食品安全檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)課件

食品安全檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)1課程簡介：《食品安全檢驗(yàn)技術(shù)》面向“食品質(zhì)量與安全”專業(yè)本科生，主要介紹食品中危害殘留物質(zhì)的檢驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)課程為該課程的實(shí)驗(yàn)教學(xué)環(huán)節(jié)，要求學(xué)生能根據(jù)檢驗(yàn)內(nèi)容選擇合適的分析方法，根據(jù)檢測結(jié)果對(duì)食品安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。共有學(xué)時(shí)數(shù)20學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容包括：“蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)測定”等。實(shí)驗(yàn)教學(xué)中包括技能型和綜合型實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)，以提高學(xué)生的安全檢測操作能力和綜合應(yīng)用能力。課程簡介：2實(shí)驗(yàn)一蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)法測定（綜合型）實(shí)驗(yàn)二對(duì)蝦中氯霉素含量的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測（技能型）實(shí)驗(yàn)三魚體中組胺含量的分光光度法檢測

（技能型）實(shí)驗(yàn)四飲料中食用合成著色劑的測定（設(shè)計(jì)型）目錄實(shí)驗(yàn)一蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)法測定（綜合3【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步掌握蔬菜中農(nóng)藥殘留量生物化學(xué)法測定的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法，比較兩種常見的生物化學(xué)測定法，酶抑制率法和速測卡法的異同；培養(yǎng)學(xué)生綜合運(yùn)用理論知識(shí)，分析和解決問題的能力。實(shí)驗(yàn)一蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)法測定【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步掌握蔬菜中農(nóng)藥殘留量生物化學(xué)法測4【實(shí)驗(yàn)原理】生物化學(xué)測定方法根據(jù)其檢測手段又可分為速測卡法和酶抑制率法。速測卡法的原理是根據(jù)膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸和靛酚（藍(lán)色），有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有抑制作用，使催化水解、變色的過程發(fā)生改變，由此可判斷出樣品中是否含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。酶抑制率法的原理是在一定條件下，有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有抑制作用，其有抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下酶催化乙酰膽堿水解生成膽堿，膽堿在顯色劑的作用下產(chǎn)生黃色物質(zhì)，該黃色在412nm處有特征吸收峰，用可見分光光度計(jì)或農(nóng)藥殘毒快速檢測儀進(jìn)行測定。

