免疫原和抗血清制備技術(shù)

免疫原和抗血清制備技術(shù)第一節(jié)免疫原的制備第二節(jié)免疫血清的制備第三節(jié)抗體的純化和鑒定第一節(jié)免疫原的制備一、細(xì)胞性抗原的制備二、可溶性抗原制備及鑒定三、半抗原免疫原的制備四、佐劑

綿羊紅細(xì)胞的制備流程圖搖動15-20min

4℃可保存3周取適量NS洗滌3次2000r/min10minNS稀釋至2～5%

細(xì)菌細(xì)胞抗原的制備流程圖液體培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)37℃24h100℃水浴2～2.5h殺菌無菌試驗NS稀釋成8～10億/mlO菌體抗原返回來源:組織和細(xì)胞，其成分比較復(fù)雜。1.組織和細(xì)胞成分混合抗原制備2.蛋白質(zhì)抗原制備3.核酸抗原制備4.類脂多糖抗原制備5.免疫球蛋白片段制備6.純化抗原的鑒定

二、可溶性抗原制備及鑒定可溶性抗原:蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、酶類、補(bǔ)體、脂多糖、細(xì)菌外毒素和核酸二、可溶性抗原制備及鑒定返回

組織和細(xì)胞成分混合抗原制備程序上清液澄清所用材料必須是新鮮或低溫保存的去除包膜或結(jié)締組織臟器進(jìn)行灌洗洗去血跡及污物NS內(nèi)含0.5g／LNaN2冷浴中組織剪碎裝入搗碎機(jī)簡內(nèi)高速粉碎制成組織勻漿液3000r／min×10min取上清液去除細(xì)胞碎片及微小組織離心

細(xì)胞破碎技術(shù)及評價1.酶處理法2.凍融法3.超聲破碎法4.表面活性劑處理細(xì)胞破碎技術(shù)及評價

常用酶類：溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶等

1.酶處理法1.酶處理法方法：在一定的條件下，能消化細(xì)菌和組織細(xì)胞。

特點：①此法適用多種微生物；②具有作用條件溫和；③內(nèi)含物成分不易受到破壞；④細(xì)胞壁損壞的程度可以控制。

2.凍融法原理：因突然冷凍，細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成及胞內(nèi)外溶劑濃度的突然改變而破壞細(xì)胞。2.凍融法完方法：將待破碎的細(xì)胞置冰箱內(nèi)凍結(jié)，然后緩慢融化，如此反復(fù)兩次，大部分組織細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的顆粒可被融破。特點：此法適用于組織細(xì)胞，對微生物細(xì)胞作用較差。

3.超聲破碎法原理：利用超聲波的機(jī)械振動而使細(xì)胞破碎。由于超聲波發(fā)生空化作用（cavitation）使得液體形成局部減壓引起液體內(nèi)部發(fā)生流動，漩渦生成與消失時，產(chǎn)生很大的壓力，使細(xì)胞破碎。超聲波使用的頻率從1kHz～20kHz不等，間歇進(jìn)行，避免長期超聲產(chǎn)熱，導(dǎo)致抗原破壞。3.超聲破碎法特點：①操作簡單，重復(fù)性較好，節(jié)省時間；②多用于微生物和組織細(xì)胞的破碎。4.表面面活性劑劑處理原理：在適當(dāng)?shù)牡臏囟?、、pH及及低離子子強(qiáng)度的的條件下，表表面活性性劑能與與脂蛋白白形成微微泡，使膜的滲滲透性改改變或使使之溶解解。4.