實驗動物學(xué)教學(xué)課件：第四章 動物實驗基本操作技術(shù)3

1第四章動物實驗常用方法第一部分動物實驗設(shè)計2第一節(jié)

實驗動物的選擇原則32023/1/114實驗動物選擇的基本原則基本要求：

首先應(yīng)從生物醫(yī)學(xué)研究的目的和實驗要求來選擇實驗動物，進而考慮實驗動物是否容易獲得、是否經(jīng)濟、是否容易飼養(yǎng)。一切實驗動物應(yīng)具有個體間的均一性，遺傳的穩(wěn)定性和容易獲得三個基本要求。2023/1/115實驗動物選擇的基本原則一、盡量選擇研究對象的功能、代謝、結(jié)構(gòu)及疾病性質(zhì)與人類相似的動物(相似性原則)

1、組織結(jié)構(gòu)方面

2、系統(tǒng)機能方面

3、生理特性方面

4、繁殖特性方面

5、體液成分方面

6、解剖特性方面

7、疾病特點方面2023/1/116實驗動物選擇的基本原則二、選用解剖、生理特點符合實驗?zāi)康囊蟮膶嶒瀯游?/p>

實驗動物的某些解剖生理特點為所要觀察的器官或組織等提供了很多便利條件。本書前面已介紹了各種常用實驗動物的解剖生理特點，熟悉這些特點，根據(jù)這些特點選擇實驗動物能簡化操作，使實驗易于成功。2023/1/117實驗動物選擇的基本原則三、根據(jù)實驗動物不同品種、品系的特點選擇動物不同種系實驗動物對同一因素的反應(yīng)有其共同的一面，但有的也會出現(xiàn)特殊反應(yīng)。（比如白兔對豬瘟苗比灰兔敏感，長毛兔最敏感。）不同藥物或化合物，在不同種系動物上引起的反應(yīng)是存在很大差異。（比如雌激素、嗎啡）同種但不同品系的動物，對同一刺激的反應(yīng)差異很大。2023/1/118實驗動物選擇的基本原則四、根據(jù)對實驗質(zhì)量的要求選擇標準化的實驗動物

動物實驗中選擇和使用與研究內(nèi)容相匹配的標準化的實驗動物

標準化動物：是指遺傳背景明確或來源清楚的，對其攜帶的微生物和寄生蟲實行控制，模型性狀顯著且穩(wěn)定的動物。2023/1/119實驗動物選擇的基本原則1.選擇何種遺傳群動物，根據(jù)課題內(nèi)容而定。2.遺傳工程小鼠的應(yīng)用。3.選擇不同微生物等級的動物。4.在精確實驗中，鑒于動物體內(nèi)外的微生物和寄生蟲會干擾試驗的結(jié)果，最好選擇無菌動物或悉生動物，至少也應(yīng)使用SPF級動物。2023/1/1110實驗動物選擇的基本原則五、符合實驗動物選擇的一般原則

1、年齡與體重：動物實驗時要注意“天文學(xué)時間”和“生物學(xué)時間”的區(qū)別。不同種屬實驗動物的壽命與人類具有很大差異。一般來說，實驗動物年齡、體重應(yīng)盡可能一致，相差不得超過10%。2023/1/1111實驗動物選擇的基本原則

2、動物性別：不同性別的動物對同一藥物的敏感程度是有差異的，如實驗無特殊要求應(yīng)選擇雌雄各半做實驗，以避免因性別差異所造成的結(jié)果誤差?！帷佟?/p>

3、生理狀態(tài)與健康狀況

4、實驗條件2023/1/1112實驗動物選擇的基本原則六、經(jīng)濟性原則七、動物實驗結(jié)果的外推

醫(yī)學(xué)研究中，動物模型、動物實驗都是為人服務(wù)的，一切動物模型和動物實驗結(jié)果都要外推到人身上去，這就是動物實驗結(jié)果的外推。因為動物與人到底不是同一種生物，在動物身上無效的藥物不等于臨床無效，而在動物身上有效的藥物也不等于臨床有效。2023/1/1113八、實驗動物的選擇應(yīng)用應(yīng)注意有關(guān)國際規(guī)范

GLP——實驗室操作規(guī)范

SOP——標準操作規(guī)程

“3R”——減少、替代、優(yōu)化第二節(jié)動物實驗設(shè)計的基本原則142023/1/1115一、選題的一般原則：科學(xué)性：明確的理論意義和實踐意義創(chuàng)新性：探知未知事物或未知過程可行性：學(xué)術(shù)水平、技術(shù)水平，開展實驗的條件倫理原則：動物倫理問題，“3R”統(tǒng)計學(xué)考慮：對照，隨機，重復(fù)的原則2023/1/1116二、動物實驗設(shè)計要素處理因素：處理水平在合理的范圍實驗對象：選擇合適的實驗動物或動物組織和細胞等實驗效應(yīng)的觀察：適當(dāng)?shù)挠^察指標（定量、定性和半定量）觀察動物的反應(yīng)2023/1/1117三、實驗設(shè)計的原則對照性原則：將實驗對象隨機分設(shè)對照——同體、異體一致性原則：實驗組與對照組除處理因素不同外，非處理因素基本保證一致重復(fù)性原則：同一處理要設(shè)置多個樣本例數(shù)隨機性原則：按照機遇均等的原則來進行分組客觀性原則：所選擇的觀測指標盡可能不帶有主觀成分第三節(jié)動物實驗前的準備182023/1/1119一、動物實驗前的理論準備實驗動物科學(xué)基礎(chǔ)知識，相關(guān)法規(guī)、制度通過上崗證考試申報項目時，附上參與動物實驗人員的動物實驗上崗證復(fù)印件2023/1/1120二、動物實驗前的條件準備實驗場所：實驗者與實驗動物中心聯(lián)系，提交實驗設(shè)計儀器、藥品、試劑實驗動物：了解動物品種、品系、等級、許可證等信息，提前準備實驗人員2023/1/1121特殊品系、特殊要求的實驗動物，或一次性需要量較大，或無事先計劃時，實驗動物中心不能滿足需求，則必須到其他具有實驗動物生產(chǎn)供應(yīng)資質(zhì)的單位去購買，必須遵循下列原則：

1、提出外購申請，經(jīng)實驗動物中心負責(zé)人同意；

2、事先與供應(yīng)單位聯(lián)系并確認能夠提供，并問清楚等級、價格、包裝、供應(yīng)方式，可供應(yīng)日期；實驗動物的購買2023/1/11223、如果系慢性實驗，則必須首先與實驗動物中心簽訂好動物實驗室的使用和代養(yǎng)觀察協(xié)議，辦妥有關(guān)手續(xù)；

4、購買時要索取實驗動物質(zhì)量合格證、許可證復(fù)印件和其他相關(guān)資料；

5、選擇最快、最安全、最有效的運輸方式；

6、遵守動物運輸檢驗檢疫法；

7、如需要實驗動物中心協(xié)助，應(yīng)事先支付足額費用。

2023/1/1123三、預(yù)實驗檢查各項準備工作是否完備，實驗方法是否可行，測試指標是否穩(wěn)定可靠使用少量動物進行，其他條件與正式實驗一致避免失誤和損失第二部分動物實驗操作24一、實驗動物福利所謂實驗動物福利，是指在飼養(yǎng)管理和使用實驗動物的過程中，采取科學(xué)合理的有效措施，使實驗動物享有潔凈、安靜、舒適的生活環(huán)境，受到良好管理與照料，避免不必要的傷害、饑餓、不適、驚恐、折磨、疾病和疼痛，保證其能夠最大限度的實現(xiàn)自然行為。25二、實驗動物的抓取和固定

小鼠的抓取和固定抓取方法

小白鼠性較溫和，一般不需戴手套捉拿，但捉拿時切勿粗暴，以防觸怒小鼠咬傷手或?qū)⑿∈竽髠Ｗ侥脮r先用右手抓住鼠尾輕輕提起，將其置于鼠籠蓋或操作臺上（切勿懸空，以防回頭咬傷），略向后拉，再用左手的拇指、食指和中指抓住小白鼠兩耳和后頸部皮膚，將小白鼠置于左手中，以無名指及小指夾住鼠尾部即可。2728小鼠的固定固定方法:

