米酒的檢驗技術(shù)及規(guī)范操作課件

米酒的檢驗技術(shù)及規(guī)范操作米酒的檢驗技術(shù)及規(guī)范操作1內(nèi)容背景1檢驗依據(jù)2檢驗項目3記錄及報告4內(nèi)容背景1檢驗依據(jù)2檢驗項目3記錄及報告42背景總批數(shù)合格數(shù)不合格數(shù)不合格項合格率78780/100%孝感市食品藥品檢驗檢測中心米酒檢驗概況表12015年度米酒微生物檢驗匯總表背景總批數(shù)合格數(shù)不合格數(shù)不合格項合格率78780/100%3米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)NY/T1885-2010綠色食品米酒1DB42/T27-2009孝感米酒23四十九類食品產(chǎn)品生產(chǎn)許可證審查細(xì)則匯編米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)NY/T1885-2010綠色食品米酒1D4米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)NY/T1885-2010綠色食品米酒適用于各類綠色食品米酒表2衛(wèi)生指標(biāo)項目指標(biāo)菌落總數(shù)b，cfu/g≤50大腸菌群b，MPN/g＜3致病菌（沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）不得檢出商業(yè)無菌商業(yè)無菌a

僅適用于罐頭包裝產(chǎn)品。b

僅適用于非罐頭包裝產(chǎn)品。米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)NY/T1885-2010綠色食品米酒表25大腸菌群GB4789.3-2010沙門氏菌GB4789.4-2010溶血性鏈球菌GB4789.11-2014金黃色葡萄球菌GB4789.10-2010菌落總數(shù)GB4789.2-2010志賀氏菌GB4789.5-2012NY/T1885-2010綠色食品米酒米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)大腸菌群沙門氏菌溶血性鏈球菌金黃色葡萄球菌菌落總數(shù)志賀氏菌N6DB42/T27-2009孝感米酒適用于孝感市孝南區(qū)生產(chǎn)的以孝感秈糯為主要原料，經(jīng)特種酒曲發(fā)酵，可添加白砂糖、木耳、桂花、紅棗等輔料，加工制成的固形物小于48%的孝感米酒飲品。米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)表3微生物指標(biāo)項目要求細(xì)菌總數(shù)/（cfu/g）≤100大腸菌群/（MPN/100g）≤6致病菌（沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）不得檢出DB42/T27-2009孝感米酒米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)表3微生7大腸菌群GB/T4789.3-2003沙門氏菌GB4789.4-2010溶血性鏈球菌GB4789.11-2014金黃色葡萄球菌GB4789.10-2010菌落總數(shù)GB4789.2-2010志賀氏菌GB4789.5-2012DB42/T27-2009孝感米酒米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)大腸菌群沙門氏菌溶血性鏈球菌金黃色葡萄球菌菌落總數(shù)志賀氏菌D8四十九類食品產(chǎn)品生產(chǎn)許可證審查細(xì)則匯編附件34：其他酒生產(chǎn)許可證審查細(xì)則（2006版）檢驗項目：發(fā)證檢驗、監(jiān)督檢驗、出廠檢驗分別按下表列出的相應(yīng)檢驗項目進(jìn)行。出廠檢驗項目欄中注有“*”標(biāo)記的，企業(yè)應(yīng)當(dāng)每年檢驗2次。米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)序號項目名稱發(fā)證監(jiān)督出廠備注9腸道致病菌√√*僅對發(fā)酵酒表4產(chǎn)品質(zhì)量檢驗項目表四十九類食品產(chǎn)品生產(chǎn)許可證審查細(xì)則匯編米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)序號項目名9菌落總數(shù)大腸菌群沙門氏菌志賀氏菌金黃色葡萄球菌檢驗項目溶血性鏈球菌菌落總數(shù)大腸菌群沙門氏菌志賀氏菌金黃色葡萄球菌檢驗項目溶血性10菌落總數(shù)檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.2-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定菌落總數(shù)：食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等）培養(yǎng)后，所得每g檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。菌落總數(shù)檢驗標(biāo)準(zhǔn)：11菌落總數(shù)菌落總數(shù)12制備1:100樣品勻液制備1:10樣品勻液制備10倍樣品勻液取樣并制備平板稱取25g