表面面活性劑劑處理常用的有有：十二烷基基硫酸鈉鈉(SDS,陰陰離子型型)、二乙胺十十六烷基基溴（陽陽離子型型）、聚聚山梨酯酯（非離子子型）、、新潔爾爾滅等。。應(yīng)用：①破碎細(xì)細(xì)菌，且且作用比比較溫和和；②提取核核酸時，，常用此此法破碎碎細(xì)胞。。蛋白質(zhì)抗抗原制備備蛋白質(zhì)是是良好的的抗原，，要制備備特異性性高的抗血清清通常需需要純化化?？刹刹捎茫?.超速速離心法法2.選擇擇性沉淀淀法3.凝膠膠層析法法4.離子子交換層層析法5.親合合層析法法蛋白質(zhì)抗抗原制備備1．超速速離心法法原理:利用各顆顆粒在梯梯度液中中沉降速速度不同同，使具有不不同沉降降速度的的顆粒,處于不不同密度度的梯度層層內(nèi)，達(dá)達(dá)到彼此此分離的的目的。。1．超速速離心法法特點：用超速離離心或梯梯度密度度離心法法純化抗抗原，極難難將某一一抗原成成分分離離出來。。應(yīng)用：用于少部部分大分分子抗原原和一些些比較輕輕的抗原物物質(zhì)的分分離，如如IgM、C1q、甲甲狀腺球球蛋白、載載脂蛋白白A、B等。2、選擇擇性沉淀淀法原理：根據(jù)各蛋蛋白質(zhì)理理化特性性的差異異，采用用各種沉淀淀劑或改改變某些些條件促促使蛋白白質(zhì)抗原原成分沉淀淀，從而而達(dá)到純純化的目目的。2、選擇擇性沉淀淀法常用方法法：鹽析沉淀淀法（不不同鹽濃濃度則溶溶解度不同））；常用用33～～50％％飽和度度的硫酸酸胺。特點：簡單方便便，純度度不高，，粗提球球蛋白。。應(yīng)用：在大量制制備中先先用此法法粗提，，再純化化。3．凝膠膠層析法法（凝膠膠過濾法法）原理：凝膠具有有三維空空間多孔孔網(wǎng)狀結(jié)結(jié)構(gòu)的物物質(zhì)，經(jīng)適當(dāng)溶溶液平衡衡后，裝裝入層析析柱。當(dāng)當(dāng)含有各各種分子大小小不一的的混合物物加在凝凝膠床面面時，大大分子物質(zhì)不不能進(jìn)入入凝膠顆顆粒的網(wǎng)網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)構(gòu)內(nèi)，在在凝膠顆粒之之間的空空隙中很很快地通通過凝膠膠床，短短時間內(nèi)被洗洗脫出來來；而分分子較小小的物質(zhì)質(zhì)則進(jìn)入入凝膠網(wǎng)孔結(jié)結(jié)構(gòu)內(nèi)，，反復(fù)受受到阻滯滯，洗脫脫較慢。。分成大、中中、小三三種類型型。3．凝膠膠層析法法（凝膠膠過濾法法）4．離子子交換層層析法原理：利用帶離離子基團(tuán)團(tuán)的纖維維素或凝凝膠，吸吸附交換換帶相反反電荷的的蛋白質(zhì)質(zhì)抗原。。各種蛋蛋白質(zhì)的的等電點點不同，，所帶電電荷不同同，與纖纖維素結(jié)結(jié)合的能能力有差差別。當(dāng)當(dāng)梯度洗洗脫時，，逐步增增加流動動相的離離子強(qiáng)度度，使加加入的離離子與蛋蛋白質(zhì)競競爭纖維維素上的的電荷位位置，，從而使使血清中中的蛋白白質(zhì)分成成γ球蛋蛋白、αα球蛋白白、β球球蛋白和和清蛋白白等幾個個部分而而被洗脫脫下來，，達(dá)到分分離純化化的目的的。4．離子子交換層層析法5．親和和層析法法（親和和色譜））原理：依據(jù)抗原原抗體的的生物學(xué)學(xué)活性進(jìn)進(jìn)行分離離和提純純的技術(shù)術(shù)。將純純化的抗抗IgG附著于惰惰性的固固相基質(zhì)質(zhì)上，制制成免疫疫吸附層層析柱。。