徒手固定:短時間實驗;

固定板固定:如果實驗時間長，也可以將小鼠麻醉后固定于小鼠固定板上。固定架固定：大鼠的抓取與固定抓取方法：基本上與抓小鼠相同。注意動作技巧，否則易被咬傷。大白鼠性烈，牙齒鋒利，捕捉時要提防被其咬傷，最好戴厚手套抓住其尾巴，或用海棉鉗夾住其頸背部皮毛（切勿夾尾巴），從鼠籠提出放在實驗臺上，用左手拇指和食指捏住鼠耳后下方，固定其頭部，不讓其轉(zhuǎn)動，余下二指緊捏鼠背部皮膚，置于左掌心，右手進行操作。30大鼠的固定固定方法:徒手固定:握持大鼠時，握頸部的手指不可用力過大，以免造成動物窒息死亡，但也不能太松，以免動物扭頭咬傷實驗人員的手。抓取大鼠時注意不能抓尾尖部，也不可讓動物懸在空中時間太長，以免動物掙扎擺動，導(dǎo)致尾部皮膚撕脫。

固定板固定:如果操作時間長，可以麻醉后用粗棉線捆住其四肢腕或膝關(guān)節(jié)上部，將其固定在大鼠固定板上。鼠靜脈注射架固定：進行尾靜脈注射或采血。豚鼠的抓取與固定

抓取方法

基本與大鼠相同，豚鼠易受驚，抓取時必須穩(wěn)準迅速。先用一只手抓住鼠背肩胛上方，用力下壓固定，以拇指和食指環(huán)握頸部，用另一只手抓住臀部。32豚鼠的固定固定方法

徒手固定固定板固定

家兔的抓取與固定

抓取方法

1、2、3均為不正確的抓取方法（1：可損傷兩腎，2：可造成皮下出血，3：可傷及兩耳），4、5為正確的抓取方法。頸后部的皮厚可以抓，并用手托兔體。34家兔的固定固定方法徒手固定;盒式固定;臺式固定

犬的抓取與固定

抓取方法

畢格犬比較溫順，抓取時動作溫柔則不會咬人。接近狗時態(tài)度要溫和，可以從側(cè)面靠近，輕輕撫摸其頸背部皮毛，然后用固定帶（粗棉帶、繃帶、麻繩等）迅速從下頜繞到上頜打一結(jié)，再繞回下頜打第二個結(jié)，最后引至后頸部打第三個結(jié)，并多打一個活結(jié)（以備解脫）。注意捆綁時動作要輕巧、迅速，松緊要適宜。36犬的抓取與固定雜種狗較兇惡，為避免其咬人，實驗前首先要綁住狗嘴。對于未經(jīng)馴服或較兇惡的狗，可以先用特制的狗頭夾夾住狗的頸部，將狗按倒在地，之后再用固定帶綁住其嘴，方法同上。如果需要麻醉，可待狗麻醉后，再移去狗頭夾，解掉綁嘴，把動物置于狗實驗臺上，用狗頭固定器固定好頭部，四肢固定方法與家兔相同。

37犬的抓取與固定1.頭部固定：固定狗頭需用一特制的狗頭固定器，狗頭固定器為一圓鐵圈，圈的中央有一弓形鐵，與棒螺絲相連，下面有一根平直鐵閂。操作時先將狗舌拉出，把狗嘴插入固定器的鐵圈內(nèi)，再用平直鐵閂橫貫于犬齒后部的上下頜之間，然后向下旋轉(zhuǎn)棒螺絲，使弓形鐵逐漸下壓在動物的下頜骨上，把鐵柄固定在實驗臺的鐵柱上即可。2.四肢固定：如采取仰臥位，四肢固定方法與家兔相同。猴的抓取與固定

抓取方法（一）猴房內(nèi)或露天大籠內(nèi)捕捉采用捕猴網(wǎng)進行捕捉，捕猴網(wǎng)是用尼龍繩編織成的網(wǎng)袋，捕捉時動作要迅速準確，不要損傷頭部及其他要害部位。猴入網(wǎng)后，將圈網(wǎng)按在地上，緊緊壓住猴頭或抓住頸后部（以防回頭咬人），再將猴雙前肢反背于猴的身后（如圖所示），捉住后將猴由網(wǎng)中取出，在捕捉兇猛的雄猴時應(yīng)戴上防護皮手套，并有2~3個人緊密配合。39猴的抓取與固定（二）單籠飼養(yǎng)的實驗猴在籠內(nèi)的捕捉法猴籠設(shè)計成籠的后壁可向前滑動（如圖所示），捕捉時拉動杠桿，使籠的后壁向前滑動，將猴夾在籠的前后壁之間，隨即將猴的雙前肢從籠隙拉出籠外并緊緊握住，使猴更加固定，另一人戴上防護手套推開籠門，抓住猴頭，然后小心地將雙前肢反背于猴的身后，由籠中提出猴子。40猴的抓取與固定固定方法固定椅可根據(jù)猴體型的大小隨意旋轉(zhuǎn)升降杠調(diào)整椅子的高低；猴頭枷上頸孔的大小可根據(jù)猴脖子的粗細作調(diào)整。固定后猴的頭部與身體以枷板分開，操作者可避免被咬傷和抓傷，枷板同時又是工作臺，可放少量器械。41三、實驗動物的性別判斷不同性別動物對許多實驗處理的反應(yīng)是有差別的。如對藥物敏感性差異、對各種刺激的反應(yīng)性等，因此，動物的性別往往是動物選擇中的一個重要環(huán)節(jié)。動物性別判斷主要是根據(jù)生殖器和第二性征。1.小鼠、大鼠、地鼠和豚鼠：幼年鼠根據(jù)生殖器與肛門的距離遠近判斷，雌鼠較雄鼠距離近。成年則主要根據(jù)睪丸進行判斷。豚鼠與地鼠用手壓迫其會陰部，雄鼠有陰莖突起，雌鼠沒有，陰道口呈“V”型。42三、實驗動物的性別判斷2.家兔和犬：幼年動物可觀察其陰部孔洞形狀和距離肛門大小——雌性：孔洞扁形、大小與肛門相同，距肛門近；雄性：孔洞圓形、略小于肛門，距肛門遠。成年動物主要根據(jù)有無睪丸進行判斷。3.靈長目：較難判斷。觸摸陰囊內(nèi)是否有睪丸是確定其雌雄的最可靠方法。43四、年齡的大致判斷小鼠1.根據(jù)形態(tài)鑒定日齡：日齡/d外觀形態(tài)特征13458109~1113~1518以后仔鼠裸體鮮紅耳殼露出表皮臍帶瘢痕脫落能翻身能爬行能聽到聲音全身被白毛，門齒長出眼皮張開，能跳躍，能抓取東西能自行采食，獨立生活44四、年齡的大致判斷2.根據(jù)體重鑒定日齡：以KM小鼠為例45四、年齡的大致判斷大鼠與豚鼠：年齡與體重的增加具有一定的關(guān)聯(lián)，但不是絕對的。與品系、性別、飼養(yǎng)、管理水平都有關(guān)系。家兔：門齒和爪隨年齡增長而增長，是鑒別的重要指標。青年家兔老年家兔門齒潔白，短小，排列整齊暗黃，厚而長，排列不整齊，有時破損趾爪較短，直平，隱在腳毛中露于腳毛之外，爪尖鉤曲46四、年齡的大致判斷犬：主要以牙齒的生長情況、磨損情況、外觀顏色等綜合判定。犬齡犬齒更換磨損情況2個月以下僅有乳齒（白、細、尖）2-4月更換門齒4-6月更換犬齒（白、牙尖圓鈍）6-10個月更換臼齒1歲牙長齊，潔白光亮，門齒有尖突2歲下門齒尖突部分磨平3歲上門齒尖突全磨平4-5歲上、下門齒尖磨損、微斜、發(fā)黃6~8歲門齒磨成齒根，犬齒發(fā)黃磨損9~10歲唇部胡須發(fā)白10歲以上犬齒不齊全，牙根黃，唇邊胡須全白47五、妊娠檢查妊娠檢查：為了在配種以后能及時掌握雌性動物是否妊娠、妊娠的時間及胎兒和生殖器官的異常情況，采用臨床和實驗室的方法進行檢查，稱為妊娠檢查，又稱妊娠診斷。妊娠檢查的目的：及時對雌性動物加強護理或再次配種，以保護母體和胎兒的正常發(fā)育，避免胎兒早期死亡和流產(chǎn)及減少繁育時間的損失。48五、妊娠檢查妊娠診斷的方法：臨床檢查法檢查有內(nèi)分泌變化所派生的及與懷孕有關(guān)的母體變化：試情法、陰道檢查法、腹部檢查法等。直接或間接檢查是否有胎兒、胎膜和胎水的存在：直腸檢查法、腹壁觸診法、聽診法、超聲波檢查法、X線檢查法等。49五、妊娠檢查實驗室診斷法檢查與妊娠有關(guān)的母體激素變化：血液（乳）孕酮的測定等檢查由內(nèi)分泌變化所派生的母體變化：檢查子宮頸和陰道粘液的理化性狀、利用外源激素檢查雌性動物是否產(chǎn)生某種特有反應(yīng)等。檢查由于胚胎出現(xiàn)而產(chǎn)生的某種特有物質(zhì)：免疫學(xué)診斷等。檢查由于妊娠雌性陰道上皮出現(xiàn)的細胞學(xué)變化：陰道活體組織學(xué)檢查等。50五、妊娠檢查外部檢查法表現(xiàn)為發(fā)情周期停止，食欲增進，體重增加。可用反復(fù)多次試情法，結(jié)合外部觀察判斷。此法過于消耗時間，且不能肯定，因而只用于后期檢查以供參考。摸胎法通過觸摸雌性個體腹部子宮內(nèi)胎兒的存在與否判斷。適用于兔、犬、貓等及較小的非人靈長類。兔在配種后一周，犬在20~35天，貓在18~30天易觸診。51陰道檢查法觀察陰道粘膜結(jié)合陰道涂片觀察陰道拴：小鼠一般不排出，檢查易于發(fā)現(xiàn)；大鼠陰道拴多在陰道停留12~24h即排出。豚鼠交配后會留有精子和陰道拴。直腸檢查法適用于較大的非人靈長類以及大動物。由直腸觸摸子宮檢查胎兒有無及大小。五、妊娠檢查52動情周期陰道涂片的細胞變化特點