樣品置盛有225mL

磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成

1:10

的樣品勻液。

用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100

的樣品勻液。按上一步操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。及時將15mL～20mL

冷卻至46℃

的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。1、樣品的稀釋菌落總數(shù)制備1:100樣品勻液制備1:10樣品勻液制備10倍樣品勻液13菌落總數(shù)2、培養(yǎng)2.1待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h。2.2如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按2.1條件進(jìn)行培養(yǎng)。菌落總數(shù)2、培養(yǎng)141選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。3當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。2其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。菌落總數(shù)3、菌落計數(shù)可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位（colony-formingunits，CFU）表示。1選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌15菌落總數(shù)4、結(jié)果與報告4.1菌落總數(shù)的計算方法4.1.1若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。4.1.2若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按公式（1）計算

N=∑C/(n1+0.1n2)d………………（1）式中：N——樣品中菌落數(shù)；∑C——平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；n2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；d——稀釋因子（第一稀釋度）。

菌落總數(shù)4、結(jié)果與報告16菌落總數(shù)4.2菌落總數(shù)的報告4.2.1菌落數(shù)小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。4.2.2菌落數(shù)大于或等于100CFU時，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。4.2.3若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。4.2.4若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。4.2.5稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。菌落總數(shù)4.2菌落總數(shù)的報告17大腸菌群計數(shù)檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB/T4789.3-2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗大腸菌群測定檢驗程序見下圖大腸菌群計數(shù)檢驗標(biāo)準(zhǔn)：18大腸菌群計數(shù)GB4789.3-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)大腸菌群：在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。包括腸桿菌科的埃希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬和克雷伯氏菌屬。大腸菌群與腸道致病菌的來源相同，在外界中的生存力接近，在檢驗方法上，也以大腸菌群的檢驗計數(shù)簡便易行，因此可作為水、土壤、乳品、食品飲料等被糞便污染的間接指標(biāo)。大腸菌群計數(shù)GB4789.3-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)19大腸菌群計數(shù)GB4789.3-2010第一法大腸菌群MPN計數(shù)法檢驗程序如下圖大腸菌群計數(shù)GB4789.3-2010第一法大腸菌群M20大腸菌群計數(shù)大腸埃希氏菌大腸桿菌（Escherichiacoli，E.coli）革蘭氏陰性短桿菌，大小0.5×1～3微米。周生鞭毛，能運(yùn)動，無芽孢。能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和動物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進(jìn)入腸道，與人終身相伴，幾乎占糞便干重的1/3。大腸菌群計數(shù)大腸埃希氏菌21大腸菌群計數(shù)液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩緩注入9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1mL無菌吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15min。1、樣品的稀釋大腸菌群計數(shù)液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有22522大腸菌群計數(shù)2、初發(fā)酵試驗每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯，每管接種1mL（如接種量超過1mL，則用雙料LST肉湯），36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24h±2h產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗，如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48h±2h，產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。大腸菌群計數(shù)2、初發(fā)酵試驗23大腸菌群計數(shù)3、復(fù)發(fā)酵試驗用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管中，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管。4、報告按3確證的大腸菌群LST陽性管數(shù)，檢索MPN表（見附錄B），報告每g（mL）樣品中大腸菌群的MPN值。大腸菌群計數(shù)3、復(fù)發(fā)酵試驗24大腸菌群計數(shù)大腸菌群計數(shù)25大腸菌群檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB/T4789.3-2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗大腸菌群測定檢驗程序見下圖大腸菌群檢驗標(biāo)準(zhǔn)：26大腸菌群制備1:100樣品勻液制備1:10樣品勻液制備10倍樣品勻液移取樣品以無菌操作將檢樣25g（mL）放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以8000r/min～10000r/min的速度處理1min，做成1:10的均勻稀釋液。

