免疫學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)理論知識(shí)

免疫學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)理論知識(shí)抗原:凡能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞并能與之發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)稱為抗原(antigen、Ag)?？乖镔|(zhì)具有免疫原性與反響原性。免疫原性〔抗原作用〕:指能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞的特性。反響原性〔抗原反響〕:指抗原與相應(yīng)的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生反響的特性。抗原第二頁(yè)，共23頁(yè)。完全抗原與半抗原完全抗原:具有免疫原性與反響原性的物質(zhì)，多為分子量大于5000的蛋白質(zhì)。半抗原:只具有反響原性而無免疫原性的物質(zhì)，一般為小分子化合物，例如某些激素、藥物等?？乖谌?yè)，共23頁(yè)。免疫系統(tǒng)組成第四頁(yè)，共23頁(yè)?？贵w:機(jī)體受到抗原物質(zhì)刺激后，由B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞產(chǎn)生的，能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白(Ig)。抗體的根本構(gòu)造所有種類Ig的單體分子構(gòu)造都是相似的，即由兩條一樣的重鏈(H)和兩條一樣的輕鏈(L)四條肽鏈構(gòu)成的“Y〞字形的分子?？贵w第五頁(yè)，共23頁(yè)。IgM:分子量最大的免疫球蛋白，抗原刺激誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答中最先產(chǎn)生的抗體。在感染過程中血清IgM水平升高，說明有近期感染，有助于早期診斷。IgG:血清中含量最高，是再次免疫應(yīng)答的主要抗體，是唯一能夠通過胎盤的抗體。感染后出現(xiàn)時(shí)間較晚，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，是既往感染的標(biāo)志。IgA:分為血清型和分泌型，分泌型IgA是參與粘膜局部免疫的主要抗體。IgE:血清中含量最少，介導(dǎo)1型超敏反響。IgD:血清型IgD作用尚不清楚。免疫球蛋白第六頁(yè)，共23頁(yè)。定義：抗原與相應(yīng)抗體之間的特異性結(jié)合反響。原理：抗原抗體的特異性結(jié)合是基于抗原決定簇與抗體超變區(qū)分子間的構(gòu)造互補(bǔ)性和親和性。這種特性是有抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的?？乖贵w反響第七頁(yè)，共23頁(yè)。特異性空間構(gòu)造互補(bǔ)，如同鑰匙和鎖，一一對(duì)應(yīng)。

共同抗原：物質(zhì)外表往往不止一種抗原決定簇，兩種不同抗原物質(zhì)可具有局部一樣或類似構(gòu)造的抗原決定簇。能與彼此相應(yīng)的抗體出現(xiàn)穿插反響?？乖贵w反響特點(diǎn)第八頁(yè)，共23頁(yè)。比例性指抗原與抗體特異性結(jié)合反響時(shí)，生成肉眼可見結(jié)合物的量與反響物濃度的關(guān)系，只有當(dāng)二者濃度比例適當(dāng)是，才出現(xiàn)可見反響。鉤狀效應(yīng)〔倒鉤〕：抗體過量-前帶，抗原過量-后帶?？乖贵w反響特點(diǎn)第九頁(yè)，共23頁(yè)。第十頁(yè)，共23頁(yè)。

可逆性

抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性稱為抗原抗體結(jié)合的可逆性。

復(fù)合物解離因素：1.抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親和力。2.環(huán)境因素。PH值，離子強(qiáng)度?？乖贵w反響特點(diǎn)第十一頁(yè)，共23頁(yè)。反響物自身因素抗原：理化性狀，外表抗原決定簇的種類和數(shù)目抗體：來源：來源不同動(dòng)物的免疫血清，等價(jià)帶寬窄不同。濃度：與相應(yīng)抗原濃度適宜才易出現(xiàn)可見反響。特異性與親和力：早期獲得的抗血清親和力低，特異性好；后期獲得的往往親和力高。診斷試劑盡可能選高特異性、高親和力的抗體。才能提高試驗(yàn)的可靠性。影響抗原抗體反響的因素第十二頁(yè)，共23頁(yè)。反響環(huán)境條件電解質(zhì)反響必須要有電解質(zhì)參與。酸堿度一般以pH6～9為易溫度一般以15～40℃，最適溫度為37℃。范圍內(nèi)溫度越高反響速度越快，溫度越低反響越慢但結(jié)合的越結(jié)實(shí)。>56℃會(huì)導(dǎo)致解離甚至變性。影響抗原抗體反響的因素第十三頁(yè)，共23頁(yè)。雙抗體夾心法