當(dāng)樣品品流過此此柱時，，待分離離的IgG可選擇性性地與免免疫吸附附劑上的的特異性性配體(抗IgG)結(jié)合；當(dāng)當(dāng)改變洗洗脫條件件可重新新解離，，將待分分離的Ig洗脫下來來，達(dá)到到純化的的目的。。優(yōu)點：提取純度度高、抗抗原抗體體不失活活性。5．親和和層析法法（親和和色譜））正常細(xì)胞胞＋標(biāo)記細(xì)胞胞洗滴標(biāo)記細(xì)胞胞被酶裂解解加入特異異性抗體其它蛋白白洗滌流失失SDS分離蛋白白親和層析析法示意意圖核酸抗原原制備大分子的的核酸具具有免疫疫原性。。提取核酸酸的主要要步驟：：核酸抗原原制備破碎碎細(xì)細(xì)胞胞核酸酸從從細(xì)細(xì)胞胞中中游游離離出出來來酸沉沉淀淀核核除去去蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)乙醇醇酚和和氯氯仿仿類脂脂多多糖糖抗抗原原制制備備苯酚酚法法提提取取LPS：：干燥燥菌菌體體或或濕濕菌菌體體水中中混勻勻激烈烈攪攪勻勻加熱熱5min冰水水急冷冷降至至10℃℃以以下下離心心上層層的的水水層層(含含LPS)下層層的的酚酚層層菌體體殘殘渣渣于于底底部部吸取取水層層透析析除酚酚加熱熱超速速離離心心濃縮縮LPS在在上上層層沉沉淀淀的的透透明明膠膠狀狀部部內(nèi)內(nèi)絞出出懸于于水水中中離心心得純純化化LPS類脂脂多多糖糖抗抗原原制制備備同溫溫的的苯苯酚酚免疫疫球球蛋蛋白白片片段段制制備備1．．酶酶裂裂解解法法酶對對免免疫疫球球蛋蛋白白的的水水解解有有極極好好的專專一一性性，，不不同同的的酶酶可可將將免免疫疫球球蛋蛋白白裂裂解解為不不同同的的片片段段。。免疫疫球球蛋蛋白白片片段段制制備備2．．氧氧化化法法和和還還原原法法是將將免免疫疫球球蛋蛋白白輕輕、、重重鏈分分開開的的兩兩種種常常用用方方法法。。3.還可可用用強(qiáng)變變性性劑劑或利利用用改變變pH將免免疫疫球球蛋蛋白亞亞單單位位分分開開。。酶水水解解免免疫疫球球蛋蛋白白示示意意圖圖Fc段段，，用用以以制制備備抗抗重重鏈鏈血血清清F(ab’’)2，常常作作為為抗抗體體試試劑劑用用于于試試驗驗?zāi)竟瞎系暗鞍装酌该福╬apain)胰蛋蛋白白酶酶(pepsin)胃蛋蛋白白酶酶(pepsin)1.氧氧化化法法：：優(yōu)點點是是切切開開后后，，肽肽鏈鏈不不能能重重新新形成成二二硫硫鍵鍵、、便便于于肽肽鏈鏈純純化化；；缺點點是是色色氨氨酸酸側(cè)側(cè)鏈鏈容容易易被被破破壞壞。。氧化化法法和和還原原法法評評價價返回回2.還還原原法法：：將二二硫硫鍵鍵還還原原成成琉琉基基。。但但極極不不穩(wěn)定定，，易易重重新新形形成成二二硫硫鍵鍵，，必必須須及及時時用用碘乙乙酸酸或或碘碘化化酰酰胺胺進(jìn)進(jìn)行行羧羧甲甲基基化化。。純化化抗抗原原的的鑒鑒定定1.含含量量鑒鑒定定2.理理化化性性質(zhì)質(zhì)鑒鑒定定①凝凝膠膠層層析析技技術(shù)術(shù)測測定定②聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝膠膠電電泳泳③凝凝膠膠管管狀狀電電泳泳④超超速速離離心心3.純純度度鑒鑒定定常用用醋醋酸酸纖纖維維膜膜電電泳泳4.免免疫疫活活性性鑒鑒定定常用用雙雙向向瓊瓊脂脂擴(kuò)擴(kuò)散散試試驗驗純化化抗抗原原的的鑒鑒定定藍(lán)色色1．．含含量量鑒鑒定定在一一定定范范圍圍內(nèi)內(nèi)，，顏顏色色深深淺淺與與蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)濃濃度度呈呈直直線線相相關(guān)關(guān)。。