用1mL無菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管中，振搖試管混合均勻，制成1:100的樣品勻液。另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度，接種三管。1、樣品的稀釋大腸菌群制備1:100樣品勻液制備1:10樣品勻液制備10倍27大腸菌群2、乳糖發(fā)酵試驗將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL及以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管，置36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。3、分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36℃±1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18h~24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗。伊紅美藍(lán)瓊脂：伊紅Y和美藍(lán)抑制絕大部分革蘭氏陽性菌的生長。伊紅Y為酸性染料，美藍(lán)為堿性染料，瓊脂是凝固劑。大腸菌群發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸時，細(xì)菌帶正電荷，所以染上伊紅(紅色)，再與美藍(lán)結(jié)合形成紫黑色菌落，大部分有金屬光澤。大腸菌群2、乳糖發(fā)酵試驗伊紅美藍(lán)瓊脂：伊紅Y和美藍(lán)抑制絕大部28大腸菌群4、證實(shí)試驗在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1~2個進(jìn)行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，觀察產(chǎn)氣情況，凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。5、報告根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報告每100mL（g）大腸菌群的MPN值。大腸菌群4、證實(shí)試驗29沙門氏菌沙門氏菌是一種食源性致病菌94%沙門氏菌感染是由于攝食受污染的食品在養(yǎng)殖動物中廣泛存在常通過動物源性食品傳遞給人是引起食物中毒爆發(fā)的主要病原菌之一革蘭氏陰性桿菌，通常有鞭毛，不形成芽孢沙門氏菌沙門氏菌是一種食源性致病菌30沙門氏菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.4-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗檢驗程序如下圖沙門氏菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：31沙門氏菌操作步驟1、前增菌稱取25g（mL）樣品放入盛有225mLBPW的無菌均質(zhì)杯中，以8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或置于盛有225mLBPW的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如需測定pH值，用1mol/mL無菌NaOH或HCl調(diào)pH至6.8±0.2。無菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500mL錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于36℃±1℃培養(yǎng)8h～18h。如為冷凍產(chǎn)品,應(yīng)在45℃以下不超過15min,或2℃～5℃不超過18h解凍。2、增菌輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取1mL，轉(zhuǎn)種于10mLTTB內(nèi)，于42℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。同時，另取1mL，轉(zhuǎn)種于10mLSC內(nèi)，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。沙門氏菌操作步驟32沙門氏菌3、分離分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個BS瓊脂平板和一個XLD瓊脂平板（或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。于36℃±1℃分別培養(yǎng)18h～24h（XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）或40h～48h（BS瓊脂平板），觀察各個平板上生長的菌落，各個平板上的菌落特征見下表。沙門氏菌3、分離33沙門氏菌沙門氏菌分別在BS、XLD、HE、顯色培養(yǎng)基平板上的菌落特征圖沙門氏菌沙門氏菌分別在BS、XLD、HE、顯色培養(yǎng)基平板上的34沙門氏菌4、生化試驗5、血清學(xué)鑒定6、結(jié)果與報告綜合以上生化試驗和血清學(xué)鑒定的結(jié)果，報告25g（mL）樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。沙門氏菌4、生化試驗35志賀氏菌(Shigella)，也稱志賀菌或者痢疾桿菌，是一類革蘭氏陰性、不活動、不產(chǎn)生孢子的桿狀細(xì)菌，可引起人和其他哺乳類動物的細(xì)菌性痢疾。大小為0.5～0.7×2～3μm，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，多數(shù)有菌毛，革蘭氏陰性桿菌。細(xì)菌性痢疾簡稱菌痢。是志賀菌屬引起的腸道傳染病。臨床表現(xiàn)主要有發(fā)冷、發(fā)熱、腹痛、腹瀉、里急后重、排粘液膿血樣大便。菌痢常年散發(fā)，夏秋多見，是我國的常見病、多發(fā)病。志賀氏菌志賀氏菌(Shigella)，也稱志賀菌或者痢疾桿菌，是一類36志賀氏菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.5-2012食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗志賀氏菌檢驗檢驗程序如下圖志賀氏菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：37志賀氏菌操作步驟：1、增菌以無菌操作取檢樣25g（mL），加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min～10000r/min均質(zhì)；或加入裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均1min～2min，液體樣品振蕩混勻即可。于41.5℃±１℃，厭氧培養(yǎng)16h～20h。