實(shí)驗(yàn)七-石蠟切片法2課件

實(shí)驗(yàn)八石蠟切片法——染色、封藏實(shí)驗(yàn)八石蠟切片法——染色、封藏實(shí)驗(yàn)七--石蠟切片法2課件切片通過(guò)不同方法，使其干燥，然后進(jìn)行染色。因?yàn)槊恳粡堓d片上粘貼的是蠟帶，因此必須先用二甲苯去除石蠟再用酒精去除二甲苯，再進(jìn)入水中，才能染色，染色的方法很多，要根據(jù)每張標(biāo)本要求顯示的目的選擇不同的染劑，染色后顯示清晰的細(xì)胞形態(tài)和核的大小，位置，然后使帶水的載片經(jīng)歷脫水→透明等步驟最后用樹(shù)膠封片。實(shí)驗(yàn)原理切片通過(guò)不同方法，使其干燥，然后進(jìn)行染色。因?yàn)槊恳粡堓d片上粘染色原理－－物理作用滲透作用：染料滲透到多孔的組織中，與組織沒(méi)有牢固的結(jié)合；吸收作用：又稱溶解學(xué)說(shuō)，組織吸收染料中的色素粒子，與之牢固結(jié)合，組織著色與染液的顏色相同，不一定與干燥染料的顏色相同。如品紅在干燥時(shí)為綠色，而其溶液呈紅色，組織在染色后也呈紅色，即使組織干燥后，其紅顏色不變；吸附作用：染液中分散的色素粒子進(jìn)入被染物質(zhì)的粒子間隙內(nèi)，由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色，也由于各種蛋白質(zhì)或膠體有不同的吸附面，因此可以吸附不同的粒子，也就是說(shuō)對(duì)粒子的吸附有選擇性，即有的容易被某些物質(zhì)吸附，有的則不容易吸附。染色原理－－物理作用滲透作用：染料滲透到多孔的組織中，與組織染色原理－－化學(xué)作用化學(xué)作用的主要理論根據(jù)是染色劑的性質(zhì)可分為酸性、堿性和中性染色劑，而動(dòng)、植物的細(xì)胞內(nèi)—般也可區(qū)分為酸性(陰離子)和堿性(陽(yáng)離子)部分。當(dāng)堿性染色劑溶液中的有色部分成為陽(yáng)離子時(shí)，就能與細(xì)胞的陰離子(酸件部分)較牢固地結(jié)合，當(dāng)酸性染色劑溶液中的有色部分成為陰離子時(shí)，就能與細(xì)胞內(nèi)的陽(yáng)離子(堿性部分)較牢固地結(jié)合。例如，細(xì)胞核，尤其是核內(nèi)的染色質(zhì)，主要由核酸組成，是酸性的組成成分．故和堿性染色劑(蘇木精)的親和力很強(qiáng)，易于著色。細(xì)胞質(zhì)含堿性物質(zhì)，故和酸性染色劑(伊紅、曙紅)的親和力很大，易于著色。染色原理－－化學(xué)作用化學(xué)作用的主要理論根據(jù)是染色劑的性質(zhì)可分常用染色劑分類按染料的化學(xué)性質(zhì)可分為：堿性染料、酸性染料、直接染料、媒染染料、中性染料；根據(jù)染料的來(lái)源可分為：天然染料（此類染色劑是從動(dòng)、植物體中提取的，為天然產(chǎn)物，產(chǎn)量少。目前常用的有蘇木精、洋紅、地衣紅和靛藍(lán)等）和合成染料（全是由芳香環(huán)或具有芳香性的雜環(huán)化合物所構(gòu)成。最早是由煤焦油蒸餾產(chǎn)物合成而得的，所以又稱為煤焦油染料）。根據(jù)染料的用途可分為：細(xì)胞核染色劑（用于細(xì)胞核的染色劑有天然染色劑的蘇木精、洋紅以及合成染色劑中的番紅、結(jié)品紫、硫堇、甲苯胺藍(lán)、甲基綠、美藍(lán)、孔雀綠和焦油紫等）、細(xì)胞質(zhì)染色劑（用于細(xì)胞質(zhì)的染色劑有合成染色劑中的曙紅、亮綠、橘黃G、酸性品紅、苦味酸和水溶性苯胺藍(lán)等）和脂質(zhì)染色劑（用于顯示脂質(zhì)的染色劑有合成染色劑中的蘇丹III、蘇丹Iv、硫酸尼羅藍(lán)及油紅等）。常用染色劑分類按染料的化學(xué)性質(zhì)可分為：堿性染料、酸性染一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆談?dòng)植物材料石蠟切片的方法及要求；學(xué)習(xí)和掌握番紅-固綠及蘇木精-伊紅雙重染色方法。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆談?dòng)植物材料石蠟切片的方法及要求；二、實(shí)驗(yàn)材料及用品實(shí)驗(yàn)材料：上周已切和貼好的植物葉片、小鼠肝臟的切片實(shí)驗(yàn)用具：蓋玻片、染色缸、鑷子、顯微鏡。