【實(shí)驗(yàn)原理】生物化學(xué)測定方法根據(jù)其檢測手段又可分為速測卡法5【實(shí)驗(yàn)步驟】1、速測卡法（紙片法）檢測①滴2~3滴洗脫液在菜葉正面近葉尖部分，用另一片菜葉滴葉處輕輕摩擦。②取一片速測卡，將菜葉上洗出的水滴1滴在白色藥片上，靜置10min。③將速測卡對(duì)折，用手捏3min。④打開速測卡，白色藥片變藍(lán)色為正常反應(yīng)，不變藍(lán)或顯淡藍(lán)色說明有過量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留。每批同時(shí)做一片無農(nóng)藥對(duì)照。【實(shí)驗(yàn)步驟】1、速測卡法（紙片法）檢測6【實(shí)驗(yàn)步驟】2、酶抑制率法檢測①取2g切碎樣本，置提取瓶內(nèi)，加入20mL提取試劑，震蕩1~2min；倒出上清液，靜置3~5min。于平底小試管中加入50μL酶液、3mL樣品提取液、50μL顯色劑，在37℃~38℃下培養(yǎng)30min。②于待測的小試管內(nèi)加入50μL底物，倒入比色杯內(nèi)，進(jìn)行儀器測定。同時(shí)做對(duì)照組（對(duì)照組的平底小試管中用3mL提取試劑代替樣本提取液）?！緦?shí)驗(yàn)步驟】2、酶抑制率法檢測7【注意事項(xiàng)】1、速測卡法檢測中，當(dāng)溫度低于37℃時(shí)，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，藥片加液后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相對(duì)延長。延長時(shí)間的確定，應(yīng)以空白對(duì)照卡用手指捏3min時(shí)可以變藍(lán)。2、速測卡法檢測中，預(yù)反應(yīng)后藥片表面必須保持潤濕。3、采用酶抑制率法測定韭菜、生姜、蔥、蒜、辣椒、胡蘿卜等蔬菜中農(nóng)藥時(shí)，不要剪得太碎，浸提時(shí)間不能太長，對(duì)于這類蔬菜必要時(shí)可采取整株浸提。一些葉綠素含量較高的蔬菜也是如此。4、當(dāng)溫度條件低于37℃時(shí)，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長，延長時(shí)間的確定應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測試3min的吸光度變化A0值在0.3以上，即可往下操作。5、當(dāng)吸光度過大無法讀取時(shí)，說明測定溶液渾濁有干擾?！咀⒁馐马?xiàng)】1、速測卡法檢測中，當(dāng)溫度低于37℃時(shí)，酶反應(yīng)的8【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹窟M(jìn)一步學(xué)習(xí)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)法的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法，確實(shí)掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測定蝦肉中氯霉素含量的基本原理、實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果的分析。實(shí)驗(yàn)二對(duì)蝦中氯霉素含量的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹窟M(jìn)一步學(xué)習(xí)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)法的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法，9【實(shí)驗(yàn)原理】抗原與抗體能發(fā)生特異性的免疫化學(xué)反應(yīng)。以競爭性酶聯(lián)免疫反應(yīng)為例：酶標(biāo)記抗原與樣品或標(biāo)準(zhǔn)體中的非標(biāo)記抗原（氯霉素）具有相同的與抗體結(jié)合的能力，兩者競爭與固相載體包被的抗體結(jié)合反應(yīng)。洗滌多余的酶標(biāo)抗原，加酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化顯色，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。在整個(gè)反應(yīng)當(dāng)中，樣品中氯霉素含量越多，反應(yīng)顯色就越淡。反之，樣品中氯霉素含量越少，則顯色越深?！緦?shí)驗(yàn)原理】抗原與抗體能發(fā)生特異性的免疫化學(xué)反應(yīng)。以競爭性10【實(shí)驗(yàn)步驟】1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備①從冰箱取出試劑盒，將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮萃取稀釋液、濃縮洗滌液、酶標(biāo)記物、底物溶液及微量測試孔條置于室溫下回溫30min。②配制原倍萃取稀釋液及洗滌液：用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液都分別用蒸餾水按1:9的比例稀釋。【實(shí)驗(yàn)步驟】1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備11【實(shí)驗(yàn)步驟】2、樣品制備①將3g對(duì)蝦肉剪碎后放入50mL帶塞離心管中，加入6mL乙酸乙酯，用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)約1min，再震蕩約30s。②離心（3000rpm，10min），取2mL上清液至玻璃管中，于50℃下氮?dú)獯蹈?。③于上述玻璃管中加入正己?mL，先將殘余物完全溶解后，再加入1mL原倍萃取稀釋液，震蕩約30s。④離心（3000rpm，10min），用吸管吸去上層液及中間乳化層部分，棄掉，取下層液備用。【實(shí)驗(yàn)步驟】2、樣品制備12【實(shí)驗(yàn)步驟】3、操作測定①取一定的微量測試孔條，于適當(dāng)微孔中分別加入100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液（六個(gè)濃度）。②在另外的微孔中加入100μL已完成前處理的樣品溶液③在每一微孔中加入50μL酶標(biāo)記物。④輕敲盤子四周，使其充分混合后于室溫下避光靜置溫育1h。⑤甩掉微孔中的反應(yīng)液，再將洗液加滿每一微孔后甩掉，重復(fù)洗3次，最后一次甩掉洗液后，在吸水紙上拍干。⑥于每一微孔中加入底物溶液100μL后，輕敲盤子四周，使其充分混合，室溫下避光靜置溫育20min。⑦于每一微孔中加入100μL反應(yīng)終止液，用酶標(biāo)儀于波長450nm下判讀。【實(shí)驗(yàn)步驟】3、操作測定13【注意事項(xiàng)】1、使用前先將試劑盒置于室溫下，回溫30min。回溫后，取出所需微量測試孔條，將剩余板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好，置于4℃保存。2、濃縮萃取稀釋液和濃縮洗滌液使用前必須稀釋。3、每次吸取不同的液體時(shí)一定要換移液槍的吸頭。4、加樣時(shí)必須小心勿濺出微孔外，以免造成其他微孔的污染，加樣品或試劑時(shí)槍頭請(qǐng)勿接觸微孔。5、洗滌必須充分，重復(fù)3次。6、溫育時(shí)，要蓋上塑料片或標(biāo)簽紙，置于暗處，溫育時(shí)間不夠不要隨意取出。7、試劑盒較貴且量很少，請(qǐng)準(zhǔn)確量取，不要造成浪費(fèi)?！咀⒁馐马?xiàng)】1、使用前先將試劑盒置于室溫下，回溫30min。14【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步學(xué)習(xí)并掌握分光光度法檢測魚肉中組胺含量的實(shí)驗(yàn)原理和實(shí)驗(yàn)方法；培養(yǎng)學(xué)生分析和解決問題的能力。