方法法：：酚酚試試劑劑法法鑒鑒定定主要要試試劑劑：：磷磷鉬鉬酸酸-鎢鎢酸酸的的混混合合酸酸原理理：：蛋白白質(zhì)質(zhì)中中的的酪酪氨氨酸酸、、半半胱胱氨氨酸酸、、色色氨氨酸酸等等能能鎢酸酸、、鉬鉬酸酸還原原3H2OP205·13WO3·5MoO3·10H20和3H2P205·14WO3·4MoO3·10H20絡(luò)合合物物的的雙雙縮縮脲脲法法蛋白白質(zhì)質(zhì)＋＋Ca2+堿性性加深深含量量鑒鑒定定藍(lán)色色理化化性性質(zhì)質(zhì)鑒鑒定定已知知分分子子量量的的標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品品測未未知知分分子子量量：：將樣樣品品在在同同一一凝凝膠膠柱柱上上，，同同一一條條件下下層層析析、、洗洗脫脫、、測測保保留留體體積積，，并并查查出出分分子子量量。。此法簡便、、樣品用量量少，有一一定的實用用價值。凝膠柱保留體積分子量的對對數(shù)2.理化性性質(zhì)鑒定繪制標(biāo)準(zhǔn)曲曲線①凝膠層析析技術(shù)進(jìn)行行測定垂直電泳聚合成大分分子凝膠②聚丙烯酰胺胺凝膠電泳泳（PAGE）有分子篩效效應(yīng)、電荷荷效應(yīng)及濃濃縮效應(yīng)，，能精確地分離和和鑒定高分分子物質(zhì)。。PAG的分分子篩效應(yīng)應(yīng)測定蛋白白質(zhì)抗原的的分子量。。原理：雙丙烯酰胺胺N,N-methylenebisacrylamide,Bis丙烯酰胺(acrylamide,Acr)催化劑3.純度度鑒定方法：醋酸纖維膜膜電泳進(jìn)行行鑒定。返回純度鑒定原理：蛋白質(zhì)在一一定pH下下都帶有電電荷，由于于各種蛋白質(zhì)質(zhì)等電點不不同、分子子量也異，，因此所帶電量也也各不相同同，在外加加直流電場場的作用下，它們們泳動的速速度不同，，經(jīng)一段時時間后即可彼此分分開，形成成電泳譜；；從而判斷斷蛋白質(zhì)抗原的純純度。特點：快速簡便。。三、半抗原原免疫原的的制備1.半抗原原：低分子量的的化學(xué)物質(zhì)質(zhì)。例如多多糖、多肽、甾族族激素、脂脂肪胺、類類脂質(zhì)、核核苷、某些藥物(包括抗生生素）及其其他化學(xué)物物品等。三、半抗原原免疫原制制備2.載體：：蛋白質(zhì)類多肽聚合物物大分子聚合合物3.半抗原原-載體連連接方法:載體類型1.蛋白質(zhì)質(zhì)：人血清白蛋蛋白、牛血清白蛋蛋白、兔血清白蛋白白、牛甲狀狀腺球蛋白白等。載體類型2.多肽聚聚合物：人工合成的的，常見的的有多聚賴賴氨酸，其分分子量大（（可達(dá)十幾幾萬到幾十十萬)，這種多聚物物和半抗原原結(jié)合后，，可刺激免免疫動物產(chǎn)生高效效價、高親親和力的抗抗體。3.大聚合合物：羧甲基纖維維素、聚乙乙烯吡咯烷烷酮等，可與半半抗原結(jié)合合，加入弗弗氏完全佐佐劑亦可誘發(fā)動物物產(chǎn)生抗體體。半抗原-載載體連接方方法1碳化二亞胺胺法：R-NH=CH-R’半抗原＋載載體蛋白質(zhì)質(zhì)攪拌1～2h室溫24h透吸除去未未反應(yīng)的半半抗原人工免疫原原半抗原載體體連接方法法1混合混合半抗原-載載體連接方方法2戊二醛法:半抗原-NH2載體蛋白-NH2半抗原-N=CH-(CH2)3-CH=NH-載體體蛋白OHC-(CH2)3-CHO*戊二醛是是常用的帶帶有兩個活活性基團(tuán)的的雙功能聯(lián)接劑劑半抗原載體體連接方法法2半抗原-載載體連接方方法3氯甲酸異丁丁脂法：半抗原-COOH載體蛋白-NH2Cl-COO-CH2CH(CH3)2半抗抗