實(shí)驗(yàn)藥品：梯度酒精、?二甲苯+?100%酒精、二甲苯、蘇木精染色液、1%伊紅水溶液、1%番紅水溶液、1%固綠95%酒精溶液、加拿大樹(shù)膠。二、實(shí)驗(yàn)材料及用品實(shí)驗(yàn)材料：上周已切和貼好的植物葉片、小鼠肝三、實(shí)驗(yàn)步驟（1）番紅-固綠二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ?二甲苯+?100%酒精100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸餾水1%番紅水溶液水洗50%80%70%95%1%固綠95%酒精溶液95%100%?二甲苯+?100%酒精二甲苯樹(shù)膠封藏脫蠟復(fù)水染色脫水對(duì)染脫水透明封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min10min10min10min10min10-60s洗一下5min5min5min1.5-2h三、實(shí)驗(yàn)步驟（1）番紅-固綠二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ?二甲苯+三、實(shí)驗(yàn)步驟（2）蘇木精-伊紅（HE）二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ?二甲苯+?100%AL100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸餾水蘇木精染色液水洗氨水中“藍(lán)化”1%伊紅水溶液蒸餾水漂洗70%AL80%AL95%AL100%AL?二甲苯+?100%AL二甲苯樹(shù)膠封藏脫蠟復(fù)水染色對(duì)染脫水透明封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min3-4s5min，換幾次3min過(guò)一下5min5min5min5min5min20min5min，換幾次三、實(shí)驗(yàn)步驟（2）蘇木精-伊紅（HE）二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ染色時(shí)注意的幾個(gè)問(wèn)題應(yīng)根據(jù)材料的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、觀察目的來(lái)選擇染色方法；材料從溶液中取出放入染色液時(shí)，此兩種溶液的濃度必須相同；作二重染色時(shí)，應(yīng)先染堿性染料，后染酸性染料；染色寧可深一點(diǎn)，不要淺一點(diǎn)；作分色用的酸、堿溶液必須徹底洗凈；制成的片子不要置于陽(yáng)光下，以免褪色。染色時(shí)注意的幾個(gè)問(wèn)題應(yīng)根據(jù)材料的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、觀察目的來(lái)選擇染封片注意事項(xiàng)切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不揮發(fā)，如已干，則可再滴加少許二甲苯；封片時(shí)萬(wàn)一樹(shù)膠量過(guò)少，可在蓋玻片有空隙的地方，再滴注少量樹(shù)膠使其慢慢布滿蓋玻片。封片注意事項(xiàng)切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不揮發(fā)，如已干四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果一張符合要求的切片應(yīng)該是：平整、透明、染色足夠，顏色鮮艷且分明、封片時(shí)沒(méi)有氣泡、樹(shù)膠不外溢、鏡檢時(shí)細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰。蘇木精-伊紅（簡(jiǎn)稱H·E）染色中：蘇木精使細(xì)胞核顯深紫色，伊紅使細(xì)胞質(zhì)顯粉紅色；番紅-固綠染色中：番紅可將木質(zhì)化細(xì)胞壁紅色，角質(zhì)化細(xì)胞壁粉紅色，栓化細(xì)胞壁黃褐色，染色體、核仁、中心體染紅色；固綠將纖維素細(xì)胞壁染成綠色，細(xì)胞質(zhì)染成淡綠色。