志賀氏菌操作步驟：38志賀氏菌2、分離取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上，于36℃±1℃培養(yǎng)20h～24h，觀察各個平板上生長的菌落形態(tài)。宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)至48h再進(jìn)行觀察。志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見表1。志賀氏菌2、分離39志賀氏菌志賀氏菌在XLD、MAC培養(yǎng)基平板上的菌落特征圖志賀氏菌志賀氏菌在XLD、MAC培養(yǎng)基平板上的菌落特征圖40志賀氏菌3、生化試驗4、血清學(xué)鑒定5、結(jié)果與報告綜合以上生化試驗和血清學(xué)鑒定的結(jié)果，報告25g（mL）樣品中檢出或未檢出志賀氏菌。志賀氏菌3、生化試驗41金黃色葡萄球菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.10-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗程序如下圖金黃色葡萄球菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：42金黃色葡萄球菌操作步驟1、樣品的處理稱取25g樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。若樣品為液態(tài)，吸取25mL樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)可預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中，振蕩混勻。金黃色葡萄球菌操作步驟43金黃色葡萄球菌2、增菌和分離培養(yǎng)2.1將上述樣品勻液于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長，污染嚴(yán)重時在10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯內(nèi)呈混濁生長。2.2將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h或45h～48h。金黃色葡萄球菌2、增菌和分離培養(yǎng)44金黃色葡萄球菌2.3金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直徑為2mm～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。在血平板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈。挑取上述菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。金黃色葡萄球菌2.3金黃色葡萄球菌在Baird-Park45金黃色葡萄球菌3鑒定3.1染色鏡檢：金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列呈葡萄球狀，無芽胞，無莢膜，直徑約為0.5μm～1μm。3.2血漿凝固酶試驗：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1個或以上，分別接種到5mLBHI和營養(yǎng)瓊脂小斜面，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。取新鮮配置兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入BHI培養(yǎng)物0.2mL～0.3mL，振蕩搖勻，置36℃±1℃溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，被判定為陽性結(jié)果。同時以血漿凝固酶試驗陽性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對照。結(jié)果如可疑，挑取營養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5mLBHI，36℃±1℃培養(yǎng)18h～48h，重復(fù)試驗。金黃色葡萄球菌3鑒定46金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌革蘭氏染色鏡檢圖金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實(shí)驗圖金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌474、結(jié)果與報告4.1結(jié)果判定符合2.3、3，可判定為金黃色葡萄球菌4.2結(jié)果報告在25g（mL）樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌4、結(jié)果與報告金黃色葡萄球菌48溶血性鏈球菌溶血性鏈球菌又稱沙培林,對熱和化學(xué)清毒劑均敏感，常引起扁桃體、咽部、中耳等感染。亦為腎盂腎炎、產(chǎn)褥熱、猩紅熱的病原體。鏈球菌呈球形或橢圓形，直徑0.6-1.0μm，呈鏈狀排列，長短不一，從4-8個至20-30個菌細(xì)胞組成不等，鏈的長短與細(xì)菌的種類及生長環(huán)境有關(guān)。該菌不形成芽胞，無鞭毛，易被普通的堿性染料著色，革蘭氏陽性，老齡培養(yǎng)或被中性粒細(xì)胞吞噬后，轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。溶血性鏈球菌溶血性鏈球菌又稱沙培林,對熱和化學(xué)清毒劑均敏感，49檢驗標(biāo)準(zhǔn)GB4789.11-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗β型溶血性鏈球菌檢驗β型溶血：在菌落周圍形成完全透明的溶血環(huán)，紅細(xì)胞完全溶解。β型溶血性鏈球菌：能夠產(chǎn)生β型溶血的化膿（或A群）鏈球菌（Streptococcuspyogenes）和無乳（或B群）鏈球菌（Streptococcusagalactiae）。溶血性鏈球菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)溶血性鏈球菌50檢驗程序如下圖溶血性鏈球菌檢驗程序如下圖溶血性鏈球菌51操作步驟1、樣品處理及增菌按無菌操作稱取檢樣25g（mL），加入盛有225mLmTSB的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)1min～2min；或加入盛有225mLmTSB的均質(zhì)杯中，以8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min。若樣品為液態(tài)，振蕩均勻即可。36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。溶血性鏈球菌操作步驟溶血性鏈球菌522、分離將增菌液劃線接種于哥倫比亞CNA血瓊脂平板，36℃±1℃厭氧培養(yǎng)18h～24h，觀察菌落形態(tài)。溶血性鏈球菌在哥倫比亞CNA血瓊脂平板上的典型菌落形態(tài)為直徑約2mm～3mm，

