗體性質(zhì)完全抗體31

IgM抗體

免疫球蛋白中8%-10%是由IgM組成IgM抗體分子量大，約為90萬(wàn)，有十個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，可直接致敏和凝集紅細(xì)胞，它的平均壽命為10天，IgM抗原抗體反應(yīng)中常激活補(bǔ)體，從而引起溶血反應(yīng)。IgM抗體32IgM抗體在鹽水介質(zhì)中凝集紅細(xì)胞示意圖IgM抗體在鹽水介質(zhì)中凝集紅細(xì)胞示意圖33

IgG抗體IgG是體液免疫應(yīng)答產(chǎn)生的主要抗體，在血清中含量最高。約占免疫球蛋白的75%。IgG是唯一的能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)的免疫球蛋白，同種IgG血型抗體通過(guò)胎盤，可引起新生兒溶血病。最常見(jiàn)的是ABO與Rh血型系統(tǒng)。IgG抗體34IgG凝集紅細(xì)胞示意圖

IgG在鹽水介質(zhì)中一般不產(chǎn)生凝集IgG凝集紅細(xì)胞示意圖IgG在鹽水介質(zhì)中一般不產(chǎn)生35抗球蛋白試驗(yàn)抗球蛋白抗球蛋白試驗(yàn)抗球蛋白36試劑及器材1、多特異性抗球蛋白試劑（lgG、C3d）；2、柱凝集抗人球卡；3、陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞（取3份正常人O型Rh（D）陽(yáng)性紅細(xì)胞等量混勻，經(jīng)生理鹽水洗滌后取少量壓積紅細(xì)胞，加抗D血清，置37℃水浴致敏1小時(shí)，取出后用生理鹽水洗滌3次，配成5%紅細(xì)胞懸液）；4、陰性對(duì)照細(xì)胞（取3份正常人O型紅細(xì)胞等量混勻，經(jīng)生理鹽水洗滌后，配成5%紅細(xì)胞懸液；或直接取Rh（D）陰性紅細(xì)胞）；5、受檢者5%（1%）紅細(xì)胞懸液；6、0.9%生理鹽水；7、柱凝集卡式配血系統(tǒng)8、滴管（加樣槍）、蠟筆或記號(hào)筆、試管、顯微鏡、37℃水浴箱、細(xì)胞洗滌離心機(jī)等。試劑及器材1、多特異性抗球蛋白試劑（lgG、C3d）；37直接抗球蛋白試驗(yàn)（DAT）直接抗球蛋白試驗(yàn)38原理患者體內(nèi)若有與紅細(xì)胞抗原不相合的不完全抗體存在，可與紅細(xì)胞結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。但因不完全抗體分子量小，不能有效地連接抗原抗體復(fù)合物，僅使紅細(xì)胞處于致敏狀態(tài)。加入抗球蛋白血清，與紅細(xì)胞上吸咐的不完全抗體結(jié)合，在致敏紅細(xì)胞之間搭橋，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集。這種直接檢測(cè)體內(nèi)被抗體或（和）補(bǔ)體致敏紅細(xì)胞的試驗(yàn)稱之為直接抗球蛋白試驗(yàn)。原理患者體內(nèi)若有與紅細(xì)胞抗原不相合的不完全抗體存在，可與紅細(xì)39直接Coombs試驗(yàn)抗人球蛋白自身抗體致敏RBC可見(jiàn)凝集直接Coombs試驗(yàn)抗人球蛋白自身抗體致敏RBC可見(jiàn)凝集40手工法操作1、取患者抗凝全血適量于試管中，加生理鹽水洗滌3次，最后一次洗滌離心后，棄上清液，用生理鹽水配成5%紅細(xì)胞懸液；2、取3支試管，作好標(biāo)記（患者、陽(yáng)性、陰性）；3、取患者5%紅懸液1滴于試管中，加生理鹽水洗滌一次；盡可能棄凈上清液；4、在陽(yáng)、陰性試管中分別加入陽(yáng)性和陰性對(duì)照紅懸液1滴；5、在各管中滴加多特異性抗球蛋白試劑1滴，混勻；6、同時(shí)以1000r/min離心1分鐘，輕輕搖動(dòng)，先用肉眼觀察管底紅細(xì)胞的凝集，再用低倍鏡觀察手工法操作1、取患者抗凝全血適量于試管中，加生理鹽水洗滌341柱凝集卡式法操作1、取出柱凝集Coombs卡、室溫平衡并做好標(biāo)記（患者、陽(yáng)性、陰性）。2、分別加入1%被檢紅懸、陽(yáng)性紅懸、陰性紅懸各50ul。3、不孵育，將卡放入專用離心機(jī)離心。4、取出凝集Coombs卡，觀察試驗(yàn)結(jié)果。柱凝集卡式法操作1、取出柱凝集Coombs卡、室溫平衡并做好42DAT操作表反應(yīng)物檢測(cè)管陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照被檢紅細(xì)胞懸液1滴陽(yáng)性紅細(xì)胞懸液1滴陰性紅細(xì)胞懸液1滴抗人球蛋白試劑1滴1滴1滴DAT操作表反應(yīng)物檢測(cè)管陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照被檢紅細(xì)胞懸43微柱卡Coombs試驗(yàn)RBC可免洗滌因?yàn)镽BC的密度遠(yuǎn)大于血清中的球蛋白，當(dāng)離心時(shí)，RBC的沉降速率遠(yuǎn)大于球蛋白，故RBC首先和凝膠中的抗人球蛋白反應(yīng)，而不受血清中的球蛋白干擾，從而可免除洗滌這一步驟。微柱卡Coombs試驗(yàn)RBC可免洗滌因?yàn)镽BC的密度遠(yuǎn)大于血44結(jié)果判斷先觀察陰性和陽(yáng)性對(duì)照管，陰性對(duì)照管無(wú)凝集，陽(yáng)性對(duì)照管出現(xiàn)+++—++++凝集，說(shuō)明檢測(cè)管結(jié)果可信。