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文檔簡介

項(xiàng)目六免疫診斷

實(shí)訓(xùn)八沉淀試驗(yàn)主要內(nèi)容目的要求儀器及材料方法與步驟結(jié)果判定注意事項(xiàng)一、目的要求

掌握瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的操作和判定標(biāo)準(zhǔn)，并明確此試驗(yàn)在生產(chǎn)中的應(yīng)用。二、儀器及材料

瓊擴(kuò)板、梅花形打孔器、火柴、酒精燈、待檢血清、微量移液器（帶吸頭）、濕盒、注射器針頭、生理鹽水、雞傳染性法氏囊炎標(biāo)準(zhǔn)抗原、傳染性法氏囊炎標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清等三、方法與步驟1%瓊脂擴(kuò)散平板的制備按照100mL蒸餾水加8-10g氯化鈉、1g瓊脂粉配制溶液，電爐加熱使之充分溶化后，倒入培養(yǎng)皿，制成厚度為3mm左右瓊脂擴(kuò)散平板；靜置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，在室溫下冷卻凝固，4℃保存?zhèn)溆?。三、方法與步驟打孔在制好的瓊擴(kuò)板上按7孔一組的梅花形打孔（中間1孔，周圍六孔），孔徑5mm，孔距2～5mm，將孔內(nèi)的瓊脂用注射器針頭斜面向上從右側(cè)邊緣插入，輕輕向左側(cè)方向?qū)傊舫?，勿傷邊緣或使瓊脂層脫離皿底。三、方法與步驟封底用酒精燈輕烤平皿底部至瓊脂板底部剛剛要溶化（手背感覺微燙手）為止，封閉孔底部，以防側(cè)漏。三、方法與步驟加樣中央孔加入傳染性法氏囊炎標(biāo)準(zhǔn)抗原，加樣量以“滿而不溢”為原則。用微量移液器將待檢血清加至瓊擴(kuò)板的周邊孔中，每加一個(gè)樣品，換一個(gè)新的吸頭。最后加陽性和陰性對照。三、方法與步驟反應(yīng)（擴(kuò)散）加樣完畢后，靜置10min，然后將平皿輕輕倒置放入濕盒內(nèi)，37℃溫箱中作用，分別在24h、48h、72h觀察并記錄結(jié)果。四、結(jié)果判定

將瓊擴(kuò)板置日光燈或側(cè)強(qiáng)光下觀察，若標(biāo)準(zhǔn)抗體與抗原孔之間出現(xiàn)一條清晰的白色沉淀線，陰性對照孔和抗原孔之間未出現(xiàn)白色沉淀線，則試驗(yàn)成立。若待測卵黃抗體與抗原孔之間也出現(xiàn)白色沉淀線，結(jié)果為陽性。五、注意事項(xiàng)加樣過程中注意微量移液器吸頭的替換。勿忘封底步驟。勿忘試驗(yàn)中陽性和陰性對照的設(shè)立。反

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