灰白色、半透明、光滑、表面突起、圓形、邊緣整齊，并產(chǎn)生β型溶血。溶血性鏈球菌2、分離溶血性鏈球菌536、鑒定7、結(jié)果與報告綜合以上試驗結(jié)果，報告每25g（mL）檢樣中檢出或未檢出溶血性鏈球菌。溶血性鏈球菌6、鑒定溶血性鏈球菌54米酒原始記錄米酒原始記錄55米酒的檢驗技術(shù)及規(guī)范操作米酒的檢驗技術(shù)及規(guī)范操作56內(nèi)容背景1檢驗依據(jù)2檢驗項目3記錄及報告4內(nèi)容背景1檢驗依據(jù)2檢驗項目3記錄及報告457背景總批數(shù)合格數(shù)不合格數(shù)不合格項合格率78780/100%孝感市食品藥品檢驗檢測中心米酒檢驗概況表12015年度米酒微生物檢驗匯總表背景總批數(shù)合格數(shù)不合格數(shù)不合格項合格率78780/100%58米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)NY/T1885-2010綠色食品米酒1DB42/T27-2009孝感米酒23四十九類食品產(chǎn)品生產(chǎn)許可證審查細(xì)則匯編米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)NY/T1885-2010綠色食品米酒1D59米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)NY/T1885-2010綠色食品米酒適用于各類綠色食品米酒表2衛(wèi)生指標(biāo)項目指標(biāo)菌落總數(shù)b，cfu/g≤50大腸菌群b，MPN/g＜3致病菌（沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）不得檢出商業(yè)無菌商業(yè)無菌a