適用于檢測(cè)分子中具有至少兩個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原，而不能用于小分子半抗原。

利用連接在固相載體上的抗體和酶標(biāo)抗體可分別與樣品中被檢測(cè)抗原分子上的兩個(gè)不同抗原決定簇結(jié)合，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體免疫復(fù)合物。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)類型第十四頁(yè)，共23頁(yè)。1、抗體包被于載體外表3、加酶標(biāo)抗體與抗原結(jié)合4、加酶作用的底物產(chǎn)生顏色2、加待檢物抗原與抗體結(jié)合4、加酶作用的底物不產(chǎn)生顏色洗滌洗滌洗滌洗滌1、抗體包被于載體外表2、加待檢物無抗原與抗體結(jié)合3、加酶標(biāo)抗體無抗原結(jié)合+-YYYEYEYEYYEYEYEYYYYEYEYEYYYYYYYYYYYYYYYYYY雙抗體夾心法測(cè)抗原第十五頁(yè)，共23頁(yè)。15間接法此法是測(cè)抗體的常用方法。將抗原連接在固相載體上，樣本中待檢抗體與之結(jié)合成固相抗原-待檢抗體復(fù)合物，再用酶標(biāo)二抗〔針對(duì)待檢抗體的抗體〕與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)類型第十六頁(yè)，共23頁(yè)。1、抗原吸附于載體外表2、加待檢物無抗體與抗原結(jié)合3、加酶標(biāo)抗Ig與抗體結(jié)合4、加酶作用的底物產(chǎn)生顏色1、抗體吸附于載體外表2、加待檢物有抗體與抗原結(jié)合3、加酶標(biāo)的抗Ig抗體4、加酶作用的底物不產(chǎn)生顏色洗滌洗滌洗滌洗滌-YEYYYEYEYYYEYYEYYEYYEYYEYEY+間接法測(cè)抗體第十七頁(yè)，共23頁(yè)。17競(jìng)爭(zhēng)法競(jìng)爭(zhēng)法可用于抗原和半抗原的定量測(cè)定，也可對(duì)抗體進(jìn)展測(cè)定。酶標(biāo)記抗原〔抗體〕與待測(cè)品中的抗原〔抗體〕具有一樣的與固相抗體結(jié)合的能力；反響體系中，固相抗體〔抗原〕和酶標(biāo)抗原〔抗體〕是固定限量，且前者的結(jié)合位點(diǎn)少于酶標(biāo)記與待測(cè)抗原〔抗體〕分子數(shù)量和；反響后，結(jié)合于固相載體上的復(fù)合物中被測(cè)定的酶標(biāo)抗原〔抗體〕的量與待測(cè)品中的抗原〔抗體〕的濃度成反比。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)類型第十八頁(yè)，共23頁(yè)。洗滌洗滌+-YYYYYYEYYEYYYYEYYEYEYEYE2、加待檢物抗原與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與抗體結(jié)合3、加酶作用的底物不顯色或顯色弱3、加酶作用的底物顯色1、抗體包被于載體外表1、抗體包被于載體外表2、加待測(cè)物和酶標(biāo)抗原，酶標(biāo)抗原與抗體結(jié)合YE競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原第十九頁(yè)，共23頁(yè)。19捕獲法最常用于IgM抗體檢測(cè)。先將針對(duì)IgM的第二抗體連接于固相載體，用以結(jié)合樣品中所有的IgM抗體，然后參加特異抗原與待檢IgM抗體結(jié)合；再參加抗原特異的梅標(biāo)抗體，最后形成固相二抗-IgM-抗原-梅標(biāo)抗體復(fù)合物。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)類型第二十頁(yè)，共23頁(yè)。洗滌洗滌洗滌洗滌+-EYEYEYEYEYYYYYYY

1、固相化抗人

IgMYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY1、固相化抗人

IgM2、加待測(cè)物特異性IgM與非特異性IgM和抗人IgM結(jié)合3、加特異性抗原，與特異性抗體結(jié)合4、加酶標(biāo)抗體與特異性