被檢測(cè)管凝集，直接抗球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性，不凝集者為陰性。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性，要加陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明該陰性結(jié)果可靠。結(jié)果判斷先觀察陰性和陽(yáng)性對(duì)照管，陰性對(duì)照管無(wú)凝集，陽(yáng)性對(duì)照管45柱凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)柱凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)46間接Coombs試驗(yàn)（IAT）間接Coombs試驗(yàn)47原理用已知抗原的紅細(xì)胞檢測(cè)受檢者血清中相應(yīng)的不完全抗體；或用已知的不完全抗體檢測(cè)紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原。在37℃條件下，若被檢血清或紅細(xì)胞有對(duì)應(yīng)的不完全抗體或抗原，則抗原抗體作用使紅細(xì)胞致敏再加抗人球蛋白試劑，與紅細(xì)胞上不完全抗體結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)凝集。這種通過(guò)體外將紅細(xì)胞致敏后，再檢測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)不完全抗體或抗原的試驗(yàn)稱為間接抗人球蛋白試驗(yàn)。原理用已知抗原的紅細(xì)胞檢測(cè)受檢者血清中相應(yīng)的不完全抗體；或用48間接Coombs試驗(yàn)抗人免疫球蛋白同種異型抗體間接Coombs試驗(yàn)抗人免疫球蛋白同種異型抗體49手工法操作取被檢血清200ul于試管中，加入等量5%已知抗原紅懸液（或被檢5%紅懸液加入等量已知抗體血清），置37℃水浴1小時(shí)。如血清與紅細(xì)胞存在相應(yīng)特異性抗原抗體，則會(huì)使紅細(xì)胞致敏。取出試管，用生理鹽水洗滌后，參照直接Coombs試驗(yàn)方法操作。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明受檢者血清中有與已知紅細(xì)胞抗原相對(duì)應(yīng)的不完全抗體（或被檢者紅細(xì)胞上有與已知抗體相對(duì)應(yīng)的抗原手工法操作取被檢血清200ul于試管中，加入等量5%已知抗50柱凝集卡式法操作1、取出柱凝集Coombs卡、室溫平衡并做好標(biāo)記（患者、陽(yáng)性、陰性）。2、在患者孔中加入被檢血清和1%已知抗原紅懸液各50ul（或加入已知抗體血清和1%待檢抗原紅懸液各50ul）3、在陽(yáng)性、陰性孔中加入相應(yīng)1%紅懸液50ul4、同時(shí)放入專用孵育器孵育5、取出用專用離心機(jī)離心。6、實(shí)驗(yàn)結(jié)果同手工法柱凝集卡式法操作1、取出柱凝集Coombs卡、室溫平衡并做好51Coombs’試驗(yàn)臨床意義正常人Coombs試驗(yàn)直接與間接試驗(yàn)均為陰性本試驗(yàn)是診斷自身免疫性溶血性貧血(AIHA)的重要依據(jù)，特別是IgG型引起的溶血性貧血，直接反應(yīng)常呈強(qiáng)陽(yáng)性，間接反應(yīng)大多陰性，但亦可陽(yáng)性新生兒同種免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血病，直接及間接反應(yīng)均強(qiáng)陽(yáng)性，持續(xù)數(shù)周、換血輸血后數(shù)天內(nèi)可變?yōu)殛幮?，由于“ABO”血型不合引起的溶血病，直接常為陰性或弱陽(yáng)性，間接反應(yīng)為陽(yáng)性Coombs’試驗(yàn)臨床意義正常人Coombs試驗(yàn)直接與間接試52藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血①α-甲基多巴型：直接及間接反應(yīng)均陽(yáng)性。②青霉素型：直接反應(yīng)陽(yáng)性，間接反應(yīng)陰性③福阿亭型：（奎寧等藥物）抗體通常為IgM，偶有IgG型者，直接反應(yīng)為陽(yáng)性，間接反應(yīng)陰性冷凝集素綜合征：直接反應(yīng)陽(yáng)性，間接反應(yīng)陰性（37℃）。由于本病紅細(xì)胞膜附著的是補(bǔ)體C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗IgG或抗IgM抗血清做試驗(yàn)時(shí)則結(jié)果陰性，如以抗補(bǔ)體的抗血清做試驗(yàn)則直接反應(yīng)陽(yáng)性。藥物誘發(fā)的免疫性溶血性貧血53紅細(xì)胞血型不合引起的輸血反應(yīng)ABO或Rh血型不合輸血，供者的紅細(xì)胞被受者的血型抗體致敏，在供