僅適用于罐頭包裝產(chǎn)品。b

僅適用于非罐頭包裝產(chǎn)品。米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)NY/T1885-2010綠色食品米酒表260大腸菌群GB4789.3-2010沙門氏菌GB4789.4-2010溶血性鏈球菌GB4789.11-2014金黃色葡萄球菌GB4789.10-2010菌落總數(shù)GB4789.2-2010志賀氏菌GB4789.5-2012NY/T1885-2010綠色食品米酒米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)大腸菌群沙門氏菌溶血性鏈球菌金黃色葡萄球菌菌落總數(shù)志賀氏菌N61DB42/T27-2009孝感米酒適用于孝感市孝南區(qū)生產(chǎn)的以孝感秈糯為主要原料，經(jīng)特種酒曲發(fā)酵，可添加白砂糖、木耳、桂花、紅棗等輔料，加工制成的固形物小于48%的孝感米酒飲品。米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)表3微生物指標(biāo)項目要求細(xì)菌總數(shù)/（cfu/g）≤100大腸菌群/（MPN/100g）≤6致病菌（沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）不得檢出DB42/T27-2009孝感米酒米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)表3微生62大腸菌群GB/T4789.3-2003沙門氏菌GB4789.4-2010溶血性鏈球菌GB4789.11-2014金黃色葡萄球菌GB4789.10-2010菌落總數(shù)GB4789.2-2010志賀氏菌GB4789.5-2012DB42/T27-2009孝感米酒米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)大腸菌群沙門氏菌溶血性鏈球菌金黃色葡萄球菌菌落總數(shù)志賀氏菌D63四十九類食品產(chǎn)品生產(chǎn)許可證審查細(xì)則匯編附件34：其他酒生產(chǎn)許可證審查細(xì)則（2006版）檢驗項目：發(fā)證檢驗、監(jiān)督檢驗、出廠檢驗分別按下表列出的相應(yīng)檢驗項目進(jìn)行。出廠檢驗項目欄中注有“*”標(biāo)記的，企業(yè)應(yīng)當(dāng)每年檢驗2次。米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)序號項目名稱發(fā)證監(jiān)督出廠備注9腸道致病菌√√*僅對發(fā)酵酒表4產(chǎn)品質(zhì)量檢驗項目表四十九類食品產(chǎn)品生產(chǎn)許可證審查細(xì)則匯編米酒檢驗標(biāo)準(zhǔn)序號項目名64菌落總數(shù)大腸菌群沙門氏菌志賀氏菌金黃色葡萄球菌檢驗項目溶血性鏈球菌菌落總數(shù)大腸菌群沙門氏菌志賀氏菌金黃色葡萄球菌檢驗項目溶血性65菌落總數(shù)檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.2-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定菌落總數(shù)：食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等）培養(yǎng)后，所得每g檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。菌落總數(shù)檢驗標(biāo)準(zhǔn)：66菌落總數(shù)菌落總數(shù)67制備1:100樣品勻液制備1:10樣品勻液制備10倍樣品勻液取樣并制備平板稱取25g

樣品置盛有225mL

磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成

1:10

的樣品勻液。

用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100

的樣品勻液。按上一步操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。及時將15mL～20mL

冷卻至46℃

的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。1、樣品的稀釋菌落總數(shù)制備1:100樣品勻液制備1:10樣品勻液制備10倍樣品勻液68菌落總數(shù)2、培養(yǎng)2.1待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h。2.2如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按2.1條件進(jìn)行培養(yǎng)。菌落總數(shù)2、培養(yǎng)691選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。3當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。2其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。菌落總數(shù)3、菌落計數(shù)可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位（colony-formingunits，CFU）表示。1選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌70菌落總數(shù)4、結(jié)果與報告4.1菌落總數(shù)的計算方法4.1.1若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。4.1.2若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按公式（1）計算

N=∑C/(n1+0.1n2)d………………（1）式中：N——樣品中菌落數(shù)；∑C——平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；n2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；d——稀釋因子（第一稀釋度）。