實(shí)驗(yàn)三魚體中組胺含量的分光光度法檢測

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹眶~體中的組胺用正戊醇提取后，與偶氮試劑反應(yīng)顯橙色，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。最低檢出濃度為5mg/100g?！緦?shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步學(xué)習(xí)并掌握分光光度法檢測魚肉中組15【實(shí)驗(yàn)步驟】1、組胺標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備2、樣品中組胺的提取

取10g切碎的魚肉于具塞錐形瓶中，加入20mL三氯乙酸（100g/L），60℃水浴中浸泡30min，過濾。取2.0mL濾液于分液漏斗中，加氫氧化鈉溶液（250g/L）使呈堿性（pH9～10）。加入3mL正戊醇，振搖5min，提取三次。合并三次的正戊醇提取液并用正戊醇定容至10.0mL。吸取2.0mL正戊醇提取液于分液漏斗中，用鹽酸（1:1）振搖提取3次，合并鹽酸提取液并定容至10.0mL，備用。【實(shí)驗(yàn)步驟】1、組胺標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備16【實(shí)驗(yàn)步驟】3、樣品中組胺的測定取1.0mL鹽酸提取液于10mL比色管中，加水至2mL；同時(shí)取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液分別置于10mL比色管中，加水到1mL，再各加1mL鹽酸（1:1）；標(biāo)準(zhǔn)管與樣品管各加3mL碳酸鈉溶液（50g/L），3mL偶氮試劑，加水至10.0mL，混勻，放置10min后以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于480nm處測比色測定，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。【實(shí)驗(yàn)步驟】3、樣品中組胺的測定17【注意事項(xiàng)】1、偶氮試劑必須臨配現(xiàn)用。2、用正戊醇提取三氯乙酸溶液中的組胺時(shí)，必須用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH值至堿性，使組胺游離便于提取；而在用鹽酸（1:1）提取時(shí)則必須使溶液呈酸性，使組胺能成為鹽酸鹽而溶于鹽酸提取液中。3、組胺測定過程中，標(biāo)準(zhǔn)管和測定各管的條件必須控制一致，保證顯色反應(yīng)的穩(wěn)定性和一致性。4、組胺與偶氮試劑的反應(yīng)須在弱堿性條件下進(jìn)行，且反應(yīng)時(shí)間控制10min?！咀⒁馐马?xiàng)】1、偶氮試劑必須臨配現(xiàn)用。18【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^本實(shí)驗(yàn)，要求學(xué)生熟悉在食品安全性檢驗(yàn)過程中，綜合運(yùn)用所學(xué)理論知識(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的總體原則和基本方法；掌握薄層色譜—分光光度法分離和測定合成著色劑的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法；進(jìn)一步了解我國食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)食用合成色素的規(guī)定以及我國飲料中添加劑的使用情況；培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)能力、獨(dú)立分析和解決問題的能力以及綜合運(yùn)用知識(shí)的能力。實(shí)驗(yàn)四飲料中食用合成著色劑的測定

