第八章 儀器分析法(多圖)

1第八章儀器分析法

第一節(jié)概述

利用精密儀器，檢測(cè)物理性質(zhì)或物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)，根據(jù)所產(chǎn)生的測(cè)試信號(hào)定性分析和定量分析。

儀器分析的特點(diǎn)：

1．靈敏度高

2．選擇性強(qiáng)

3．價(jià)格昂貴，普及困難藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-228463842儀器分析法在藥典中的使用情況藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-228463843目標(biāo)：1．掌握紫外可見(jiàn)分光光度法、氣相色譜法和高效液相色譜法的原理、方法及在藥物含量測(cè)定中的應(yīng)用。2．了解熒光分析法、原子吸收分光光度法在藥品含量測(cè)定中的應(yīng)用。3．掌握常用儀器分析法的含量計(jì)算。4．熟悉常用儀器的基本結(jié)構(gòu)及使用方法。藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-228463844第二節(jié)光譜分析法一、紫外-可見(jiàn)分光光度法基本原理：分子光譜，電子躍遷

λmax

λmin

λsh

①摩爾吸收系數(shù)ε②百分吸收系數(shù)）

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YAOWUJIANYANJISHU020-228463845儀器:光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器及測(cè)量系統(tǒng)。儀器校正:1.波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正2．吸光度準(zhǔn)確度校正對(duì)溶劑的要求:藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-228463846測(cè)定方法:（一）對(duì)照品比較法分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液應(yīng)為供試品溶液的100％±10％，溶劑一致，測(cè)定吸光度.藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-228463847實(shí)例：貝諾酯的含量測(cè)定精密稱取貝諾酯0.07495g，用無(wú)水乙醇定量配成100ml溶液，再定量稀釋100倍后，照分光光度法在240nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度為0.473。另取經(jīng)105℃干燥2小時(shí)的貝諾酯對(duì)照品0.03667g，用無(wú)水乙醇定量配成100ml溶液，再定量稀釋50倍后，同法測(cè)定吸光度為0.462，求貝諾酯的百分含量。藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-228463848藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-228463849（二）吸收系數(shù)法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，按吸收系數(shù)計(jì)算含量。注意儀器的校正和檢定。

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YAOWUJIANYANJISHU020-2284638410實(shí)例：卡比馬唑的含量測(cè)定精密稱取本品0.05012g，配成500ml溶液，再定量稀釋10倍后，照分光光度法在292nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度為0.555。按C7H10N2O2S的百分吸收系數(shù)為557，求卡比馬唑的百分含量。

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YAOWUJIANYANJISHU020-2284638412制劑的含量計(jì)算

對(duì)照品比較法片劑：注射劑：藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638413實(shí)例：硫酸阿托品注射液（規(guī)格：5mg/1ml）含量測(cè)定

精密量取本品0.5ml（約相當(dāng)于硫酸阿托品2.5mg），置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，另取硫酸阿托品對(duì)照品25.47mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液2.0ml，振搖提取2分鐘后，靜置使分層，分取澄清的三氯甲烷液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在420nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，對(duì)照與供試品的吸光度為0.450和0.432，依法計(jì)算（分子量694.8）的標(biāo)示百分含量。

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YAOWUJIANYANJISHU020-2284638414藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638415制劑的含量計(jì)算

吸收系數(shù)法片劑：注射劑：藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638416實(shí)例：鹽酸氯丙嗪片的含量測(cè)定

取標(biāo)示量為25mg的鹽酸氯丙嗪片20片，除去糖衣后精密稱定，總重量為2.4215g，研細(xì)，精密稱量片粉0.2290g，置500ml量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置100ml量瓶中，加同一溶劑稀釋至刻度，搖勻，在254nm波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度為0.440，按為915計(jì)算，求其含量占標(biāo)示量的百分率？藥物分析教研室

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YAOWUJIANYANJISHU020-2284638418注意事項(xiàng)取吸收池時(shí)，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。含量測(cè)定至少配制2份，平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638419二、原子吸收分光光度法基本原理

由待測(cè)元素?zé)舭l(fā)出的特征譜線通過(guò)供試品蒸氣時(shí)，被蒸氣中待測(cè)元素的基態(tài)原子所吸收。通過(guò)測(cè)定輻射光強(qiáng)度減弱的程度可求出供試品中待測(cè)元素的含量。