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果一張符合要求的切片應(yīng)該是：平整、透明、染色足夠，五、作業(yè)實(shí)驗(yàn)完畢，每人交玻片兩張，用鉛筆在載玻片上寫上材料名稱及自己的姓名和日期；實(shí)驗(yàn)報(bào)告（姓名和日期）。五、作業(yè)實(shí)驗(yàn)完畢，每人交玻片兩張，用鉛筆在載玻片上寫上材料名實(shí)驗(yàn)八石蠟切片法——染色、封藏實(shí)驗(yàn)八石蠟切片法——染色、封藏實(shí)驗(yàn)七--石蠟切片法2課件切片通過(guò)不同方法，使其干燥，然后進(jìn)行染色。因?yàn)槊恳粡堓d片上粘貼的是蠟帶，因此必須先用二甲苯去除石蠟再用酒精去除二甲苯，再進(jìn)入水中，才能染色，染色的方法很多，要根據(jù)每張標(biāo)本要求顯示的目的選擇不同的染劑，染色后顯示清晰的細(xì)胞形態(tài)和核的大小，位置，然后使帶水的載片經(jīng)歷脫水→透明等步驟最后用樹(shù)膠封片。實(shí)驗(yàn)原理切片通過(guò)不同方法，使其干燥，然后進(jìn)行染色。因?yàn)槊恳粡堓d片上粘染色原理－－物理作用滲透作用：染料滲透到多孔的組織中，與組織沒(méi)有牢固的結(jié)合；吸收作用：又稱溶解學(xué)說(shuō)，組織吸收染料中的色素粒子，與之牢固結(jié)合，組織著色與染液的顏色相同，不一定與干燥染料的顏色相同。如品紅在干燥時(shí)為綠色，而其溶液呈紅色，組織在染色后也呈紅色，即使組織干燥后，其紅顏色不變；吸附作用：染液中分散的色素粒子進(jìn)入被染物質(zhì)的粒子間隙內(nèi)，由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色，也由于各種蛋白質(zhì)或膠體有不同的吸附面，因此可以吸附不同的粒子，也就是說(shuō)對(duì)粒子的吸附有選擇性，即有的容易被某些物質(zhì)吸附，有的則不容易吸附。染色原理－－物理作用滲透作用：染料滲透到多孔的組織中，與組織染色原理－－化學(xué)作用化學(xué)作用的主要理論根據(jù)是染色劑的性質(zhì)可分為酸性、堿性和中性染色劑，而動(dòng)、植物的細(xì)胞內(nèi)—般也可區(qū)分為酸性(陰離子)和堿性(陽(yáng)離子)部分。當(dāng)堿性染色劑溶液中的有色部分成為陽(yáng)離子時(shí)，就能與細(xì)胞的陰離子(酸件部分)較牢固地結(jié)合，當(dāng)酸性染色劑溶液中的有色部分成為陰離子時(shí)，就能與細(xì)胞內(nèi)的陽(yáng)離子(堿性部分)較牢固地結(jié)合。例如，細(xì)胞核，尤其是核內(nèi)的染色質(zhì)，主要由核酸組成，是酸性的組成成分．故和堿性染色劑(蘇木精)的親和力很強(qiáng)，易于著色。細(xì)胞質(zhì)含堿性物質(zhì)，故和酸性染色劑(伊紅、曙紅)的親和力很大，易于著色。染色原理－－化學(xué)作用化學(xué)作用的主要理論根據(jù)是染色劑的性質(zhì)可分常用染色劑分類按染料的化學(xué)性質(zhì)可分為：堿性染料、酸性染料、直接染料、媒染染料、中性染料；根據(jù)染料的來(lái)源可分為：天然染料（此類染色劑是從動(dòng)、植物體中提取的，為天然產(chǎn)物，產(chǎn)量少。目前常用的有蘇木精、洋紅、地衣紅和靛藍(lán)等）和合成染料（全是由芳香環(huán)或具有芳香性的雜環(huán)化合物所構(gòu)成。最早是由煤焦油蒸餾產(chǎn)物合成而得的，所以又稱為煤焦油染料）。根據(jù)染料的用途可分為：細(xì)胞核染色劑（用于細(xì)胞核的染色劑有天然染色劑的蘇木精、洋紅以及合成染色劑中的番紅、結(jié)品紫、硫堇、甲苯胺藍(lán)、甲基綠、美藍(lán)、孔雀綠和焦油紫等）、細(xì)胞質(zhì)染色劑（用于細(xì)胞質(zhì)的染色劑有合成染色劑中的曙紅、亮綠、橘黃G、酸性品紅、苦味酸和水溶性苯胺藍(lán)等）和脂質(zhì)染色劑（用于顯示脂質(zhì)的染色劑有合成染色劑中的蘇丹III、蘇丹Iv、硫酸尼羅藍(lán)及油紅等）。