（設(shè)計(jì)型實(shí)驗(yàn)）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^本實(shí)驗(yàn)，要求學(xué)生熟悉在食品安全性檢驗(yàn)過程中19【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】學(xué)生自主選擇市售的各種飲料，根據(jù)所學(xué)的基礎(chǔ)理論知識(shí)，結(jié)合現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)條件，通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，設(shè)計(jì)簡易可行的實(shí)驗(yàn)方案，對(duì)飲料中莧菜紅、胭脂紅、檸檬黃、日落黃及亮藍(lán)5種食用合成著色劑進(jìn)行提取、分離以及定性和定量檢測。根據(jù)我國食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)市售飲料中合成著色劑的使用情況進(jìn)行評(píng)價(jià)和比較。【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】學(xué)生自主選擇市售的各種飲料，根據(jù)所學(xué)的基礎(chǔ)理論20【實(shí)驗(yàn)要求】本實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生有目的地選擇市售飲料（每組至少選擇三種，每班至少選擇20種），根據(jù)所選飲料的性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目要求獨(dú)立設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、準(zhǔn)備和完成實(shí)驗(yàn)并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和討論；每組提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告一份，綜合各組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，每班擬寫一份湛江市售飲料中合成著色劑使用情況的調(diào)查報(bào)告?！緦?shí)驗(yàn)要求】本實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生有目的地選擇市售飲料（每組至少選21【實(shí)驗(yàn)思考題】1、提取分離食用合成著色劑的基本原理是什么？2、樣品前處理過程中吸附色素除了聚酰胺粉還有哪些材料可用？3、薄層色譜法分離檢測合成著色劑的基本原理是什么？4、影響薄層色譜—分光光度法檢測食用合成著色劑含量的因素主要有哪些？如何降低其影響？5、食用合成著色劑混合物的分離方法除薄層色譜法之外還有哪些？試簡述其基本原理?！緦?shí)驗(yàn)思考題】1、提取分離食用合成著色劑的基本原理是什么？22食品安全檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)食品安全檢驗(yàn)技術(shù)23課程簡介：《食品安全檢驗(yàn)技術(shù)》面向“食品質(zhì)量與安全”專業(yè)本科生，主要介紹食品中危害殘留物質(zhì)的檢驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)課程為該課程的實(shí)驗(yàn)教學(xué)環(huán)節(jié)，要求學(xué)生能根據(jù)檢驗(yàn)內(nèi)容選擇合適的分析方法，根據(jù)檢測結(jié)果對(duì)食品安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。共有學(xué)時(shí)數(shù)20學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容包括：“蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)測定”等。實(shí)驗(yàn)教學(xué)中包括技能型和綜合型實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)，以提高學(xué)生的安全檢測操作能力和綜合應(yīng)用能力。課程簡介：24實(shí)驗(yàn)一蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)法測定（綜合型）實(shí)驗(yàn)二對(duì)蝦中氯霉素含量的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測（技能型）實(shí)驗(yàn)三魚體中組胺含量的分光光度法檢測

（技能型）實(shí)驗(yàn)四飲料中食用合成著色劑的測定（設(shè)計(jì)型）目錄實(shí)驗(yàn)一蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)法測定（綜合25【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步掌握蔬菜中農(nóng)藥殘留量生物化學(xué)法測定的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法，比較兩種常見的生物化學(xué)測定法，酶抑制率法和速測卡法的異同；培養(yǎng)學(xué)生綜合運(yùn)用理論知識(shí)，分析和解決問題的能力。實(shí)驗(yàn)一蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學(xué)法測定【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步掌握蔬菜中農(nóng)藥殘留量生物化學(xué)法測26【實(shí)驗(yàn)原理】生物化學(xué)測定方法根據(jù)其檢測手段又可分為速測卡法和酶抑制率法。速測卡法的原理是根據(jù)膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸和靛酚（藍(lán)色），有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有抑制作用，使催化水解、變色的過程發(fā)生改變，由此可判斷出樣品中是否含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。酶抑制率法的原理是在一定條件下，有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有抑制作用，其有抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下酶催化乙酰膽堿水解生成膽堿，膽堿在顯色劑的作用下產(chǎn)生黃色物質(zhì)，該黃色在412nm處有特征吸收峰，用可見分光光度計(jì)或農(nóng)藥殘毒快速檢測儀進(jìn)行測定。