階段經(jīng)過時間（小時）卵巢變化細胞變化特點小鼠大鼠動情前期（P）(ProestrusStage)1017～21卵泡加速生長全部是有核上皮細胞，偶有少量角化細胞動情期（E）（EstrusStage）429～15卵胞成熟排卵全部是無核角化細胞或間有少量上皮細胞動情后期（M）（MetestrusStage）1210～14黃體生成白細胞、角化細胞、有核上皮細胞均有動情間期（DI）(DiestrusStage)48～7260～70黃體退化大量白細胞及少量上皮細胞和粘膜53五、妊娠檢查超聲波檢查法利用超聲檢查妊娠早期的胎囊、少量胎水、胎體及胎心博動。孕酮含量測定法采用放射免疫測定法和酶聯(lián)免疫測定法測定外周血孕酮含量，妊娠準確率較高。54六、實驗動物的分組（一）

分組原則實驗動物分組應(yīng)嚴格按照隨機分組的原則進行，使每只動物都有同等機會被分配到各個實驗組中去，盡量避免人為因素對實驗造成的影響。（二）

建立對照組實驗動物分組時應(yīng)特別注意建立對照組。對照組可分自身對照組和平行對照組。1．自身對照組自身對照是把實驗動物本身在動物實驗前、后兩階段的各項相關(guān)數(shù)據(jù)，分別作為對照組和實驗組的結(jié)果并進行統(tǒng)計學(xué)處理。552．平行對照組平行對照組分正對照組和負對照組（空白對照組）兩種。

正對照組是對實驗動物實施與實驗動物相同但排除了所要觀察的目的因子（如治療手段或藥物）的處理，負對照組則不作任何處理，這種方法就是平行對照組。例如要觀察某種藥物的藥效，對實驗組動物采用肌肉注射的給藥方法；正對照組動物同樣進行肌肉注射，但注射的不是藥物而是同等劑量的生理鹽水，以便排除肌肉注射生理鹽水可能產(chǎn)生的影響；負對照組動物則不進行肌肉注射，并與實驗組動物和正對照組動物在相同的環(huán)境和條件下飼養(yǎng)，作為空白對照。六、實驗動物的分組七、動物的編號、標記動物的編號與標記：對隨機分組后的實驗動物進行標記編號，是動物實驗準備工作中相當(dāng)重要的一項工作。標記編號方法應(yīng)保證編號不對動物生理或?qū)嶒灧磻?yīng)產(chǎn)生影響，且號碼清楚、易認、耐久和適用。目前常用的標記編號方法有染色法、耳緣剪孔法、烙印法、掛牌法等標記編號方式。此外還有針刺法、斷趾編號法、剪尾編號法、被毛剪號法、籠子編號法等。七、動物的編號、標記體表顏料著色法染色法是用化學(xué)藥品在實驗動物身體明顯的部位，如被毛、四肢等處進行涂染，以染色部位、顏色不同來標記區(qū)分實驗動物，是最常用、最易掌握的方法，也很方便。動物的編號與標記：常用的標記液：

①3%~5%苦味酸溶液（黃色）或80%~90%苦味酸酒精飽和液②0.5%中性紅或堿性品紅溶液（紅色）③2%硝酸銀溶液（咖啡色，涂后需光照10分鐘）④煤焦油酒精溶液（黑色）編號原則：

先左后右，從前到后。左前肢記為1號，左側(cè)腹部為2號，左后肢3號，頭頂部為4號，腰背部5號，尾基部6號，右前肢7號，右側(cè)腹部8號，右后肢9號。編號超過10時，可使用兩種不同顏色的溶液，把一種顏色作為個位數(shù)，另一種為十位數(shù)。5960染色法應(yīng)注意的問題染色法雖然簡單方便，不會給實驗動物造成損傷和痛苦，但是長時間實驗會使涂染劑自行褪色，或由于實驗動物互相嬉鬧、舔毛、摩擦、換毛、糞尿和飲水浸濕被毛等原因，易造成染色標記模糊不清，因而染色法對慢性實驗不適用。如果所做慢性實驗只能采用此種染色方法，則應(yīng)注意不斷地補充和加深染色。另外，常用染色劑的毒性對實驗動物的影響也是需要注意的一個問題。61個體耳號標記法耳孔法是直接在實驗動物的耳朵上打孔結(jié)合剪緣編號（如書上圖4-4-3所示），根據(jù)打在動物耳朵上的部位、孔數(shù)和缺口位置，來區(qū)分實驗動物。在耳朵打孔后，必須用消毒過的滑石粉抹在打孔局部，以免傷口愈合過程中將耳孔閉合。個體耳號標記法可標記0~99之內(nèi)的號碼。嚙齒類和豬的編號常用此方法。62個體斷趾標記法新生仔鼠根據(jù)前肢4趾，后肢5趾的切斷位置標記。后肢從左到右表示1~10，前肢從左到右表示20~90，11~19由切斷右后肢最右趾加其他1~9號表示?？删幊?~99號，多用于大小鼠。切斷趾時，應(yīng)切斷其一段趾骨，不能只斷指尖，以防傷口愈合后無法辨別。63耳號鉗標記法用專用耳號鉗標記號碼針加墨：多用于兔、犬的編號。夾刺在耳內(nèi)側(cè)無血管的部位。固定耳號牌：多用于犬、貓、豬、羊等。將耳號牌用專用耳鉗穿夾到耳上豬、牛、羊耳標64掛牌法：犬、羊、猴制作印有不同數(shù)字標記的金屬標牌，金屬牌應(yīng)選用不生銹、刺激小的金屬材料，制成輕巧、美觀的小牌子。固定于犬、羊、猴的項鏈上，禽類為鋁條號碼固定于翅膀上。該方法清楚、方便觀察。要防止弄傷動物或丟失65八、實驗動物被毛的去除方法動物實驗前應(yīng)去除實驗操作局部的被毛，以免影響實驗操作和觀察。常用的被毛去除方法有拔毛法、剪毛法、剃毛法和脫毛法四種。