原原-COO-COO-CH2CH(CH3)2半抗抗原原-CO-NH-載體體蛋蛋白白半抗抗原原載載體體連連接接方方法法3簡便便，，用用于于類類固固醇醇抗抗原原制制備備HO-CH2CH(CH3)2＋半抗抗原原-載載體體連連接接方方法法4琥珀珀酸酸酐酐法法：：用于于不不含含羧羧基基衍衍生生物物半半抗抗原原制制備備半抗抗原原-CH2OHCH2-COCH2-CO帶羧羧基基的的半半抗抗原原琥琥珀珀酸酸衍衍生生物物半抗抗原原-CH2-OOC-CH2-CH2-COOH返回回吡啶啶再經(jīng)經(jīng)氯氯甲甲酸酸異異丁丁脂脂法法或或碳碳化化二亞亞胺胺法法制制備備載載體體半半抗抗原原半抗抗原原載載體體連連接接方方法法4四、、佐佐劑劑*概概念念：：與抗抗原原同同時時或或預(yù)預(yù)先先注注射射于于機(jī)機(jī)體體，，能能增增加機(jī)機(jī)體體免免疫疫應(yīng)應(yīng)答答或或改改變變免免疫疫應(yīng)應(yīng)答答類類型型的的物物質(zhì)質(zhì)。。四、、佐佐劑劑條件件：：①增增加加抗抗原原的的表表面面積積；；②改改變變抗抗原原的的活活性性基基團(tuán)團(tuán)構(gòu)構(gòu)型型；；③佐佐劑劑與與抗抗原原混混合合能能延延長長抗抗原原在在局局部部組織織的的存存留留時時間間；；④可可直直接接或或間間接接激激活活免免疫疫活活性性細(xì)細(xì)胞胞；；⑤無無毒毒性性或或無無副副作作用用。。（二二））常常用用佐佐劑劑的的種種類類和和制制備備1.氫氫氧氧化化鋁鋁佐佐劑劑：：5%硫硫酸酸鋁鋁5%氫氫氧氧化化鈉鈉氫氧氧化化鋁鋁沉沉淀淀制成成懸懸液液即為為佐佐劑劑強(qiáng)烈烈攪攪拌拌NS洗洗二次次NS等體體積積抗抗原原免疫疫接接種種（二二））常常用用佐佐劑劑的的種種類類和和制制備備2.明明礬礬佐佐劑劑10%硫硫酸酸鉀鉀鋁鋁氫氧氧化化鈉鈉校校正正pH值值至至6.5沉淀淀乳狀狀懸懸液液*明礬礬佐佐劑劑抗抗原原常常用用用用于于肌肌肉肉注注射射，，皮皮下下注注射射易引引起起肉肉芽芽種種和和膿膿腫腫。。NS攪攪拌拌NS洗洗二次次離心心抗原原備用用防腐腐劑劑作用用大大于于不不完完全全佐佐劑劑局部部形形成成肉肉芽芽種種和和潰潰瘍瘍不能能用用于于人人體體弗氏氏完完全全佐佐劑劑3.弗弗氏氏佐佐劑劑(Freundadjuvant)液體體石石蠟蠟完全全乳乳化化備用用＋高壓壓滅菌菌加熱熱抗原原弗氏氏不不完完全全佐佐劑劑卡介介苗苗羊毛毛脂脂鑒定定一滴滴乳劑劑乳劑劑不不散散浮浮于于液液面面水中中混合合4.佐佐劑劑應(yīng)應(yīng)用用原原則則和和評評價價目的的:①增增強(qiáng)強(qiáng)抗抗原原對對機(jī)機(jī)體體的的免免疫疫原原性性；；②增增強(qiáng)強(qiáng)抗抗體體的的產(chǎn)產(chǎn)生生能能力力；；③為為制制備備出出高高效效價價的的免免疫疫血血清清；；④增增強(qiáng)強(qiáng)可可溶溶性性抗抗原原的的免免疫疫原原性性；；⑤在在某某種種情情況況下下，，改改變變Ag免免疫疫應(yīng)應(yīng)答答類類型型；；⑥延延長長抗抗原原在在免免疫疫動動物物的的時時間間；；⑦改改變變抗抗原原的的分分布布；；⑧增增強(qiáng)強(qiáng)局局部部對對變變應(yīng)應(yīng)原原的的超超敏敏反反情情況況；；4.