菌落總數(shù)4、結(jié)果與報告71菌落總數(shù)4.2菌落總數(shù)的報告4.2.1菌落數(shù)小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。4.2.2菌落數(shù)大于或等于100CFU時，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。4.2.3若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。4.2.4若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。4.2.5稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。菌落總數(shù)4.2菌落總數(shù)的報告72大腸菌群計數(shù)檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB/T4789.3-2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗大腸菌群測定檢驗程序見下圖大腸菌群計數(shù)檢驗標(biāo)準(zhǔn)：73大腸菌群計數(shù)GB4789.3-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)大腸菌群：在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。包括腸桿菌科的埃希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬、腸桿菌屬和克雷伯氏菌屬。大腸菌群與腸道致病菌的來源相同，在外界中的生存力接近，在檢驗方法上，也以大腸菌群的檢驗計數(shù)簡便易行，因此可作為水、土壤、乳品、食品飲料等被糞便污染的間接指標(biāo)。大腸菌群計數(shù)GB4789.3-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)74大腸菌群計數(shù)GB4789.3-2010第一法大腸菌群MPN計數(shù)法檢驗程序如下圖大腸菌群計數(shù)GB4789.3-2010第一法大腸菌群M75大腸菌群計數(shù)大腸埃希氏菌大腸桿菌（Escherichiacoli，E.coli）革蘭氏陰性短桿菌，大小0.5×1～3微米。周生鞭毛，能運(yùn)動，無芽孢。能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和動物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進(jìn)入腸道，與人終身相伴，幾乎占糞便干重的1/3。大腸菌群計數(shù)大腸埃希氏菌76大腸菌群計數(shù)液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩緩注入9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1mL無菌吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15min。1、樣品的稀釋大腸菌群計數(shù)液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有22577大腸菌群計數(shù)2、初發(fā)酵試驗每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯，每管接種1mL（如接種量超過1mL，則用雙料LST肉湯），36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24h±2h產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗，如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48h±2h，產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。大腸菌群計數(shù)2、初發(fā)酵試驗78大腸菌群計數(shù)3、復(fù)發(fā)酵試驗用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管中，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管。4、報告按3確證的大腸菌群LST陽性管數(shù)，檢索MPN表（見附錄B），報告每g（mL）樣品中大腸菌群的MPN值。大腸菌群計數(shù)3、復(fù)發(fā)酵試驗79大腸菌群計數(shù)大腸菌群計數(shù)80大腸菌群檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB/T4789.3-2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗大腸菌群測定檢驗程序見下圖大腸菌群檢驗標(biāo)準(zhǔn)：81大腸菌群制備1:100樣品勻液制備1:10樣品勻液制備10倍樣品勻液移取樣品以無菌操作將檢樣25g（mL）放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以8000r/min～10000r/min的速度處理1min，做成1:10的均勻稀釋液。