八、實驗動物被毛的去除方法

（一）、拔毛法

實驗動物被固定后，用食指和拇指將暴露部位的毛拔去。進行采血或動、靜脈穿刺時，常用此方法暴露血管穿刺的部位。拔毛不但暴露了血管，而且刺激了局部組織產(chǎn)生擴張血管的作用。如：作兔耳緣靜脈和鼠靜脈采血，就要拔去上述靜脈表面的被毛。67（二）、剪毛法實驗動物被固定后，用水濕潤局部被毛，繃緊局部皮膚，用剪刀緊貼皮膚表面剪去被毛。這是家兔和犬頸部手術(shù)，家兔胸、腹部手術(shù)，局部皮膚需要去除被毛時常采用的方法。注意剪毛過程中切不可提起被毛，以免剪傷皮膚。同時為了避免被毛到處飛揚，應(yīng)預(yù)先準備一個盛有自來水的杯子裝載剪下來的被毛。八、實驗動物被毛的去除方法

68（三）、剃毛法實驗動物固定后，用刷子蘸溫肥皂水將需要暴露部位的被毛濕透，用剪刀剪去被毛，然后用剃毛刀逆被毛生長方向剃去殘留被毛。剃毛時必須繃緊局部皮膚，盡量不要剃破皮膚。剃毛法常用于大動物手術(shù)區(qū)域皮膚的術(shù)前準備。剃毛刀除專用刀具外，尚可用止血鉗夾持半片新剃須刀片代替，但要小心不要割破皮膚或血管。八、實驗動物被毛的去除方法

69（四）、脫毛法脫毛法是采用化學(xué)脫毛劑進行脫毛的方法。此法常用于大動物無菌手術(shù)，局部皮膚刺激性實驗，觀察實驗動物局部血液循環(huán)等實驗。常用的化學(xué)藥品：硫化鋇（BaS）、硫化鈉（NaS）、硫化鈣（CaS）八、實驗動物被毛的去除方法

70八、實驗動物被毛的去除方法常用脫毛劑配方配方1：硫化納8g溶于100ml水中。配方2：硫化納：肥皂粉：淀粉的比例為3：1：7，再加水調(diào)至糊狀。配方3：硫化納10g和生石灰15g溶于100ml水中。71八、實驗動物被毛的去除方法脫毛方法使用脫毛劑前應(yīng)剪去局部被毛，但剪毛前不能用水濕潤被毛，以免脫毛劑流入毛根造成損傷。脫毛時用鑷子夾棉球或紗布團蘸脫毛劑涂抹一層在已剪去被毛的部位，3~5分鐘后，用溫水洗去脫下的毛和脫毛劑。再用干紗布將水檫干，涂上一層油脂。注意操作時動作應(yīng)輕巧，以免脫毛劑沾在實驗人員的皮膚、粘膜上，造成不必要的損傷。72九、

動物的麻醉方法在一些動物實驗，特別是手術(shù)等實驗中，常對動物采用必要的麻醉。麻醉(anesthesia)的基本任務(wù)是消除實驗過程中所致的疼痛和不適感覺，保障實驗動物的安全，使動物在實驗中服從操作，確保實驗順利進行。由于動物種屬間的差異等情況，所采用的麻醉方法和選用的麻醉劑亦有不同。九、

動物的麻醉方法常用的麻醉劑

1.

揮發(fā)性麻醉劑:乙醚、氯仿等乙醚吸入麻醉適用于各種動物，其麻醉量和致死量差距大，安全度亦大，動物麻醉深度容易掌握，而且麻后蘇醒較快。其缺點是對局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液體分泌增多，再通過神經(jīng)反射可影響呼吸、血壓和心跳活動，并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醚時必需有人照看，以防麻醉過深而出現(xiàn)上情況。

74九、

動物的麻醉方法2.非揮發(fā)性麻醉劑：苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉等巴比妥類的衍生物，鹽酸氯胺酮、水合氯醛等。這些麻醉劑使用方便，一次給藥可維持較長的麻醉時間，麻醉過程較平穩(wěn)，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。但缺點是蘇醒較慢。

75九、

動物的麻醉方法3.中藥麻醉劑：洋金花、東莨菪堿等。動物實驗時有時也用到象洋金花和氫溴酸東莨菪堿等中藥麻醉劑，但由于其作用不夠穩(wěn)定，而且常需加佐劑麻醉效果才能理想，故在使用過程中不能得到普及，因而，多數(shù)實驗室不選用這類麻醉劑進行麻醉。麻醉方法1．全身麻醉①吸入法②腹腔和靜脈給藥麻醉法

九、動物的麻醉方法九、

動物的麻醉方法麻醉前注意事項:動物禁食，大動物10~12h不能使用瀉劑：瀉劑降低堿儲，麻醉和失血狀態(tài)下易發(fā)生酸中毒，降低損傷組織的抗感染能力犬應(yīng)灌腸，排除積糞檢查麻醉劑、固定器具，過深麻醉的急救器材和藥品準確計算麻醉劑量考慮麻醉劑的純度麻醉時注意事項:靜脈注射必須緩慢，同時觀察肌肉緊張性、角膜反射和對皮膚疼痛的反應(yīng)，當(dāng)這些活動明顯減弱或消失時，立即停止注射。麻醉后注意事項:

采取保溫措施。麻醉使動物體溫調(diào)節(jié)功能受到抑制，會出現(xiàn)體溫下降，影響實驗結(jié)果。保溫方法有：實驗桌內(nèi)裝燈，電褥，臺燈照射等必須保持動物氣道的通暢和組織（眼球、舌、腸等)的營養(yǎng)。出現(xiàn)麻醉過深情況后，應(yīng)立刻采取搶救措施。79九、動物的麻醉方法2.局部麻醉用局部麻醉藥阻滯周圍神經(jīng)末梢或神經(jīng)干、神經(jīng)節(jié)、神經(jīng)叢的沖動傳導(dǎo)，產(chǎn)生局部性的麻醉區(qū)，稱為局部麻醉。特點是動物保持清醒，對重要器官功能干擾輕微，麻醉并發(fā)癥少，是一種比較安全的麻醉方法。適用于大中型動物各種短時間內(nèi)的實驗。

80九、動物的麻醉方法局部麻醉操作方法很多，可分為表面麻醉、局部浸潤麻醉、區(qū)域阻滯麻醉以及神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉。表面麻醉利用局部麻醉藥的組織穿透作用，透過粘膜，阻滯表面的神經(jīng)末梢，稱表面麻醉。在口腔及鼻腔粘膜、眼結(jié)膜、尿道等部位手術(shù)時，常把麻醉藥涂敷、滴入、噴于表面上，或尿道灌注給藥，使之麻醉。區(qū)域阻滯麻醉在手術(shù)區(qū)四周和底部注射麻醉藥阻斷疼痛的向心傳導(dǎo)，稱區(qū)域阻斷麻醉。常用藥為普魯卡因。81九、動物的麻醉方法神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉

在神經(jīng)干(叢)的周圍注射麻醉藥，阻滯其傳導(dǎo),使其所支配的區(qū)域無疼痛，稱神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉。常用藥為利多卡因。局部浸潤麻醉沿手術(shù)切口逐層注射麻醉藥，靠藥液的張力彌散，浸入組織,麻醉感覺神經(jīng)末梢，稱局部浸潤麻醉。常用藥為普魯卡因。在施行局部浸潤麻醉時，先固定好動物，用0.5～1％鹽酸普魯卡因皮內(nèi)注射，使局部皮膚表面呈現(xiàn)一桔皮樣隆起，稱皮丘，然后從皮丘進針，向皮下分層注射，在擴大浸潤范圍時，針尖應(yīng)從已浸潤過的部位刺入，直至要求麻醉區(qū)域的皮膚都浸潤為止。每次注射時，必須先抽注射器，以免將麻醉藥注入血管內(nèi)引起中毒反應(yīng)。

82局部麻醉:

⑴貓的局部麻醉一般應(yīng)用0.5-1.0%鹽酸普魯卡因注射。粘膜表面麻醉宜用2%鹽酸可卡因。⑵兔在眼球手術(shù)時，可于結(jié)膜囊滴入0.02%鹽酸可卡因溶液，數(shù)秒鐘即可出現(xiàn)麻醉。⑶狗的局部麻醉用0.5-1%鹽酸普魯卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%鹽酸可卡因。九、動物的麻醉方法十、動物的給藥途徑和方法84十、動物的給藥途徑和方法在動物實驗中，為了觀察藥物對機體功能、代謝及形態(tài)引起的變化，常需要將藥物注入動物體內(nèi)。給藥的途徑和方法多種多樣，可根據(jù)實驗?zāi)康?、實驗動物種類和藥物劑型、劑量等情況確定。(一)注射給藥法1.皮下注射方法是：注射時以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號針頭的注射器刺入皮下，固定后即可進行注射。一般小鼠在背部或前肢腋下，大鼠在背部或側(cè)下腹部；豚鼠在后大腿內(nèi)側(cè)、背部、肩部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部注射；蛙可在脊背部淋巴囊注射；狗多在頸部、背部皮下、大腿外側(cè)注射。拔針時，輕按針孔片刻，防藥液逸出。85十、動物的給藥途徑和方法2.皮內(nèi)注射此法用于觀察皮膚血管的通透性變化或觀察皮內(nèi)反應(yīng)。如將一定量的放射性同位素溶液、顏料或致炎物質(zhì)、藥物等注入皮內(nèi)，觀察其消失速度和局部血液循環(huán)變化，作為皮膚血管通透性觀察指標之一。方法是：注射前需將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用5號針頭或結(jié)核菌素注射器連4(1/2)細針頭，緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液，此時可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。86十、動物的給藥途徑和方法3.肌肉注射當(dāng)給動物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時，常采用肌肉注射。肌肉注射一般選用肌肉發(fā)達、無大血管經(jīng)過的部位，多選臀部。方法是：注射時針頭要快速刺入肌肉，回抽針栓如無回血現(xiàn)象即可注射。給大、小鼠等小動物作肌肉注射時，用左手抓住鼠兩耳和頭部皮膚，右手取連有5（1/2）針頭的注射器，將針頭刺入大腿外側(cè)肌肉，將藥液注入。87十、動物的給藥途徑和方法4.腹腔注射方法是：先將動物固定，以左手抓住動物，使腹部向上，腹部用酒精棉球擦試消毒，右手將注射針頭于腹中白線左（或右1mm）刺入皮下，使針頭向前推

0.3～0.5cm，再以45度角穿過腹肌，回抽無腸液、尿液后，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實驗動物為家兔，進針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。88十、動物的給藥途徑和方法5.靜脈注射是將藥液直接注射于靜脈管內(nèi)，使其隨著血液分布全身,迅速奏效。但排泄較快，作用時間較短。小白鼠和大白鼠：一般采用尾靜脈注射，鼠部左右兩側(cè)尾靜脈比較容易固定，多采用它們進行注射。89操作時先將動物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用45～50℃的溫水浸潤半分鐘或用酒精擦拭使血管擴張，并可使表皮角質(zhì)軟化，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，使靜脈充盈，用中指從下面托起尾巴，以無名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器連4(1/2)號細針頭，使針頭與靜脈平行（小于30℃），從尾下四分之一處（約距尾尖2-3厘米）處進針，此處皮薄易于刺入，先緩注少量藥液，如無阻力，表示針頭已進入靜脈，可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。如需反復(fù)注射，應(yīng)盡可能從末端開始，以后向尾根部方向移動注射。90豚鼠的靜脈注射：一般采用前肢皮下頭靜脈，位于前肢內(nèi)側(cè)的皮下

。靜脈管壁較脆，注射時應(yīng)特別注意。兔的靜脈注射：一般采用外耳緣靜脈，因其表淺易固定。注射部位除毛，用75％的酒精消毒，手指輕彈兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近心端，拇指及小指繃緊靜脈的遠心端，無名指墊在下面，右手持注射器，盡量從靜脈的遠端刺入血管，移動拇指于針頭上以固定，放開食、中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻以止血。91狗：狗靜脈注射多選前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈（左上圖）或后肢小隱靜脈（左下圖）注射。注射前由助手將動物側(cè)臥，剪去注射部位的被毛，用膠皮帶扎緊（或用手抓緊）靜脈近心端，使血管充盈，從靜脈的遠端將注射針頭平行刺入血管，待有回血后，松開綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。92靜脈注射注意事項

靜脈注射開始前，應(yīng)先仔細核對藥物名稱，準確吸取藥量。排盡注射器內(nèi)的空氣，避免其進入靜脈內(nèi)形成氣栓。靜脈注射要盡量從相應(yīng)部位的遠端血管處開始，假如注射失敗，應(yīng)拔出針頭從靠近原注射點的近端部位再次進針，直至注射成功。如進針后回抽針栓不見回血，或推注時阻力較大且局部腫脹發(fā)白出現(xiàn)皮丘，便說明針頭末刺入靜脈血管。注射過程中應(yīng)減少動物注射部位的活動，防止針頭滑脫。若動物掙扎應(yīng)暫緩?fù)谱?，固定好針頭，待動物安靜后，再繼續(xù)給藥。靜脈注射給藥的速度要緩慢均勻，以免擾亂循環(huán)和呼吸系統(tǒng)的生理功能。注射完畢，用一棉球按住針眼，拔出針頭，繼續(xù)壓迫片刻，以防針眼處出血。93表2幾種動物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）注射途徑小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.1-1.01-32-55-105-15肌肉0.1-0.20.2-0.50.2-0.50.5-1.02-5靜脈0.2-0.51-21-53-105-15皮下0.5-1.00.5-1.00.5-21.0-3.03-1094十、動物的給藥途徑和方法(二)經(jīng)口給藥法1.口服法：把藥物放入飼料或溶于飲水中讓動物自動攝取。此法優(yōu)點在于簡單方便，缺點是不能保證劑量準確。一般適用于對動物疾病的防治或某些藥物的毒性實驗，制造某些與食物有關(guān)的人類疾病動物模型。

95十、動物的給藥途徑和方法2.灌胃法：在急性實驗中,多采用灌胃法。此法劑量準確。灌胃法是用灌胃器將所應(yīng)投給動物的藥灌到動物胃內(nèi)。灌胃器由注射器和特殊的灌胃針構(gòu)成。小鼠的灌胃針長約4～5cm，直徑為1mm，大鼠的灌胃針長約6～8cm，直徑約1.2mm。灌胃針的尖端焊有一小圓金屬球，金屬球為中空的。焊金屬球的目的是防止針頭刺入氣管或損傷消化道。針頭金屬球端彎曲成20°左右的角度，以適應(yīng)口腔、食道的生理彎曲度走向。96十、動物的給藥途徑和方法鼠類的灌胃法：用左手固定鼠，右手持灌胃器，將灌胃針從鼠的口腔插入，壓迫鼠的頭部，使口腔與食道成一直線，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食道，可感到輕微的阻力，此時可略改變一下灌胃針方向，以刺激引起吞咽動作，順勢將藥液注入。97十、動物的給藥途徑和方法動物應(yīng)固定成垂直體位，針插入時應(yīng)無阻力。若感到阻力或動物掙扎時，應(yīng)立即停止進針或?qū)⑨槹纬觯悦鈸p傷或穿破食道以及誤入氣管。