【實(shí)驗(yàn)原理】生物化學(xué)測定方法根據(jù)其檢測手段又可分為速測卡法27【實(shí)驗(yàn)步驟】1、速測卡法（紙片法）檢測①滴2~3滴洗脫液在菜葉正面近葉尖部分，用另一片菜葉滴葉處輕輕摩擦。②取一片速測卡，將菜葉上洗出的水滴1滴在白色藥片上，靜置10min。③將速測卡對(duì)折，用手捏3min。④打開速測卡，白色藥片變藍(lán)色為正常反應(yīng)，不變藍(lán)或顯淡藍(lán)色說明有過量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留。每批同時(shí)做一片無農(nóng)藥對(duì)照?！緦?shí)驗(yàn)步驟】1、速測卡法（紙片法）檢測28【實(shí)驗(yàn)步驟】2、酶抑制率法檢測①取2g切碎樣本，置提取瓶內(nèi)，加入20mL提取試劑，震蕩1~2min；倒出上清液，靜置3~5min。于平底小試管中加入50μL酶液、3mL樣品提取液、50μL顯色劑，在37℃~38℃下培養(yǎng)30min。②于待測的小試管內(nèi)加入50μL底物，倒入比色杯內(nèi)，進(jìn)行儀器測定。同時(shí)做對(duì)照組（對(duì)照組的平底小試管中用3mL提取試劑代替樣本提取液）?！緦?shí)驗(yàn)步驟】2、酶抑制率法檢測29【注意事項(xiàng)】1、速測卡法檢測中，當(dāng)溫度低于37℃時(shí)，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，藥片加液后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相對(duì)延長。延長時(shí)間的確定，應(yīng)以空白對(duì)照卡用手指捏3min時(shí)可以變藍(lán)。2、速測卡法檢測中，預(yù)反應(yīng)后藥片表面必須保持潤濕。3、采用酶抑制率法測定韭菜、生姜、蔥、蒜、辣椒、胡蘿卜等蔬菜中農(nóng)藥時(shí)，不要剪得太碎，浸提時(shí)間不能太長，對(duì)于這類蔬菜必要時(shí)可采取整株浸提。一些葉綠素含量較高的蔬菜也是如此。4、當(dāng)溫度條件低于37℃時(shí)，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長，延長時(shí)間的確定應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測試3min的吸光度變化A0值在0.3以上，即可往下操作。5、當(dāng)吸光度過大無法讀取時(shí)，說明測定溶液渾濁有干擾?！咀⒁馐马?xiàng)】1、速測卡法檢測中，當(dāng)溫度低于37℃時(shí)，酶反應(yīng)的30【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹窟M(jìn)一步學(xué)習(xí)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)法的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法，確實(shí)掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測定蝦肉中氯霉素含量的基本原理、實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果的分析。實(shí)驗(yàn)二對(duì)蝦中氯霉素含量的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹窟M(jìn)一步學(xué)習(xí)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)法的基本原理和實(shí)驗(yàn)方法，31【實(shí)驗(yàn)原理】抗原與抗體能發(fā)生特異性的免疫化學(xué)反應(yīng)。以競爭性酶聯(lián)免疫反應(yīng)為例：酶標(biāo)記抗原與樣品或標(biāo)準(zhǔn)體中的非標(biāo)記抗原（氯霉素）具有相同的與抗體結(jié)合的能力，兩者競爭與固相載體包被的抗體結(jié)合反應(yīng)。洗滌多余的酶標(biāo)抗原，加酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化顯色，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。在整個(gè)反應(yīng)當(dāng)中，樣品中氯霉素含量越多，反應(yīng)顯色就越淡。反之，樣品中氯霉素含量越少，則顯色越深?！緦?shí)驗(yàn)原理】抗原與抗體能發(fā)生特異性的免疫化學(xué)反應(yīng)。以競爭性32【實(shí)驗(yàn)步驟】1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備①從冰箱取出試劑盒，將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮萃取稀釋液、濃縮洗滌液、酶標(biāo)記物、底物溶液及微量測試孔條置于室溫下回溫30min。②配制原倍萃取稀釋液及洗滌液：用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液都分別用蒸餾水按1:9的比例稀釋?！緦?shí)驗(yàn)步驟】1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備33【實(shí)驗(yàn)步驟】2、樣品制備①將3g對(duì)蝦肉剪碎后放入50mL帶塞離心管中，加入6mL乙酸乙酯，用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)約1min，再震蕩約30s。②離心（3000rpm，10min），取2mL上清液至玻璃管中，于50℃下氮?dú)獯蹈?。③于上述玻璃管中加入正己?mL，先將殘余物完全溶解后，再加入1mL原倍萃取稀釋液，震蕩約30s。④離心（3000rpm，10min），用吸管吸去上層液及中間乳化層部分，棄掉，取下層液備用?！緦?shí)驗(yàn)步驟】2、樣品制備34【實(shí)驗(yàn)步驟】3、操作測定①取一定的微量測試孔條，于適當(dāng)微孔中分別加入100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液（六個(gè)濃度）。②在另外的微孔中加入100μL已完成前處理的樣品溶液③在每一微孔中加入50μL酶標(biāo)記物。④輕敲盤子四周，使其充分混合后于室溫下避光靜置溫育1h。⑤甩掉微孔中的反應(yīng)液，再將洗液加滿每一微孔后甩掉，重復(fù)洗3次，最后一次甩掉洗液后，在吸水紙上拍干。⑥于每一微孔中加入底物溶液100μL后，輕敲盤子四周，使其充分混合，室溫下避光靜置溫育20min。⑦于每一微孔中加入100μL反應(yīng)終止液，用酶標(biāo)儀于波長450nm下判讀。【實(shí)驗(yàn)步驟】3、操作測定35【注意事項(xiàng)】1、使用前先將試劑盒置于室溫下，回溫30min?；販睾?，取出所需微量測試孔條，將剩余板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好，置于4℃保存。2、濃縮萃取稀釋液和濃縮洗滌液使用前必須稀釋。3、每次吸取不同的液體時(shí)一定要換移液槍的吸頭。4、加樣時(shí)必須小心勿濺出微孔外，以免造成其他微孔的污染，加樣品或試劑時(shí)槍頭請(qǐng)勿接觸微孔。5、洗滌必須充分，重復(fù)3次。6、溫育時(shí)，要蓋上塑料片或標(biāo)簽紙，置于暗處，溫育時(shí)間不夠不要隨意取出。7、試劑盒較貴且量很少，請(qǐng)準(zhǔn)確量取，不要造成浪費(fèi)。【注意事項(xiàng)】1、使用前先將試劑盒置于室溫下，回溫30min。36【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步學(xué)習(xí)并掌握分光光度法檢測魚肉中組胺含量的實(shí)驗(yàn)原理和實(shí)驗(yàn)方法；培養(yǎng)學(xué)生分析和解決問題的能力。