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YAOWUJIANYANJISHU020-2284638420原子吸收分光光度計(jì)光源：心陰極燈，銳線光源原子化系統(tǒng)：火焰原子化和無(wú)火焰原子化。分光系統(tǒng)：衍射光柵檢測(cè)系統(tǒng)：檢測(cè)器、放大器、對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換器和顯示裝置藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638421測(cè)定方法1．標(biāo)準(zhǔn)曲線法藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-22846384222．標(biāo)準(zhǔn)加入法藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638423三、熒光分析法基本原理：

某些物質(zhì)（分子結(jié)構(gòu)常常具有長(zhǎng)共軛結(jié)構(gòu)、剛性和共平面性）受紫外光或可見(jiàn)光照射激發(fā)后，它會(huì)在極短的時(shí)間內(nèi)發(fā)射出較照射光波長(zhǎng)為長(zhǎng)的光，這種光稱為熒光。光致發(fā)光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638424熒光分析儀

1．光源：現(xiàn)在大多數(shù)儀器采用高壓氙燈

2．單色器：由光柵和狹縫組成。3．樣品池：常用石英池，質(zhì)地應(yīng)較純藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638425測(cè)定方法選定激發(fā)光波長(zhǎng)和發(fā)射光波長(zhǎng)，并配制對(duì)照品溶液和供試品溶液，測(cè)定跑光強(qiáng)度。藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638426第三節(jié)色譜分析法色譜的種類：按流動(dòng)相所處的物理狀態(tài)分類，可以將色譜法分為氣相色譜（GC）、液相色譜（LC）和超臨界流體色譜（SFC）。氣相色譜又可以分為氣-固、氣-液色譜，液相色譜可分為液-固和液-液色譜。

氣相色譜法是一種很重要的，以氣體為流動(dòng)相，以液體或固體為固定相的色譜方法分離效能、靈敏度、選擇性、分析速度硅膠柱上加上中藥提取物洗脫的效果色譜法原理：一、吸附混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強(qiáng)弱不同。色譜法原理一、吸附當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)時(shí)，各組分以不同的速度隨流動(dòng)相流出色譜柱。色譜法原理：二、分配混合成分在固定相與流動(dòng)相之間分配色譜法原理：三、分子篩因混合物中各種分子體積大小不一樣而分離色譜法分類常用色譜法的種類薄層色譜法常壓柱色譜法氣相色譜法高效液相色譜法從粗顆粒到細(xì)顆粒色譜所用硅膠顆粒變細(xì)之后分離效能大為提高，同時(shí)阻力也增大。各種加壓泵為提高分離效果，出現(xiàn)了從中壓到高壓的各種加壓泵從玻璃柱到不銹鋼柱二、高效液相色譜法highperformanceliquidchromatographHPLCHPLC基本組成示意圖HPLC主要由色譜柱、加壓泵和檢測(cè)器組成色譜柱色譜柱是液相分離的核心部件輸液泵輸液泵分單元等度泵和多元梯度泵檢測(cè)器對(duì)沒(méi)有紫外吸收的物質(zhì)的檢測(cè)，以蒸發(fā)光散射檢測(cè)器用得較多檢測(cè)器種類很多，現(xiàn)在最常用的是紫外檢測(cè)器進(jìn)樣器—手動(dòng)進(jìn)樣器Rheodyne7725i幾乎成了所有液相色譜儀的手動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣器—手動(dòng)進(jìn)樣器—六通閥進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器可由軟件完全控制Waters717Agilent色譜工作站色譜工作站就是HPLC的軟件控制系統(tǒng)外企的在數(shù)萬(wàn)元左右，國(guó)產(chǎn)的幾千元。色譜工作站工作站的兩大功能1.控制儀器2.處理數(shù)據(jù)液相色譜儀器常見(jiàn)種類

highperformanceliquidchromatograph液相色譜儀（2）液相色譜儀（3）安捷倫Agilent1100液相色譜儀（4）液相色譜儀（5）上海伍豐科學(xué)儀器有限公司液相色譜儀（6）戴安公司Ultimate3000高效液相色譜法在藥典中的使用

1985年版1990年版1995年版2000年版2005年版數(shù)量8561212791327比例%0.53.25.110.441.3高效液相圖譜各成分依次流出色譜柱，從進(jìn)樣到出峰的時(shí)間稱為保留時(shí)間三、定性方法定性:確定成分歸屬，依據(jù)與對(duì)照品相比較時(shí)，相同的保留時(shí)間定量方法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法定量方法——外標(biāo)法定量方法——內(nèi)標(biāo)法對(duì)照品供試品內(nèi)標(biāo)物內(nèi)標(biāo)法供試液（樣品+內(nèi)標(biāo)）內(nèi)標(biāo)物對(duì)照液（對(duì)照+內(nèi)標(biāo)）是樣品中不存在的物質(zhì)與被測(cè)組分峰靠近能與各組分完全分離與被測(cè)組分的量接近校正因子：例內(nèi)標(biāo)液