常用染色劑分類按染料的化學(xué)性質(zhì)可分為：堿性染料、酸性染一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆談?dòng)植物材料石蠟切片的方法及要求；學(xué)習(xí)和掌握番紅-固綠及蘇木精-伊紅雙重染色方法。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆談?dòng)植物材料石蠟切片的方法及要求；二、實(shí)驗(yàn)材料及用品實(shí)驗(yàn)材料：上周已切和貼好的植物葉片、小鼠肝臟的切片實(shí)驗(yàn)用具：蓋玻片、染色缸、鑷子、顯微鏡。實(shí)驗(yàn)藥品：梯度酒精、?二甲苯+?100%酒精、二甲苯、蘇木精染色液、1%伊紅水溶液、1%番紅水溶液、1%固綠95%酒精溶液、加拿大樹(shù)膠。二、實(shí)驗(yàn)材料及用品實(shí)驗(yàn)材料：上周已切和貼好的植物葉片、小鼠肝三、實(shí)驗(yàn)步驟（1）番紅-固綠二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ?二甲苯+?100%酒精100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸餾水1%番紅水溶液水洗50%80%70%95%1%固綠95%酒精溶液95%100%?二甲苯+?100%酒精二甲苯樹(shù)膠封藏脫蠟復(fù)水染色脫水對(duì)染脫水透明封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min10min10min10min10min10-60s洗一下5min5min5min1.5-2h三、實(shí)驗(yàn)步驟（1）番紅-固綠二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ?二甲苯+三、實(shí)驗(yàn)步驟（2）蘇木精-伊紅（HE）二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ?二甲苯+?100%AL100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸餾水蘇木精染色液水洗氨水中“藍(lán)化”1%伊紅水溶液蒸餾水漂洗70%AL80%AL95%AL100%AL?二甲苯+?100%AL二甲苯樹(shù)膠封藏脫蠟復(fù)水染色對(duì)染脫水透明封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min3-4s5min，換幾次3min過(guò)一下5min5min5min5min5min20min5min，換幾次三、實(shí)驗(yàn)步驟（2）蘇木精-伊紅（HE）二甲苯Ⅰ二甲苯Ⅱ染色時(shí)注意的幾個(gè)問(wèn)題應(yīng)根據(jù)材料的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、觀察目的來(lái)選擇染色方法；材料從溶液中取出放入染色液時(shí)，此兩種溶液的濃度必須相同；作二重染色時(shí)，應(yīng)先染堿性染料，后染酸性染料；染色寧可深一點(diǎn)，不要淺一點(diǎn)；作分色用的酸、堿溶液必須徹底洗凈；制成的片子不要置于陽(yáng)光下，以免褪色。染色時(shí)注意的幾個(gè)問(wèn)題應(yīng)根據(jù)材料的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、觀察目的來(lái)選擇染封片注意事項(xiàng)切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不揮發(fā)，如已干，則可再滴加少許二甲苯；封片時(shí)萬(wàn)一樹(shù)膠量過(guò)少，可在蓋玻片有空隙的地方，再滴注少量樹(shù)膠使其慢慢布滿蓋玻片。封片注意事項(xiàng)切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不揮發(fā)，如已干四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果一張符合要求的切片應(yīng)該是：平整、透明、染色足夠，顏