一般灌胃針插入小鼠深度為3～4cm，大鼠或豚鼠為4～6cm。常用灌胃量小鼠為0.1～0.3ml/10g體重,大鼠1～2ml/100g體重,豚鼠1.6～2.0ml/100g體重。98十、動物的給藥途徑和方法狗、兔的灌胃法：先將動物固定，再將灌胃管(帶有彈性的橡皮導(dǎo)管,如導(dǎo)尿管)沿開口器的小孔插入動物口中（開口器之寬度可視動物口腔大小而定)，再慢慢沿上顎壁插入食道，將灌胃管的外端浸入水中，如有氣泡逸出，則說明灌胃管誤入氣管，需拔出重插。插好后，將注射器連于灌胃管將藥液推入。灌胃結(jié)束后，先拔出灌胃管，再拿出開口器。99十、動物的給藥途徑和方法狗、兔等動物灌胃時，可不用開口器也能順利將藥液灌入胃內(nèi)，狗灌胃時，用12號灌胃管，左手抓住狗嘴，右手中指固定最后一對臼齒后的天然空隙下，胃管由此空隙順食管方向不斷插入約20cm，可達胃內(nèi)，將胃管另一端插入水中，如不出氣泡，表示確已進入胃，而沒誤入氣管內(nèi)，即可灌入。兔灌胃時，將兔固定在木制固定盒內(nèi)左手虎口卡住并固定好兔嘴，右手取14號細導(dǎo)尿管，由右側(cè)唇裂避開門齒，將導(dǎo)管慢慢插入，如插管順利，動物不掙扎，插入約15cm時，即表示插入胃內(nèi)，將藥液注入。一次灌胃能耐受的最大容積家兔為80-150ml，狗為200ml。100狗灌胃方法101十、動物的給藥途徑和方法(三)其它途徑給藥方法1.呼吸道給藥：呈粉塵、氣體及蒸氣或霧等狀態(tài)的藥物或毒氣,均需要通過動物呼吸道給藥。如實驗時給動物乙醚作吸入麻醉、用鋸末、煙霧制作慢性氣管炎動物模型等，特別在毒理學(xué)實驗中應(yīng)用更為廣泛。2.皮膚給藥：為了鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用經(jīng)皮膚給藥方法。如兔和豚鼠常采用背部一定面積的皮膚脫毛后，將一定的藥液涂在皮膚上，藥液經(jīng)皮膚吸收。102十、動物的給藥途徑和方法3.脊髓腔內(nèi)給藥：此法主要用于錐管麻醉或抽取腦脊液。4.小腦延髓池給藥:此種給藥都是在動物麻醉情況下進行的。而且常采用大動物如狗等，小動物很少采用。

狗小腦延髓池給藥103十、動物的給藥途徑和方法5.直腸內(nèi)給藥：此種方法常用于動物麻醉。兔直腸內(nèi)給藥時，常采用灌腸的膠皮管或用14號導(dǎo)尿管代替。6.關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥：此法常用于關(guān)節(jié)炎的動物模型復(fù)制。7.腦內(nèi)給藥：此法常用于微生物學(xué)動物實驗，將病原體等接種于被檢動物腦內(nèi)，然后觀察接種后的各種變化。104十一、動物血液的采集方法實驗研究中，經(jīng)常要采集實驗動物的血液進行常規(guī)檢查或某些生物化學(xué)分析，必須掌握血液的正確采集、分離和保存的操作技術(shù)。采血方法的選擇，主要決定于實驗的目的、所需血量以及動物種類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細胞計數(shù)、血紅蛋白的測定、血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細血管的血。當(dāng)需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠離心臟端開始，以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。當(dāng)需要比較動脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、CI-離子濃度，必須采取動脈血液。105十一、動物血液的采集方法采血時要注意：采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在25-28℃，冬季以15-20℃為宜；采血用具及采用部位一般需要進行消毒；采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑。現(xiàn)將采用血方法按動物和部位分別加以介紹。106(一)小鼠、大鼠采血法1.割（剪）尾采血當(dāng)所需血量很少時采用本法。固定動物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈。再將尾擦干，用銳器（刀或剪刀）割去尾尖0.1-0.2cm，讓血液自由滴入盛器，采血結(jié)束，傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口，割破尾動脈或靜脈，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。107(一)小鼠、大鼠采血法2.眼眶靜脈叢采血采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部（大鼠采血需帶上紗手套），應(yīng)防止動物窒息。當(dāng)取血時左手拇指及食指輕輕壓迫動物的頸部兩側(cè)，使眶后靜脈叢充血。右手持7號針頭的1ml注射器，使采血器與鼠面成45℃的夾角，由眼內(nèi)角刺入，針頭斜面先向眼球，刺入后再轉(zhuǎn)180度使斜面對著眼眶后界。刺入深度，小鼠約2～3mm，大鼠約4～5mm。當(dāng)感到有阻力時即停止推進，同時，將針退出約0.1-0.5mm，邊退邊抽。108(一)小鼠、大鼠采血法若穿刺適當(dāng)血液能自然流入毛細管中，當(dāng)?shù)玫剿璧难亢?，即除去加于頸部的壓力，同時，將采血器拔出，以防止術(shù)后穿刺孔出血。若技術(shù)熟練，用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血均無多大困難。左右兩眼輪換更好。體重20-25g的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；體重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可適用于某些生物化學(xué)項目的檢驗。109(一)小鼠、大鼠采血法3.斷頭取血采血者的左手拇指和食指從背部較緊地握住大（?。┦蟮念i部皮膚，并作動物頭朝下傾的姿勢。右手用剪刀猛剪鼠頸，約1/2-4/5的頸部前剪斷，讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約0.8～1.2ml；大鼠約5-10ml。4.心臟采血鼠類的心臟較小，且心率較快，心臟采血比較困難，故少用?；铙w采血的方法是將大、小鼠固定后，剪去心前區(qū)的毛，消毒后在左側(cè)第3、4肋間、心跳搏動最強處用注射器刺入心臟。若做開胸一次死亡采血，先將動物作深麻醉，打開胸腔，暴露心臟，用針頭刺入右心室，吸取血液。小鼠約0.5-0.6ml；大鼠約0.8-1.2ml。110(一)小鼠、大鼠采血法5.頸動靜脈采血先將動物仰位固定，切開頸部皮膚，分離皮下結(jié)締組織，使頸靜脈充分暴露，可用注射器吸出血液。在氣管兩側(cè)分離出頸動脈，離心端結(jié)扎，向心端剪口將血滴入試管內(nèi)。6.摘除眼球取血將鼠倒持，壓迫頸部，使眼球突出充血，用眼科鑷迅速挾取眼球，眼眶內(nèi)很快流出血液，用玻璃器皿收集。7.股動、靜脈采血將鼠麻醉，固定，切開腹股溝的皮膚，分離股靜脈或股動脈，用注射器取血，如需反復(fù)抽血，抽血部位要盡量從遠心端開始。111（二）豚鼠采血法1.耳緣剪口采血將耳消毒后，用銳器（刀或刀片）割破耳緣，在切口邊緣涂抹20%檸檬酸鈉溶液，阻止血凝，則血可自切口自動流出，進入盛器。操作時，使耳充血效果較好。此法能采血0.5ml左右。2.心臟采血取血前應(yīng)探明心臟搏動最強部位，通常在胸骨左緣的正中，選心跳最明顯的部位作穿刺。針頭宜稍細長些，以免發(fā)生手術(shù)后穿刺孔出血。因豚鼠身體較小，一般可不必將動物固定在解剖臺上，而可由助手握住前后肢進行采血即可。成年豚鼠每周采血應(yīng)不超過10ml為宜。112（二）豚鼠采血法3.股動脈采血方法同大小鼠，固定，切開腹股溝的皮膚，分離股靜脈或股動脈，用注射器取血。4.背中足靜脈取血助手固定動物，將其右或左膝關(guān)節(jié)伸直提到術(shù)者面前。術(shù)者將動物腳背面用酒精消毒，找出背中足靜脈后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿的注射針刺入靜脈。拔針后立即出血，呈半球狀隆起。采血后，用紗布或脫脂棉壓迫止血。反復(fù)采血時，兩后肢交替使用。113（三）兔采血法1.耳靜脈采血本法為最常用的取血法之一，常作多次反復(fù)取血用，因此，保護耳緣靜脈，防止發(fā)生栓塞特別重要。2.心臟取血將家兔仰臥固定，在第三、四肋間胸骨左緣3毫米處注射針垂直刺入心臟，血液隨即進入針管。注意事項有：⑴動作宜迅速，以縮短在心臟內(nèi)的留針時間和防止血液凝固；⑵如針頭已進入心臟但抽不出血時，應(yīng)將針頭稍微后退一點。⑶在胸腔內(nèi)針頭不應(yīng)左右擺動以防止傷及心、肺，一次可取血20-25ml。114（三）兔采血法3.耳中央動脈采血固定兔，在兔耳的中央有一條較粗、顏色較鮮紅的中央動脈，用左手固定兔耳，右手取注射器，在中央動脈的末端，沿著動脈平行地向心方向刺入動脈，即可見動脈血進入針筒，取血完畢后注意止血。此法一次抽血可達15ml。但抽血時應(yīng)注意，由于兔耳中央動脈容易發(fā)生痙攣性收縮，因此抽血前，必須先讓兔耳充分充血，當(dāng)動脈擴張，未發(fā)生痙攣性收縮之前立即進行抽血，不可等待時間過長。取血用的針頭一般用6號針頭，不要太細。針刺部位從中央動脈末端開始。不要在近耳根部取血，因耳根部軟組織厚，血管位置略深，易刺透血管造成皮下出血。115（三）兔采血法4.后肢脛部皮下靜脈取血將兔仰臥固定于兔固定板上，或由一人將兔固定好。拔去脛部被毛，在脛部上端股部扎以橡皮管，則在脛部外側(cè)淺表皮下，可清楚見到皮下靜脈。用左手兩指固定好靜脈，右手取帶有5（1/2）號針頭的注射器內(nèi)皮下靜脈平行方向刺入血管，抽一下針栓，如血進入注射器，表示針頭已刺入血管，即可取血。一次可取2～5ml。取完后必須用棉球壓迫取血部位止血，時間要略長些，因此處不易止血。如止血不妥，可造成皮下血腫，影響連續(xù)多次取血。116（三）兔采血法5.股靜脈、頸靜脈取血：先作股靜脈和頸靜脈暴露分離手術(shù)⑴股靜脈取血