佐佐劑劑應(yīng)應(yīng)用用原原則則和和評評價價應(yīng)用用佐佐劑劑的的缺缺點點①佐劑劑常常混混有有微微量量其其它它物物質(zhì)質(zhì)，，這這些些物物質(zhì)質(zhì)進(jìn)進(jìn)入體體內(nèi)內(nèi)后后也也可可引引起起抗抗體體的的產(chǎn)產(chǎn)主主，，影影響響抗抗血清清的的特特異異性性；；應(yīng)用用佐佐劑劑的的缺缺點點②注射射佐佐劑劑可可引引起起局局部部形形成成肉肉芽芽腫腫和和無無菌菌性膿膿腫腫；；③反復(fù)復(fù)注注射射，，易易發(fā)發(fā)生生超超敏敏反反應(yīng)應(yīng)，，使使局局部部組組織壞壞死死，，甚甚至至引引起起動動物物死死亡亡。。第二二節(jié)節(jié)免免疫疫血血清清的的制制備備1.免免疫疫動動物物選選擇擇2.免免疫疫方方法法3.動動物物采采血血法法4.免免疫疫血血清清的的分分離離及及保保存存一、、免免疫疫動動物物選選擇擇能作作免免疫疫接接種種用用的的動動物物主主要要是是哺哺乳乳類類和和禽禽類類。。兔、、綿綿羊羊、、豚豚鼠鼠、、雞雞、、山山羊羊和和馬馬。。一、、免免疫疫動動物物選選擇擇1.抗抗原原與與免免疫疫動動物物種種屬屬差差異異越越遠(yuǎn)遠(yuǎn)越越好好；；2.動動物物必必須須適適齡齡、、健健壯壯、、無無感感染染的的正正常常動動物物、、體重重合合乎乎要要求求；；3.不不同同動動物物種種類類對對同同一一免免疫疫原原有有不不同同的的免免疫疫應(yīng)答答；；4.按按需需要要量量選選擇擇大大小小不不同同的的動動物物。。二、、免免疫疫方方法法3.免免疫疫方方案案①全全量量免免疫疫法法：：弗弗氏氏佐佐劑劑抗抗原原多多次次注注射射②微微量量免免疫疫法法：：卡卡介介苗苗7天天弗氏氏佐佐劑劑1月月抗原原③混混合合免免疫疫法法：：綜綜合合皮皮下下、、淋淋巴巴結(jié)結(jié)和和靜靜脈脈二、、免免疫疫方方法法1.免免疫疫原原的的注注射射劑劑量量2.免免疫疫途途徑徑：：免免疫疫反反應(yīng)應(yīng)產(chǎn)產(chǎn)生生速速度度依依次次為為靜靜脈脈＞＞腹腔腔＞＞肌肌肉肉＞＞皮皮下下＞＞皮皮內(nèi)內(nèi)＞＞淋淋巴巴結(jié)結(jié)＞＞足足掌掌三、、動動物物采采血血法法1.頸頸動動脈脈放放血血法法：：最最常常用用的的方方法法2.心心臟臟采采血血法法：：要要求求操操作作熟熟練練3.靜靜脈脈采采血血法法：：1.4℃℃保保存存：：可可保保存存3～～6個個月月2.低低溫溫保保存存：：-20～～-40℃℃，，可可保保存存2～～3年年3.冰冰凍凍干干燥燥保保存存：：可可保保存存3～～5年年三、、動動物物采采血血法法四、、免免疫疫血血清清的的分分離離和和保保存存第三三節(jié)節(jié)抗抗體體的的純純化化和和鑒鑒定定1.抗抗體體特特異異性性的的純純化化2.特特異異性性IgG類類抗抗體體的的純純化化3.特特異異性性抗抗體體的的鑒鑒定定一、、抗抗體體特特異異性性的的純純化化1.親親合合層層析析法法：：將交交叉叉抗抗原原交交聯(lián)聯(lián)到到Sepharose4B上上，，裝裝柱柱后后，，將將預(yù)預(yù)吸吸收收的的抗抗體體通通過過親親合合層層析柱柱，，雜雜抗抗體體吸吸附附在在柱柱上上，，流流出出液液則則是是特特異異性抗抗體體。。一、、抗抗體體特特異異性性的的純純化化2.吸吸附附法法：：利用用不不含含特特異異性性抗抗原原的的抗抗原原液液，，直直接加加到到免免疫疫血血清清中中，，抗抗原原則則與與抗抗體體結(jié)結(jié)合合，，上上清液液則則為為無無雜雜抗抗體體的的單單價價特特異異性性抗抗體體。。二、、特特異異性性IgG類類抗抗體體的的純純化化1.鹽鹽吸吸沉沉淀淀法法：：經(jīng)硫硫酸酸銨銨鹽鹽吸吸提提取取γγ球球蛋蛋白白3次次，，基基本本為為IgG類類抗抗體體，，但但不不純純。。