取正三十二烷加正己烷溶解并稀釋成1.0mg/ml溶液對(duì)照液精密稱取VitE對(duì)照品0.2011g置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液10ml，密塞，振搖使溶解，取1~3ul注入GC儀，測(cè)定，計(jì)算供試液精密稱取供試品0.1998g置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液10ml，密塞，振搖使溶解，取1~3ul注入GC儀，測(cè)定，計(jì)算維生素E含量測(cè)定對(duì)照液供試液HPLC操作注意事項(xiàng)流動(dòng)相嚴(yán)格過(guò)濾（0.45μm微孔濾膜），不要相信任何商家宣傳的流動(dòng)相已過(guò)濾的保證。樣品嚴(yán)格過(guò)濾。流動(dòng)相需經(jīng)脫氣處理。藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638467基本原理：色譜分離體系包括兩個(gè)相，其中的一相固定不動(dòng)，稱為固定相；另一相是攜帶試樣混合物流過(guò)此固定相的氣體或液體，稱為流動(dòng)相。當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，反復(fù)多次地利用混合物中所有組分性質(zhì)的差異使彼此得到分離。兩相及兩相的相對(duì)運(yùn)動(dòng)構(gòu)成了色譜法的基礎(chǔ)。

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YAOWUJIANYANJISHU020-2284638468氣相色譜系統(tǒng)：主要由分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和溫度控制系統(tǒng)藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638469系統(tǒng)適用性試驗(yàn)藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-22846384701.基線和色譜峰

無(wú)試樣通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，檢測(cè)到的信號(hào)即為基線。2.保留值

（1）時(shí)間表示的保留值

保留時(shí)間（tR）：組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)所需的時(shí)間

死時(shí)間（tM）：不與固定相作用的氣體（如空氣）的保留時(shí)間。

調(diào)整保留時(shí)間（tR

＇）：tR＇=tR－tM

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YAOWUJIANYANJISHU020-2284638471用來(lái)衡量色譜峰寬度的參數(shù)，有三種表示方法：（1）標(biāo)準(zhǔn)偏差()：

即0.607倍峰高處色譜峰寬度的一半。（2）半峰寬(Y1/2)：

色譜峰高一半處的寬度Y1/2=2.354（3）峰底寬(Wb)：

Wb=4藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638472塔板理論-柱分離效能指標(biāo)色譜柱長(zhǎng)：L，虛擬的塔板間距離：H，色譜柱的理論塔板數(shù)：n，則三者的關(guān)系為：

n=L/H理論塔板數(shù)與色譜參數(shù)之間的關(guān)系為：藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638473分離度的表達(dá)式：R=0.8：兩峰的分離程度可達(dá)89%；R=1.0：分離程度98%；R=1.5：達(dá)99.7%（相鄰兩峰完全分離的標(biāo)準(zhǔn)）。藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638474測(cè)定方法內(nèi)標(biāo)法加校正因子法（R：對(duì)照品S：內(nèi)標(biāo)X：待測(cè)樣品）

校正因子：含量計(jì)算：

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YAOWUJIANYANJISHU020-2284638475

按《中國(guó)藥典》2010版（二部）的規(guī)定測(cè)定維生素E，做系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)時(shí)的數(shù)據(jù)如上表。取維生素E對(duì)照品20.80mg(98.0%)，精密加入濃度為1.044mg/ml的內(nèi)標(biāo)物（正三十二烷）溶液10.00ml溶解，取1μl注入氣相色譜儀，對(duì)照品峰面積為481736，內(nèi)標(biāo)物峰面積為238787，求維生素E的理論塔板數(shù)、維生素E與內(nèi)標(biāo)物的分離度和校正因子各為多少？再精密稱取維生素E供試品22.68mg，內(nèi)標(biāo)物28.00mg，用氣相色譜法測(cè)得供試品峰面積為529887，內(nèi)標(biāo)物峰面積為644911，計(jì)算供試品中維生素E的含量。物質(zhì)Rt/minW(1/2h)/minW/min對(duì)照品8.880.250.6內(nèi)標(biāo)物5.740.61.2實(shí)例藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638476藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638477藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638478高效液相色譜法液相：固定相為液相高效、高壓、高速高柱效、高選擇性、分析速度快、靈敏度高、重復(fù)性好、應(yīng)用范圍廣藥物分析教研室

YAOWUJIANYANJISHU020-2284638479高效液相色譜儀：