注射器平行于血管，從股靜脈下端向心方向刺入，徐徐抽動針栓即可取血。抽血完畢后要注意止血。股靜脈較易止血，用于紗布輕壓取血部位即可。若連續(xù)多次取血，取血部位宜盡量選擇靠離心端。⑵外頸靜脈取血

注射器由近心端（距頸靜脈分支2-3厘米處）向頭側(cè)端順血管平行方向刺入，使注射針一直引深至頸靜脈分支叉處，即可取血。此處血管較粗，很容易取血，取血量也較多，一次可取10ml以上。取血完畢，拔出針頭，用干紗布輕輕壓迫取血部位也易止血。兔急性實驗的靜脈取血，用此法較方便。

117（四）狗、貓采血法1.后肢外側(cè)小隱靜脈和前肢內(nèi)側(cè)下頭靜脈采血此法最常用，且方便。抽血前，將狗固定在狗架上或使狗側(cè)臥，由助手將狗固定好。將抽血部位的毛剪去，碘酒/酒精消毒皮膚。采血者左手拇指和食指握緊剪毛區(qū)上部，使下肢靜脈充盈，右手用連有6號或7號針頭的消毒器迅速穿刺入靜脈，左手放松將針固定，以適當(dāng)速度抽血（以無氣泡為宜）?；?qū)⒛z皮帶綁在狗股部，或由助手握緊股部，即可，若僅需少量血液，可以不用注射器抽取，只需用針頭直接刺入靜脈，待血從針孔自然滴出，放入盛器或作涂片。采集前肢內(nèi)側(cè)皮下的頭靜脈血時，操作方法基本與上述相同。一只狗可采10-20ml血。118（四）狗、貓采血法2.股動脈采血本法為采取狗動脈血最常用的方法。操作也較簡便。稍加以訓(xùn)練的狗，在清醒狀態(tài)下將狗臥位固定于狗解剖臺上。伸展后肢向外伸直，暴露腹股溝三角動脈搏動的部位，剪去毛。用碘酒消毒。左手中指、食指探摸股動脈跳動部位，并固定好血管，右手取連有5（1/2）號針頭的注射器，針頭由動脈跳動處直接刺入血管，若刺入動脈一般可見鮮紅血液流入注射器，有時還需微微轉(zhuǎn)動一下針頭或上下移動一下針頭，方見鮮血流入。有時，往往刺入靜脈，必須重抽。待抽血完畢，迅速拔出針頭，用干藥棉壓迫止血2～3分鐘。119（四）狗、貓采血法3.心臟采血本法最好在麻醉下進行，馴服的狗不麻醉也行。將狗固定在手術(shù)臺上，前肢向背側(cè)方向固定，暴露胸部，將左側(cè)第3-5肋間的被毛剪去，用碘酒-酒精消毒皮膚。采血者用左手觸摸左側(cè)3-5肋間處，選擇心跳最顯處穿刺。一般選擇胸骨左緣外1cm第4肋間處。取連有6（1/2）號針頭的注射器，由上述部位進針，并向動物背側(cè)方向垂直刺入心臟。采血者可隨針接觸心跳的感覺，隨時調(diào)整刺入方向和深度，擺動的角度盡量小，避免損傷心肌過重，或造成胸腔大出血。當(dāng)針頭正確刺入心臟時，血即可進入抽射器，可抽取多量血液。120（四）狗、貓采血法4.耳緣靜脈采血本法宜取少量血液作血常規(guī)或微量酶活力檢查等。有訓(xùn)練的狗不必綁嘴，剪去耳尖部短毛，即可見耳緣靜脈，手法基本與兔相同。5.頸靜脈狗不需麻醉，經(jīng)訓(xùn)練的狗不需固定，未經(jīng)訓(xùn)練的狗應(yīng)予固定。取側(cè)臥位，剪去頸部被毛約10×3cm2范圍，用碘酒、酒精消毒皮膚。將狗頸部拉直，頭盡量后抑。用左手拇指壓住頸靜脈入胸部位的皮膚。使頸靜脈怒張，右手取連有6（1/2）號針頭的注射器。針頭沿血管平行方向向心端刺往前血管。由于此靜脈在皮下易滑動，針刺時除用左手固定好血管外，刺入要準確。取血后注意壓迫止血。采用此法一次可取較多量的血。貓的采血法基本與狗相同。常采用前肢皮下頭靜脈、后肢的股靜脈、耳緣靜脈取血。需大量血液時可從頸靜脈取血。方法見前述。121（五）猴采血法與人類的采血法相似，常用者有以下幾種：1.毛細血管采血需血量少時，可在猴拇指或足跟等處采血。采血方法與人的手指或耳垂處的采血法相同。2.靜脈采血最宜部位是后肢皮下靜脈及外頸靜脈。后肢皮下靜脈的取血法與狗相似。用外頸靜脈采血時，把猴固定在猴臺上，側(cè)臥，頭部略低于臺面，助手固定猴的頭部與肩部。先剪去頸部的毛，用碘酒-酒精消毒，即可見位于上頜角與鎖骨中點之間的怒張的外頸靜脈。用左手拇指按住靜脈，右手持連6（1/2）號針頭的注射器，其它操作與人的靜脈取血同。3.動脈采血股動脈可觸及。取血量多時常被優(yōu)先選用，手法與狗股動脈采血相似。122十二、實驗動物的急救措施

當(dāng)實驗進行中因麻醉過量、大失血、過強的創(chuàng)傷、窒息等各種原因，而使動物呼吸極慢而無規(guī)則甚至呼吸停止、角膜反射消失、心跳停止、血壓急劇下降甚至測不到，等臨床死亡癥狀時，應(yīng)立即進行急救。急救的方法可根據(jù)動物情況而定。123十二、實驗動物的急救措施對狗、兔、貓常用的急救措施有下面幾種。（一）針刺針刺人中穴對挽救家兔效果較好。對狗用每分鐘幾百次頻率的脈沖電刺激膈神經(jīng)效果較好。（二）注射強心劑