二、、特特異異性性IgG類類抗抗體體的的純純化化2.A蛋蛋白白親親和和層層析析：：SPA與與IgG的的Fc段段有有很很強(qiáng)強(qiáng)的的特異異性性的的親親和和力力，，細(xì)細(xì)菌菌表表面面不不同同位位點點獨獨立立地地與抗抗體體結(jié)結(jié)合合，，一一個個A蛋蛋白白至至少少可可以以結(jié)結(jié)合合二二個個IgG分分子子。。適適合合純純化化細(xì)細(xì)胞胞培培養(yǎng)養(yǎng)上上清清中中的的McAb。。3.其其它它：：凝膠膠過過濾濾、、離離子子交交換換層層析析等等三、特特異性性抗體體的鑒鑒定1.抗抗體效效價的的鑒定定：即為抗抗體活活性滴滴定三、特特異性性抗體體的鑒鑒定2.抗抗體特特異性性鑒定定：①細(xì)菌菌類抗抗原的的抗體體用凝凝集試試驗②可溶溶性抗抗原的的抗體體用雙雙向瓊瓊脂擴(kuò)擴(kuò)散試試驗3.抗抗體的的純度度鑒定定：免疫電電泳分分析法法4.抗抗體親親和力力鑒定定：親和力力高則則靈敏敏度好好第四節(jié)節(jié)單單克克隆抗抗體技技術(shù)單克隆隆抗體體：由B細(xì)細(xì)胞雜雜交瘤瘤產(chǎn)生生的只只識別別抗原原分子上一種種抗原決定定簇的抗體體分子。多克隆抗體體：識別抗原分分子上各種種抗原決定定簇的多種抗體體的混合制制劑。一、雜交瘤瘤技術(shù)的原原理及流程程二、單克隆隆抗體的應(yīng)應(yīng)用返回一、雜交瘤技術(shù)術(shù)的原理及及流程二、單克隆隆抗體的應(yīng)應(yīng)用1.醫(yī)學(xué)檢檢驗試劑：：①傳染病的的快速診斷斷②尋找TSA及檢測測TAA③免疫細(xì)胞胞抗原檢測測④激素測定定⑤血中藥物物濃度監(jiān)測測⑥HLA分分型監(jiān)測二、單克隆隆抗體的應(yīng)應(yīng)用2.導(dǎo)向治治療作用3.抗原物物質(zhì)的分離離和提純9、靜夜四四無鄰，，荒居舊舊業(yè)貧。。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、雨雨中中黃黃葉葉樹樹，，燈燈下下白白頭頭人人。。。。03:52:3403:52:3403:5212/29/20223:52:34AM11、以我我獨沈沈久，，愧君君相見見頻。。。12月月-2203:52:3403:52Dec-2229-Dec-2212、故故人人江江海海別別，，幾幾度度隔隔山山川川。。。。03:52:3503:52:3503:52Thursday,December29,202213、乍見翻疑疑夢，相悲悲各問年。。。12月-2212月-2203:52:3503:52:35December29,202214、他鄉(xiāng)生白白發(fā)，舊國國見青山。。。29十二二月20223:52:35上上午03:52:3512月-2215、比比不不了了得得就就不不比比，，得得不不到到的的就就不不要要。。。。。十二二月月223:52上上午午12月月-2203:52December29,202216、行動出成成果，工作作出財富。。。2022/12/293:52:3503:52:3529December202217、做前，能能夠環(huán)視四四周；做時時，你只能能或者最好好沿著以腳腳為起點的的射線向前前。。3:52:35上上午3:52上上午03:52:3512月-229、沒有有失敗敗，只只有暫暫時停停止成成功??！。12月月-2212月月-22Thursday,December29,202210、很多事事情努力力了未必必有結(jié)果果，但是是不努力力卻什么么改變也也沒有。。。03:52:3503:52:3503:5212/29/20223:5