實(shí)驗(yàn)三魚體中組胺含量的分光光度法檢測

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹眶~體中的組胺用正戊醇提取后，與偶氮試劑反應(yīng)顯橙色，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。最低檢出濃度為5mg/100g?！緦?shí)驗(yàn)?zāi)康摹客ㄟ^實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步學(xué)習(xí)并掌握分光光度法檢測魚肉中組37【實(shí)驗(yàn)步驟】1、組胺標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備2、樣品中組胺的提取

取10g切碎的魚肉于具塞錐形瓶中，加入20mL三氯乙酸（100g/L），60℃水浴中浸泡30min，過濾。取2.0mL濾液于分液漏斗中，加氫氧化鈉溶液（250g/L）使呈堿性（pH9～10）。加入3mL正戊醇，振搖5min，提取三次。合并三次的正戊醇提取液并用正戊醇定容至10.0mL。吸取2.0mL正戊醇提取液于分液漏斗中，用鹽酸（1:1）振搖提取3次，合并鹽酸提取液并定容至10.0mL，備用?！緦?shí)驗(yàn)步驟】1、組胺標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備38【實(shí)驗(yàn)步驟】3、樣品中組胺的測定取1.0mL鹽酸提取液于10mL比色管中，加水至2mL；同時(shí)取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液分別置于10mL比色管中，加水到1mL，再各加1mL鹽酸（1:1）；標(biāo)準(zhǔn)管與樣品管各加3mL碳酸鈉溶液（50g/L），3mL偶氮試劑，加水至10.0mL，混勻，放置10min后以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于480nm處測比色測定，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?！緦?shí)驗(yàn)步驟】3、樣品中組胺的測定39【注意事項(xiàng)】1、偶氮試劑必須臨配現(xiàn)用。2、用正戊醇提取三氯乙酸溶液中的組胺時(shí)，必須用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH值至堿性，使組胺游離便于提??；而在用鹽酸（1:1）提取時(shí)則必須使溶液呈酸性，使組胺能成為鹽