可以靜脈注射0.1%腎上腺素1ml，必要時直接作心臟內(nèi)注射。腎上腺素具有增強心肌收縮力，使心肌收縮幅度增大與加速房室傳導(dǎo)速度、擴張冠狀動脈、增強心肌供血、供氧及改善心肌代謝、刺激高位及低位心臟起搏點等作用。當(dāng)動物注射腎上腺素后，如心臟已搏動但極為無力時，可從靜脈或心腔內(nèi)注射1%氯化鈣5ml。鈣離子可興奮心肌緊張力，而使心肌收縮加強，血壓上升。124十二、實驗動物的急救措施（三）注射呼吸中樞興奮藥可從靜脈注射戊四氮或尼可剎米。（四）動脈快速注射高滲葡萄糖液一般常采用經(jīng)動物肌動脈逆血流加壓、快速、沖擊式的注入40%葡萄糖溶液。注射量根據(jù)動物而定，如狗可按2-3ml/kg體重計算。這樣可刺激動物血管內(nèi)感受器，反射性地引起血壓呼吸的改善。125十二、實驗動物的急救措施（五）動脈快速輸血、輸液在作失血性休克或死亡復(fù)活等實驗時采用?？稍趧游锕蓜用}插一軟塑料套管，連接加壓輸液裝置（血壓計連接輸液瓶上口，下口通過膠皮管連接塑料套管）。當(dāng)動物發(fā)生臨床死亡時，即可加壓（180-2000mmHg）快速從股動脈輸血和低分子右旋糖酐。如實驗前動物曾用肝素抗凝，由于微循環(huán)血管中始終保持通暢，不出現(xiàn)血管中血液凝固現(xiàn)象，因此就是動物出現(xiàn)臨床死亡后數(shù)分鐘，采用此種急救措施仍易救活。126十二、實驗動物的急救措施（六）人工呼吸可采用雙手壓迫動物胸廓進行人工呼吸。如有電動人工呼吸器，可行氣管分離插管后，再連接人工呼吸器進行人工呼吸。一旦見到動物自動呼吸恢復(fù)，即可停止人工呼吸。有條件時，當(dāng)動物呼吸停止，而心搏極弱或剛停止時，可用5%CO2和60%O2的混合氣體進行人工呼吸，效果更好。127十三、動物的安樂死方法實驗動物的處死方法很多，應(yīng)根據(jù)動物實驗?zāi)康?、實驗動物品種（品系）、以及需要采集標本的部位等因素，選擇不同的處死方法。無論采用哪一種方法，都應(yīng)遵循安樂死的原則。安樂死是指在不影響動物實驗結(jié)果的前提下，使實驗動物短時間無痛苦地死亡。十三、動物的安樂死（一）、原則：盡量減少動物的痛苦，避免產(chǎn)生驚恐、掙扎、喊叫注意實驗人員的安全方法容易操作不能影響實驗結(jié)果盡可能縮短致死時間判斷是否死亡時不僅要看呼吸，而且要觀察神經(jīng)反射、肌肉松弛等情況（二）、安樂死方法頸椎脫臼法：此法是將實驗動物的頸椎脫臼，斷離脊髓致死，為大、小鼠最常用的處死方法。操作時實驗人員用右手抓住鼠尾根部并將其提起，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按壓鼠頭及頸部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成頸椎脫臼，脊髓與腦干斷離，實驗動物立即死亡。130（二）、安樂死方法空氣栓塞法：處死兔、貓、犬常用此法。向?qū)嶒瀯游镬o脈內(nèi)注入一定量的空氣，形成肺動脈或冠狀動脈空氣栓塞，或?qū)е滦那粌?nèi)充滿氣泡，心臟收縮時氣泡變小，心臟舒張時氣泡變大，從而影響回心血液量和心輸出量，引起循環(huán)障礙、休克、死亡。空氣栓塞處死法注入的空氣量，貓和兔為20~50ml，犬為90~160ml。131（二）、安樂死方法放血法：此法適用于各種實驗動物。具體做法是將實驗動物的股動脈、頸動脈、腹主動脈剪斷或剪破、刺穿實驗動物的心臟放血，導(dǎo)致急性大出血、休克、死亡。犬、猴等大動物應(yīng)在輕度麻醉狀態(tài)下，在股三角做橫切口，將股動脈、股靜脈全部暴露并切斷，讓血液流出。操作時用自來水不斷沖洗切口及血液，既可保持血液暢流無阻，又可保持操作臺清潔，使實驗動物急性大出血死亡。132（二）、安樂死方法斷頭法：此法適用于鼠類等較小的實驗動物。操作時，實驗人員用左手按住實驗動物的背部，拇指夾住實驗動物右腋窩，食指和中指夾住左前肢，右手用剪刀在鼠頸部垂直將鼠頭剪斷，使實驗動物因腦脊髓斷離且大量出血死亡。藥物法：藥物吸入：大、小鼠、豚鼠等；CO2、CO、乙醚、氯仿等藥物注射：兔、犬靜脈注射氯化鉀、巴比妥類麻醉劑、DDT等（二）、安樂死方法134十三、動物的安樂死方法過量麻醉處死法此法多用于處死豚鼠和家兔?？焖龠^量注射非揮發(fā)性麻醉藥（投藥量為深麻醉時的30倍），或讓動物吸入過量的乙醚，使實驗動物中樞神經(jīng)經(jīng)過過度抑制，導(dǎo)致死亡。擊打頭蓋骨處死法主要用于豚鼠和兔的處死。操作時抓住實驗動物尾部并提起，用木錘等硬物猛烈打擊實驗動物頭部，使大腦中樞遭到破壞，實驗動物痙攣并死亡。135十四、實驗動物用藥量的確定和計算方法一、動物用藥量的確定1、先用小鼠粗略地探索中毒或致死劑量，然后用小于中毒量的劑量，或取致死量的若干分之一為應(yīng)用劑量，一般可取1/10-1/5。2、植物藥粗制劑的劑量多按生藥折算。3、化學(xué)藥品可參考化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的已知藥物，特別是化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用都相似的藥物的劑量。1364、確定劑量后，如第一次實驗的作用不明顯，動物也沒有中毒的表現(xiàn)（體重下降、精神不振、活動減少或其他癥狀），可以加大劑量再次實驗。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應(yīng)降低劑量再次實驗。在一般情況下，在適宜的劑量范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強。所以有條件時，最好同時用幾個劑量作實驗，以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。如實驗結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強度之間毫無規(guī)律，則更應(yīng)慎重分析。1375、用大動物進行實驗時，開始的劑量可采用給鼠類劑量的十五分之一~二分之一，以后可根據(jù)動物的反應(yīng)調(diào)整劑量。6、確定動物給藥劑量時，要考慮給藥動物的年齡大小和體質(zhì)強弱。一般說確定的給藥劑量是指成年動物的，如是幼小動物，劑量應(yīng)減少。138

如以狗為例：6個月以上的狗給藥量為1份時，3-6個月的給予1/2份，45-89日的給予1/4份，20-44日的給予1/8份，10-19日的給予1/16份。7、確定動物給藥劑量時，要考慮因給藥途徑不同，所用劑量也不同，以口服量為100時，灌腸量應(yīng)為100-200，皮下注射30-50，肌肉注射25-30，靜脈注射為25。139二、實驗動物用藥量的計算方法動物實驗所用的藥物劑量，一般按mg/kg體重或g/kg體重計算，應(yīng)用時須從已知藥液的濃度換算出相當(dāng)于每kg體重應(yīng)注射的藥液量（ml數(shù)），以便給藥。例1：計算給體重1.8kg的家兔，靜脈注射20%氨基甲酸乙酯溶液麻醉，按每kg體重1g的劑量注射，應(yīng)注射多少ml？140計算方法：兔每kg體重需注射1g，注射液為20％，則氨基甲酸乙酯溶液的注射量應(yīng)為5ml/kg體重，現(xiàn)在兔體重為1.8kg，應(yīng)注射20%氨基甲酸乙酯溶液用量=5×1.8=9ml。注意：20%的含義

二、實驗動物用藥量的計算方法141三、人與動物及各類動物間藥物劑量的換算方法1、人與動物用藥量換算人與動物對同一藥物的耐受性相差很大。一般說來，動物的耐受性要比人大，也就是單位體重的用藥量動物比人要大。人的各種藥物的用量在很多書上可以查得，但動物用藥量可查的書較少，而且動物用的藥物種類遠不如人用的那么多。因此，必須將人的用藥量換算成動物的用藥量。一般可按下列比例換算：人用藥量為1，小白鼠、大白鼠為25-50，兔、豚鼠為15-20，狗、貓為5-10。

1422、體表面積計算：（1）人體體表面積計算法：計算東亞人得體表面積：采用許文生氏公式：體表面積（m2）=0.0061x身高（cm）+0.0128x體重（kg）-0.1529如：身高168cm，體重55kg，體表面積為1.576m2三、人與動物及各類動物間藥物劑量的換算方法143吸入麻醉麻醉藥以蒸氣或氣體狀態(tài)經(jīng)呼吸道吸入而產(chǎn)生麻醉者，稱吸入麻醉，常用乙醚作麻醉藥。吸入法對多數(shù)動物有良好的麻醉效果