用1mL無菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管中，振搖試管混合均勻，制成1:100的樣品勻液。另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度，接種三管。1、樣品的稀釋大腸菌群制備1:100樣品勻液制備1:10樣品勻液制備10倍82大腸菌群2、乳糖發(fā)酵試驗將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL及以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管，置36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。3、分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36℃±1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18h~24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗。伊紅美藍(lán)瓊脂：伊紅Y和美藍(lán)抑制絕大部分革蘭氏陽性菌的生長。伊紅Y為酸性染料，美藍(lán)為堿性染料，瓊脂是凝固劑。大腸菌群發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸時，細(xì)菌帶正電荷，所以染上伊紅(紅色)，再與美藍(lán)結(jié)合形成紫黑色菌落，大部分有金屬光澤。大腸菌群2、乳糖發(fā)酵試驗伊紅美藍(lán)瓊脂：伊紅Y和美藍(lán)抑制絕大部83大腸菌群4、證實(shí)試驗在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1~2個進(jìn)行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，觀察產(chǎn)氣情況，凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。5、報告根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報告每100mL（g）大腸菌群的MPN值。大腸菌群4、證實(shí)試驗84沙門氏菌沙門氏菌是一種食源性致病菌94%沙門氏菌感染是由于攝食受污染的食品在養(yǎng)殖動物中廣泛存在常通過動物源性食品傳遞給人是引起食物中毒爆發(fā)的主要病原菌之一革蘭氏陰性桿菌，通常有鞭毛，不形成芽孢沙門氏菌沙門氏菌是一種食源性致病菌85沙門氏菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.4-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗檢驗程序如下圖沙門氏菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：86沙門氏菌操作步驟1、前增菌稱取25g（mL）樣品放入盛有225mLBPW的無菌均質(zhì)杯中，以8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或置于盛有225mLBPW的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如需測定pH值，用1mol/mL無菌NaOH或HCl調(diào)pH至6.8±0.2。無菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500mL錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于36℃±1℃培養(yǎng)8h～18h。如為冷凍產(chǎn)品,應(yīng)在45℃以下不超過15min,或2℃～5℃不超過18h解凍。2、增菌輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取1mL，轉(zhuǎn)種于10mLTTB內(nèi)，于42℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。同時，另取1mL，轉(zhuǎn)種于10mLSC內(nèi)，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。沙門氏菌操作步驟87沙門氏菌3、分離分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個BS瓊脂平板和一個XLD瓊脂平板（或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。于36℃±1℃分別培養(yǎng)18h～24h（XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）或40h～48h（BS瓊脂平板），觀察各個平板上生長的菌落，各個平板上的菌落特征見下表。沙門氏菌3、分離88沙門氏菌沙門氏菌分別在BS、XLD、HE、顯色培養(yǎng)基平板上的菌落特征圖沙門氏菌沙門氏菌分別在BS、XLD、HE、顯色培養(yǎng)基平板上的89沙門氏菌4、生化試驗5、血清學(xué)鑒定6、結(jié)果與報告綜合以上生化試驗和血清學(xué)鑒定的結(jié)果，報告25g（mL）樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。沙門氏菌4、生化試驗90志賀氏菌(Shigella)，也稱志賀菌或者痢疾桿菌，是一類革蘭氏陰性、不活動、不產(chǎn)生孢子的桿狀細(xì)菌，可引起人和其他哺乳類動物的細(xì)菌性痢疾。大小為0.5～0.7×2～3μm，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，多數(shù)有菌毛，革蘭氏陰性桿菌。細(xì)菌性痢疾簡稱菌痢。是志賀菌屬引起的腸道傳染病。臨床表現(xiàn)主要有發(fā)冷、發(fā)熱、腹痛、腹瀉、里急后重、排粘液膿血樣大便。菌痢常年散發(fā)，夏秋多見，是我國的常見病、多發(fā)病。志賀氏菌志賀氏菌(Shigella)，也稱志賀菌或者痢疾桿菌，是一類91志賀氏菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.5-2012食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗志賀氏菌檢驗檢驗程序如下圖志賀氏菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：92志賀氏菌操作步驟：1、增菌以無菌操作取檢樣25g（mL），加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min～10000r/min均質(zhì)；或加入裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均1min～2min，液體樣品振蕩混勻即可。于41.5℃±１℃，厭氧培養(yǎng)16h～20h。志賀氏菌操作步驟：93志賀氏菌2、分離取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上，于36℃±1℃培養(yǎng)20h～24h，觀察各個平板上生長的菌落形態(tài)。宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)至48h再進(jìn)行觀察。志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見表1。志賀氏菌2、分離94志賀氏菌志賀氏菌在XLD、MAC培養(yǎng)基平板上的菌落特征圖志賀氏菌志賀氏菌在XLD、MAC培養(yǎng)基平板上的菌落特征圖95志賀氏菌3、生化試驗4、血清學(xué)鑒定5、結(jié)果與報告綜合以上生化試驗和血清學(xué)鑒定的結(jié)果，報告25g（mL）樣品中檢出或未檢出志賀氏菌。志賀氏菌3、生化試驗96金黃色葡萄球菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：GB4789.10-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗程序如下圖金黃色葡萄球菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)：97金黃色葡萄球菌操作步驟1、樣品的處理稱取25g樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。若樣品為液態(tài)，吸取25mL樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)可預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中，振蕩混勻。金黃色葡萄球菌操作步驟98金黃色葡萄球菌2、增菌和分離培養(yǎng)2.1將上述樣品勻